r-tPA对兔眼晶状体上皮细胞影响的实验研究

目的　研究体外细胞培养中基因重组的组织纤维蛋白溶解酶原激活物(recombination tissue plasminigen activator,r- t PA)对兔晶状体上皮细胞增殖的抑制作用及有效浓度 ,为晶状体后囊混浊的药物预防提供新线索。方法　首先进行兔晶状体上皮细胞的原代与传代培养。传代培养的兔晶状体上皮细胞分为 6个实验组 ,分别加入 2 mg· L- 1 、4mg·L- 1 、8mg· L- 1 、16 mg· L- 1 、32 m g· L- 1 的 r- t PA,设空白对照组 ,在加药后不同时间进行细胞计数 ,3H- TDR掺入实验 ,研究 r- t PA对晶状体上皮细胞增殖的影响。结果　 r- t PA对体外培养的兔晶状体上皮细胞的增殖有显著抑制作用 ,呈浓度依赖性改变。 4mg· L- 1 r- t PA已有显著抑制作用 ,16 mg· L- 1基本发挥最大作用。结论　 r- t PA能有效抑制体外培养晶状体上皮细胞的增殖 ,通过进一步在体研究 ,可能成为预防后囊膜混浊的理想药物     

环孢素A对晶状体上皮细胞的影响

目的 观察环孢素A（CsA)对体外培养的牛晶状体上皮细胞（BLEC）增殖的影响。方法 对培养牛晶状体上皮细胞采用^3H-TdR掺入法及MTT法，研究不同质量浓度CsA(1-16μg/ml)作用24h和72h对牛晶状体上皮细胞增殖有抑制作用。且呈剂量依赖性，24h50%抑制质量浓度（IC50）为10.37μg/ml，72hIC50为6.61μ/ml。CsA引起细胞形态学改变的主要特点是细胞胞浆内大量空泡形成，且随药物剂量增大，细胞形态改变越明显。结论 一定剂量的CsA可抑制体外培养的牛晶状体上皮细胞的增殖，为预防后囊混浊提供了新途径。     

去整合素对人眼品状体上皮细胞的粘附移行作用

目的研究去整合素对体外培养的人眼晶状体上皮细胞生长的抑制作用。方法对先天性白内障患者术中环行撕前囊膜,进行原代培养并传代,取第2代细胞用于实验。抗粘附实验:将悬浮的细胞与不同浓度的去整合素(5μg·L-1、10μg·L-1、20μg·L-1、40μg·L-1、80μg·L-1)在37℃、50mL·L-1CO2条件下一起孵育30min。然后接种于涂有鼠尾胶原的96孔培养板。8h后,用HBSS轻洗各孔2次,MTT法测定粘附细胞的吸光度。抗移行实验:对融合的细胞进行划线,80μg·L-1的去整合素进行干预,24h、48h、72h后,细胞计数法观察裸露区内细胞的移行数量。结果不同浓度的去整合素(20μg·L-1、40μg·L-1、80μg·L-1)对晶状体上皮细胞的粘附均具有抑制作用且呈剂量依赖性。与对照组相比,24h、48h、72h内80μg·L-1的去整合素可显著抑制晶状体上皮细胞的移行。结论去整合素抑制体外培养的人眼晶状体上皮细胞的粘附及移行。     

Genistein对兔晶状体上皮细胞增殖的影响

目的　探讨染料木黄酮 (genistein)对体外培养的兔晶状体上皮细胞增殖的影响。方法　用不同浓度的 genisteinDMSO溶液处理常规培养的第 3代兔晶状体上皮细胞 ,采用细胞计数法以及MTT法检测对晶状体上皮细胞增殖的影响。结果　 12 .5mg·L-1genistein对晶状体上皮细胞增殖无显著影响 ,genistein在 2 5mg·L-1可显著抑制体外培养的兔晶状体上皮细胞的增殖 ,抑制率为 32 .86 % ,5 0mg·L-1genistein抑制率为 4 9.2 4 % ,10 0mg·L-1genistein抑制作用最强 ,抑制率达 70 .72 % ,且genistein在 2 5～ 10 0mg·L-1其抑制作用呈剂量依赖性。结论　genistein在浓度≥ 2 5mg·L-1时可显著抑制体外培养的兔晶状体上皮细胞的增殖 ,且呈剂量依赖性。提示genistein可能在临床防治后发性白内障中有所帮助。     

MTT法检测紫杉醇对兔晶状体上皮细胞增殖的影响

目的　研究紫杉醇 (Taxol)对体外培养的兔晶状体上皮细胞生长的影响。方法　取 2～ 3代对数生长期的兔晶状体上皮细胞 ,于 96孔板中培养 2 4 h后 ,用不同浓度的紫杉醇分别作用 2 4及 72 h,MTT比色测定法观察紫杉醇对兔晶状体上皮细胞增殖的影响。结果　我们发现 ,浓度为 0 .312 5 m g· L- 1的紫杉醇作用于培养的兔晶状体上皮细胞 2 4 h对其生长无明显的抑制 ,而作用 72 h则能抑制其生长。 2 4 h的半效抑制量 (ID50 )为 14 .6 81mg· L- 1 ,72 h的 ID50 为 4 .0 0 7mg· L- 1 ,紫杉醇还能抑制细胞贴壁。结论　紫杉醇对传代培养的兔晶状体上皮细胞增殖有明显的抑制作用 ,紫杉醇对预防后囊膜混浊的发生可能有一定作用     

肿瘤坏死因子-а对人眼小梁细胞增殖及NO合成的影响

目的研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对体外培养人眼小梁细胞增殖及一氧化氮(NO)合成的影响.方法体外培养人眼小梁细胞,采用细胞计数法及MTT法比较不同浓度TNF-α对细胞增殖能力的影响.采用硝酸还原酶法检测不同浓度TNF-α对细胞合成NO的影响. 结果 TNF-α浓度在10×103 IU·L-1以上可以抑制人眼小梁细胞增殖,呈浓度依赖性,并可以增加人眼小梁细胞NO合成,在浓度100×103 IU·L- 1达到最大促进程度. 结论 TNF-α可以抑制人眼小梁细胞增殖,增加NO生成,可能在青光眼发病过程中发挥重要作用.     

准分子激光角膜屈光性切削术后肿瘤坏死因子︿的表达

目的　探讨准分子激光角膜切削术 (PRK)后肿瘤坏死因子 α(TNF- α)的表达及其对角膜创伤修复的作用。对比 10 g· L- 1 强地松龙和 1g· L- 1 双氯芬酸钠对 TNF- α表达的影响。方法　应用半定量反转录 -多聚酶链式反应 (semi- quantitative,RT- PCR)的方法探测 PRK后兔角膜细胞活性因子不同时间 m RNA表达的变化 ,并在相应时间点观察细胞学改变。结果　 TNF-α在 PRK后 m RNA表达随时间变化 ,表达水平有改变 ,高峰出现在术后 2 4h。10 g· L- 1强地松龙完全抑制 TNF- α的表达 ,双氯芬酸钠无显著影响。结论　在高能量短暂作用的紫外光照射下角膜组织选择性地表达 TNF-α,提示这一细胞因子在PRK后角膜创伤修复过程中有一定作用 ,并证实 10 g· L- 1强地松龙能在转录水平抑制TNF- α的表达     

γ干扰素对兔晶状体上皮细胞增殖细胞核抗原表达的影响

目的 :探讨γ干扰素 (interferon γ ,IFN γ)对兔晶状体上皮细胞增殖细胞核抗原 (proliferatingcellnuclearcntigen ,PCNA)表达的影响。方法 :采用新西兰白兔白内障囊外摘除模型 ,术中囊袋内灌注BSS为A组即对照组。B、C组为治疗组 ,分别灌注 10 3 IU/mlIFN γ和 10 4IU/mlIFN γ。术后 3个月运用免疫组化法和计算机图象分析技术检测晶状体上皮细胞PCNA表达。结果 :γ干扰素组PCNA阳性表达少 ,与对照组比较有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,高浓度抑制作用强。结论 :IFN γ有抑制兔晶状体上皮细胞PCNA表达的作用 ,IFN γ对PCNA表达的抑制作用具有浓度依赖性     

细胞因子对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响

目的 :探讨细胞因子在翼状胬肉发病机制中的作用。方法 :体外培养翼状胬肉成纤维细胞 ,采用MTT比色法测定肿瘤坏死因子 (tumornecrosisfactor,TNF -α)、血小板源生长因子 (platelet-derivedgrowthfactor,PDGF)和γ -干扰素 (interferon -gamma,IFN -γ)对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响。结果 :TNF -α和PDGF可明显促进翼状胬肉成纤维细胞的增殖 ,且均呈剂量依赖效应 ;但IFN -γ对翼状胬肉成纤维细胞的增殖却有明显的抑制作用。结论 :TNF -α和PDGF可促进翼状胬肉成纤维细胞的增殖 ,在翼状胬肉发病机制中起重要作用 ;IFN -γ是一种成纤维细胞增殖的负性调节因子 ,有望在翼状胬肉的防治中发挥重要作用     

bFGF和顺铂、米托蒽醌及阿糖胞苷对兔晶状体上皮细胞的相互作用

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)和顺铂（PDD）、米托蒽醌（Mit)及阿糖胞苷（Ara-C)对兔晶状体上皮细胞（RLECs)的相互作用。方法 分离兔晶状体囊膜行组织细胞培养,传代的2-3代RLECs在96孔板培养24h,然后分别用不同浓度的bFGF,PDD,Mit和Ara-c;以及bFGF合用PDD,Mit及Ara-C作用24h及72h,用（MTT）比色法测定对RLECs的影响。结果 bFGF可明显促进晶状体上皮细胞的增殖,而PDD和Mit明显抑制晶状体上皮细胞的增殖,在bFGF存在的情况下此两种药物仍能抑制晶状体上皮细胞的增殖,在本实验条件下Ara-C单用对兔晶状体上皮细胞无明显影响。而在bFGF存在时则表现出抑制作用。结论 bFGF是促进兔晶状体上皮细胞增殖的重要因子。并不能阻止抑制兔晶状体上皮细胞增殖药物对其的抑制作用。而对z细胞周期特异性药物的作用有增强效果。     

肿瘤坏死因子α和表皮生长因子对晶状体上皮细胞增殖的作用

目的研究肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）和表皮生长因子（ＥＧＦ）对人、牛晶状体上皮细胞增殖的影响。方法采用ＭＴＴ比色法检测ＴＮＦα和ＥＧＦ对晶状体上皮细胞（ｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌ，ＬＥＣ）增殖的作用。结果０．１Ｕ／ｍｌ的ＴＮＦα即可明显促进人、牛晶状体上皮细胞的增殖；ＥＧＦ为１、１０ｎｇ／ｍｌ时可明显促进牛晶状体上皮细胞增殖。结论细胞因子ＴＮＦα、ＥＧＦ通过促进ＬＥＣ的增殖参与后囊混浊的形成     

bFGF诱导人晶状体上皮细胞增殖过程中细胞外信号调节激酶的作用

目的:检测细胞外信号调节激酶(extracellular regulated kinase,ERK)在碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)诱导的人晶状体上皮细胞增殖过程中的表达与活化;检测ERK1/2特异性阻断剂PD98059对人晶状体上皮细胞增殖的影响。方法:人晶状体上皮细胞系SRA01/04体外培养,采用MTT比色法和[3H]-TdR掺入法检测ERK阻断剂PD98059对人晶状体上皮细胞活力和DNA合成的影响;Westernblot法测定bFGF对培养的人晶状体上皮细胞ERK,c-Jun氨基末端激酶(JNK),P38蛋白表达及PD98059对环氧合酶-2(COX-2)表达的影响。结果:10μg/LbFGF能显著刺激人晶状体上皮细胞增生,1μmol/LPD98059即能显著抑制bFGF启动的HLEC增殖,其效应呈浓度依赖性(P<0.01)。10μg/LbFGF可激活ERK信号通路,诱导COX-2蛋白表达,其效应在30min内达到高峰,6h后逐渐减弱,此作用可被10μmol/LPD98059阻断;10μg/LbFGF对非磷酸化ERK,磷酸化和非磷酸化JNK及P38表达无明显影响。结论:有丝分裂原活性蛋白激酶信号传导通路中ERK磷酸化对bFGF启动的人晶状体上皮细胞增殖具有重要的调节作用。     

抗Ⅳ型胶原抗体-金雀异黄素偶联物体外抑制晶状体上皮细胞增殖

目的:研究抗Ⅳ型胶原抗体-金雀异黄素偶联物对人晶状体上皮细胞抗增殖作用.方法:免疫组织化学法检测偶联物与人晶状体囊膜结合的特异性;倒置显微镜细胞形态学观察;丫啶橙染色荧光显微镜观察偶联物作用下细胞形态的变化;MTT法检测偶联物抑制晶状体上皮细胞增殖的作用.结果:偶联物既保持了抗体的免疫活性,又能高效的抑制体外晶状体上皮细胞增殖.结论:通过活性酯法制备的抗Ⅳ型胶原抗体-金雀异黄素偶联物体外具有高效的抑制晶状体上皮细胞增殖的作用.     

RGDS肽对晶状体上皮细胞与细胞小基质蛋白粘附作用的影响

目的 探讨纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原蛋白对晶状体上皮细胞粘附的影响,研究Arg-Gly-Asp-Ser(RGDS)肽抑制晶状体上皮细胞与基质蛋白粘附的作用。方法 应用MTT法观测纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原蛋白对体外培养的牛晶状体上皮细胞的粘附作用,其次测定RGDS肽对牛晶状体上皮细胞与细胞外基质蛋白粘附和细胞增殖的影响。结果 牛晶状体上皮细胞 能够粘附到包被有不同浓度的纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原蛋白培养板表面上,呈现浓度效应特点;RGDS肽能够抑制牛晶状体上皮细胞在基质蛋白上的粘附。结论 纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原蛋白能够介导晶状体上皮细胞粘附到后囊上,在后囊混浊发生过程中起到重要的促进作用;在细胞水平上证实了RGDS肽通过竞争细胞外基质蛋白与晶状体上皮细胞表面的整合素体结合,阻止细胞粘附和增殖,具有潜在的防治后囊混浊的作用。     

血小板源性生长因子BB对体外培养兔角膜成纤维细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨重组人血小板源性生长因子BB(recombinant human platelet-derived growth factor-BB,rhPDGF-BB)对体外培养的兔角膜成纤维细胞增殖和细胞周期的影响。方法体外培养兔角膜成纤维细胞,分实验组和对照组,对照组弃原培养液,加无血清培养液继续培养,实验组用不同浓度的rhPDGF-BB1μg·L-1、10μg·L-1、100μg·L-1、1000μg·L-1分别作用于兔角膜成纤维细胞24h、48h、72h,用MTT比色法检测rhPDGFBB对兔角膜成纤维细胞生长的影响,流式细胞仪检测rhPDGFBB对兔角膜成纤维细胞细胞周期的影响。结果rhPDGFBB在1～100μg·L-1浓度范围内与兔角膜成纤维细胞增殖呈剂量效应关系,当浓度增大到1000μg·L-1,促增殖作用减弱。流式细胞术对细胞周期时项分析结果显示,经rhPDGFBB作用后,兔角膜成纤维细胞的DNA合成量(S%)显著升高,G1%降低,反映细胞增殖活力的增殖指数PI值增高。结论rhPDGFBB能促进兔角膜成纤维细胞的增殖和DNA合成,这一作用可能是通过促使处于G1期的兔角膜成纤维细胞进入S期来实现的。     

r—tPA对兔眼晶状体上皮细胞影响的实验研究

目的研究体外细胞培养中基因重组的组织纤维蛋白溶解酶原激活物(recombinationtissueplasminigenactivator,r-tPA)对兔晶状体上皮细胞增殖的抑制作用及有效浓度,为晶状体后囊混浊的药物预防提供新线索.方法首先进行兔晶状体上皮细胞的原代与传代培养.传代培养的免晶状体上皮细胞分为6个实验组,分别加入2mg·L、4mg·L1、8mg·L1、16mg·L、32mg·L1的rtPA,设空白对照组,在加药后不同时间进行细胞计数,3HTDR掺入实验,研究rtPA对晶状体上皮细胞增殖的影响.结果rtPA对体外培养的兔晶状体上皮细胞的增殖有显著抑制作用,呈浓度依赖性改变.4mg·L…r-tPA已有显著抑制作用,16mg·     

L-精氨酸和L-NAME对牛小梁细胞增殖和凋亡的影响

目的研究L-精氨酸和L-NAME对体外培养的牛小梁细胞增殖和凋亡的影响.方法在体外培养的牛小梁细胞中分别加入浓度为1×10-7mol/L、1×10-6mol/L、1×10-5mol/L、1×10-4mol/L、1×10-3mol/L及1×10-2mol/L的L-精氨酸和左旋-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)与小梁细胞共同孵育48 h,以不加药组为对照组,用化学比色法、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)及四甲基偶氮唑盐(MTT)法,检测小梁细胞在上述药物中增殖和凋亡状况.结果≥1×10-4mol/L的L-精氨酸通过促进NO的产生导致小梁细胞凋亡并抑制细胞的增殖;而≥1×10-5mol/L的L-NAME通过抑制NO的产生,促进小梁细胞的增殖.结论高浓度的NO可抑制小梁细胞的增殖,诱导细胞凋亡.     

PCNA反义寡脱氧核苷酸对牛晶状体上皮细胞体外增殖活性的影响

目的　使用增殖细胞核抗原反义寡脱氧核苷酸(PCNAASODN)作用于牛晶状体上皮细胞,观察其对细胞增殖活性的影响,以探讨PCNAASODN技术防治后发性白内障形成的新途径。方法　应用3H-TdR掺入法检测细胞增殖活性,用流式细胞仪检测晶状体上皮细胞PCNA蛋白的表达。结果　PCNAASODN30～50 μmol/L可使细胞增殖显著受抑制,其CPM值分别从对照组的6 699.67下降为5986.33,5 525.33和5 154.67,PCNA蛋白在晶状体上皮细胞的表达阳性率下调至12.32%,与对照组比较有显著性差异(P<0.01)PCNASODN组则作用不明显,与对照组比较无显著性差异(P>0.05),而PCNAASODN组与PCNASODN组比较差异显著(P<0.01)。结论　PCNAASODN可以显著抑制牛晶状体上皮细胞体外增殖活性,其抑制作用可能通过阻断PCNAmRNA的翻译过程而影响PCNA蛋白表达     

三氟拉嗪对体外培养人晶状体上皮细胞增殖作用的实验研究

目的研究三氟拉嗪(trifluoperazine,TFP)对体外培养的人晶状体上皮细胞增殖作用的影响,为三氟拉嗪防治晶状体后囊混浊提供理论依据。方法不同浓度(2μg/ml、4μg/ml、6μg/ml、8μg/ml)的TFP作用于传代培养的晶状体上皮细胞,于作用244、8、729、6 h后,用MTT比色法测定其抑制率;用流式细胞仪分析检测TFP诱导人晶状体上皮细胞的细胞周期的阻断。结果TFP对人晶状体上皮细胞的抑制呈明显的时间剂量依赖性,细胞周期分布显示TFP使细胞阻滞在G0/G1期。结论三氟拉嗪可抑制晶状体上皮细胞的生长增殖,其抑制后囊混浊的可能作用值得进一步研究。     

维生素E琥珀酸酯对人晶状体上皮细胞增殖的影响

目的研究维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)对体外培养的人晶状体上皮细胞(HLECs)增殖的影响。方法人晶状体上皮细胞株HLECs-B3以VES刺激24h、48h、72h、96h,VES浓度为5μg/ml、10μg/ml和20μg/ml,用MTT比色法测定VES对细胞增殖的抑制作用;以流式细胞仪分析细胞周期。结果VES对人晶状体上皮细胞的增殖具有显著的抑制作用,表现为时间和剂量依赖关系。并且将细胞周期阻滞于G0/G1期。结论VES对体外培养的人晶状体上皮细胞的增殖具有抑制作用,为临床筛选防治后发性白内障的药物提供依据。