NMDA受体NR1a与NR2A亚单位重组体在HEK-293细胞的功能表达

目的 :建立表达大鼠NMDA(N methyl D aspartate)受体NR1a与NR2A亚单位重组体的细胞模型 ,研究其生物学及药理学特性。方法 :利用脂质体转染方法将大鼠NR1a与NR2A亚单位重组体共转染到HEK 2 93细胞中 ,在细胞培养 4 8～ 72h后 ,利用膜片钳全细胞记录技术 ,观察和分析L 谷氨酸诱发的NMDA受体电流。结果 :向转染后的HEK 2 93细胞表面喷射NMDA受体激动剂L 谷氨酸可在 38%细胞上诱发出瞬时内向电流 ,该电流可被NMDA受体选择性拮抗剂D AP5 (5 0 μmol/L)完全阻断。L 谷氨酸诱发的电流具有快速失敏的动力学特征和内向整流特性 ,衰减时间常数 (τ值 )为 (5 3± 9)ms(n =2 0 )。L 谷氨酸诱发电流的EC50 值为 (8.5± 0 .5 ) μmol/L。 结论 :成功地将NR1a与NR2A亚单位转染入HEK 2 93细胞并形成NMDA受体的功能性表达 ,为进一步深入研究NMDA受体不同亚单位组成与其功能的关系及其药理学特性奠定了基础。     

不同条件微波辐射致大鼠学习和记忆能力及脑组织结构改变的影响研究

目的探讨微波单次和累积辐射对大鼠学习和记忆能力以及脑组织结构的影响。方法对80只二级SD大鼠采用单次和累积辐射,单次辐射平均功率密度分别为2 mW/cm2和11 mW/cm2,累积辐射组每天辐射,平均功率密度为4.68μW/cm2,连续辐射30 d。采用Morris水迷宫观察大鼠学习与记忆能力的改变,于辐射后1,7,14,30,60 d采用光镜和电镜观察大鼠脑组织学和超微结构的改变。结果 （1）单次辐射后,与正常对照组相比,各辐射组大鼠逃避潜伏期均在辐射后有不同程度延长。2 mW/cm2组辐射后1 d和2 d,大鼠逃避潜伏期差异有显著性,11 mW/cm2组辐射后1 d和3 d,逃避潜伏期有显著性差异。累积辐射后大鼠逃避潜伏期无显著性差异。（2）11 mW/cm2组辐射后7~14 d,大鼠海马和大脑皮质神经元皱缩,核固缩,线粒体肿胀,局部空化,内质网扩张,突触间隙不清、囊泡减少,血管内皮连接增宽;累积辐射后14 d,大鼠海马及大脑皮质神经元固缩,线粒体肿胀空化,内质网扩张,突触间隙不清。结论 2和11 mW/cm2微波单次辐射可使大鼠学习和记忆能力下降,大鼠脑组织结构损伤;4.68μW/cm230 d微波累积辐射可引起大鼠脑组织结构损伤。     

低氧和运动训练对大鼠学习记忆功能的影响及其与海马突触功能可塑性之间的关系

目的:探讨低氧和运动训练对大鼠学习记忆的作用和交互作用及其与海马突触传递功能之间的关系。方法:采用交互设计的研究方案对SD大鼠进行8周14.2%的低氧暴露或/和60 min的无负重游泳训练后,通过Morris水迷宫检测大鼠的学习和记忆能力,并测定海马组织中γ-氨基丁酸(GABA)含量和N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR)亚基NR1、NR2B的m RNA表达量。结果:1长期的低氧暴露可使大鼠的潜伏期显著增加(P<0.05),穿越平台的次数显著减少(P<0.05),运动训练能使大鼠的潜伏期显著缩短(P<0.05),穿越平台的次数显著增加(P<0.05),低氧联合运动训练对缩短大鼠潜伏期、提高大鼠穿越平台次数没有显著的交互作用(P>0.05)。2慢性低氧暴露能显著降低海马组织中NR1和NR2B m RNA的表达(P<0.05),运动训练能显著提高海马组织中NR1和NR2B的m RNA表达和降低GABA含量(P<0.05),低氧联合运动训练对海马组织中NR1、NR2B m RNA表达的提高和GABA含量的降低没有显著的交互作用(P>0.05)。结论:1长期的低氧暴露可抑制学习记忆能力,而运动训练能够增加学习记忆能力,虽然运动训练在一定程度上可以改善低氧暴露大鼠的学习记忆能力,但是并不能完全逆转低氧暴露所造成的学习能力下降。2长期的低氧暴露或运动训练可下调或上调海马NR1和NR2B m RNA表达,抑制或增强海马突触功能可塑性,这可能是影响学习记忆能力的重要机制。     

东莨菪碱和丙泊酚合用对小鼠学习记忆的影响

目的：观察东莨菪碱与丙泊酚合用对小鼠学习记忆的影响。方法：30只小鼠分为3组：东莨菪碱组（S组）、丙泊酚组（P组）、两药合用组（SP组）,每组10只。用跳台法观察小鼠跳台错误次数和跳下潜伏期。结果：SP组用药后第1 d错误次数均多于S组和P组（P〈0.05）,潜伏期均短于S组和P组（P〈0.05）;用药后第2 d和第4 d,各组错误次数、潜伏期的差异均无显著性（P〉0.05）。结论：东莨菪碱与丙泊酚合用当天抑制小鼠学习记忆呈协同作用,学习记忆功能障碍在停药1 d后迅速消失,提示不会造成持久性的学习记忆障碍。     

丙泊酚与地西泮合用对小鼠学习记忆的影响

目的：研究丙泊酚与地西泮合用对小鼠学习记忆的影响。方法：将小鼠分为4组（n=10）：生理盐水（NS）组、地西泮（D）组、丙泊酚（P）组、丙泊酚与地西泮合用（DP）组,用跳台和避暗实验分别观察各组不同时间相应的潜伏期、错误次数,以其评估对小鼠学习记忆的影响。结果：在跳台和避暗实验中,用药后第1d,与NS组相比,D、P和DP组错误次数均增加、潜伏期均缩短（P〈0.05或P〈0.01）;与DP组相比,D组、P组错误次数减少、潜伏期延长（P〈0.05或P〈0.01）;用药后第2d,在避暗实验中,与DP组相比,D组错误次数减少、潜伏期延长（P〈0.05）;用药后第3d各组间的差异均无显著性（P〉0.05）。结论：丙泊酚与地西泮单用可以抑制小鼠学习记忆能力,合用呈协同作用,但不会造成持久的学习记忆障碍。     

丙泊酚、神经节苷脂对幼鼠认知和caspase-3表达的影响

目的 探讨丙泊酚及神经节苷脂(GM1)对SD幼鼠认知功能及脑神经细胞caspase-3表达的影响.方法 17～18日龄SD大鼠77只,体重33～42g,随机分为7组(每组11只),分别腹腔注射生理盐水10ml/kg(NS组)、丙泊酚50mg/kg(P50组)、丙泊酚100mg/kg(P100组)、丙泊酚200mg/kg(P200组)、神经节苷脂10mg/kg(G组)、丙泊酚100mg/kg+神经节苷脂10mg/kg(P100G组)、丙泊酚200mg/kg+神经节苷脂10mg/kg(P200G组 ),一次性或分次腹腔注射当天药量,连续6d.前5d每天用Morris水迷宫测试其空间学习能力,第6天撤去平台测试其记忆能力.测试结束后处死大鼠,断头取脑,每组随机选取8只应用免疫组化法检测caspase-3的表达,余下3只取新鲜脑组织进行Western blotting检测caspase-3蛋白表达.结果 在水迷宫实验中,与NS组比较,P100组、P200组和P200G组寻找平台潜伏期显著延长,穿越平台次数明显减少(P<0.05);与P100G组比较,P100组寻找平台潜伏期显著延长,穿越平台次数明显减少(P<0.05).免疫组化结果显示,P100组、P200组、P100G组及P200G组caspase-3表达明显高于NS组(P<0.05).Western blotting结果显示,P100G组caspase-3蛋白表达明显低于P100组(P<0.05),而P200G组和P200组间差异无统计学意义.结论 较大剂量的丙泊酚可引起caspase-3表达明显增高,影响幼鼠的认知功能;GM1能明显抑制大剂量丙泊酚引起的caspase-3的表达增加,抑制神经细胞凋亡,减轻幼鼠的认知功能障碍.     

丙泊酚对匹鲁卡品诱发癫痫持续状态大鼠海马NMDA受体2A、2B亚型表达的影响

目的建立可逆性胆碱酯酶抑制剂匹鲁卡品诱发大鼠癫痫持续状态(SE)模型,观察丙泊酚对SE大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚型(NR2A、NR2B)表达的影响。方法60只SD大鼠随机分为6组(n=10):空白对照(BLK)组、SE组、丙泊酚50mg/kg(PPF)组、安定10mg/kg(DZP)组、东莨菪碱10mg/kg(SCOP)组及MK-801(2mg/kg)组。匹鲁卡品30mg/kg诱发SE模型,惊厥发作程度以Racine分级法判断,反复发作达到4～5级的大鼠纳入实验。待SE发作后30min,各实验组动物分别腹腔注射相应药物,而BLK组和SE组则注射等量生理盐水。24h后取各组大鼠大脑组织,采用免疫组化法检测SE大鼠海马NR2A、NR2B的表达情况。结果SE发作后24h,与BLK组相比,SE组大鼠海马NR2A、NR2B亚型的阳性表达量显著增加(P<0.05);与SE组相比,PPF组海马NR2B表达显著降低(P<0.05),而NR2A亚型表达无明显变化。与SE组相比,MK-801组皮层NR2A、NR2B亚型的表达显著降低(P<0.05),而DZP组、SCOP组的NR2A、NR2B亚型表达无统计学...     

大鼠严重烧伤后早期下丘脑NMDA受体NR1和NR2B亚基的表达

目的 观察大鼠严重烧伤后早期下丘脑N-甲基-D-天冬氨酸(N- methyl -D -aspartic acid,NMDA)受体NR1及NR2B亚基表达的变化,探讨严重烧伤后下丘脑-垂体-肾上腺皮质( hypothalamus - pituitary - adrenal,HPA)轴活化状态发生变化的机制. 方法 按随机数字表法将40只SD大鼠分为对照组和烧伤组(包括伤后6,24,48 h组),并建立30％体表面积背部皮肤Ⅲ度烧伤模型,采用免疫组织化学染色、Western blot蛋白印迹法观察大鼠下丘脑组织中NMDA受体NR1、NR2B亚基表达的变化. 结果 大鼠在严重烧伤后HPA轴活性显著增强,血清皮质醇浓度及血流动力学相关指标在伤后均发生了明显变化,血清皮质醇在伤后6h达到高峰,伤后48 h仍显著高于对照组(P＜0.05),收缩压(SP)、舒张压(DP)、左心室收缩压(LVSP)均在伤后6h显著下降,其中SP、DP在伤后48 h时仍低于对照组(P＜0.05).Western blot检测结果 显示,烧伤各组NR1亚基表达增加,伤后24h达到高峰(1.12±0.27),与对照组(0.45±0.15)比较,差异有统计学意义(P＜0.05);而NR2B亚基的表达明显减少,6h最为明显(0.65±0.21),与对照组(1.38 ±0.51)比较,差异有统计学意义(P＜0.05),48 h恢复到伤前水平(1.25±0.30),与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).下丘脑室旁核(hypothalamus paraventricular nucleus,PVN)免疫组织化学染色中获得与Western blot相一致的结果 . 结论 下丘脑NR1及NR2B亚基长时间的可塑性变化可能是严重烧伤后早期HPA轴活化状态发生变化的机制之一.     

游泳训练对大鼠学习记忆和脑内神经递质的影响

目的:探讨8周游泳训练对大鼠学习记忆的影响及其与脑内多巴胺(DA)的关系.方法:本实验选取28只3月龄SD大鼠,随机分成4组:对照组(C组)、无训练运动即刻组(E组)、训练对照组(TC组)、训练运动即刻组(TE组).TC组、TE组进行每周4次的无负重游泳训练,每次1小时,共8周.所有大鼠每周进行一次迷宫实验的测试.E组和TE组在第8周最后一次运动后即刻,与C组、TC组一起迅速断头处死,各组交叉进行,迅速取血液和脑组织(纹状体、海马、前额叶皮层、伏隔核)测试.结果:第7周时,TC组和TE组大鼠迷宫实验的错误次数比C组和E组显著减少,说明7周的游泳训练能显著提高大鼠的学习记忆能力.同时发现游泳训练使大鼠脑内纹状体、海马、前额叶皮层和伏隔核中DA的含量显著增加.提示:游泳训练提高大鼠的学习和记忆能力可能与DA等神经递质的正相调控作用有关.     

氚对神经细胞迁移相关因子表达及空间学习记忆能力的影响

目的 探讨氚水（HTO）对大鼠海马神经细胞迁移相关因子表达及空间学习记忆能力的影响。方法 取24 h内新生鼠脑海马细胞培养,培养第7天以0、3.7×10²、3.7×10³、3.7×10⁴、3.7×10⁵、3.7×10⁶ Bq/ml终浓度氚水培养细胞24 h;Western blot法、RT-PCR法分别检测各浓度氚水处理后的神经细胞骨架蛋白（F-肌动蛋白、α-微管蛋白、tau蛋白及MAP2蛋白）、脑源性神经细胞营养因子（BDNF）及Reelin mRNA的表达情况。取妊娠14 d孕鼠16只,采用随机数表法分两组,每组8只,实验组单次注射3.7×10⁶ Bq/g （体重）氚水,对照组注射等量体积生理盐水,Morris水迷宫法观察出生后两组大鼠的空间学习能力。结果 3.7×10²、3.7×10³、3.7×10⁴、3.7×10⁵、3.7×10⁶ Bq/ml终浓度氚水处理后的神经细胞中,F-肌动蛋白（t=8.898~25.749,P<0.05）、α-微管蛋白（t=3.261~7.900,P<0.05）、tau （t=2.274~5.003,P<0.05）、MAP2（t=2.274~5.003,P<0.05）、BDNF mRNA （t=3.580~19.792,P<0.05）、Reelin mRNA （t=3.240~39.692,P<0.05）表达水平均低于0 Bq/ml浓度并随氚水浓度的升高表达量呈递减趋势。Morris水迷宫结果显示,与对照组相比,实验组大鼠逃避潜伏期延长（t=-2.563,P<0.05）,目标象限穿行次数减少、停留时间缩短（t=3.214、3.874,P<0.05）。结论 HTO辐射对大鼠神经元迁移相关因子表达和空间学习有影响,这可能有助于了解放射性脑损伤的机制。     

谷氨酸对腺苷A2A受体调节一氧化氮合酶活力的影响

目的探讨谷氨酸是否能够影响腺苷A2A受体对一氧化氮合酶（NOS）活力的调节。方法用1000ng／ml脂多糖（LPS）刺激小胶质细胞，分别加入100nmol／L A2A受体激动剂CGS21680以及不同浓度的谷氨酸（0，1，0，25，0，5mmol／L）干预，观察NOS活力变化。结果LPS诱导NOS活力增高，激活A2A受体可以产生抑制作用；0，25及0．5mmoL／L谷氨酸和A2A受体激动剂同时存在时，NOS活力进一步增高。结论高浓度谷氨酸可逆转腺苷A2A受体激动剂抑制升高NOS活力的作用。     

中隔核毁损对MAP大鼠颞叶皮质多巴胺受体的影响

目的 :探讨立体定向中隔核毁损对甲基苯丙胺 (MAP)大鼠脑颞叶皮质多巴胺D2受体表达的影响。方法 :4 0只SD大鼠随机分为对照组、MAP组、MAP +毁损组和MAP +假毁损组 ,每组各 10只 ;采用经腹腔注射MAP制备精神分裂症MAP模型 ,立体定向 -射频毁损中隔核 ,免疫组织化学ABC法观察颞叶皮质多巴胺受体 2型的表达。结果 :与对照组比较 ,MAP组及MAP+假毁损组大鼠颞叶皮质多巴胺受体 2型表达有非常显著性差异 (P <0 .0 1) ;MAP +毁损组大鼠颞叶皮质多巴胺受体 2型阳性细胞数目与对照组比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :中隔核毁损可以抑制使用MAP而诱发的颞叶皮质多巴胺受体 2型表达的亢进。     

丙泊酚对新生大鼠海马BDNF mRNA、proBDNF/mBDNF表达的影响及其与学习记忆功能的关系

目的 探讨丙泊酚麻醉对新生大鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA、BDNF前体(proBDNF)/成熟型BDNF(mBDNF)表达的影响及其与学习记忆功能的关系.方法 108只新生7d SD大鼠随机分为对照组(C组)、丙泊酚单次麻醉组(P1组)和丙泊酚多次麻醉组(P2组),每组36只.C组腹腔注射生理盐水7.5ml/(kg.d),连续7d;P1组腹腔注射生理盐水7.5ml/(kg.d),连续6d,第7天腹腔注射丙泊酚75mg/kg;P2组腹腔注射丙泊酚75mg/(kg.d),连续7d.各组于第7天注射完毕后15min随机选取6只大鼠,心室穿刺采血,测定血糖及血气分析;于注射完毕后6h、24h、48h、72h及30d,每组随机抽取6只大鼠,分离海马组织,采用RT-PCR检测BDNF mRNA的表达,Western blotting检测mBDNF、proBDNF蛋白的表达;各组取6只大鼠喂养至出生25d进行Morris水迷宫实验,测试空间学习记忆能力.结果 C组大鼠海马BDNF mRNA及mBDNF蛋白表达水平逐渐升高,proBDNF蛋白表达水平及proBDNF/mBDNF比值逐渐降低.与C组比较,P1组各时间点海马BDNF mRNA及mBDNF蛋白表达水平下降(P＜0.05),proBDNF/mBDNF比值升高(P＜0.05),大鼠幼年期逃逸潜伏期延长,空间探索时间缩短(P＜0.05);与C组及P1组比较,P2组各时间点海马BDNF mRNA及mBDNF蛋白表达水平下降,proBDNF蛋白表达及proBDNF/mBDNF比值升高(p＜0.05),大鼠幼年期逃逸潜伏期延长,空间探索时间缩短(P＜0.05).结论 丙泊酚麻醉可导致大鼠幼年期学习记忆功能减退,且多次麻醉的效果强于单次麻醉,其机制可能与BDNF mRNA、proBDNF)/mBDNF表达改变有关.     

AT2受体对自发性高血压大鼠肾脏近曲小管上皮细胞AT1受体表达与功能的影响

目的 研究AT2受体激动剂CGP42112对自发性高血压大鼠(SHR)肾脏近曲小管上皮(RPT)细胞AT1受体的表达及功能的影响.方法 以RPT细胞株作为研究对象,采用不同浓度AT2受体激动剂CGP42t12(10-9～10-7mol/L)作用24h或同一浓度CGP42112(10-7mol/L)作用不同时间(8、16...     

犬冲击伤复合破片伤血栓素A2受体表达变化

目的 探讨血栓素A2受体表达以及在血栓素A2受体信号通路中起重要作用的磷脂酶A2在犬冲击伤复合破片伤肺组织中的变化。方法 实验动物经BST－I型生物激波管致中度肺冲击伤，三角形破片致单侧后肢破片伤。检测伤后24小时肺组织血栓素A2受体最大结合容量和亲和力、血栓素A2受体基因表达以及磷脂酶A2活性水平。结果 复合伤组动物肺组织血栓素A2受体数目明显低于其它各实验组。与对照组相比，单纯冲击伤组、单纯破片伤组和复合伤组动物肺组织血栓素A2受体基因转录水平以及磷脂酶A2活性明显升高，但以复合伤组最为显著。结论 冲击伤复合高速破片伤肺组织血栓素A2受体的表达以及磷脂酶A2活性变化与单纯冲击和破片伤有显著不同。     

补充支链氨基酸对运动大鼠脑及血小板5-HT2A受体与螺环哌丁苯结合影响的研究

采用放射标记受体测定技术观察补充支链氨基酸 (BCAA)或BCAA +CHO对SD大鼠一次性运动以及 3周耐力训练后的一次性运动前后血小板以及脑 5 -HT2A受体与 [3H]Spiperone(螺环哌丁苯 )结合的影响 ,结果表明 :急性耐力运动可导致SD大鼠脑 5 -HT浓度的增加 ,并且导致血小板以及脑 5 -HT2A受体下调 ,大鼠 3周耐力训练期间补充BCAA +CHO有防止由耐力运动引起的 5-HT2A受体密度下调的作用 ,长期耐力训练期间补充BCAA +CHO对延缓中枢疲劳有积极的作用。