核转录因子-κB对氧化低密度脂蛋白诱导大鼠系膜细胞转化生长因子β1转录的调控

氧化低密度脂蛋白 (Ox LDL)是肾脏病发生发展中的重要因素。Ox LDL与细胞膜上的特异或非特异性受体结合而沉积于肾脏固有细胞内 ,促使其释放各种因子 ,最终引起肾小球细胞增生和细胞外基质沉积 ,但机制尚未明了。核转录因子 (NF κB) ,能与多种细胞因子、生长因子、化学趋化因子以及细胞外基质基因的启动子上的特异位点结合 ,启动其转录 ,在免疫炎症反应、抗凋亡和肿瘤发生中起着重要作用。Ox LDL激活NF κB对肾脏细胞影响的研究目前未见报道。我院采用SD大鼠肾脏系膜细胞(MC)为研究对象 ,观察Ox LDL对MCNF κB结合活性的影响 …     

肾小球系膜细胞转化生长因子-β1基因启动子中氧化低密度脂蛋白应答元件的研究

目的 :了解在氧化低密度脂蛋白 (Ox LDL)刺激下 ,转化生长因子 β1(TGF β1)基因启动子中顺式作用元件的应答情况。研究在大鼠肾系膜细胞中 ,Ox LDL对TGF β1基因启动子转录活性的影响作用。　 方法 :用聚合酶链反应 (PCR)、酶切和亚克隆的方法 ,构建出 5个TGF β1启动子缺失体—虫荧光素酶 (luciferase)报告基因 ,利用其瞬时转染系膜细胞并检测luciferase相对活性。　 结果 :在Ox LDL(10 0mg/L)刺激下 ,luciferase的活性 12h即出现 ,并于 36h达到平台期。对Ox LDL刺激的应答 ,TGF β1启动子 15 5 0到 845之间可能存在着增强子 , 6 2 9到 4 2 2之间则可能有抑制子。计算机软件分析表明 ,前者内有一转录激活蛋白 1(AP 1)精确识别位点。　 结论 :在大鼠肾系膜细胞TGF β1基因启动子中 ,AP 1结合序列 (TGAGTCA)可能是应答Ox LDL的顺式作用元件。Ox LDL上调TGF β1的表达至少部分是通过AP 1蛋白来介导的 ,且Ox LDL可能通过蛋白激酶C(PKC)信号通路激活AP 1从而正调控TGF β1基因的转录过程。     

肾小球系膜细胞转化生长因子—β1基因启动子中氧化低密度脂蛋白应签元件的研究

目的：了解在氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL)刺激下，转化生长因子－β1（TGF－β1）基因启动子中顺式作用元件的应答情况。研究在大鼠肾系膜细胞中，Ox-LDL对TGF－β1基因启动子转录活性的影响作用。方法：用聚合酶链反应（PCR）、酶切和亚克隆的方法，构建出5个TGF－β1启动子缺失体一虫荧光素酶（luciferase)报告基因，利用其瞬时转染系膜细胞并检测luciferase相对活性。结果：在Ox-LDL(100mg/L)刺激下，luciferase的活性12h即出现，并于36h达到平台期。对Ox-LDL刺激的应答。TGF－β1启动子－1550到－845之间可能存在着增强子，－629到－422之间则可能有抑制子。计算机软件分析表明，前者内有一转录激活蛋白－1（AP－1）精确识别位点。结论：在大鼠肾系膜细胞TGF－β1基因启动子中，AP－1结合序列（TGAGTCA）可能是应答Ox-LDL的顺式作用元件。Ox-LDL上调TGF－β1的表达至少部分是通过AP－1蛋白来介导的，且Ox-LDL可能通过蛋白激酶C（PKC）信号通路激活AP－1从而正调控TGF－β1基因的转录过程。     

氧化低密度脂蛋白诱导Zucker肥胖大鼠肾小球系膜细胞AP-1活性的变化

目的 :研究氧化低密度脂蛋白 (oxidizedlow densitylipoprotein ,Ox LDL)对体外培养的Zucker大鼠肾小球系膜细胞 (glomerularmesangialcell,GMC)中核转录因子激活蛋白 1(activatorprotein 1,AP 1)活化的影响 ,以及观察Ox LDL诱导的AP 1活性的变化与Zucker大鼠鼠龄以及基因型的相关性。　 方法 :①采用Zucker肥胖大鼠 (3月龄和 10月龄 )及Zucker瘦型大鼠 (3月龄和 10月龄 )的 4种GMC株 (O3m,O10m,L3m,L10m)进行传代培养。②利用凝胶迁移率实验 (EMSA)和超迁移率实验检测不同浓度及不同时相Ox LDL对Zucker大鼠GMCAP 1活性的影响 ,以及AP 1二聚体中c jun和c fos成分的变化。　 结果 :①经Ox LDL诱导后 ,4个组GMC内AP 1活性均较对照组明显增强 (F =177 84 ,P <0 0 1) ;②随着Ox LDL刺激浓度增加和时间的延长 ,GMC内AP 1活性相应增强 ,5 0mg/L的Ox LDL刺激 8h时 ,AP 1活性强度达最高峰 ;③Ox LDL主要激活AP 1二聚体成分中的c jun ;④O10m组AP 1的活性显著高于O3m组 (P <0 0 1) ,L10m组AP 1的活性显著高于L3m组 (P <0 0 1) ,O10m组显著高于L10m组 (P <0 0 1) ,O3m组显著高于L3m组 (P <0 0 1)。　 结论 :Ox LDL可诱导Zucker大鼠GMC内AP 1活化 ,其活化方式呈时间和剂量依赖 ;活化强度与大鼠的基因型及鼠龄     

核因子-κ B p65反义寡核苷酸对大鼠肝星状细胞转化生长因子β1及细胞间黏附分子1表达的影响

目的 探讨核因子-κB p65反义寡核苷酸(NF-κB 065 ASODN)对大鼠肝星状细胞HSC炎症因子转化生长因子β 1(TGF β 1)及细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响. 方法Ⅳ型胶原酶消化密度梯度离心法分离培养大鼠HSC;人工合成NF-κB p65 ASODN并行全程硫代磷酸化修饰;观察脂质体介导的不同浓度的NF-κB p65 ASODN(0.001、0.010、0.100、1.000μmol/L)对肿瘤坏死因子(TNF)α刺激HSC产生TGF β1及ICAM-1 mRNA和蛋白质表达的影响,蛋白凝胶电脉迁移率变动分析法检测NF-κB p65 ASODN对TNF α刺激HSCNF-κB的活性影响.结果 TNF α刺激HSC后,NF-κB活性和TGF β1、ICAM-1的表达明显增强;应用NF-κB p65 ASODN(0.001～1.000 μmol/L)作用后,NF-κB活性明显减弱,且呈剂量依赖性,灰度值分别为16 070±223,15 715±199,14 999±224,14 447±228,各组比较,P值均<0.05.同时TGF β1、ICAM-1的mRNA及蛋白质表达明显减少,亦呈剂量依赖性,P值均<0.05.结论 NF-κB p65 ASODN可特异性降低HSC的NF-κB的活性,明显抑制TGF β1、ICAM-1的表达,为NF-κB p65 ASODN治疗肝纤维化提供了理论依据.     

慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中核转录因子-κB、转化生长因子-β1表达与气道重塑的关系

目的观察COPD患者肺组织中核转录因子(NF)-κB、转化生长因子(TGF)-β1的表达及与气道重塑的相关性。方法标本取自40例因肺部孤立性结节行肺叶切除术患者的肺组织,按术前肺功能分为非COPD组(A组,20例)及COPD组(B组,20例)。所取肺组织HE染色后光镜下观察肺组织的病理形态学改变,以半定量图像分析法测量小气道管壁和平滑肌层厚度。用Western印迹法检测肺组织中NF-κB、TGF-β1的表达。结果 1B组NF-κB、TGF-β1表达均高于A组(均P0.05),且NF-κB与TGF-β1表达存在正相关(P0.05);2肺组织中NF-κB、TGF-β1的表达与单位长度的管壁面积(WAt/Pi,μm2/μm)及单位长度的平滑肌层面积(WAsm/Pi,μm2/μm)表达均呈正相关(P0.05)。3 FEV1/FVC、FEV1%预计值分别与NF-κB、TGF-β1的表达呈负相关(P0.05)。结论 COPD肺组织中NF-κB、TGF-β1的表达增加,细胞因子的表达增加使其发挥的生物学效应增强,从而促进气道重塑,进一步影响肺功能。     

氧化苦参碱对转化生长因子-β1促肝星状细胞活化及跨膜信号转导影响

目的观察低浓度氧化苦参碱对大鼠肝星状细胞(HSC)培养活化和转化生长因子-β1,(TGF-β1)促活化作用影响,并探讨该作用与TGF-β1受体后信号通路的关系.方法原代分离培养2d HSC,MTT法检测低浓度氧化苦参碱(0.25～8 mg/L)对HSG细胞毒作用(作用12 h)和增殖影响(作用48 h),或给予TGF-β1(5 ng/m1)和/(或)氧化苦参碱(2 mg/L)干预,相差显微镜观察HSC形态变化,分别以RT-PCR或Western blot法检测TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体、Smad 2/3、Smad 7以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和/(或)蛋白表达.结果氧化苦参碱(0.25～8 mg/L)对HSC无明显细胞毒作用,大于8 mg/L能抑制HSC增殖.氧化苦参碱(2 mg/L)抑制TGF-β1诱导HSC激活时的α-SMA表达和形态转化,伴随TGF-β1受体mRNA表达升高,Smad 7 mRNA表达上调及TGF-β1mRNA表达下降(与单纯TGF-β1处理组相比,分别上升1.25、0.87倍或下降1.92倍,P均＜0.05),但不影响TGF-β1Ⅱ型受体和Smad 3 mR-NA表达.Western blot检测Smad 2/3、Smad 7蛋白表达,与RT-PCR结果相似.氧化苦参碱对单纯培养激活的HSC有类似作用.结论低浓度氧化苦参碱(2 mg/L)上调Smad 7表达并抑制TGF-β1表达、上调TGF-β1Ⅰ型受体、恢复正常的TGF-β1跨膜信号转导,抑制HSC培养活化和TGF-β1促活化作用.     

转化生长因子β1对大鼠肝星状细胞表达β-连环蛋白的影响

目的研究转化生长因子β1（TGF—β1）对大鼠肝星状细胞（HSC）表达β-连环蛋白（β-catenin）的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）比较经不同浓度的TGF-β1刺激不同时间后HSC表达β-catenin、smad3和α-SMA mRNA的变化,并比较三者之间的关系。结果1ng／ml TGF—β1刺激2h后,HSC表达β—catenin mRNA、smad3 mRNA和α—SMA mRNA量最大,β—catenin mRNA表达与两者均具有明显的相关关系（r=0．947,P〈0．01;r=0．950,P〈0．01）。结论β—catenin在TGF—β1活化HSC的过程中发挥重要作用。     

人重组骨形成蛋白-7对高糖诱导的肾系膜细胞转化生长因子-β1及结缔组织生长因子表达的影响

目的 探讨人重组骨形成蛋白-7(rhBMP-7)对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)基因表达及细胞外基质(ECM)成分Ⅳ型胶原(ColⅣ)和纤维黏连蛋白(FN)分泌的影响.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为四组:正常对照组(DMEM培养基含1 000 mg/L葡萄糖)、高糖组(DMEM培养基含4 500 mg/L葡萄糖)、rhBMP-7低剂量组(DMEM培养基含4 500 mg/L葡萄糖+50 nmol/L rhBMP-7)、rhBMP-7高剂量组(DMEM培养基含4 500 mg/L葡萄糖+100 nmol/L rhBMP-7).RT-PCR技术检测TGF-β1和CTGF基因表达水平,ELISA技术检测上清液中TGFβ1、ColⅣ、FN含量.结果 高糖组系膜细胞TGF-β1和CTGF mRNA水平明显高于正常对照组(P<0.01),TGF-β1、ColⅣ和FN分泌增多,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);与高糖组比较,rhBMP-7不同剂量(50、100 ng/ml)TGF-β1和CTGF mRNA表达明显降低,培养上清中TGF-β1、ColⅣ及FN分泌量亦明显减少,且差异显著(P<0.05).结论 RhBMP-7通过抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1、CTGF基因表达和ECM的分泌可能起到抗纤维化作用.     

内皮素-1、NF-κB及AP-1对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞纤维连接蛋白表达的影响

目的探讨高糖（HG）对大鼠肾小球系膜细胞（GMC）表达纤维连接蛋白（FN）的影响及内皮素-1（ET-1）、NF-κB和AP-1在FN表达中的作用。方法建立高糖培养条件下的大鼠肾小球系膜细胞模型,在mRNA水平及蛋白水平检测不同条件下的ET-1和FN表达。结果（1）HG组与正常糖浓度（NG）组比较,HG组ET-1及FN的mRNA和蛋白表达显著增加（P〈0.01）。（2）NG组加入ET-1（5nmol/L）后,FNmRNA及蛋白表达增加（P〈0.01）,加入ET-1受体拮抗剂PD142893（10μmol/L）后,HG及ET-1诱导的FNmRNA及蛋白表达均被明显抑制（P〈0.01）。（3）给予NF-κB抑制剂PDTC（10μmol/L）后,HG及ET-1诱导的FNmRNA及蛋白表达均被明显抑制（P〈0.01）。（4）给予JNK特异性抑制剂SP600125（10μmol/L）后,HG及ET-1诱导的FNmRNA及蛋白表达均被明显抑制（P〈0.01）。结论HG增强大鼠GMC表达FN的作用通过ET-1介导,NF-κB和AP-1参与调控ET-1介导的FN表达增加。     

脑缺血后核因子-кB信号通路对星形胶质细胞活化增殖的影响

<正>核转录因子(NF)-κB广泛存在于神经系统中,包括星形胶质细胞(AC)、小胶质细胞和少突胶质细胞,能诱导多种细胞因子、黏附分子和炎性介质的表达〔1〕。脑缺血后,NF-κB与AC的活化增殖密切相关,是参与脑损伤后炎症反应的重要信号调控因子〔2〕,被许多专家认为是炎症反应的中心环节,在脑缺血中的作用日益受到重视。1 NF-κB和κB抑制蛋白(IκBs)NF-κB最初于1986年在B淋巴细胞中发现,它能与免疫     

糖化血清蛋白对刺激肾小球系膜细胞表达转移生长因子-β_1的作用

目的　探讨Ａｍ ａｄｏｒｉ糖化血清蛋白对肾小球系膜细胞表达转移生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）的影响。方法　用体外制备的Ａｍ ａｄｏｒｉ糖化的胎牛血清蛋白（Ａｍ ａｄｏｒｉ－ｍ ｏｄｉｆｉｅｄ ｇｌｙｃａｔｅｄ ｓｅｒｕｍ ｐｒｏｔｅｉｎ）分别在生理浓度葡萄糖（５．５ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ）和高浓度葡萄糖（２５ｍｍ ｏｌ／Ｌ）培养液中作用于大鼠肾小球系膜细胞,观察ＴＧＦ－β１ ｍ ＲＮＡ表达有改变。结果　糖化血清蛋白在正常糖浓度下作用于系膜细胞４天后,ＴＧＦ－β１ 基因表达显著增高,为对照组的１．９９倍。结论　糖化血清蛋白对肾小球系膜细胞中的ＴＧＦ－β１基因表达有明显的刺激作用,可能是其参与糖尿病肾病发病的机制之一     

葛根素对大鼠肝星状细胞生长及NF-κB p65和TGF-β1表达的影响

目的探讨葛根素对大鼠肝星状细胞生长及核转录因子κB亚基(NF-κB)p65和转化生长因子(TGF)-β1表达的影响。方法将培养的大鼠肝星状HSC-T6细胞随机分为溶剂组和葛根素组,葛根素组包括0.1、1.0和10.0μmol/L 3个不同浓度组,溶剂组加入二甲基亚砜(DMSO)。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞的周期分布,酶联免疫吸附(ELISA)检测细胞中TGF-β1含量,Western印迹检测细胞NF-κB p65蛋白表达。结果葛根素能够呈浓度-时间效应关系抑制HSC-T6细胞增殖,诱导细胞阻滞于G0/G1期。TGF-β1含量和NF-κB p65蛋白的表达水平均随葛根素浓度的增加而降低。结论葛根素能够抑制HSC-T6细胞生长,其作用机制可能与抑制炎症相关因子TGF-β1和NF-κB信号通路有关。     

核因子-кB与内毒素介导的肝损伤

严重感染导致的内毒素血症是引起全身炎症反应和死亡的主要原因之一,革兰氏阴性细菌细胞壁成分脂多糖(lippolysaccharide,LPS)是其主要致病因素.LPS直接介导大量炎症介质释放,从而导致组织器官损伤,肝脏是其中重要受累器官之一.而炎症介质的合成和释放主要是由核因子-кB(nuclear factor-кB,NF-кB)调控的.     

罗格列酮对高糖诱导的系膜细胞核因子-κB活性及细胞间黏附分子1表达的影响

目的探讨罗格列酮对高糖诱导的大鼠系膜细胞表达细胞间黏附分子1(ICAM-1)的影响及其可能机制。方法采用正常糖(NG)、高糖(HG)及HG 不同浓度罗格列酮培养大鼠系膜细胞。以RT-PCR检测ICAM-1 mRNA的表达,采用ELISA检测培养细胞上清中ICAM-1蛋白的浓度。采用凝胶电泳迁移率改变法检测NF-κB的活性。结果HG组ICAM-1/GAPDH吸光度是NG组的2.9倍(P<0.01)。5μmol/L及20μmol/L罗格列酮均可显著抑制ICAM-1 mRNA的表达。HG刺激系膜细胞1 h可使NF-κB活性增强2.5倍(P<0.01),高糖诱导的NF-κB的活化可被罗格列酮(20μmol/L)所抑制(0.8±0.2vs2.5±0.3,P<0.01)。结论罗格列酮可通过抑制NF-κB信号传导途径降低高糖诱导的系膜细胞ICAM-1的表达。     

褪黑素对糖尿病大鼠心肌转化生长因子-β1表达的影响

糖尿病(DM)心肌病是DM患者所特有的心脏病变，其病理特点是心肌细胞肥大、心肌纤维化和心肌微小血管广泛内膜病变。转化生长因子β1(TGF-β1)对细胞的生长、分化和免疫功能都有重要的调节作用。动物试验表明体内转染TGF-β1基因可促进心肌纤维化。Doi等用免疫组化方法证实，DM大鼠心脏TGF-β1表达显著增高。褪黑素(Me     

低密度脂蛋白对体外培养的肾小球系膜细胞表型转化的影响

目的研究低密度脂蛋白(LDL)对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(MCs)表型转化的诱导作用.方法采用不同浓度的LDL(0, 25, 50, 100, 150 μg/mL)刺激体外培养的大鼠肾小球系膜细胞的方法,以MTT比色法检测细胞增殖,透射电镜观察系膜细胞的形态学变化,免疫细胞化学染色及Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)及纤维连接蛋白(FN)的表达.结果在LDL作用下,系膜细胞形态发生明显变化,细胞变为长梭形,透射电镜下出现肌动蛋白样结构.免疫细胞化学染色及Western blot显示α-SMA、CTGF、ColⅣ及FN表达增强(P<0.05).结论 LDL具有诱导肾小球系膜细胞发生表型转化的作用.     

氨氯地平经核因子κB下调氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞血小板源生长因子B的表达

目的 观察氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC-12)中血小板源生长因子B(PDGF-B)和核因子κB (NF-κB)表达的影响,通过氨氯地平对ox-LDL/NF-κB/PDGF-B的影响,进一步探讨氨氯地平相关的作用机制.方法 不同浓度氨氯地平(0、0.1、1.0、10.0μmol/L)预先处理细胞0.5h后加入50mg/L ox-LDL共同孵育24 h,RT-PCR和Western Blot检测细胞内PDGF-B的表达及NF-κB的蛋白表达;进一步通过NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)的加入,RT-PCR和Western blot观察其对PDGF-B及NF-κB表达的影响.结果 随着氨氯地平处理浓度的增加,HUVEC-12中PDGF-B的mRNA和蛋白表达,以及NF-κB的蛋白表达均明显下调,NF-κB抑制剂PDTC既可降低NF-κB的蛋白表达,也可下调PDGF-B的表达,作用与10.0 μmol/L氨氯地平组的结果相近.结论 氨氯地平可通过NF-κB下调ox-LDL诱导的HUVEC-12中PDGF-B的表达.     

酒精性肝病外周血单个核细胞转化生长因子β1mRNA表达的研究

转化生长因子 β1(ＴＧＦ β1)在慢性肝病的纤维化过程中起重要作用。但对酒精性肝病 (ＡＬＤ)中ＴＧＦ β1的作用研究甚少 ,外周血单个核细胞 (ＰＢＭＣ)的ＴＧＦ β1ｍＲＮＡ检测尚未见有报道。我们通过检测ＡＬＤ患者ＰＢＭＣ中的ＴＧＦ β1ｍＲＮＡ表达水平 ,以探讨其临床意义。一、材料与方法1 标本 :男性嗜酒者 10 7例 ,年龄 2 5～ 70岁 ,平均年龄4 3岁。按 1995年中华医学会肝病分会酒精性肝病及肝纤维化学术研讨会关于酒精性肝病诊断要点[1] 进行诊断分组 ,嗜酒无肝功能损害者 2 2例 ,酒精性脂肪肝 30例 ,酒精性肝炎31例 ,酒精性肝…     

转化生长因子β在高糖培养条件下系膜细胞生长抑制中的作用

观察了转化生长因子β（ＴＧＦβ）在高糖培养条件下系膜细胞生长抑制中的作用。结果显示，高糖浓度依赖性地抑制了系膜细胞的增殖；培养中加入抗－ＴＧＦβ抗体，则明显增强了正常及高糖培养条件下的系膜细胞的生长，拮抗了高糖导致的系膜细胞增殖的抑制；生物学方法检测高糖培养后系膜细胞产生的ＴＧＦβ，发现随着糖浓度增加，活性ＴＧＦβ占总ＴＧＦβ的百分比也明显上升。结果提示，ＴＧＦβ是系膜细胞产生的自分泌性生长调节因子，高糖条件下，内源性ＴＧＦβ参与并介导了高糖导致的系膜细胞增殖抑制。