成纤维细胞激活蛋白和基质金属蛋白酶1在小鼠肺纤维化中的表达及相关性

目的 探讨成纤维细胞激活蛋白(FAP)在小鼠肺纤维化组织中的表达,及其与基质金属蛋白酶1(MMP-1)之间的关系.方法 制备小鼠肺纤维化模型,采用免疫组织化学技术、Western-bolt检测肺组织中FAP、MMP-1和α-SMA的表达.结果 ①博莱霉素-A5盐溶液诱导后,FAP、MMP-1和α-SMA的表达与小鼠肺泡炎和肺纤维化程度呈正相关;FAP与MMP-1的表达呈正相关.②Westernbolt结果显示FAP对照组表达弱阳性,随肺纤维化程度的增强,表达增强;MMP-1、α-SMA随肺纤维化程度的增加表达亦增强.结论 FAP的表达与肺泡炎和肺纤维化程度均呈正相关,FAP与MMP-1可能在肺纤维化基质重塑中起协同作用.     

成纤维细胞激活蛋白和转化生长因子-β1在小鼠肝纤维化组织中的表达及相关性

目的探讨成纤维细胞激活蛋白（FAP）、α-SMA和TGF-β1在小鼠肝纤维化组织中的表达和三者之间的关系。方法建立四氯化碳诱导的小鼠实验性肝纤维化模型,应用免疫组织化学技术检测小鼠肝纤维化组织中FAP、α-SMA和TGF-β1的表达。结果FAP、α-SMA和TGF-β1与小鼠肝纤维化程度呈正相关（rs分别为0.753,0.762,0.834,P〈0.0001）;且FAP与α-SMA、FAP与TGF-β1的表达均呈正相关（rs为0.825和0.814,P〈0.0001）。结论FAP可作为判定肝纤维化程度的指标之一,且可能与TGF-β1共同促进肝纤维化进展。     

晚期日本血吸虫病患者肝组织基质金属蛋白酶2和9的表达

目的研究基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)在晚期日本血吸虫病患者肝组织中的表达及意义。方法26例晚期日本血吸虫病患者肝活检标本和5例正常人肝标本行常规病理检查,用MMP-2、MMP-9和Ⅳ型胶原(G-Ⅳ)单克隆抗体进行免疫组织化学染色进行定量和定位研究。结果MMP-2主要表达在肝细胞浆、肝细胞膜和肝窦,肌成纤维细胞和血管内皮细胞也有表达。MMP-9主要表达在肝星状细胞、肝窦和肌成纤维细胞,偶见肝细胞浆和胆管上皮细胞表达。晚期日本血吸虫病患者肝组织MMP-2、MMP-9和G-Ⅳ的表达明显高于正常人(P<0.05),随着汇管区炎症活动度和肝纤维化程度的升高,MMP-2的表达也明显增强(P<0.01),MMP-9的表达无明显改变(P>0.05),C-Ⅳ表达与MMP-2呈同步关系。结论MMP-2与日本血吸虫病肝纤维化的发生、发展有关,MMP-9表达与日本血吸虫病肝纤维化的发生有关。     

缺氧对肺成纤维细胞表达结缔组织生长因子和基质金属蛋白酶-9的影响

目的观察不同缺氧时间对肺成纤维细胞结缔组织生长因子（CTGF）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的影响。方法原代培养的人肺成纤维细胞在缺氧（37℃，5％CO2，5％O2，90％N2）条件下分别孵育0、1．5、3、6、12h，反转录聚合酶链反应（RT—PCR）法测定细胞CTGFmRNA、MMP-9mRNA表达情况，并以酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定培养细胞上清液CTGF、MMP-9浓度。结果缺氧刺激成纤维细胞CTGFmRNA高表达出现在1．5h，并保持一相对平台至6h．12h开始下降。MMP-9mRNA在缺氧1．5h出现高表达，并保持一持续增高的趋势。ELISA结果证实CTGF与MMP-9一样其峰浓度在缺氧12h。用抗CTGF抗体干预的成纤维细胞组较未干预组表达MMP-9量明显减少。结论缺氧可促使人肺成纤维细胞高表达CTGF。缺氧可能是通过刺激成纤维细胞高表达CTGF，进而调节细胞分泌MMP-9的量，来达到促进细胞外基质沉积、气道重塑作用而形成纤维化。     

小鼠血吸虫病肝纤维化的超微结构动态观察

目的　研究血吸虫病小鼠肝纤维化过程中几种相关细胞和肝组织超微结构动态变化 ,以探讨血吸虫病肝纤维化的可能机制。　方法　日本血吸虫尾蚴经皮肤感染小鼠建立血吸虫病肝纤维化模型。常规方法制作肝组织透射电镜标本并观察。常规 HE染色观察其病理变化。　结果　 HE染色显示小鼠血吸虫病肝纤维化模型建立成功。电镜观察显示小鼠感染后 6 wk,急性肉芽肿周围的肝细胞发生坏死 ,肝窦内皮细胞窗孔减少 ,贮脂细胞 (FSC)脂滴减少 ,枯否细胞胞浆出现大吞噬体和粗面内质网。 8wk时部分肝细胞发生脂肪变性 ,少数肝细胞间隙增宽 ,间面出现微绒毛。肝窦周隙内充满大量胶原纤维 ,并形成肝窦毛细血管化。FSC胞浆出现含胶原原纤维的分泌泡 ,周围见大量胶原纤维。枯否细胞粗面内质网增加。 10 wk时 FSC转变为肌成纤维细胞。 12 wk时肌成纤维细胞减少 ,成纤维细胞和纤维细胞增加。　结论　 FSC被激活转化为肌成纤维细胞是血吸虫病肝纤维化发生的关键环节 ,激活的枯否细胞、损伤的肝细胞和肝窦内皮细胞与 FSC的活化密切相关 ,肝窦毛细血管化可能加速肝纤维化的发展。     

成纤维细胞与肺癌细胞相互作用对膜型基质金属蛋白酶-1及基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的 研究胚肺成纤维细胞对肺癌H460细胞膜型基质金属蛋白酶-1(MTl-MMP)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响.方法 采用Western blot方法检测各组MT1-MMP的表达.取其上清,采用酶联免疫吸附法检测各组细胞培养液中活性MMP-2的浓度.结果 H460细胞、胚肺成纤维细胞单独培养时均有MT1-MMP表达,但混合培养后MT1-MMP表达增强(P＜0.05).H460细胞、胚肺成纤维细胞单独培养时MMP-2均有分泌,混合培养MMP-2分泌增强(P＜0.05).结论 胚肺成纤维细胞和肺癌H460细胞相互作用能通过上调MT1-MMP、MMP-2的表达从而促进肺癌的侵袭和转移,这可能为肺癌侵袭转移的一个重要机制.     

CC10与小鼠心肌梗死后心肌纤维化的关系

目的 探究克拉拉细胞10-kDa蛋白(CC10)与心肌梗死后心肌纤维化的关系。方法 取6～8周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠32只,随机分为模型组与假手术组,每组16只。模型组小鼠结扎冠状动脉左前降支,构建心肌梗死模型。检测小鼠心脏的CC10 mRNA、α-SMA mRNA表达及肺内的CC10 mRNA表达。观察小鼠心肌纤维化程度;分析CC10在组织层面和蛋白表达的变化;明确CC10在心脏梗死区定位的细胞类型;测定CC10 mRNA随心脏成纤维细胞增殖的表达变化。结果 心肌梗死后,随着心肌纤维化加重,CC10在心脏与肺组织中的表达上升(P<0.05)。CC10的表达主要定位于心脏梗死区的成纤维细胞,且伴随成纤维细胞增殖,CC10的表达不断增加。结论 伴随心肌纤维化程度加重,CC10在小鼠心肌梗死后的心脏与肺组织中表达上升。     

沉默小鼠成纤维细胞活化蛋白表达对原代胰腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 应用RNA干扰技术沉默小鼠胰腺癌相关成纤维细胞的成纤维活化蛋白(FAP)表达,观察其对小鼠原代胰腺癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 构建靶向小鼠FAP基因的重组表达质粒siFAP及对照质粒siMOCK,分别转染小鼠原代胰腺癌相关成纤维细胞mPCa-FCs-1212,采用定量RT-PCR法及蛋白质印迹法检测转染细胞的FAP mRNA及蛋白表达.将该细胞与小鼠原代胰腺癌细胞mPCa-1212按1∶1的比例共培养,应用MTT比色法检测mPCa-1212细胞的增殖抑制率,应用Annexin V-FTTC/PI染色及流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 转染重组质粒siFAP的mPCa-FCs-1212细胞的FAP mRNA及蛋白表达较转染对照质粒siMOCK的细胞的表达明显下调[0.584±0.029比1.052±0.281,P=0.0213;(27.18±3.23)％比(61.58±4.72)％,P=0.0317].转染siFAP和转染siMOCK的mPCa-FCs-1212分别与mPCa-1212细胞共培养3d后,mPCa-1212的增殖抑制率分别为(23.02±3.32)％和(1.11±0.23)％;细胞凋亡率分别为(42.31±5.34)％和(7.38±2.09)％,两组细胞的差异具有统计学意义(P=0.000).结论 沉默FAP基因的mPCa-FCs-1212在体外可有效抑制mPCa-1212细胞的增殖,诱导细胞凋亡,可能是一种潜在的基因治疗新方法.     

缝隙连接蛋白43对成纤维细胞中Ⅰ型胶原蛋白的调节作用

目的探讨缝隙连接蛋白(Cx)43对成纤维细胞中Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)的调控作用。方法利用Cx43-siRNA及其相关miRNA的抑制剂下调或上调人皮肤成纤维细胞(hDFBs)中Cx43的水平,利用Western印迹法和免疫荧光染色法检测细胞内COL-Ⅰ的表达;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western印迹法评估Cx43水平下降后COL-Ⅰ、基质金属蛋白酶(MMP)-1和MMP-9的mRNA和蛋白表达水平;用免疫共沉淀(Co-IP)法检测Cx43分别与MMP-1、MMP-9或蛋白激酶(PK)D1的结合情况。结果 COL-Ⅰ表达水平与Cx43水平呈负相关(P0.001);Cx43水平降低导致MMP-1、MMP-9在mRNA及蛋白水平均显著增加(P0.001,P0.01,P0.05);且PKD1表达也明显降低。结论 Cx43参与hDFBs中COL-Ⅰ的调控并发挥重要作用,其机制很可能与PKD1密切相关。     

肝组织碱性成纤维细胞生长因子与乙肝患者肝纤维化关系的研究

肝星状细胞(HSC)激活分泌大量细胞外基质(ECM)沉积在肝内引起肝纤维化[1]。碱性成纤维细胞生长因子(BFGF)能促进多种细胞产生ECM,从而促进纤维化进展。本实验以260例慢性乙型肝炎患者肝组织BFGF为研究对象,采用免疫组化、计算机图像分析等技术,观察肝组织中BFGF表达和定位特点,     

Twist1,MMP-2和MMP-9在结直肠癌组织中的表达及意义

目的:研究Twist1、MMP-2和MMP-9蛋白在结直肠癌组织中的表达及其相互关系.方法:建立组织微阵列平台,应用免疫组织化学方法检测92例结直肠癌组织Twist1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达情况.结果:结直肠癌中Twist1的表达率为64.1%,MMP-2和MMP-9阳性率分别为66.3%和67.4%;Twi...