胆囊癌组织中抑癌基因p53突变与肿瘤血管生长的相关性研究

目的：探讨胆囊癌中抑癌基因p53突变与肿瘤血管生长的相关性。方法：1998年1月至2000年12月共收集44例胆囊切除标本，其中24例胆囊癌，20例胆囊腺瘤。用免疫组化方法定性检测突变抑癌基因p53蛋白产物的表达，同时检测标本中血管内皮生长因子（VEGF）的表达以反映肿瘤血管生长的情况，比较二者的相关性。结果：胆囊癌中p53蛋白的阳性率达到62．5％。VEGF的阳性率为75％，其阳性表达率随胆囊癌的病理分期的进展而逐渐增强（P＜0．05）。p53与VEGF的阳性率显著相关（P＜0．01）。结论：抑癌基因p53突变在胆囊癌早期发生中起重要作用，在胆囊癌晚期则通过促进肿瘤血管的生长，导致癌肿的浸润转移。     

Cyclin E和p53在胆囊癌组织中的表达及意义

目的：探讨p53和细胞周期蛋白E（Cyclin E）在胆囊癌组织中的表达及其意义。方法：采用免疫组化方法,检测p53和Cyclin E在胆囊癌组织中的表达状况,并以同期慢性胆囊炎组织作为对照。结果：p53和Cyclin E在胆囊癌组织中表达阳性率较慢性胆囊炎组高,在中-低分化胆囊癌组织中表达阳性率较高分化胆囊癌组织高,与肿瘤有无淋巴转移及肿瘤1年生存率无明显相关性;Cyclin E在晚期胆囊癌（Nevin III~V期）组织中表达阳性率较早期（Nevin I~II期）胆囊癌组织高,Cyclin E表达阳性的胆囊癌患者1年生存率较表达阴性者低（P＜0.05）。结论：检测分析p53和Cyclin E在胆囊组织中的表达,有助于对胆囊癌进行早期诊断和判断预后。     

转化生长因子β1在胆囊癌中的表达及意义

目的：探讨转化生长因子β1（TGF－β1）与胆囊癌发生、发展的关系。方法：应用TGF－β1多克隆抗体对35例原发性胆囊癌、10例胆囊腺瘤及10例慢性胆囊炎标本进行S－P免疫组化标记。结果：胆囊癌TGF－β1的阳性率为57．1％,与胆囊腺瘤、胆囊炎（阳性率分别为20％和10％）比较差异有显著性意义（P＜0．01）,TGF－β1的阳性表达率在Nevin分期和伴淋巴结及远处转移的病人中,差异均有显著性意义（P＜0．05,P＜0．01）,TGF－β1表达率与病理组织学分级、性别及年龄无关。结论;TGF-β1与胆囊癌的发生发展密切相关,TGF－β1水平增高可增加胆囊癌转移的危险。     

4种肿瘤相关抗原在胆囊癌组织中的表达及其意义

目的 探讨肿瘤相关抗原表达对胆囊癌早期诊断及其预后判断的价值。方法 采用免疫组化染色对10例慢性胆囊炎、10例胆囊腺瘤及50例胆囊癌组织的癌胚抗原（CEA）、癌相关粘液抗原（CA50）、钙粘附蛋白E（E－CD）及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达进行检测。结果 胆囊癌组织中CEA及CA50表达阳性率显著高于腺癌组和胆囊炎组（P＜0．05），而E－CD表达阳性率明显降低，且伴有转移的胆囊癌E－CD表达更低。胆囊癌的PCNA标记指数显著高于胆囊炎组和腺瘤组（P＜0．01）。CEA及PCAN过度表达者3年生存率显著降低（P＜0．01），E－CD过度表达者3年生存率较阴性者明显增高（P＜0．05）。结论 CEA、CA50以及PCNA检测可能有助于胆囊腺瘤恶变和胆囊癌的早期诊断，且CEA、PCNA和E－CD检测可作为胆囊癌预后判断的参考指标。     

组织蛋白酶B、D在原发性胆囊癌、胆囊腺瘤样息肉和慢性胆囊炎组织中的表达

目的 探讨原发性胆囊癌、胆囊腺瘤样息肉和慢性胆囊炎组织中组织蛋白酶B(CatB)及组织蛋白酶D(CatD)的表达和相关性及其与临床病理特征之间的关系.方法 采用免疫组织化学染色方法检测32例胆囊癌组织和20例胆囊良性病变(其中胆囊腺瘤样息肉10例,慢性胆囊炎10例)组织中CatB及CatD的表达.结果 CatB、CatD在胆囊癌组织的阳性表达率分别为93.75％ (30/32)、90.63％ (29/32),均明显高于胆囊腺瘤样息肉组织(分别为60.00％、60.00％,P＜0.05)和慢性胆囊炎组织(分别为60.00％、50.00％,P＜0.05).CatB、CatD的表达在患者年龄、性别、标本Nevin分期、病理学分级、病理学类型间的差异均无统计学意义(P＞0.05).CatB与CatD的表达呈正相关性(r=0.434,P ＜0.05).结论 CatB和CatD在胆囊癌组织中表达增强,可作为胆囊癌组织学标志物.胆囊组织中CatB和CatD的高表达与临床病理特征无明显相关.CatD与CatB的表达呈正相关.     

CD44v6和基质金属蛋白酶-2表达与胆囊癌的侵袭和转移关系

目的 探讨粘附分子CD44v6，基质金属蛋白－2（MMP－2）在胆囊癌侵袭和转移中的作用。方法 采用免疫组织化学方法检测了42例胆囊癌，10例慢性结石性胆囊炎组织中CD44v6和MMP－2的表达。结果 （1）CD44v6阳性表达率在胆囊癌组（64．3％，72／42）明显高于慢性结石性胆囊炎组（0％，0／10）（P＜0．005）；CD44v6表达强度与胆囊癌的病理学分级相关（P＜0．05），低分化与中，高分化组差异有显著性（P＜0．01）；胆囊癌中转移组阳性率明显高于非转移组（P＜0．01），CD44v6阳性的胆囊癌病人预后较差。（2）MMP－2在胆囊癌组织中表达率（61．9％）明显高于慢性结石性胆囊炎组（10％，P＜0．005）；MMP－2的表达与胆囊癌细胞的分化，转移和预后有关（P＜0．05）；随着分化程度的恶化，其阳性率增高；93）CD44v6和MMP－2在胆囊癌组织中表达呈正相关（P＜0．005）。结论 CD44v6，MMP－2的表达与胆囊癌分化，转移及预后有关，在胆囊癌细胞的侵袭和转移中起重要作用。联合检测有利于评估胆囊癌的生物学行为和判断预后。     

nm23-H1和E-Cadherin基因蛋白在胆囊癌组织中的表达

目的：探讨nm23-H1和E－cadherin(E-Cad)基因蛋白在胆囊癌组织中的表达与组织类型，病理分级和转移的关系。及nm23-H1和E－Cad基因蛋白表达的相关性。方法：应用催化信号放大系统免疫组化方法，检测52例胆囊腺癌，20例胆囊腺瘤和10例慢性胆囊炎组织中nm23-H1和E－Cad表达水平。结果：在胆囊癌中nm23-H1和E－Cad阳性表达率分别为51．9％和42．3％，均明显低于胆囊腺瘤和慢性胆囊炎（P＜0．05），nm23-H1和E－Cad表达与胆囊癌的组织类型，病理分级和转移密切相关（P＜0．05），两基因蛋白表达在胆囊癌组织中呈正相关（P＜0．05），结论：nm23-H1和E－Cad基因与胆囊癌的转移密切相关，对临床判断胆囊癌预后有一定指导意义。     

血管内皮生长因子及其受体Flt-1和KDR在原发性胆囊癌的表达及其与临床病理特征的关系

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）、Flt-1和KDR的表达与原发性胆囊癌临床病理特征的关系。方法对21例原发性胆囊癌和10例胆囊腺瘤样息肉新鲜组织标本采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学染色在mRNA和蛋白水平检测VEGF、Flt-1和KDR在原发性胆囊癌和胆囊腺瘤样息肉的表达情况，并分析VEGF、Flt-1和KDR免疫组织化学阳性表达的病例与胆囊癌肝浸润、淋巴转移、病理分级和Nevin分期等临床病理特征的相关性。结果在胆囊癌和胆囊腺瘤样息肉组织中VEGF mRNA阳性表达率为90．47％（19／21）和20％（2／10）；Flt-1mRNA阳性表达率为71．42％（15／21）和0％（0／10）；KDR mRNA阳性表达率为85．71％（18／21）和10％（1／10）；两组差异有统计学意义（P〈0．05）。免疫组织化学染色VEGF蛋白检测阳性表达率为80．95％（17／21）和20％（2／10）；Flt-1蛋白阳性表达率为60．90％（13／21）和10％（1／10）；KDR蛋白阳性表达率为76．19％（16／21）和10％（1／10），两组差异有统计学意义（P〈0．05）。VEGF、Flt-1和KDR蛋白的阳性表达率在胆囊癌肝浸润、淋巴转移和NevinⅣ、Ⅴ期组明显高于无肝浸润、无淋巴转移和NevinⅠ、Ⅱ、Ⅲ期组（P〈0．05），而在高、中和低分化组三者的阳性表达率无统计学意义（P〉0．05）。结论原发性胆囊癌组织中VEGF、Flt-1和KDR在mRNA和蛋白水平均存在高表达，VEGF、Flt-1和KDR蛋白的阳性表达同胆囊癌肝浸润、淋巴转移和Nevin分期明显相关，但与病理分级无明显相关。     

细胞周期素E在胆囊癌中的表达及意义

目的:探讨cyclinE与胆囊癌发生发展的关系 。方法:应用S-P免疫组织化学技术,对35例原发性胆囊癌、10例胆囊腺瘤及10例慢性胆囊炎行cyclinE多克隆抗体的免疫组化标记 。结果:胆囊癌cyclinE的阳性率为48.57%,与胆囊腺瘤、胆囊炎（阳性率均为10%）比较差异有显著性（P<0.05）。cyclinE阳性表达率在病理组织学分级中有显著性差异（P<0.05）,伴淋巴结及远处转移者cyclinE阳性表达率明显高于无转移者,而与Nevin分期无关。cyclinE表达程度与性别、年龄无关 。结论:cyclinE可反映细胞的增殖状态,是判断胆囊癌发生发展的重要生物学标志。     

血管内皮生长因子与E-钙粘蛋白在胆囊癌组织中的表达研究

目的：探讨血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF)与F－钙粘蛋白（E－Cad)在胆囊癌组织中的表达及与胆囊癌发生发展的关系。方法：应用免疫组织化学法检测14例胆囊腺癌和41例胆囊癌组织中VEGF、E－Cad的表达。结果：VEGF阳性表达率胆囊腺瘤中为42．86％，胆囊癌组织中为80．49％，二者差异有显著意义（P＜0．05），E－Cad在胆囊腺瘤中仅1例表达减弱，而在胆囊癌组织中表达减弱或不表达占68．29％（28／41），差异有非常显著意义（P＜0．01）。胆囊癌直径≥2cm及侵及浆膜组VEGF表达升高，而E－Cad表达率明显降低，E－Cad表达率在远处转移组也明显降低。两者表达与肿瘤Nevin分期、组织学分级及有无淋巴结转移无关。结论：VEGF与E－Cad在胆囊癌发生和浸润转移过程中发挥重要作用，两者表达率的高低可作为预示胆囊癌进展及判断预后的指标。     

Association of p53, p16, and vascular endothelial growth factor protein expressions with the prognosis and metastasis of gallbladder cancer

BACKGROUND: Tumor suppressor genes were studied in gallbladder disease including cancer for correlation. VEGF (vascular endothelial growth factor) expression was assessed against Nevin staging and metastasis of gallbladder carcinoma. The importance of p53, p16, and VEGF in gallbladder cancer was estimated. STUDY DESIGN: Twenty-four gallbladder carcinomas, 20 gallbladder adenomas, and 18 chronic cholecystitis specimens were immunohistochemically and histopathologically investigated for the relation of p53, p16, and VEGF to Nevin staging and pathologic grading. RESULTS: The expression rate of abnormal p53 in gallbladder carcinomas was significantly higher than that in gallbladder adenoma and chronic cholecystitis (p = 0.003, p = 0.014). The expression rate of abnormal p53 in Nevin staging S1, S2, S3 gallbladder carcinoma was significantly higher than that in S4, S5 (p = 0.01). Abnormal p16 was highest in carcinoma, next in adenoma, and lowest in chronic cholecystitis (p = 0.031, p = 0.017). Gallbladder carcinoma expressed VEGF far more often than adenoma or cholecystitis (p = 0.001); VEGF-positive rates were lower in S1, S2, S3 than S4, S5 by Nevin staging of gallbladder cancer (p = 0.044). CONCLUSION: Mutation of p53 and p16 genes might correlate with progression of of gallbladder carcinoma. Analysis of p53 and p16 can estimate the prognosis of gallbladder cancer. VEGF expression correlates with Nevin staging in gallbladder cancer.     

高尔基磷酸化蛋白3在胆囊癌组织中表达的临床意义及其与血管生成的关系

背景与目的:胆囊癌是来源于胆道系统的恶性肿瘤,其起病隐匿、恶性程度高、预后极差。高尔基磷酸化蛋白3(GOLPH3)是一种癌基因,其通过启动一系列信号通路参与肿瘤的发生、发展。目前GOLPH3在胆囊癌中的表达及其临床意义尚未见报导。由于血管生成是肿瘤生长的必要条件,故本研究探讨GOLPH3在胆囊癌组织中的表达及其与促血管形成因子VEGF、肿瘤血管生成的关系。方法:收集中国人民解放军联勤保障部队第九〇四医院2010年1月-2018年12月期间手术切除的胆囊癌组织标本80例及慢性胆囊炎组织标本30例,采用免疫组化的方法检测标本中GOLPH3、VEGF的表达及肿瘤微血管密度(MVD)计数(以CD34的表达标记)。分析GOLPH3、VEGF、MVD计数与胆囊癌患者临床病理特征及预后的关系,并分析胆囊癌组织中GOLPH3、VEGF表达与MVD计数三者的相关性。结果:胆囊癌组织GOLPH3、VEGF的阳性表达率及MVD计数均明显高于慢性胆囊炎组织(均P<0.05)。胆囊癌组织GOLPH3与MVD的表达与患者肿瘤分化程度、有无淋巴结转移、TNM分期有关(均P<0.05),而VEGF的表达与患者TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。胆囊癌组织中GOLPH3表达与VEGF表达呈正相关(r=0.437,P<0.05),并且两者的表达均与MVD计数呈正相关(r=0.416、0.433,均P<0.05)。生存分析显示,GOLPH3、VEGF表达阳性胆囊癌患者生存率明显低于各自的阴性表达患者(χ~2=5.300、6.023,均P<0.05),而高MVD计数胆囊癌患者生存率明显低于低MVD计数患者(χ~2=11.986,P<0.05)。结论:GOLPH3的表达与胆囊癌的恶性临床病理特征及胆囊癌患者的不良预后密切相关,基于GOLPH3与VEGF及MVD之间的相关性推测,它可能通过影响VEGF的表达来促进肿瘤的血管生成,进而促进胆囊癌的生长及转移。     

环氧合酶-2在原发性胆囊癌中的表达及临床意义

目的：研究环氧合酶—2基因(COX—2)在原发性胆囊癌中的表达及其意义，探讨COX—2与原发性胆囊癌发生与发展的关系，为原发性胆囊癌的防治提供实验依据。方法：应用免疫组织化学SABC法检测39例原发性胆囊癌、11例胆囊腺瘤和16例慢性胆囊炎组织中COX—2蛋白的表达情况，并结合临床病理指标进行分析。结果：COX—2在原发性胆囊癌、胆囊腺瘤和慢性胆囊炎组织中的阳性表达率分别为82％(32/39)、36％(4／11)和25％(4／16)，其差异有显著性(P＜0．05)；原发性胆囊癌组织中COX—2的表达在Nevin分期晚期病例比早期高(P＜0．05)，有转移者明显高于无转移者(P＜0．05)。结论：COX—2在原发性胆囊癌组织中为诱导性表达，其表达上调与原发性胆囊癌的形成关系密勿，并与肿瘤Nevin分期及是否有转移相关，提示COX—2在原发性胆囊癌的发生、发展中可能起一定作用。     

Survivin在胆囊癌中的表达及其与p53相关性研究

目的检测胆囊癌中凋亡抑制因子Survivin的表达，研究其与胆囊癌f临床特征的关系，并探讨其与p53的相关性。方法采用免疫组织化学技术检测45例胆囊癌组织、20例胆囊息肉、20例胆囊炎及10例正常胆囊组织中Survivin和p53表达。结果45例胆囊癌组织中40例表达Survivin蛋白，34例表达p53蛋白，表达p53的病例中，31例表达Survivin阳性。而在胆囊息肉、胆囊炎及正常胆囊组织中不表达。且Survivin的表达与胆囊癌病人性别、年龄、肿瘤大小、病理分级、Nevin分期、淋巴结转移无关（P〉0．05），而p53与淋巴结转移密切相关（P〈0．01）。结论Survivin在胆囊癌中的高表达提示其可能与肿瘤的发生有关，Survivin和p53突变对凋亡抑制的协同作用在胆囊癌的发生发展过程中起重要作用。     

p73蛋白在原发性胆囊癌中的表达及意义

目的 研究p73蛋白在原发性胆囊癌中的表达并探讨其与肿瘤生物学行为、预后的关系。方法 应用免疫组化S-P法检测p73蛋白在49例原发性胆囊癌、15例胆囊腺瘤性息肉和12例慢性胆囊炎组织中的表达。结果 p73蛋白在原发性胆囊癌中的阳性表达率为49％(24/49),而在胆囊腺瘤性息肉和慢性胆囊炎中均无表达,具有显著差异(P<0.01)。胆囊癌组织中p73蛋白表达与肿瘤分化程度有关,在低分化癌中有较高表达,与高中分化癌比较,差异有显著性(P<0.05)。与性别、年龄、淋巴结有无转移和Nevin分期无关(P>0.05)。与预后有关,p73蛋白表达阴性病人预后显著优于p73蛋白表达阳性病人,术后1年内死亡者p73阳性表达率为68％(21/31),1～3年死亡组为25％(3/12),而>3年死亡组为0,差异有显著性(P<0.05)。结论 p73蛋白在原发性胆囊癌组织中呈高水平表达,p73基因可能参与了胆囊癌的发生、发展过程,可作为判断原发性胆囊癌分化程度和预后的指标。     

cyclin E和p27kip1蛋白在胆囊癌组织中的表达及其意义

目的　探讨cyclinE和 p2 7kip1蛋白在胆囊癌组织中的表达及其意义。方法　采用免疫组化SP法检测 4 1例胆囊癌和 15例慢性胆囊炎组织中cyclinE及p2 7kip1蛋白的表达 ,并分析两者的表达与胆囊癌临床病理特征的关系。结果　cyclinE在胆囊癌组织中的表达阳性率为 6 1.0 % (2 5 / 4 1) ,显著高于慢性胆囊炎的 2 0 .0 % (3/15 ) ,P<0 .0 5 ;胆囊癌组织中p2 7kip1蛋白的表达阳性率为 5 3.7% ,低于慢性胆囊炎的 10 0 % (P<0 .0 5 )。cyclinE的表达与胆囊癌TNM分期呈正相关 (r =0 .314 ,P<0 .0 5 ) ,p2 7kip1蛋白的表达则随胆囊癌TNM分期进展、组织学分化程度的降低而逐渐下降 (P<0 .0 5 ) ,cyclinE与 p2 7kip1蛋白表达之间呈负相关 (r =- 0 .342 ,P<0 .0 5 )。结论　cyclinE蛋白高表达和 p2 7kip1蛋白表达下降导致细胞周期的调控异常 ,可能参与了胆囊癌的发生、发展过程。     

ABCG2和OCT4在胆囊癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨ABCG2和OCT4在胆囊癌组织中的表达及临床意义。方法:应用实时荧光定量PCR法检测新鲜的胆囊良、恶性组织中ABCG2和OCT4 mRNA中的表达。采用Western印迹法检测新鲜的胆囊良、恶性组织中ABCG2和OCT4蛋白的表达。采用免疫组化法检测40例胆囊癌组织和8例慢性胆囊炎组织石蜡切片中ABCG2和OCT4的表达水平。对ABCG2和OCT4表达情况进行统计学处理,并分析其与临床病理特征之间的关系。结果:①实时荧光定量PCR显示,胆囊癌组织中ABCG2和OCT4 mRNA中的表达分别为(117.9±10.5)和(86.2±13.2),均高于慢性胆囊炎组织[(27.1±7.9)和(2.1±1.0)]的表达,各组间有统计学差异。②Western印迹法检测显示,ABCG2蛋白在胆囊癌组织中的表达水平较强,而在慢性胆囊炎组织表达较弱;在慢性胆囊炎组织中未见OCT4蛋白表达,而在肿瘤中都有表达。③免疫组化实验结果显示,ABCG2的阳性表达率在胆囊癌和慢性胆囊炎组分别为60.0%和37.5%,两组间有统计学差异(P0.05),但与周围脏器侵犯与否、癌组织分化程度及病理TNM分期有关(P<0.05)。结论:与慢性胆囊炎组织相比,ABCG2和OCT4在胆囊癌组织中的转录和翻译水平都有过表达。ABCG2和OCT4的表达水平与胆囊癌侵袭能力、分化程度及TNM分期有关,且两者表达呈正相关;提示ABCG2和OCT4是反映胆囊癌生物学行为的重要指标。     

胆囊癌组织细菌L型的检测与p21及p53基因突变的关系

目的 探讨胆囊癌的发生与细菌L型感染和p21及p53基因突变的关系。方法 采用免疫组化SP法和革兰氏染色技术，对40例胆囊癌及40例慢性胆囊炎组织中的细菌L型和突变型p53蛋白及p21蛋白进行检测，并对胆囊癌组织中的细菌L型阳性伴p21及p53蛋白阳性表达结果和细菌L型阴性伴p21及p53蛋白阳性表达结果进行对比分析。结果 胆囊癌组织中革兰氏染色细菌L型检出率为77．5％(31／40)，明显高于胆囊炎的57．5％(23／40)，P＜0．05，且与免疫组化细菌L型抗原表达阳性率[80．0％(32／40)]具有一致性；胆囊癌组织中的p21及p53蛋白表达阳性率分别为62．5％(25／40)和65．0％(26／40)，明显高于胆囊炎组织中的p21及p53蛋白表达阳性率[2．5％(1／40)和5.0％(2／40)]，P＜0．05；胆囊癌组织中的细菌L型阳性者其p21及p53蛋白表达阳性率分别为75．0％(24／32)和78．1％(25／32)，明显高于细菌L型阴性者的p21及p53蛋白的表达阳性串率[12.5％(1／8)，12．5％(1／8)]，P＜0。05。结论 细菌L型参与了p21及p53基因的突变，并在胆囊癌的发生中可能起协同作用。     

Survivin和p27kipl在胆囊癌中的表达及相关性研究

目的 检测胆囊癌中Survivin和p27kip1的表达,研究它们与胆囊癌临床病理特征的关系.并探讨两者的相关性.方法 采用免疫组织化学技术检测50例胆囊癌组织、20例胆囊息肉、20例胆囊炎组织中Survivin和p27kip1表达.结果 50例胆囊癌组织中39例Survivin蛋白表达阳性,22例p27kip1蛋白表达阳性.二者表达呈负相关系;Survivin在胆囊息肉和胆囊炎标本中不表达,p27kip1在胆囊息肉和胆囊炎标本中呈高表达;Survivin在胆囊癌中的表达与病人性别、年龄、病理分级、Nevin分期、淋巴结转移无关(P>0.05),p27kip1在胆囊癌中的表达与病理分级、Nevin分期、淋巴结转移有关(P<0.05),而与年龄、性别无明显相关性.结论 Survivin和p27kip1表达异常可能在胆囊癌的发生、发展中起重要的作用,二者在胆囊癌的发生、发展中可能有相互作用;Survivin在胆囊癌中的高表达提示其可能与肿瘤的发生有关;p27kip1有可能成为判断胆囊癌预后的有效指标之一.