原位分子杂交中脱片问题浅析

核酸分子杂交技术是当今分子生物学研究的重要手段。原位分子杂交技术是分子生物学和组织化学结合的成果,能准确定位组织细胞内的特定基因表达。但分子杂交实验操作步骤繁琐,实验周期长,条件要求高,涉及实验试剂多,常常因为很小的因素而导致实验失败。     

一种基于流式细胞仪分选后的细胞原位分子杂交

原位分子杂交是从组织细胞原位显示特定核酸序列存在的技术 ,它对一些异质性的细胞群体如血液 ,脑组织等 ,常不能准确阐明特定核酸序列表达于何种类型的细胞 ,或在某一细胞群体是否有特定基因的表达。在对中枢神经系统 (CNS)胶质细胞的研究中 ,参考相关报道[1 ,2 ] ,我们将流式细胞仪技术与原位分子杂交结合 ,对经分选的小胶质细胞进行细胞原位分子杂交分析 ,取得了满意结果。1　材料与方法1 .1　主要试剂及材料　小胶质细胞标记物同工凝集素GSA IB4 (FITC标记 )、2 0×SSC购自Sigma公司 ,诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)与肿瘤坏死因子 …     

提高非放射性标记核酸分子杂交敏感性的研讨

提高非放射性标记核酸分子杂交敏感性的研讨王伯云，彭玮丹，吴人亮，李玉松（西安第四军医大学病理学教研室，西安７１００３２）非同位素标记核酸探针应用于分子杂交技术，已受到重视，正在生物学和医学领域推广，在临床检测中已用于一些疾病的诊断，称多基因诊断。分子...     

病理学中一些新技术、新仪器和新材料(摘要)

病理学中一些新技术、新仪器和新材料（摘要）王伯氵云李玉松（第四军医大学病理学教研室，西安７１００３２）本文报告了在病理学研究和临床诊断中应用的一些新技术、新仪器和新材料。新技术：如快速免疫组织化学技术（微波Ｅｎｖｉｓｉｏｎ），原位核酸分子杂交技术，Ｆ...     

一种新原位分子杂交技术

原位分子杂交技术已开展多年 ,但至今尚未找到能应用到石蜡切片中效果理想的杂交方法。我们通过反复摸索 ,多次实践 ,总结出一种新的原位分子杂交技术。它不仅能很好地应用于石蜡切片 ,而且可应用于冰冻切片和培养的组织细胞 ,极大地方便了实验研究工作 ,报道如下。１材料和方法１．１材料０．２ｇ／ＬＤＥＰＣ ;４０ｍＬ／Ｌ多聚甲醛（ｐＨ７．４） ;２ｇ／Ｌ甘氨酸 ,２ｇ／Ｌ醋酸酐（用０．１ｍｍｏｌ／ＬｐＨ８．０三乙醇胺配制） ;含０．３ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸胺的０．５,０．７,０．９和１Ｌ／Ｌ酒精 ;２０×ＳＳＣ（ｐＨ７．５） 〔１〕 …     

原位分子杂交技术的体会(摘要)

原位分子杂交技术的体会（摘要）朱春红戴晓汶（解放军第１１７医院病理科，杭州３１００１３）原位核酸杂交是一种快速而又准确地检测组织内ＤＮＡ与ＲＮＡ片段，重组ＤＮＡ的方法。灵敏度高、特异性强，已成为分子生物学中重要方法之一。我院曾开展了生物素标记探针，在...     

用分子生物学方法检测螨体内汉坦病毒的研究

目的 研究汉坦病毒(HV)在革螨、总螨体内增殖、定位等。方法 采用聚合酶链反应和原位分子杂交法检测革螨、总螨体内HV—RNA。结果 用PCR技术从革螨、总螨体内检测到HV—RNA，最低检测为5只螨组；取革螨和恙螨幼虫、若虫定期测定TCID50／m1滴度，证明HV在革螨、恙螨体内可经期传播并有增殖现象；用原位分子杂交技术在革螨、恙螨的卵巢细胞、支肠细胞等组织中检测到HV—RNA。结论 研究结果证明HV在螨体内可经期传播，并有增殖现象；HV通常定位于螨的卵巢和支肠细胞等组织内。为革螨、恙螨的媒介意义提供了具有分子水平的直接证据。     

乳腺癌分子分型用荧光分子影像探针

目前,乳腺癌的临床诊断就是结合病理类型和分子分型 (免疫组化)。该方法是有创的,而且不能原位、实时地展现关键生物分子与临床关键信息之间的关系。本文介绍了利用分子影像技术对乳腺癌进行分子分型检测的最新研究进展。荧光成像灵敏度高,且不过分依赖图像分析,只需相应的荧光分子探针,即可实时、定量或半定量、多通道地得到肿瘤组织分子分型信息。因此,研制安全高效、组织穿透力强的近红外荧光分子探针是未来荧光成像技术和乳腺癌分子分型研究的重点。     

生物素标记探针原位杂交法检测细胞中c-myc基因的表达

本文采用生物素标记的c-mye基因作探针，通过细胞原位分子杂交技术，对人舌癌、膀胱癌和正常细胞中c-myc基因的转录量进行了定性和半定量分析。结果表明与正常细胞相比，舌癌和膀胱癌细胞中c-myc基因异常高度表达。     

比较基因组杂交及其在肿瘤分子细胞遗传学研究中的应用

比较基因组杂交是一种分子细胞遗传学方法，可在全部染色体或染色体亚区水平上对不同基因组间ＤＮＡ序列拷贝数进行检测并定位。它已被许多分子生物实验室和临床检验室利用，对多种肿瘤和遗传性疾病进行检测。本文主要对其原理、技术优缺点、应用、与其他细胞遗传学方法比较及展望作一综述。     

碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达与微血管密度和胃癌的发展及预后

我们应用原位分子杂交和免疫组织化学技术检测人胃癌组织中碱性成纤维细胞生长因子 (ｂＦＧＦ)表达和微血管密度 (ＭＶＤ) ,分析ｂＦＧＦ与ＭＶＤ及其与胃癌各临床病理指标和预后的关系。一、材料与方法1.组织材料 :1986～ 1996年本院外科切除胃癌标本 12 4例 ,所有标本均经常规甲醛固定 ,石蜡包埋 ,连续切片 ,分别供ＨＥ、原位分子杂交检测和免疫组织化学染色 ,选择正常胃黏膜 2 0例作为对照。2 .临床资料 :本组 12 4例胃癌标本 ,手术前均未行放化疗。按ＷＨＯ 1997年胃癌分类标准 :乳头状腺癌 2 2例 ,管状腺癌 5 5例 ,黏液腺癌 6例 ,印戒…     

DNA连接酶及相关检测技术研究进展

核酸检测技术已被广泛应用于分子遗传学、微生物学、免疫学和肿瘤学等方面的临床诊断.聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术大大促进了病原体、基因突变和基因型的分子诊断方法的发展,它将在临床诊断与分析中起着越来越重要的作用.     

软组织肉瘤染色体畸变的检测技术及进展

软组织肉瘤是一种起源不同、形态学复杂多样的恶性肿瘤,其诊断和鉴别诊断一直是病理学家们的主要挑战之一.部分软组织肉瘤具有特异性染色体易位并产生相应的融合基因.通过分子遗传学技术,如传统的遗传学技术、RT-PCR、原位杂交、比较基因组杂交等检测软组织肉瘤特异性染色体改变,对软组织肉瘤的诊断、鉴别诊断及指导临床治疗和预后分析提供了有力的工具.     

人原发性肝癌Ⅰ型胶原基因的表达

用DNA-m RNA原位分子杂交技术检测了2例正常肝及4例原发性肝癌、癌周肝组织中Ⅰ型胶原基因的表达。结果提示人原发性肝癌组织中肿瘤细胞及间质细胞均可参与Ⅰ型胶原的合成。胶原的合成可能与细胞的活跃增殖有关,其意义尚需进一步探讨。     

白细胞介素-1β及其Ⅰ型受体mRNA在大鼠颈动脉体中的表达

目的研究白细胞介素-1β（IL-1β）及其Ⅰ型受体（IL-1RI）mRNA在大鼠颈动脉体中的表达。方法原位分子杂交、免疫荧光双重染色和Western blotting。结果原位分子杂交结果显示，IL-1RI mRNA阳性信号出现在颈动脉体球细胞中；免疫荧光双重染色结果显示，IL-1β表达在颈动脉体球细胞中；Western blotting结果进一步证明，IL-1β阳性反应条带出现在18kD处，与其分子量一致。结论大鼠颈动脉体球细胞不仅表达IL-1RI，而且也表达其配体IL-1β。     

PCR分子信标法及其应用

PCR分子信标法是近几年发展起来的一种全新的核酸定量检测技术，它具有PCR技术的高效核酸扩增特性，核酸探针杂交的高特异性，以及光谱技术的高灵敏性和可计量性。目前，PCR分子信标法已被广泛应用于病原微生物的检测、肿瘤研究、基因突变研究等多个领域。     

胃癌Ha-ras、APC基因的电镜原位标记

超微水平的电镜原位分子杂交 (又称电镜原位分子 )技术是近十余年发展起来的一种新的电镜技术。它能在超微水平对特异性ＤＮＡ或ＲＮＡ进行精确定位 ,给生物学及病理学研究提供了新的手段。为了对胃癌癌基因 (Ｈａ -ｒａｓ)和抑癌基因 (ＡＰＣ)进行定位 ,作者将电镜酶细胞化学有关技术〔1〕和原位分子杂交技术〔2〕结合起来 ,建立了电镜原位分子杂交技术 ,取得较为满意的结果。1　材料和方法胃癌手术切除标本 ,取材后经预冷的ＰＧ液 (4 %多聚甲醛 0 5 %戊二醛 )固定 4ｈ(0℃～ 4℃ )。用 0 1ｍｏｌ/ＬＰＢＳ漂洗后在该液中细切成条。应用…     

免疫组化在恶性淋巴瘤诊断中的正确应用与评价

免疫组织化学技术应用于病理诊断起始于20世纪70年代。随着单隆抗体的问世，抗原修复和检测系统技术的不断改进，免疫组化技术在敏感性与特异性方面有了很大的提高。目前此项技术已广泛应用于病理诊断中，成为病理诊断中不可缺少的检测手段，特别在淋巴网状组织肿瘤的诊断、分型和鉴别诊断中，与分子遗传学检测技术一起成为重要的辅助手段。     

适配分子在分子识别中的作用

抗体是分子识别领域应用最广的一类分子 ,在临床治疗和诊断方面均发挥了巨大的作用。随着配体指数增强系统进化技术 (SEL EX)的发展 ,已经可能筛选出针对任何靶分子以高特异性、高亲和力结合的适配分子。在治疗和诊断的分子识别领域 ,它已经成为能够和抗体竞争的一类分子     

原位杂交组织化学技术

<正> 近几年随着基因工程的进展,新兴的分子遗传学中有些研究手段已被引入神经科学领域中。其中之一便是原位杂交组织化学技术(in situ hybridization histochemical technique)。众所周知,以往的免疫组织化学技术是在组织上检测某种特定的蛋白质、神经肽或糖类等的重要手段;与其相反,原位分子杂交技术则是检测组织内的蛋白质、神经肽的前体信使RNA(mRNA)的方法。原位分子杂交技术有几种方法。如:从已经确定的核苷酸序列制作30-50 mer的合成DNA,再用某些方法将之标记以其做为探针的方法;用互补DNA