人参皂苷Rh2联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响

目的:探讨人参皂苷Rh2联合顺铂对于人卵巢癌细胞株SKOV-3的影响。方法:采用MTT比色法检测人参皂苷Rh2与DDP联合应用对SKOV-3细胞株增殖的影响,利用流式细胞仪分析细胞周期及凋亡情况,并计算细胞平均凋亡率,利用Western-blot技术观察SKOV-3细胞内HER-2蛋白的表达。结果:①Rh2与DDP联合应用分别作用于SKOV-3卵巢癌细胞株,单独应用DDP 350μmol/L和600μmol/L IC50降为DDP 250μmol/L和300μmol/L。②流式细胞术检测显示,DDP+Rh2组凋亡率在SKOV-3细胞系中为32.2%,SKOV-3细胞被阻止于G1期,在SKOV-3 DDP细胞中为12.5%,均显著高于仅应用DDP组细胞(P<0.05),SKOV-3 DDP细胞亦被阻止于G1期。③Western blotting结果显示,SKOV-3细胞中DDP+Rh2组HER-2蛋白表达较对照组、DDP组、Rh2组显著降低(P<0.05)。结论:人参皂苷Rh2与DDP联合应用对SKOV-3卵巢癌细胞株有促凋亡作用,并改善卵巢癌细胞株SKOV-3 DDP对DDP的敏感性。     

黄芩提取物联合顺铂对人卵巢癌细胞株SKOV-3凋亡的研究

目的:探讨黄芩提取物(Scutellaria Baicalensis)与顺铂(cisplatin,DDP)联合应用对卵巢癌细胞系SKOV-3增殖及凋亡的影响。方法:采用MTT比色法检测S.Baicalensis与DDP联合应用对SKOV-3细胞增殖的影响,吖啶橙染色观察诱导细胞凋亡情况,流式细胞仪分析细胞周期及凋亡并计算细胞平均凋亡率,Westernblot技术观察细胞内p53、ERK1/2、p-STAT3的表达。结果:300μg/mlS.Baicalensis联合5μg/ml DDP给药:①48h后可使肿瘤细胞抑制率由单独应用DDP的15.8%提高到37.3%;②吖啶橙荧光染色可见细胞呈现明显凋亡形态,其凋亡率与10μg/ml DDP组相当;③流式细胞检测结果显示,可使细胞凋亡率从15.1%提高到42.2%(P<0.05);④westernblot结果显示,p53、ERK1/2、p-STAT3表达较5μg/ml DDP组单独给药组降低(P<0.05)。结论:S.Baicalensis与DDP联合应用增强对卵巢癌细胞株SKOV-3的致凋亡效应,联合应用可达到减毒增效的效果。     

甲羟孕酮对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP耐药的逆转作用

目的:应用甲羟孕酮(Medroxyprogesterone Acetate,MPA)体外逆转人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP的耐顺铂(cisplatin,DDP)效应,并对其作用机制进行初步探讨。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测MPA对SKOV3/DDP的细胞毒作用,确定MPA对此细胞株的非细胞毒性剂量作为逆转剂量,同法测定非细胞毒性剂量MPA联合DDP作用后SKOV3/DDP对顺铂耐药性的变化,采用流式细胞技术(FCM)检测细胞周期及凋亡情况。结果:单用MPA浓度大于7.50 g/L时对SKOV3/DDP细胞有不同程度的抑制作用,且呈剂量依赖性。MPA浓度小于15.85 g/L时,其对细胞生长无明显抑制作用(细胞存活率均>90%),因此选用15.00 g/L作为逆转剂量。DDP联合15.00 g/L的MPA作用24、48、72 h后,顺铂的IC50分别下降至(57.72±0.48)g/L、(13.39±0.21)g/L、(7.93±0.18)g/L,逆转倍数分别为1.22,1.90,2.44倍。DDP与MPA联合作用于SKOV3/DDP细胞,使其细胞周期阻滞于G0/G1期,S期细胞比例下降,并可以增加耐药细胞的凋亡率。结论:MPA可以逆转DDP引发的卵巢癌耐药,其可能的逆转耐药机制为促进细胞的凋亡,阻滞细胞周期进程。     

TAM和MPA联合用药对卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV-3/DDP生长的影响

目的探讨三苯氧胺(tamoxifen,TAM)和甲孕酮(medroxyprogesterone,MPA)联合用药对顺铂耐药的卵巢癌细胞株SKOV-3/DDP生长影响的机制.方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、电子显微镜及流式细胞仪测定用药前后SKOV-3/DDP细胞生长、形态学、周期及凋亡率的变化.结果低浓度的TAM和MPA联合用药组对SKOV-3/DDP细胞生长无影响.高浓度用药组可抑制卵巢癌细胞生长,电子显微镜可观察到细胞凋亡的形态学变化,1×10-6～1×10-4mol/L的TAM和MPA联合用药组在抑制细胞增殖的同时尚可诱导细胞凋亡,其细胞凋亡率分别为4.06%、11.77%、19.3%,两两比较,差异均有显著性(P＜0.05).结论TAM和MPA联合用药既对顺铂耐药的卵巢癌细胞有杀灭作用,又因其较小的副作用及肯定的临床意义有可能成为卵巢癌有效的化疗辅助用药.     

MDR1及MDR3基因与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系

目的:探讨MDR1(Multidrug resistance gene-1)及MDR3(Multidrug resistance gene-3)基因与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系。方法:两种质粒一起瞬时转染A2780/DDP细胞,空载体组及未转染组作为对照。Annexin V-FITC/PI双标流式细胞术、MTT法、RT-PCR、western blot分别检测A2780/DDP细胞早晚期凋亡、细胞增殖活性、MDR1和MDR3 mRNA表达及caspase-3蛋白水平。结果:两种质粒(pSuppressorNeo MDR1 siRNA,MDR3 siRNA)均未能逆转A2780/DDP细胞顺铂耐药:①流式显示转染MDR1 siRNA组、MDR3 siRNA组和pSuppressorNeo空载体组后相比较未转染A2780/DDP细胞凋亡率无显著改变(P>0.05);②在一定药物浓度范围内,转染MDR1和MDR3小分子干扰RNA均未能增强顺铂对A2780/DDP细胞的细胞毒作用;③与空载体组和未转染细胞相比,A2780/DDP细胞的MDR3及MDR1 mRNA表达均低下(P>0.05);④Caspase-3蛋白表达未见增加。结论:顺铂所致的卵巢癌细胞多药耐药与MDR1及MDR3基因过度表达均无关,卵巢癌细胞顺铂耐药为非P-gp     

TAM和MPA联合用药对卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV-3/DDP生长的影响

目的:探讨三苯氧胺(tamoxifen,TAM)和甲孕酮(medroxyprogesterone,MPA)联合用药对顺铂耐药的卵巢癌细胞株SKOV-3／DDP生长影响的机制。方法:用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、电子显微镜及流式细胞仪测定用药前后SKOV-3／DDP细胞生长、形态学、周期及凋亡率的变化。结果:低浓度的TAM和MPA联合用药组对SKOV-3／DDP细胞生长无影响。高浓度用药组可抑制卵巢癌细胞生长,电子显微镜可观察到细胞凋亡的形态学变化,1×10-6~1×10-4mol／L的TAM和MPA联合用药组在抑制细胞增殖的同时尚可诱导细胞凋亡,其细胞凋亡率分别为4.06％、11.77％、19.3％,两两比较,差异均有显著性(P<0.05)。结论:TAM和MPA联合用药既对顺铂耐药的卵巢癌细胞有杀灭作用,又因其较小的副作用及肯定的临床意义有可能成为卵巢癌有效的化疗辅助用药。     

紫杉醇联合顺铂对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药性的逆转作用

目的:探讨紫杉醇联合顺铂对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药性的逆转作用。方法:取对数生长期SK-OV3/DDP细胞进行实验。实验分为顺铂组、紫杉醇组、联合组和空白对照组。顺铂组细胞给予顺铂15μg/ml;紫杉醇组细胞给予紫杉醇3.13μg/ml;联合组细胞给予顺铂15μg/ml+紫杉醇3.13μg/ml;空白对照组细胞不给予任何药品。所有细胞均培养48 h后进行实验。采用MTT法检测细胞的生长抑制率。采用流式细胞术检测各组细胞的细胞周期和凋亡率。结果:顺铂组细胞生长抑制率与空白对照组无明显增加(P<0.05),证实SKOV3/DDP对顺铂的耐药,紫杉醇组和联合组细胞生长抑制率较空白对照组和顺铂组明显增加(P﹤0.05),联合组细胞生长抑制率最高,较紫杉醇组增加更为明显(P﹤0.05)。顺铂组与空白对照组细胞多被阻滞于G1和S期,紫杉醇及联合组细胞多被阻滞于G2/M期,联合组作用较紫杉醇组更加明显(P﹤0.05)。顺铂组细胞凋亡率与空白对照组无明显差异(P>0.05),紫杉醇组和联合组细胞凋亡率较空白对照组和顺铂组明显增加(P﹤0.05),联合组细胞凋亡率最高,较紫杉醇组增加更为明显(P﹤0.05)。结论:紫杉醇联合顺铂可明显逆转卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP对顺铂的耐药性。     

PTEN对耐顺铂的食管癌细胞的增殖及P-糖蛋白表达的影响

目的探讨PTEN对耐顺铂食管癌Ec9706/c DDP细胞增殖及P-gp表达的影响.方法采用顺铂浓度梯度增加的方法筛选食管癌耐药细胞株Ec9706/c DDP,采用流式细胞术检测PTEN转染后对Ec9706/c DDP细胞周期和凋亡的影响,采用Western blot检测PTEN转染后Ec9706/c DDP细胞P-gp表达改变。结果通过顺铂浓度梯度增加的方法成功诱导食管癌耐顺铂细胞株Ec9706/c DDP,与Ec9706/c DDP和Ec9706/c DDP+空载相比,转染野生型PTEN的Ec9706/c DDP细胞G1期细胞比例增加,S期细胞明显减少,差异有统计学意义(P0.05)。Ec9706/c DDP细胞株在野生型PTEN转染48 h后细胞凋亡率显著高于转染无活性G129E和C124S组,差异有统计学意义(P0.05)。Western blot结果显示:转染野生型PTEN的Ec9706/c DDP细胞P-gp蛋白的表达显著下调,而转染2种突变型的PTEN组没有明显改变。结论 PTEN在食管癌耐顺铂细胞株Ec9706/c DDP过表达能够显著抑制肿瘤细胞增殖,促进其凋亡,降低肿瘤耐药关键蛋白P-gp表达,从而逆转食管癌细胞的多药耐药。     

顺铂作用下卵巢癌敏感细胞A2780与耐药细胞A2780/DDP凋亡与自噬水平的变化及意义

目的:通过分析自噬对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响,探讨自噬与卵巢癌顺铂耐药性的关系,为卵巢癌治疗提供依据。方法:培养卵巢癌细胞株A2780和A2780/DDP,进行卵巢癌细胞系A2780及A2780/DDP顺铂敏感性的测定,流式细胞仪测定顺铂作用下A2780和A2780/DDP细胞的凋亡率;将10μM顺铂作用48h的A2780细胞和40μM顺铂作用48h的A2780/DDP细胞经处理,采用Western blot法检测Beclin1蛋白的表达;电镜下观察10μM顺铂作用48h的A2780细胞和40μM顺铂作用48h的A2780/DDP细胞经固定染色处理的自噬细胞活性。结果:顺铂主要通过诱导凋亡对卵巢癌耐药细胞A2780/DDP及敏感细胞A2780发挥细胞毒效应;顺铂作用下,耐药细胞的自噬活性明显增强,而敏感细胞自噬活性无明显增强。结论:顺铂诱导耐药卵巢癌细胞发生凋亡的能力较亲代敏感细胞降低,在其发生过程中,反应性自噬活性增强可能与其顺铂耐药性的形成有关,提示对肿瘤细胞的自噬水平进行监测及调控可能为逆转卵巢癌铂耐药提供新的思路。     

抑制自噬基因Beclin 1的表达对耐药卵巢癌细胞A2780/DDP顺铂敏感性的影响及相关机制研究

[目的]观察抑制自噬基因Beclin1的表达对卵巢癌耐药细胞A2780/DDP顺铂敏感性的影响并探讨其中机制。[方法]利用脂质体将自噬基因Beclin1RNA干扰质粒pSUPER-Beclin1和对照质粒pSUPER-non分别转染耐药卵巢癌细胞A2780/DDP,筛选稳定表达株,检测顺铂作用下各组细胞(pSUPER-Beclin1组、pSUPER-non组和未转染组)生长抑制率、半数抑制浓度(IC50)、自噬和凋亡率的变化。[结果]A2780/DDP细胞转染干扰质粒pSUPER-Be-clin1后,细胞内Beclin1蛋白的表达明显下降;比较3组细胞顺铂48hIC50,pSUPER-Beclin1转染组最低(P﹤0.01);对3组细胞自噬与凋亡水平的检测显示,抑制Beclin1蛋白表达,在顺铂作用下,细胞自噬水平明显下降,而凋亡细胞比例明显升高,凋亡蛋白Caspase-3的表达亦明显上调,实验组与对照组相比差异有统计学意义(P﹤0.01)。[结论]抑制耐药细胞A2780/DDP自噬基因Beclin1的表达,可通过抑制自噬,增强凋亡提高耐药细胞对顺铂的敏感性。     

癌宁对人胃腺癌细胞SGC—7901细胞因子及Fas基因表达的影响

目的：探索癌宁对体外人胃癌细胞基因及细胞因子表达的影响。方法：采用流式细胞术,对中药复方癌宁诱导胃癌细胞凋亡机制进行研究。结果：顺铂、癌宁组与空白对照比较,TGF－β1、Fas和Fas-L基因表达产物含量显著增高（P＜0．01）。结论：癌宁对人胃癌细胞的诱导凋亡作用与其对抑癌基因及细胞因子表达的改变有关。     

来曲唑与三苯氧胺对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP生长及耐药的影响

目的:研究来曲唑(letrozole,LTZ)与三苯氧胺(tamoxifen,TAM)对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP生长及耐药的影响。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,比较不同浓度的LTZ、TAM、LTZ+TAM对SKOV3/DDP细胞生长及对顺铂(cisplatin,DDP)耐药的逆转作用。结果:①不同浓度(1×10-9mol/L～1×10-4mol/L)LTZ或低浓度(1×10-9mol/L～1×10-7mol/L)TAM对SKOV3/DDP细胞生长无抑制,不能逆转DDP引发的耐药。高浓度(1×10-6mol/L～1×10-4mol/L)TAM能抑制SKOV3/DDP细胞的生长且能逆转DDP引发的耐药,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。②1×10-6mol/L TAM与各浓度(1×10-9mol/L～1×10-4mol/L)LTZ联合用药,对该细胞的生长抑制作用及逆转DDP引发的耐药较单用1×10-6mol/L TAM无明显增强,差异无统计学意义(P>0.05);(1×10-5mol/L～1×10-4mol/L)TAM与各浓度(1×10-9 mol/L～1×10-4 mol/L)LTZ联合用药,在LTZ为(1×10-6 mol/L～1×10-4 mol/L)时,两药联合对该细胞的生长抑制作用与单用TAM(1×10-5mol/L～1×10-4mol/L)及组间相比差异有统计学意义(P<0.01);在LTZ为(1×10-5mol/L～1×10-4mol/L)时,两药联合逆转DDP引发的耐药与单用TAM(1×10-5mol/L～1×10-4mol/L)逆转及组间相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:高浓度TAM可以逆转SKOV3/DDP细胞对DDP的耐药性;高浓度LTZ与TAM联合可使TAM逆转SK-OV3/DDP细胞对DDP耐药的作用增强。     

白藜芦醇对绒癌细胞JEG-3的杀伤效应

目的:研究白藜芦醇(RES)对绒癌细胞JEG-3的凋亡作用及其机制.方法:不同浓度RES药物作用于JEG-3细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术、Western blot法,检测RES对细胞增殖、周期分布、凋亡、及相关蛋白表达的影响.结果:RES以时间和浓度依赖方式抑制JEG-3细胞的增殖(P<0.01),同时诱导JEG-3细胞发生凋亡和G0/G1期阻滞(P<0.01).Western blot法检测显示在RES作用之后,Caspase-3蛋白、Bax表达明显上调,Bcl-2表达明显下调.结论:RES可抑制人绒癌JEG-3细胞增殖、诱导其凋亡、阻滞细胞G0/G1期、伴随Caspase-3活性上调,其机制可能与上调凋亡蛋白Bax、下调抗凋亡蛋白Bcl-2有关.     

吲哚-3-甲醇抑制人肝癌细胞株SMMC-7721生长作用及机理探讨

目的探讨吲哚-3-甲醇(I3C)抑制人肝癌细胞株SMMC-7721生长作用及机理。方法采用人肝癌细胞株SMMC-7721制备荷瘤裸鼠;通过测量肿瘤大小和病理学检测,观察I3C对肿瘤细胞的抑制作用;采用流式细胞仪检测肿瘤细胞周期、线粒体膜电位;采用Western blot法检测相关蛋白的表达。结果经I3C作用后,SMMC-7721细胞生长变慢,细胞周期、线粒体膜电位、相关蛋白的表达改变。结论 I3C能够抑制SMMC-7721细胞生长,细胞周期和细胞凋亡相关信号分子可能在其中发挥了一定作用。     

人生长激素对结肠癌细胞株细胞周期动力学的影响

目的：了解人生长激素（ｈＧＨ）对于结肠癌细胞有无促增殖和分化作用。方法：取对数生长期的人结肠癌细胞株ＬＯＶＯ,以顺铂和（或）不同浓度的ｈＧＨ体外培养,２４ｈ后以流式细胞增殖周期及细胞凋亡等指标。结果：同时加顺铂和ｈＧＨ培养细胞,癌细胞群在Ｇ２－Ｍ期发生阻滞,细胞凋亡率增加,Ｓ期细胞数率非常显著地降低;加ｈＧＨ１００ｎｇ／ｍｌ组Ｇ０－Ｇ１期九率降低,Ｓ期百分率增高。结论：ＬＯＶＯ细胞表面可能有ｈＧＨ     

人参皂苷Rg3对人肺腺癌细胞株A549/DDP抑制转移及逆转耐药作用的研究

目的:探讨人参皂苷Rg3抑制人肺腺癌细胞株A549/DDP的浸润及转移和逆转其耐药作用及机制。方法:应用MTT法检测Rg3对A549/DDP细胞逆转耐药的作用;用细胞膜流动性实验检测Rg3对A549/DDP细胞膜流动性的改变用穿膜实验检测Rg3对A549/DDP细胞侵袭和转移的影响;用Western blotting实验检测Rg3对转移和耐药相关蛋白表达的影响。结果:Rg3作用后,A549/DDP细胞对顺铂的耐药性下降I,C50明显降低(P<0.05),细胞膜的流动性明显降低(P<0.05),细胞的穿膜能力明显降低(P<0.05),Rg3作用后,nm23及caspase-3的表达明显上调,LRP的表达无明显改变。结论:Rg3可通过上调nm23的表达抑制A549/DDP细胞的侵袭和转移能力,还可通过上调caspas-3的表达,降低细胞膜的流动性达到逆转耐药的作用。     

菌灵诱导小鼠睾丸支持细胞凋亡及周期阻滞的研究

目的 观察多菌灵对小鼠睾丸支持细胞系（TM4）周期及凋亡的影响,并探讨其凋亡机制。方法 不同浓度(0.25、0.5、1、2、4、8 μg/ml)的多菌灵体外作用TM4细胞48 h,运用MTT法检测OD值及计算细胞存活率,PI染色法检测TM4细胞周期的分布变化,Annexin V/PI双标识标记法检测TM4细胞的凋亡情况,应用荧光探针DCFH - DA法检测TM4细胞内活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）的相对荧光强度,qRT - PCR法检测TM4细胞内Bax和Bcl - 2 mRNA的表达水平。结果 随着多菌灵浓度的升高,TM4细胞的增殖受到抑制,细胞周期分布发生变化,G2/M期的细胞呈现增加的趋势（P＜0.01）,胞内Bax mRNA和ROS表达水平也逐步升高（P＜0.05,P＜0.01）,而Bcl - 2 mRNA表达则逐步下降（P＜0.01）。结论 多菌灵可诱导TM4细胞凋亡并发生G2/M期阻滞,其作用机制可能与Bax、Bcl - 2 mRNA及ROS的异常表达有关。     

放射线照射引起胶质瘤细胞细胞周期和凋亡的动力学变化及其对Chk1/2蛋白表达的影响

目的：观察非同步化的U251细胞株对放射线所表现的细胞周期和凋亡的变化以及放射线对Chk1、Chk2蛋白表达的影响。方法：以不同剂量的放射线处理非同步化的U251细胞株,流式细胞仪检测处理后不同时间细胞周期和凋亡的变化,流式细胞仪和Westernblot法检测照射后Chk1、Chk2蛋白表达量。结果：非同步化的U251细胞株经放射线处理后可引起G2/M期阻滞,细胞周期阻滞呈照射剂量依赖性增强,而细胞凋亡均发生于细胞周期阻滞解除后,其强度与细胞周期激活的程度成反比。照射后不影响Chk1、Chk2蛋白水平的表达。结论：放射线处理非同步化的U251细胞株可成功地建立G2/M期阻滞模型,但对Chk1、Chk2蛋白水平表达无影响。