四物汤对γ射线照射致血虚证小鼠造血细胞作用的研究

探讨四物汤预防和治疗血虚证的作用,用60 Coγ射线身全照射小鼠造成血虚证模型;荧光标记并用流式细胞仪测定CD34＋细胞在骨髓有核细胞中的比例,细胞固定后PI染色测定细胞周期,Annexin V-FITC试剂盒和DNA凝胶电泳检测骨髓细胞的凋亡,结果：四物汤对小鼠骨髓造 血干祖细胞,外周血细胞的恢复有明显促进作用,有保护骨髓和促进骨髓细胞由G1期进入S期的效应,四物汤可减轻射线引起的细胞凋亡,促进骨髓造血干祖细胞的增殖,抑制骨髓造血干祖细胞的凋亡是四物汤预防和治疗血虚证的机制之一。     

环磷酰胺所致血虚证小鼠骨髓CD34^＋细胞的变化

目的：研究环磷酰胺（CTX）诱发的血虚证小鼠骨髓中干祖细胞的数量和骨髓细胞周期的动态变化。方法：采用CTX大小两个剂量分别对两组小鼠进行腹腔注射制作小鼠血虚证模型,在不同时相点,双荧光标记测定CD34^ 细胞在骨髓有核细胞中的比例,骨髓细胞固定后PI染色测定细胞周期。结果：（1）注射CTX后CD34^ 细胞在骨髓有核细胞中的比例下降后迅速上升,然后又下降。（2）注射CTX后骨髓细胞增殖受抑,然后动员骨髓细胞增殖,但药后10d细胞增殖又受抑。与CD34^ 细胞在骨髓有核细胞中比例的变化规律有一致性。结论：CTX可以动员骨髓造血干祖细胞进入细胞周期而增殖,增加了骨髓中造血干祖细胞的数量,但此过程加速了干祖细胞池的耗竭,从而对骨髓造成更大损伤,这厅能是CTX诱发小鼠血虚证的机理之一。     

四物汤对γ射线照射致血虚证小鼠造血细胞作用的研究

探讨四物汤预防和治疗血虚证的作用机理。用⁶⁰Coγ射线全身照射小鼠造成血虚证模型;荧光标记并用流式细胞仪测定CD34⁺细胞在骨髓有核细胞中的比例;细胞固定后PI染色测定细胞周期;Annexin V-FITC试剂盒和DNA凝胶电泳检测骨髓细胞的凋亡。结果:四物汤对小鼠骨髓造血干祖细胞、外周血细胞的恢复有明显促进作用;有保护骨髓和促进骨髓细胞由G₁期进入S期的效应;四物汤可减轻射线引起的细胞凋亡;促进骨髓造血干祖细胞的增殖,抑制骨髓造血干祖细胞的凋亡是四物汤预防和治疗血虚证的机制之一     

环磷酰胺所致血虚证小鼠骨髓CD34~ 细胞的变化

目的 :研究环磷酰胺 (CTX)诱发的血虚证小鼠骨髓中干祖细胞的数量和骨髓细胞周期的动态变化。方法 :采用CTX大小两个剂量分别对两组小鼠进行腹腔注射制作小鼠血虚证模型。在不同时相点 ,双荧光标记测定CD34 细胞在骨髓有核细胞中的比例 ,骨髓细胞固定后PI染色测定细胞周期。结果 :①注射CTX后CD34 细胞在骨髓有核细胞中的比例下降后迅速上升 ,然后又下降。②注射CTX后骨髓细胞增殖受抑 ,然后动员骨髓细胞增殖 ,但药后 10d细胞增殖又受抑。与CD34 细胞在骨髓有核细胞中比例的变化规律有一致性。结论 :CTX可以动员骨髓造血干祖细胞进入细胞周期而增殖 ,增加了骨髓中造血干祖细胞的数量 ,但此过程加速了干祖细胞池的耗竭 ,从而对骨髓造成更大损伤 ,这可能是CTX诱发小鼠血虚证的机理之一。     

四物汤及其提取物对辐射致血虚证小鼠造血作用的研究

【目的】探讨四物汤及其提取物治疗辐射致血虚证小鼠的作用机制和有效物质基础。【方法】γ射线全身照射小鼠制成血虚证模型,观察四物汤对其外周血和造血祖细胞集落的影响,基因芯片检测有效单体芍药苷的分子作用机制。【结果】四物汤、正丁醇提取物、水溶提取物对血虚证小鼠外周的白细胞的恢复有明显促进作用;四物汤和芍药苷增强血虚证小鼠骨髓造血干祖细胞的集落形成能力;芍药苷可促进骨髓基质细胞分泌造血因子(G—CSF,GM—CSF,PDGF—α)等,抑制造血抑制因子(M—CIP)的分泌。【结论】四物汤补血的物质基础可能是芍药苷,促进骨髓基质细胞分泌G—CSF,GM—CSF,PDGF-α等造血因子可能是四物汤补血的作用机制之一。     

四物汤对环磷酰胺所致血虚证治疗后的代谢组学研究

目的:通过分析血虚证模型以及给予四物汤反证后小鼠血清和组织提取物的代谢组学变化,结合模式识别的统计分析方法,探讨环磷酰胺所致血虚证及四物汤治疗后的特征性内源代谢谱的改变,为中药经典复方四物汤的作用机制研究提供科学依据。方法:将C57小鼠按体重随机分为3组:正常对照组、环磷酰胺模型组、四物汤给药组(10 g.kg-1.d-1),每组10只,连续给药7 d后股动脉取血,同时取脾脏、胸腺及股骨骨髓。用600 MHz超导傅立叶变化核磁共振波谱仪检测,对所得到的氢谱按每段0.04进行分段积分并归一化后,用SIMCA-P10.0软件进行主成分分析。结果:正常对照组、环磷酰胺模型组和四物汤给药组的血清代谢物组成、胸腺、脾脏、骨髓提取物的成分明显不同。其中环磷酰胺导致血清中的乳酸、3-羟基丁酸、胆碱、葡萄糖的含量下调,低密度脂蛋白、亮氨酸/异亮氨酸含量上调;胸腺提取物中的牛磺酸,胆碱,F:βRCH2CH2CO,epi-coprostanol,乳酸含量下调;脾脏提取物中的乳酸,3-羟基丁酸,胆碱,F:βRCH2CH2CO,epi-coprostanol,牛磺酸的含量下调;骨髓提取物中的乳酸、3-羟基丁酸、胆碱、葡萄糖的含量下调。给予四物汤后,以上各成分在不同程度上得到有效逆转。结论:环磷酰胺所致血虚证的可能机制是导致机体脂肪酸β氧化功能紊乱、细胞内外渗透压平衡破坏以及糖酵解功能失调。经典补血方剂治疗血虚证的机制可能与改善线粒体功能,纠正脂肪酸β氧化功能紊乱;稳定细胞膜,维持细胞内外正常渗透压;调节糖酵解,促进机体正常能量代谢有关。     

赤芍、白芍对环磷酰胺所致的血虚证小鼠补血作用比较研究

目的：研究赤芍、白芍在补血作用上的异同。方法：采用腹腔注射环磷酰胺100mg·kg-1、每日1次、连续3d的造模方法,灌胃给药,定期采血检测血常规。结果：造模12d,给药组的RBC、HGB、HCT值明显回升,且白芍的药效优于赤芍。结论：对于环磷酰胺所致的血虚证小鼠模型,白芍升高红细胞数、血红蛋白含量、红细胞压积的作用与模型组相比具统计学意义,而赤芍作用相对较弱。     

四物汤及两味中药组方对γ射线照射所致血虚证小鼠作用机制的研究

[目的]探讨四物汤及其两味药组方治疗血虚证小鼠的补血作用机制。[方法]采用60^Coγ射线全身照射制成实验性小鼠血虚证模型，测定外周血象、CD34^ 细胞、细胞周期、NFS60细胞增殖以及造血干祖细胞的增殖情况。[结果]1)四物汤在各指标上都优于其两味药组方；(2)两味药组方中，当归相关组对CFU—E，CFU—Mix，CFU—GM的促进作用较好，且有升高白细胞的作用；而地黄相关组对CFU—E有增殖作用；白芍相关组能明显促进NFS60细胞的增殖；川芎相关组增加CD34抗原表达，并促进细胞由G0/1期向S期转化，其作用和所含的川芎嗪有关。[结论]四物汤全方优于两味药组方，各组方的作用靶点和作用强度各有异同。     

四物汤对综合放血法致小鼠血虚证造血功能的影响

目的:观察四物汤对综合放血法致小鼠血虚证造血功能的影响,为比较四物汤对不同血虚证模型补血作用提供实验依据。方法:每日按75g·kg^-1体重限食,隔日游泳20min及放血0.4mL共15d,建立小鼠血虚证模型。提前7d,四物汤小,中,大剂量组分别按每天5,10,20g·kg^-1给予四物汤至造模结束,通过血细胞计数仪及流式细胞仪等分析手段,检测外周血象、骨髓细胞周期、骨髓细胞凋亡和CD34⁺细胞数。结果:四物汤小,中,大剂量组可以使血虚证小鼠红细胞由第7天最低值4.6×10¹²·L^-1,分别显著升高到6.5,7.1,7.0×10¹²·L^-1;在第15天,使血虚证小鼠S期骨髓细胞数由11.53%,分别显著增加到14.34%,14.03%,13.58%。结论:四物汤可以在一定程度上逆转综合放血致小鼠的造血损伤。     

四物汤对血虚证小鼠骨髓细胞CD 34抗原表达的影响

目的：探讨四物汤对^60Coγ射线或环磷酰胺诱导的血虚证小鼠骨髓细胞CD34抗原分子表达的影响。方法：用^60Coγ射线全身照射小鼠升腹腔注射环磷酰胺造成小鼠血虚证模型，实验分正常组、模型组、小剂量组、中剂量组、大剂量组，荧光标记小鼠骨髓细胞并用流式细胞仪 测定CD34＋细胞在骨髓有核细胞中的比例，同时做小鼠骨髓细胞 落培养。结果与结论：四物汤可促进血虚小鼠骨髓中干祖细胞增生，增加CD34抗原分子的表达，为四物汤治疗血虚证提供了依据。     

血虚证实质及四物汤反证研究

概述了血虚证动物模型研究现状及存在的问题，提出模型的选择及指标观测应根据受试药特点而定。另从血虚证实质角度探讨了该模型的病理生理反应机制，用四物汤进行了反证研究。     

四物汤不同提取工艺对血虚模型小鼠造血功能的影响

目的:探讨四物汤水提工艺、水提醇沉工艺及50％乙醇渗漉工艺对血虚模型小鼠造血功能的影响.方法:将小鼠随机分为6组,即空白对照组、模型组、阳性(复方阿胶浆)组、四物汤药物组1号(水提组)、2号(水提醇沉组)、3号(50％乙醇渗漉组).四物汤药物组每日ig给予四物汤1,2,3号(12 g生药·ks-1),阳性组给予复方阿胶浆(20 mL·kg-1),正常对照组与模型组给予等容量生理盐水,连续给药(生理盐水)8d.除空白对照组外,其余各组分别于第2,5日sc乙酰苯肼20,40 mg·kg-1,从第5日起,每日ip环磷酰胺40 mg·kg-1,连续4d.空白对照组同时注射等容量生理盐水.检测四物汤不同提取工艺药物组对血虚小鼠外周血象、脾脏和胸腺指数、骨髓有核细胞数的作用.结果:四物汤药物组1,2,3号均能升高血虚小鼠红细胞数、血红蛋白含量、白细胞数及骨髓有核细胞数,其中水提组和50％乙醇渗漉组差异性显著(P＜0.05);四物汤药物组1,2,3号均能显著增加血虚小鼠脾脏指数和胸腺指数(P＜0.01),其中水提组、50％乙醇渗漉组有强于水提醇沉组的趋势.结论:由3种提取工艺制得的四物汤对改善血虚模型小鼠的造血功能均有作用,以水提组和50％乙醇渗漉组较优.     

四物汤对血虚模型小鼠补血作用有效部位的筛选

目的考察四物汤不同溶剂提取部位对血虚模型小鼠外周血象和免疫器官指数的影响,筛选四物汤补血作用有效部位。方法采用ip环磷酰胺(CTX)复制小鼠骨髓造血功能抑制模型。以驴胶补血颗粒作为阳性对照药物。药物组分别ig给予四物汤的多糖、挥发油、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇提取部位。测定外周血象、脾脏指数和胸腺指数。采用HPLC法对四物汤不同提取部位的化学成分差异进行初步分析。结果与对照组比较,模型组小鼠RBC、HCT、HGB、PLT、胸腺指数及脾脏指数明显降低,表明血虚模型复制成功。与模型组比较,四物汤多糖部位可明显升髙RBC、HCT、HGB、PLT、胸腺指数及脾脏指数(P <0.05);二氯甲烷部位可明显升高HCT、HGB、PLT、胸腺指数及脾脏指数(P <0.05);挥发油部位可明显升高HGB、PLT和脾脏指数(P <0.05);正丁醇部位可明显升高HCT、RBC、胸腺指数和脾脏指数(P <0.05);乙酸乙酯部位可明显升高PLT(P <0.05)。四物汤正丁醇部位含有川芎嗪、芍药苷和阿魏酸。二氯甲烷部位含有5-羟甲基糠醛和藁本内酯。乙酸乙酯部位含有5-羟甲基糠醛。挥发油部位含有藁本内酯。结论多糖、二氯甲烷、挥发油和正丁醇部位均为四物汤补血作用有效部位,其中多糖和二氯甲烷部位补血作用最强。     

四物汤对辐射致血虚证小鼠作用的代谢组学研究

目的:基于超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱联用(UPLC-ESI-Q-TOF-MS)技术进行辐射损伤致血虚证以及四物汤的方证结合研究,发现辐射致血虚证及用四物汤干预后小鼠内源性代谢物的变化,基于代谢组学的方法考察血虚证的发生及四物汤的作用机制。方法:选用C57小鼠36只,按体重随机分为对照组、模型组及四物汤组。造模方法采用3.5Gy60Coγ射线全身照射制作模型,造模7 d后股动脉取血并摘取脾脏和胸腺,进行处理后用UPLC-ESI-Q-TOF-MS检测,应用Mark-erLynx XS软件对总离子流图进行色谱峰识别,利用主成分分析法对数据进行处理,采用正交偏最小二乘法进行组间数据分析。通过模式识别分析,快速确认标志物。结果:辐射损伤所致的血虚证小鼠血清中溶血磷脂、葡糖苷酸、单酰甘油酯、三羟基丁酸、神经酰胺、天冬氨酸磷酸酯、甘油磷脂等代谢物的含量变化明显;脾脏中变化明显的代谢物有单酰甘油酯、神经酰胺、溶血磷脂、羟基丁酸、棕榈酸、3-羟基硬脂酸、二甲基精氨酸、苯丙氨酸、磷脂酰丝氨酸;胸腺中有甲基腺苷、谷甾醇、肉毒碱、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、甘油二酯、二甲基精氨酸、神经酰胺、溶血磷脂、羟基丁酸、胆固醇等。结论:通过对这些生物标志物的生理功能分析,推测辐射损伤使小鼠机体的脂类代谢、糖类代谢及部分氨基酸的合成代谢发生紊乱,经典补血方剂四物汤治疗可以使之逆转并调整平衡。     

四物汤对放射线致血虚证小鼠骨髓蛋白质表达的影响

目的 :观察四物汤对血虚证小鼠骨髓蛋白质表达的影响 ,为阐明四物汤补血作用的分子机理提供理论和实验依据。方法 :采用 3.5Gy⁶⁰Coγ射线全身 1次性照射 ,制备小鼠血虚证模型。利用双向电泳、图像分析、胶内酶切、质谱鉴定等蛋白质组学技术 ,结合生物信息学 ,分离、分析、鉴定蛋白质。结果 :四物汤可以逆转放射线致血虚证小鼠骨髓 10个上调和 5个下调的蛋白质。其中 8个蛋白质可能分别是淋巴细胞特异性蛋白质 1、蛋白酶体26SATP酶亚组分 4、造血细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶、H-ras、3-磷酸甘油醛脱氢酶、生长因子受体结合蛋白 14及Lgals12。结论 :四物汤能调节骨髓蛋白质表达 ,并可能由此促进造血细胞的生长和分化 ,发挥补血作用。     

四物汤对急性血瘀模型大鼠活血祛瘀有效部位筛选

目的:比较四物汤不同溶剂提取部位对急性血瘀模型大鼠血液流变学、凝血功能和血小板系统的影响,筛选四物汤活血祛瘀有效部位。方法:四物汤经水煎煮后,采用系统溶剂提取法分别得到4个溶剂提取部位。雌性SD大鼠80只分为8组,每组10只,分别为正常组,模型组,复方丹参滴丸组(0.15 g·kg-1),四物汤组(7 g·kg-1),石油醚提取液组(7 g·kg-1),乙酸乙酯提取液组(7 g·kg-1),正丁醇提取液组(7 g·kg-1),水提取液组(7 g·kg-1)。除正常组外,其余各组采用ih盐酸肾上腺素加冰水浴复制大鼠急性血瘀模型,比较四物汤不同提取部位给药后大鼠血液流变学,凝血酶原时间(PT),凝血酶时间(TT),活化部分凝血活酶时间(APTT),血浆纤维蛋白原(FIB),血小板聚集率,血浆中血栓素B2(TXB2)和6-酮-前列腺素F1a(6-keto-PGFla)含量的差异。结果:与正常组比较,模型组各切变率全血黏度、血浆黏度明显升高,TT,PT,APTT明显缩短,FIB含量明显升高,血小板聚集率明显升高,血浆TXB2含量明显升高,6-keto-PGFla的含量明显降低(P0.01);与模型组比较,四物汤乙酸乙酯组明显降低大鼠各切变率全血黏度、血浆黏度,明显延长TT,PT,APTT,明显降低FIB含量、血小板聚集率、血浆TXB2的含量,明显升高6-keto-PGFla的含量(P0.01);石油醚组可明显降低高切变率下全血黏度(P0.05),降低TXB2含量、升高6-keto-PGFla的含量(P0.01);正丁醇组、水提组可明显降低TXB2含量、升高6-keto-PGFla含量(P0.01)。结论:乙酸乙酯部位是四物汤活血祛瘀的最有效部位。     

计算机辅助分析四物汤补血作用配伍机理的研究

观察四物激发及拆方对乙酰苯肼和环磷酰胺所致血虚动物模型的补血作用。根据血常规检验指标及计算机聚类分析结果,各样本药物补血作用,四物汤全方作用最强;当归在方中起主要作用,两味药配伍中,当归与白芍,当归与熟地作用较好;三味药配伍中,当归,白芍,川芎作用最好。     

补阳还五汤对气虚血瘀型小鼠免疫功能影响的实验研究

目的：观察补阳还五汤对细胞免疫影响及清除免疫复合物的作用,验证补阳还五汤可提高免疫功能、修复血管内皮的损伤。方法：将小鼠随机分为正常组、模型组和治疗组,治疗组给予补阳还五汤,Elisa法测CIC循环免疫复合物的含量,镜下观察E花环形成率,吞噬细胞的吞噬率。结果：补阳还五汤治疗组的循环免疫复合物的含量、E花环形成率、吞噬细胞的吞噬率与模型组相比,P〈0．05,有统计学意义,与正常组比较,P〉0．05,无统计学意义。结论：补阳还五汤可以提高红细胞受体活性,减少循环免疫复合物含量,增强小鼠腹腔的巨噬细胞的吞噬功能。