肺癌Th1／Th2反应状态及黄芪的调节作用

目的：探讨肺癌细胞株以及荷瘤机体外周血单个核细胞（PBMC）Th1/Th2免疫反应状态,中药黄芪（AG）对两者Th1/Th2状态的作用,方法：（1）3种人肺癌细胞（鳞,腺,小细胞癌）各分为5组,其中1组即刻冻存待测,其余4组分别为不加药对照组,加5％AG,10％AG,20％AG组,培养48h,收集细胞;（2）采集并分离肺癌患者和健康志愿者的PBMCs,各分为4组,其中1组即刻冻存待测,其余3组分别为不加药对照组,加10％AG,20％AG线,培养48h,收集细胞,以IL－2,IFN－γ代表Th1型细胞因子,IL－4,IL－6,IL－10代表Th2型细胞因子,用RT－PCR方法检测各组肺癌细胞株和肺癌患者PBMC中Th1/Th2型细胞因子m-RNA的表达,结果：（1）3种肺癌细胞株的Th1型因子IFN－γ和IL－2均无表达,Th2型因子IL－4,IL－6,IL－10则均表达;经与黄芪培养后,小细胞肺癌在3种不同浓度AG存在时均可出现IFNγ表达,在5％AG时可同时出现IL－2的表达,IL－4,IL－6的表达被抑制,鳞癌和腺癌细胞株经黄芪培养后,其Th1/Th2型细胞因子的m-RNA表达与培养前异差异无显著性（P＞0．05）;、（2）肺癌患者PBMC中,IL－4,IL－6,和IL－10表达阳性率显著高于正常对照（P均＜0．05）,而IL－2无1例表达（0／23）,IFN－γ仅1例表达;经与黄芪培养后（两种浓度）,肺癌患者Th2型因子与未加AG培养组相比,IL－4,IL－6和IL－10的表达率下降（P均＜0．05）;而IL－2的表达率显著提高（P＜0．05）,结论：无论肺癌细胞株还是荷瘤机体外周血的免疫细胞的呈现Th2型免疫反应的优势状态;黄芪对于肺癌细胞株和宿主PBMCsTh1/Th2的状态有良好的凋节作用,可使肺癌细胞株和肺癌患者PBMCs的Th2型优势免疫反应向Th1方向逆转。γγγγ     

肺癌患者的Th1/Th2免疫反应状态

目的 了解不同病理类型肺癌患者辅助性T细胞亚群(Th1/Th2)的反应状态,探讨肺癌发生发展的免疫机制.方法 收集不同病理类型肺癌患者77例(腺癌30例,鳞癌28例,小细胞肺癌19例)、肺部良性疾病患者33例、健康志愿者45例的血清,分成肺癌组、良性组和正常组,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组外周血中Th1型细胞因子白细胞介素2(IL-2)、γ-干扰素(IFN-γ)和Th2型细胞因子IL-4、IL-10的浓度.结果 3种不同病理类型肺癌患者外周血中IL-2、IFN-γ浓度均显著低于正常组,IL-4、IL-10浓度显著高于正常组(P＜0.05).良性组外周血Th1/Th2型细胞因子浓度与正常组比较差别无统计学意义(P＞0.05).结论 腺癌、鳞癌、小细胞肺癌等3种不同病理类型的肺癌患者外周血中的免疫细胞均呈现Th2型免疫反应优势状态,使肺癌逃逸免疫,是肺癌发生发展的可能免疫机制.     

重组人生长激素对原发性肝癌术后Th1/Th2漂移影响

目的 研究重组人生长激素对原发性肝癌(PHC)手术切除后病人Th1/Th2漂移的影响.方法 以干扰素(IFN-γ)和白细胞介素2 (IL-2)代表Th1类细胞因子,白细胞介素4(IL-4)和白细胞介素10(IL-10)代表Th2类细胞因子,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测16例原发性肝癌病人术前和术后10 d即应用重组人生长激素5 d后外周血单个核细胞(PBMC)Th1/Th2类细胞因子mRNA的表达,以20例原发性肝癌单纯手术切除病人作为对照组.结果 重组人生长激素组与单纯手术切除组比较,术前Th1类细胞因子表达无显著性差异(P>0.05);术后10 d重组人生长激素组Th1类细胞因子显著增高,与单纯手术切除组比较差异有显著性(Uc=2.58,P＜0.01).结论 短期应用重组人生长激素可促使PHC手术切除后病人免疫状态向Th1状态漂移.     

肺癌患者外周血CK19 mRNA和CEA mRNA表达的检测及临床意义

目的探讨CK19 mRNA、CEA mRNA能否作为判断肺癌血源性微转移的参考指标.方法取67例肺癌患者及37例健康体检者外周血,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测上述两个指标的表达.结果肺癌组外周血中CK19 mRNA阳性率(57.6%)及CEA mRNA阳性率(52.2%)均显著高于健康对照组的2.7%和5.4%(均P＜0.01),两个指标联合检测能将对肺癌微转移诊断的灵敏度提高至76.1%;CK19 mRNA的表达与临床分期相关(P＜0.01),CEA mRNA的表达与组织类型相关(P＜0.05).结论 CK19 mRNA和CEAmRNA可作为判断肺癌血源性微转移的参考指标,两者联检可提高诊断价值.     

HIF-1α在肺癌中的表达及临床意义

目的:研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在低氧培养条件下肺癌细胞株及肺癌组织中的表达及临床意义.方法:采用Transwell侵袭小室测定法检测缺氧对肺癌细胞侵袭力的影响,分别采用RT-PCR法和免疫印迹(Western blot)、免疫组化法测定缺氧条件下人肺腺癌细胞株A549、小细胞肺癌细胞株H446及60例肺癌组织和20例癌旁正常肺组织中HIF-1α的mRNA和蛋白表达.结果:两种肺癌细胞系在缺氧下侵袭力较正常时增强.随着缺氧时间的延长,肺癌细胞的HIF-1αmRNA和蛋白水平呈升高趋势(P<0.05或P<0.01).肺癌组织中HIF-1α的mRNA和蛋白阳性表达率分别为90.0%、75.0%,明显高于癌旁正常肺组织的30.0%、20.0%(P<0.01),有淋巴结转移的表达高于无淋巴结转移者,中晚期(Ⅲ～Ⅳ期)肺癌组织中的表达高于早期(I-Ⅱ期)(P<0.05).结论:氯化钴诱导缺氧上调HIF-1α在肺癌细胞中的表达,使之进一步耐受缺氧.HIF-1α的过表达参与了肺癌的侵袭转移,HIF-1α可成为判断肺癌生物学行为的重要指标.     

慢性乙型肝炎Th1/Th2失衡分析

目的:探讨慢性乙型肝炎发病过程中Th1/Th2细胞平衡失调的原因. 方法:用CD3和CD28 mAb, LPS分别体外刺激慢性HBV感染者和健康对照者的PBMC,ELISA法检测培养上清液中IL-10, IL-12及IFN-γ的水平. 结果:用mAb诱导刺激PBMC后,慢性HBV感染组IFN-γ和IL-10水平与健康对照组无差异;LPS诱导刺激后,慢性HBV感染组IL-12水平显著低于健康对照组(34±8 vs 77±9, P<0.05),且HBV阳性者IL-10分泌水平显著高于阴性者(975±101 vs 895±97, P<0.05). 结论:慢性HBV感染时Th1/Th2失衡并非T细胞本身缺陷所致,APC功能缺陷可能为Th1/Th2失衡的原因. APC功能缺陷可能与HBV侵犯APC有关.     

外周血中hnRNP A2/B1含量及其在肺癌诊断中的意义

目的用FQ-RT-PCR技术检测外周血中hnRNPA2/B1表达水平及在肺癌诊断中的意义.方法用FQ-RT-PCR技术定量分别检测18例健康体检者、12例肺部良性疾病和30例肺癌患者外周血中hnRNPA2/B1 mRNA,并用β-actin对hnRNPA2/B1表达水平进行标化.结果 hnRNPA2/B1与β-actin的比值在正常对照组和良性肺部疾病组间差异无显著性(P>0.05),而肺癌组均高于前两组(P<0.05);hnRNPA2/B1基因在低分化鳞癌中的表达水平很低,与其它类型肺癌差异有显著性(P<0.05).结论 hnRNPA2/B1在血中表达水平的差异在肺癌诊断中具有一定临床应用价值,并与肺癌的病理分级有一定相关性.     

非小细胞肺癌病人外周血MUC1基因定量表达及意义

目的探讨Mucin-1（MUC1）mRNA在非小细胞肺癌（NSCLC）病人外周血中的表达及临床意义。方法采用实时荧光定量RT—PCR方法检测MUC1 mRNA在NSCLC病人外周血中的表达。结果NSCLC病人外周血中MUC1 mRNA表达显著高于正常人（t=2．01,P〈0．05）;鳞癌与腺癌病人MUC1基因的表达无明显差异（P〉0．05）。NSCLC病人外周血中MUC1 mRNA表达与NSCLC的病理分级、TNM分期及淋巴结转移密切相关（F=25．62、34．61,t=2．05,P〈0．05）。结论NSCLC病人外周血中MUC1 mRNA表达与NSCLC发生、发展、侵袭、转移及恶性程度密切相关,对判断NSCLC恶性程度及预后有重要参考价值。     

调节Th1／Th2平衡对脑胶质瘤细胞增殖的影响

目的研究外源性细胞因子调节Th1/Th2平衡对脑胶质瘤细胞增殖的影响.方法分别将IFN-γ+IL-4单抗或IL-4+IFN-γ单抗与脑胶质瘤细胞共同孵育,半定量RT-PCR方法观察Th1/Th2类细胞因子基因表达的变化,并用MTT方法检测其对脑胶质瘤细胞生长情况的影响.结果脑胶质瘤细胞Th2类细胞因子的表达明显强于Th1类(P＜0.01),IFN-γ+IL-4单抗可以增强IFN-γ的表达,抑制脑胶质瘤细胞的增殖并呈剂量依赖性关系(P＜0.01);IL-4+IFN-γ单抗则使Th2类细胞因子的表达有所增强,促进脑胶质瘤细胞的增殖,也呈剂量依赖性关系(P＜0.01).结论 外源性的细胞因子或细胞因子单抗可以调节Th1/Th2平衡,逆转Th2优势,影响脑胶质瘤细胞的生长.     

肺癌患者胸水中GLUT1mRNA的转录表达及临床意义

目的 常规细胞学诊断肺癌患者胸水中的癌细胞具有重要的应用价值,然而对胸膜微转移的诊断是有限的.为研究拟探讨GLUT1(葡萄糖转运蛋白1)mRNA在肺癌患者胸水中表达的临床意义.方法 应用RT-PCR方法,分别检测了64例肺癌患者和40例良性疾病患者胸水中GLUT1mRNA的表达,并与常规细胞学诊断进行对比.结果 肺癌组胸水中GLUT1mRNA阳性表达率为90.6%(58/64),肺良性疾病组胸水中GLUT1mRNA阳性表达率为10.0%(4/40).两组间GLUT1mRNA阳性表达率的差异具统计学意义(x2=66.46,P＜0.01);肺癌组胸水中GLUT1mRNA阳性表达率与病理类型无关;检测肺癌患者胸水中的GLUT1 mRNA,明显优于常规细胞学诊断的敏感性和准确性.结论 GLUT1mRNA可作为检测肺癌患者胸膜微转移的分子标志物,该方法有助于诊断肺癌患者胸水中的脱落癌细胞,并指导临床分期和治疗.     

MAL基因在原发食管癌组织表达及临床意义

目的 探讨MAL基因表达下调与食管癌病理分期、组织学分级的相关性.方法 采用RT-PCR和半定量RT-PCR方法检测45例食管癌组织和癌旁食管黏膜组织中MAL基因的表达.结果 40例食管癌组织中MAL mRNA表达明显低于相应的癌旁食管黏膜组织(χ2=30.59,P<0.01);Ⅰ～Ⅱ期病人的MAL基因表达水平显著高于Ⅲ期病人(t=5.952,P<0.001),淋巴结转移阳性病人MAL mRNA表达水平显著低于淋巴结转移阴性病人(t=6.743,P<0.001).结论 MAL mRNA在食管癌组织中的表达与临床分期、组织学分级等临床病理因素有一定相关性,可作为判断食管癌恶性程度、转移潜能及预后的实验室指标.     

非小细胞肺癌组织中TUBB3基因的表达及临床意义

目的：探讨TUBB3基因在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及临床意义。方法：采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测82例肺癌组织、36例癌旁组织及15例良性组织中TUBB3基因mRNA的表达。结果：TUBB3基因在NSCLC癌、癌旁及良性组织中表达分别为18．3％（15／82）、2．8％（1／36）及93．3％（14／15）。3者比较后总体差异有统计学意义（P〈0．001）。癌组织TUBB3表达18．3％高于癌旁组织2．8％（P=0．048）;腺癌TUBB3表达25．9％（14／54）高于鳞癌3．6％（1／28）（P-0．013）。结论：TUBB3基因mRNA癌组织中表达高于癌旁组织,尤其是腺癌表达高于鳞癌可指导广西人群患者术后紫杉醇类药物的个体化治疗。     

胃癌组织中H-ras及K-ras基因第12密码子点突变的检测及意义

目的 探讨人胃癌组织中H-ras、K-ras基因第12密码子点突变情况及意义。方法 收集43例胃癌及相应癌旁组织标本。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）分析法检测H-ras、K-ras基因第12密码子点突变情况。结果 43例胃癌组织中有1例发生H-ras突变（1/43,2．3％）,癌旁组织中未发生突变。K-ras在胃癌及癌旁组织中均未发生突变。结论 胃癌组织中H-ras、K-ras基因第12密码子点突变率低,在胃癌的发生中不起主要作用。     

肺癌与人类巨细胞病毒感染关系的初步研究

目的：探讨肺癌与人类巨细胞病毒（HCMV）感染的关系。方法：对88例肺癌及117例肺非癌患者，用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清HCMV－IgG，IgM抗体，用聚合酶链反应（PCR）法检测尿HCMV－DNA。同时检测其中64例肺癌及67例肺非癌患者的病灶局部冲洗或支气管肺泡灌洗回收液HCMV－DNA。对肺癌组中抗癌化疗的患者于每一化疗周期复查血清HCMV－IgM，尿HCMV－DNA。结果：肺癌组血清HCMV－IgM阳性率26．1％，病灶局部冲洗或支气管肺泡灌洗回收液HCMV－DNA阳性率26．6％，均显著高于肺非癌组（P＜0．01）；血清HCMV－IgG及尿HCMV－DNA阳性率两组未见明显差别。42例肺癌到化疗第二周期时，血清HCMV－IgM16例由阴性转阳性，尿HCMV－DNA6例转阳性。结论：肺病与HCMV感染有统计学上的相关性；抗癌化疗使肺癌患者HCMV活动性感染明显增多，值得重视。     

HPV16、HPV18感染及p53蛋白过度表达与肺癌的相关性研究

为研究人乳头瘤病毒１６和１８型（ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８）感染及ｐ５３基因突变与肺癌的关系，应用经病理学证实的肺癌活组织，行聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测癌组织中的ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８；并用ＬＳＡＢ免疫组化法检测相应蜡块标本中ｐ５３蛋白的过度表达。在４８例肺癌组织标本中未检出ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８；ｐ５３蛋白表达呈阳性，阳性率为５４．２％（２６／４８），其中鳞癌６６．７％（１８／２７），腺癌５７．１（４／７），小细胞癌３３．３％（１／３），大细胞癌３３．３％（２／６），类癌２０．０％（１／５）。提示肺癌的发生可能与ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８感染无关，而与ｐ５３基因突变有关，尤以与鳞癌和腺癌关系密切     

肺癌的CT扫描及诊断

本文对25例肺癌患者的CT和X线平片表现进行比较分析,结果表明:扫描方法在CT检查中非常重要;CT对观察肿瘤轮廓、边缘、内部结构、纵隔肺门淋巴结转移、心脏大血管以及胸壁侵犯方面明显较一般平片优越.具有分叶和棘状突起的孤立肿块,且其CT值在100Hu以下,为周围型肺癌较可靠的征象.对于中央型肺癌,CT扫描除能显示支气管腔内病变外,还可同时了解腔外情况.另外,本文对肺小细胞癌的CT表现亦作了初步探讨.     

人卵巢上皮癌细胞中Th1和Th2类细胞因子表达及其意义

（１）目的 探讨人卵巢上皮癌细胞中Ｔｈ１和Ｔｈ２类细胞因子表达及其意义。（２）方法 采用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测５种卵巢癌细胞系和１０份卵巢癌新鲜组织中ＩＬ－２,ＩＦＮ－γ,ＩＬ－４,ＩＬ－６及ＩＬ－１０ｍＲＮＡ表达。（３）结果 ５种卵巢癌细胞系中４０％细胞株表达ＩＬ－４,６０％细胞株表达ＩＬ－６,８０％细胞株表达ＩＬ－１０,无１株表达ＩＬ－２和ＩＦＮ－γ,１０份卵巢癌组织中ＩＬ     

微小染色体维持蛋白5基因在痰液脱落细胞表达对肺癌的诊断价值

目的：探讨微小染色体维持蛋白5（MCM 5）在痰脱落细胞中的表达,用以检测肺癌细胞,为临床早期发现、探讨方便、快捷的方法。方法：收集肺癌病人和健康志愿者痰脱落细胞,提取总RNA,逆转录-巢式聚合酶链反应,免疫组化检测微小染色体维持蛋白5 mRNA表达水平。结果：在肺癌36例痰脱落细胞中MCM 5阳性率58.3%,肺部良性疾病26例MCM 5阳性率15%,健康志愿者20名MCM 5阳性率0%。肺癌组织中MCM 5基因表达量在1、2、3级间差异均有非常显著意义（P〈0.001）。结论：痰液脱落细胞中MCM 5基因检测有助于肺癌的临床诊断,对早期诊断亦有一定的意义。可以设想作为早期诊断肺癌的标志基因。     

人原发性乳腺癌及肺癌中乳腺癌抑制基因突变

采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法，研究了９例人原发性乳腺癌和２０例肺癌中ＢＲＣＡ１基因外显子２及外显子２１区域上的突变情况。结果显示：３例乳腺癌存在突变（３／９），其中１例发生于外显子２，２例发生在外显子２１上；１例肺癌在外显子２上发生突变（１／２０，５％），该结果表明ＢＲＣＡ１基因突变与乳腺癌关系密切，同时该结果首次发现ＢＲＣＡ１基因突变可能与肺癌发生有关，但所有这些结果尚需进一步的序列分析证实。