铜绿假单胞菌氨基糖甙类药物产酶耐药机制的研究

目的了解我院临床分离的30株多重耐药铜绿假单胞菌中16SrRNA甲基化酶基因及氨基糖甙类修饰酶（AMEs）基因存在状况。方法收集山东和江苏两地医院临床分离的铜绿假单胞菌共50株（山东烟台多重耐药30株,江苏泛耐株20株）,采用聚合酶链反应（PCR）及序列分析的方法分析6种16SrRNA甲基化酶（armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、npmA）和6种AMEs基因aac（3）-I、aac（3）-II、aac（6’）-Ib、aac（6’）-II、ant（3”）-I和ant（2”）-I。结果山东烟台30株多重耐药铜绿假单胞菌中4种基因aac（3）-II、aac（C）-II、ant（3”）-I和ant（2”）-I的阳性株数分别为6株（20％）、14株（46．7％）、11株（36．7％）和1株（3．3％）,其余8株基因均为阴性;AMEs基因总阳性率为50％（15／30）。江苏20株泛耐株中6种基因rmtB、aac（3）-II、aac（6’）-Ib、aac（6’）-II、ant（3”）-I和ant（2”）-I的阳性株数分别为ll株（55％）、12株（60％）、7株（35％）、12株（60％）、10株（50％）和9株（45％）,其余6株基因均为阴性;AMEs基因总阳性率为95％（19／20）。结论铜绿假单胞菌存在16SrRNA甲基化酶基因为国内首次报道;铜绿假单胞菌AMEs基因携带率很高;两家医院检出酶基因种类有差别。     

铜绿假单胞菌16SrRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解烟台地区多重耐药铜绿假单胞菌16SrRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因的存在状况。方法自2006年1-6月间烟台地区住院病人标本中分离出30株多重耐药的铜绿假单胞菌,(K-B)法测定16种抗菌药物的敏感性;PCR法检测16SrRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因。结果30株多重耐药铜绿假单胞菌中16SrRNA甲基化酶(armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、rpmA)基因均为阴性;氨基糖苷类修饰酶aac(3)-Ⅱ基因阳性株6株、aac(6′)-Ⅱ基因阳性株14株、ant(3″)-Ⅰ基因阳性株11株、ant(2″)-Ⅰ基因阳性株1株;aac(3)-Ⅰ和aac(6′)-Ⅰb基因均为阴性。结论烟台地区多重耐药铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物耐药的主要原因与aac(3)-Ⅱ、aac(6’)-Ⅱ、ant(3")-Ⅰ和ant(2")-Ⅰ4种氨基糖苷类修饰酶基因存在有关。尚未检出16SrRNA甲基化酶。     

铜绿假单胞菌氨基糖苷类抗生素耐药基因检测

目的 了解铜绿假单胞菌对氨基糖苷类抗生素耐药基因的分布情况.方法 收集临床分离的铜绿假单胞菌,采用仪器法和纸片扩散法(K-B法)进行药敏实验.筛选出对氨基糖苷类抗生素耐药的菌株,用PCR法检测16个氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因和5个16S rRNA甲基化酶基因的表达,进一步对阳性基因扩增产物进行测序验证.结果 54株菌中51 株AMEs基因阳性,检出率为94.4% ,28 株甲基化酶基因阳性,检出率为51.9% .共检出5 种AMEs基因:ant(3″) -Ⅰ、aac(3) -Ⅱc、ant(4′) -Ⅰa、aac(6′) -Ⅰb和ant ( 2″) - Ⅰa,阳性率分别为 66.7% 、 38.9% 、 31.5% 、31.5%和16.6% ;2种16S rRNA甲基化酶基因:rmtB和ar-mA,阳性率分别为29.6%和29.6% ,其余基因均未检出.测序结果与目的基因一致.结论 铜绿假单胞菌氨基糖苷类抗生素耐药的主要基因为ant(3″)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱc、ant(4′) -Ⅰa、aac(6′)-Ⅰb和ant(2″)-Ⅰa以及rmtB, armA.     

多重耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因及耐消毒剂基因的检测

目的了解我院多重耐药铜绿假单胞菌中氨基糖苷类修饰酶编码基因及耐消毒剂基因的存在状况。方法聚合酶链反应（PCR）法对多重耐药的铜绿假单胞菌进行氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因、qacE△1-sul1耐消毒剂基因的检测。结果本组7株多重耐药的Pa菌分别检出aac（6’）-Ⅰ、aac（6’）-Ⅱ、ant（3″）-Ⅰ和ant（2″）-Ⅰ等4种氨基糖苷类修饰酶基因和qacE△1-sul1型耐消毒剂基因。结论多重耐药铜绿假单胞菌存在多重耐药基因。     

携带blaKPC-2基因泛耐药肺炎克雷伯菌16S rRNA甲基化酶基因和氨基糖苷类修饰酶基因分析

目的 了解临床分离的携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌中16S rRNA甲基化酶基因和氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因的分布。方法 在2008年11月～2009年7月从笔者医院住院患者中分离19株携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌,采用PCR及序列分析的方法分析6种16S rRNA甲基化酶基因（armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA）和14种AMEs基因[ant（3″）-Ⅰ、ant（2″）-Ⅰ、ant（4′）-Ⅰ a/b、aadA4/5、aadA6/16、aac（3）-Ⅰ、aac （3）-Ⅱ、aac（3）-Ⅲ、aac（3）-Ⅳ、aac（6′）-Ⅰb、aac（6′）-Ⅱ、aph（3′）-Ⅰ、aph（3′）-Ⅱb和aph（3＇）-Ⅵa].结果 19株中,5种基因aac（3）-Ⅱ、aac（6′）-Ⅰb、aac（6′）-Ⅱ、ant（3″）-Ⅰ和aph（3′）-Ⅰ的阳性株数[阳性率（％）]分别为2（10.5％）、1（5.3％）、19（100.0％）、19（100.0％）和2（10.5％）,其余15种基因均阴性;AMEs基因总阳性率为100.0％ （19/19）.对1株（6号菌株）aac（6′）-Ⅰb基因PCR阳性产物进行测序,证实为aac（6＇）-Ⅰb-cr双功能酶基因.结论 氨基糖苷类修饰酶基因aac（6′）-Ⅱ和ant（3″）-Ⅰ在携带blaKPc-2型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌中广泛分布。     

一株携带多种耐药基因的铜绿假单胞菌研究

目的了解铜绿假单胞菌的多重耐药情况和有关机理。方法聚合酶链反应（PCR）法对多重耐药的铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因、耐消毒剂和磺胺基因（qacE△1—sul1）的检测。并对CARB基因进行了测序。结果PCR显示CARB、TEM型β-内酰胺酶基因，aac（6’）-Ⅰ、aac（6’）-Ⅱ、ant（2″）-Ⅰ、ant（3″）-Ⅰ AMEs基因、qacE△1-sul1耐消毒剂基因和耐磺胺基因扩增阳性，oprD2基因扩增检测呈缺失型。CARB基因扩增产物测序，经BLAST程序分析（WWW．ncbi．nlm．nih．gov）为CARB-3型。结论铜绿假单胞菌存在多重耐药基因，管壁涂有季胺类、双胍类消毒剂和磺胺的Ⅱ代导管的抑菌效果需重新评价。     

1株泛耐药铜绿假单胞菌耐药基因研究

目的了解1株泛耐药铜绿假单胞菌（PDRPA）耐药基因携带状况。方法采用PCR检测该株PDRPA菌44种基因。结果该株PDRPA菌携带TEM-1、OXA．10、PER-1、aac（3）-Ⅱ、aac（6’）-Ⅱ、ant（3”）-Ⅰ、rmtB、sull、cmlA、intⅠ1、merA基因,且伴有oprD2缺失。结论该株PDRPA菌携带多种耐药基因是泛耐药原因。     

亚胺培南耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因型研究

目的了解中国5个地区亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌部分氨基糖苷类修饰酶分布情况。方法从成都、杭州、北京、上海和广州收集对亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌,使用PCR法扩增16种氨基糖苷类修饰酶基因。结果共收集了146株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌。16种氨基糖苷类修饰酶基因中有6种基因型获得阳性的PCR结果,氨基糖苷类修饰酶基因总检出率为65.06%,各种氨基糖苷类修饰酶基因检出率分别为aac（3）-Ⅱ33.6%、aac（6＇）-Ⅰ15.8%、aac（6＇）-Ⅱ19.9%、ant（2″）-Ⅰ28.8%、ant（3″）-Ⅰ14.4%和aph（3＇）-Ⅵ4.8%。氨基糖苷类修饰酶基因的分布存在地区差异,其中杭州和上海6种AMEs基因均被检测出,成都和北京检测出4种AMEs基因,广州的IRPA中仅检测出3种AMEs基因。结论亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因携带率高;氨基糖苷类修饰酶基因型在中国5个地区间分布存在差异。     

泛耐恶臭假单胞菌40种耐药基因的研究

目的研究泛耐恶臭假单胞菌40种耐药机制。方法应用法国梅里埃公司的API鉴定条／PSE5．0药敏条和美国BD公司的Phoenix NMIC／ID-109鉴定／药敏板鉴定和细菌药敏试验,应用PCR法检测1株泛耐恶臭假单胞菌临床分离株30种β-内酰胺酶基因、6种氨基糖苷类修饰酶基因（AMEs）、消毒剂／磺胺耐药基（qacE△1-sul1）、整合子（int）1、2、3等40种耐药基因,分析其分布情况。结果在本株菌,8种耐药基因阳性（二种β-内酰胺酶基（b1aCARB、b1aVIM）、4种氨基糖苷类修饰酶基因（aac（6′）-Ⅰb、aac（3）-Ⅱ、ant（3″）-Ⅰ、ant（2″）-Ⅰ）和二种整合子基因（qacE△1-sul1、intⅠ1）,其它28种β-内酰胺酶基因、2种氨基糖苷类修饰酶基因（aac（6′）-Ⅱ、aac（3）-Ⅰ）和二种整合子基因（intⅠ2、intⅠ3）均为阴性。结论本株泛耐菌耐药机制为多重机制,主要与b1aCARB、b1aVIM、AMEs和Ⅰ类整合子有关。经检索中文生物医学期刊文献数据库（CMCC）和medline数据库,本研究是泛耐恶臭假单胞菌检测耐药基因最多的报道,也是第一篇从恶臭假单胞菌检出β-内酰胺酶b1aCARB和aac（3）-Ⅱ、aac（6′）-Ⅰb、ant（3″）-Ⅰ、ant（2″）-Ⅰ）耐药基因的报道。     

慢性重型肝炎患者泛耐铜绿假单胞菌40种耐药相关基因的研究

目的研究慢性重型肝炎患者泛耐铜绿假单胞菌40种耐药相关基因。方法应用法国梅里埃公司的API鉴定条／PSE5．0药敏条和美国BD公司的Phoenix NMIC／ID-109鉴定／药敏板鉴定和细菌药敏试验,应用PCR法检测1株泛耐铜绿假单胞菌临床分离株29种β-内酰胺酶相关基因、外膜蛋白D2基因（oprD2）、6种氨基糖甙类修饰酶基因（AMEs）、消毒剂／磺胺耐药基因（qacE△1-sull）、3种整合子基因（intI1、2、3）等40种耐药相关基因,分析其分布情况。结果在本株菌,6种耐药相关基因阳性（二种β-内酰胺酶基因（blaTEM、blaOXA10）、二种氨基糖甙类修饰酶基因（aac（6′）-Ⅱ、aac（3）-Ⅱ）、qacE△1-sull和Ⅰ类整合子基因（intI1））,同时oprD2缺失;其它27种β-内酰胺酶基因、4种氨基糖甙类修饰酶基因（aac（6′）-Ⅰb、aac（3）-Ⅰ、ant（3″）-Ⅰ、ant（2″）-Ⅰ）和2种整合子基因（intI2、intI3）均为阴性。结论本株泛耐菌耐药机制为多重机制,主要与7种耐药相关基因（blaTEM、blaOXA10、oprD2缺失、aac（6′）-Ⅱ、aac（3）-Ⅱ、qacE△1-sul1和Ⅰ类整合子）有关。经检索中文生物医学期刊文献数据库（CMCC）和medline数据库,本研究是泛耐铜绿假单胞菌检测耐药相关基因最多的报道。     

阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类抗生素耐药基因分析

目的调查临床分离的阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类抗菌药物耐药基因的携带状况。方法采用ATB药敏试验板微量肉汤法,对33株临床分离的阴沟肠杆菌进行抗菌药物敏感性试验,聚合酶链反应（PCR）法检测aac（3）-Ⅰ、aac（3）-Ⅱ、aac（3）-Ⅲ、aac（3）-Ⅳ、aac（6′）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ、ant（3″）-Ⅰ、ant（2″）-Ⅰ、aph（3′）Ⅵ9种氨基糖苷类修饰酶基因。结果 33株阴沟肠杆菌株呈现多重耐药,亚胺培南和厄它培南均敏感,对头孢唑啉全部耐药,氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢替坦耐药率均在90%以上。对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素3类氨基糖苷类抗生素的耐药率分别为33.3%、63.6%、81.8%。氨基糖苷类修饰酶基因的阳性率分别为aac（6′）-Ⅰ87.8%（29/33）、ant（3″）-Ⅰ63.6%（21/33）、aac（3-）II 54.5%（18/33）、ant（2″）-Ⅰ45.4%（15/33）及aph（3′）-Ⅵ24.2%（8/33）。aac（3）-Ⅰ、aac（3）-Ⅲ、aac（3-）IV、aac（6′-）II未检出。携带1种或1种以上基因的菌株有32株（97%）。结论临床分离的阴沟肠杆菌多重耐药严重,氨基糖苷类修饰酶基因携带率非常高。     

多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因的研究

目的探讨临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶相关耐药基因及氨基糖苷类修饰酶基因。方法采用MicroScan40微生物全自动鉴定系统微量肉汤稀释法测定菌株的耐药性。采用聚合酶链反应(PCR)方法检测β-内酰胺酶基因型及氨基糖苷类修饰酶基因型。结果 32株铜绿假单胞菌除对哌拉西林/他唑巴坦和替卡西林/克拉维酸耐药率分别为75.9%和93.1%外,对其余抗菌药物耐药率均为100%。氨基糖苷类修饰酶基因检出30株(93.7%),aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6)-Ⅰ、aac(6)-Ⅱ、ant(3)-Ⅰ和ant(2)-Ⅰ基因阳性率分别为9.3%、90.6%、12.5%、90.6%、90.6%和0,检出β-内酰胺酶基因28株(87.5%),TEM、DHA、OXA和IMP基因阳性率分别为62.5%、43.7、21.8%和3.1%,未检出VIM、SHV和CTX-M-9,检出OprD2基因缺失23株(71.8%)。结论广州地区多重耐药铜绿假单胞菌携带多种氨基糖苷类修饰酶基因和β-内酰胺酶基因。     

阴沟肠杆菌耐药性与AMEs及BLa基因研究

目的了解分离的阴沟肠杆菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶、β-内酰胺酶相关基因存在状况，给防治提供参考。方法采用MicroScan微生物鉴定系统Neg Combo Panel Type 21阴性复合板微量肉汤法测定临床分离的20株阴沟肠杆菌对抗菌药物的敏感性，采用聚合酶链反应方法分析氨基糖苷类修饰酶及β-内酰胺酶编码基因。结果20株菌均呈严重多重耐药，仅对亚胺培南高度敏感（耐药率5.0％），哌拉西林／他唑巴坦耐药率50．0％，对包括3、4代头孢在内的其他β-内酰胺类及氨基糖苷类抗生素耐药率90．0％～100．0％，对复方新诺明耐药率100％；20株菌均检出氨基糖苷类修饰酶基因，未检出aac（3）-Ⅲ和aac（3）-Ⅳ基因；19株（95．0％）菌检出β-内酰胺酶相关基因，TEM和DHA基因阳性率均为70％，9株菌（45．0％）同时检出TEM和DHA基因，未检出SHV、OXA、PER、VEB和GES基因。结论广州地区医院感染阴沟肠杆菌多重耐药严重，氨基糖苷类修饰酶基因、DHA型质粒AmpC酶基因和TEM型β-内酰胺酶基因携带率高，在介导细菌耐药方面起重要作用。     

鲍曼不动杆菌氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的：对临床分离鲍曼不动杆菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因进行研究,以指导临床合理应用抗生素。方法：K-B琼脂纸片扩散法进行药敏试验,PCR法检测8种氨基糖苷类修饰酶基因,并对PCR产物进行测序。结果：70株ABA对13种药物的耐药率均在65％以上,仅对头孢哌酮／舒巴坦、亚胺培南、美洛培南的敏感率较高。氨基糖苷类修饰酶基因总检出率为64．29％（45／70）,其中aac（6’）-Ⅰ检出率最高为41．40％,其次为基因aae（3）-Ⅱ,aac（3）-Ⅰ和ant（3’）-Ⅰ,检出率分别为34．29％,31．435％和25．71％;未检出aac（6’）-Ⅱ,ant（2’）-Ⅰ,aph（3’）-Ⅰ及aph（3’）-Ⅱ基因。结论：氨基糖苷类修饰酶基因aac（6’）-Ⅰ、aac（3）-Ⅱ、aac（3）-Ⅰ及ant（3’）-Ⅰ为本地区鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药的主要原因。     

慢性重型肝炎患者痰泛耐药鲍曼不动杆菌39种耐药相关基因的研究

目的研究慢性重型肝炎患者痰泛耐药鲍曼不动杆菌39种耐药相关基因。方法应用法国梅里埃公司的API鉴定条／PSE5．0药敏条和美国BD公司的Phoenix NMIC／ID-109鉴定／药敏板鉴定和细菌药敏试验,应用PCR法检测分离于慢性重型肝炎患者合格痰标本1株泛耐Ab临床分离株29种β-内酰胺酶相关基因（bla）、6种氨基糖甙类修饰酶基因（AMEs）、消毒剂／磺胺耐药基因（qacE△1-sull）、3种整合子基因（intl1、2、3）等39种耐药相关基因,分析其分布情况。结果本株菌7种耐药相关基因阳性（二种bla基因（blaTEM、blaADC）、三种AMEs基因（aac（6′）-Ib、aac（3）-Ⅰ、ant（3″）-Ⅰ、qacE△1-sul1和Ⅰ类整合子基因（intIl））;其它27种bla基因、3种AMEs基因（aac（6′）-Ⅱ、aac（3）．Ⅱ）、ant（2″）-Ⅰ和2种整合子基因（intI2、intI3）均为阴性。结论本株泛耐菌耐药机制为多重机制,主要与7种耐药相关基因（blaTEM、blaADC、aac（6′）-Ib、aac（3）-Ⅰ、ant（3″）-Ⅰ、qacE△1-sull和Ⅰ类整合子）有关。经检索中文生物医学期刊文献数据库（CMCC）和medline数据库,本研究是泛耐Ab检测耐药相关基因最多的报道。