抗日本血吸虫抗独特型抗体的制备及初步鉴定和应用

本研究用1株针对日本血吸虫尾蚴和童虫表膜抗原的单克隆抗体(N15D9)免疫新西兰兔制备多克隆抗N15D9独特型抗体。结果表明,多克隆抗N15D9独特型抗体具有较高的抗体滴度,经用间接免疫荧光法和ELISA分析,该抗体显示较高的结合特异性,与具有相同靶抗原结合特异性的单克隆抗体有中度的交叉反应。当用抗N15D9独特型抗体作为诊断抗原检测日本血吸虫感染的病人血清时,其阳性检出率为39％。本研究结果初步揭示,抗N15D9独特型抗体具有一定的分子模拟作帮和诊断应用的潜能。     

马立克氏病毒单克隆抗独特型抗体间接ELISA方法的建立

目的用马立克氏病毒(Marak's Disease Virus-MDV)阳性鸡血清提纯IgG和MDV制备抗原,免疫BALB/c鼠,建立间接ELISA法检测MDV抗独特型抗体的方法.方法采集琼扩检出MDV羽囊阳性鸡血清,提纯制备IgG抗原和用MDV制备的抗原,免疫接种6～8周龄BALB/c小鼠,不同时期采集血样,用间接酶联免疫吸附试验和竞争抑制试验方法进行动态血清学观测.结果各个时段都出现MDV抗独特型抗体效价,效价可达10 000×以上.结论建立了MDV抗独特型抗体的间接ELISA方法.     

日本血吸虫单克隆独特型抗体的筛选及初步鉴定

目的 从本实验室已建立的IgG类抗日本血吸虫抗原不同表位的单抗中筛选抗独特型抗体NP30的独特型抗体（id,Ab1)。方法 应用间接DLISA经典法,NP30作为抗原包板。加IgG各亚类杂交瘤细胞培养上清孵育,用辣根过氧化物酶（HRP）标记抗鼠IgG捕捉。结果 单抗NP56与NP30呈阳性反应,NP56的Ig同型为IgG2b。免疫组织化学显示NP56与虫卵内毛蚴头腺及毛蚴膜呈阳性反应。结论 NP56是NP30的特异性id,可用于NP30模拟抗原的鉴定。     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30的建株及初步鉴定

用感染8条日本血吸虫尾蚴,时间长达一年半的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用兔抗日本血吸虫肠相关抗原和兔抗可溶性虫卵抗原免疫血清与细胞培养上清进行ELISA筛选阳性克隆,最终建立了分泌单克隆抗独特型抗体细胞株NP30。作者用一系列试验证明,NP-30是日本血吸虫肠相关抗原的内影象抗独特型抗体,有替代日本血吸虫虫源性抗原用于血清学诊断的可能性。     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30重链(CDR3)_6基因的构建表达及初步鉴定

目的设计、构建日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30重链(H链)CDR3区6倍重复表位基因(CDR3)6,并对表达产物进行初步鉴定.方法克隆NP30 H链(CDR3)6基因,导入PET-28(a)载体并在E.coli BL21中表达;表达产物经纯化后用ELISA方法测定活性.结果(CDR3)6基因被成功构建、表达,表达产物经ELISA检测证实其可与抗NP30抗体NP48及日本血吸虫病人血清反应.结论(CDR3)6部分保留了抗独特型抗体表位的亲和性和特异性.     

McAb斑点-ELISA直接法检测利什曼病犬循环抗原的应用

应用McAb斑点-ELISA直接法检测黑热病病人循环抗原已获得了较满意的结果,1990年5月我们试用McAb斑点-ELISA直接法,检测四川省汶川县113头犬的血清循环抗原,调查当地犬利什曼病的感染情况。     

抗血吸虫成虫表膜抗原单克隆抗体检测循环抗原及/或免疫复合物的实验研究

本文报告用单克隆抗体检测血吸虫感染兔血清中循环抗原及/或免疫复合物的实验结果.以血吸虫成虫盐水浸液抗原ACSE免疫BALB/c小鼠,取其脾脏与SP2/0骨髓瘤细胞融合获得抗成虫表膜的单克隆抗体8SE_4。此抗体经DE_(52)柱层析提纯后制成HRP-8SE_4结合物.血清样本与HRP-8SE_4作用后加入PEG(mw·6000)沉淀免疫复合物,然后加入底物OPD显色,于492nm读数,OD值即反映血循环中抗原及/或免疫复合物的量。实验结果表明5只重感染兔(接种尾蚴15O0～2000条)于感染后6wk可见OD值明显升高,达到感染前的1.9～4.5倍。5只轻感染兔接种尾蚴10～500条亦于感染6wk后OD值明显上升,至感染后8wk达高峰,此后至11wk剖杀时仍维持在较高水平.5轻感染兔检虫数为4～326条,未见虫荷与检测结果有明显相关。本实验结果提示感染兔血清中有循环表膜抗原及/或其复合物存在。至于检测该抗原能否用于考核治疗效果,有待进一步研究。     

抗HBs—抗独特型抗体对病人产生抗HBs的影响

乙型肝炎病毒感染时常有免疫失控,例如出现各种血清抑制因子等,但机制大多不明。由于独特型及抗独特型抗体在免疫调控网中起重要作用,作者对此采用 Irshad 法检测了70例 HBsAg(-)血清,156例 HBsAg(+)血清中抗 HBs 的抗独特型(抗 HBs-抗 Id),并加以分析报告如下:     

单克隆抗独特型抗体NP30检测78例慢血血清的效果观察

研究证明,无论是在感染血吸虫的小鼠还是人体中,都存在自然产生的抗独特型抗体(anti-id),单克隆抗独特型抗体NP 30即是用生物技术制备抗原-抗独特型抗体NP30作为探针,用双“抗原”夹心酶标法检测血吸虫病人血清中的短程抗体。近来,我们用     

应用斑点金免疫渗滤法诊断日本血吸虫病

目的：探索一种便捷的血吸虫病诊断方法。方法：在原已建立的ELISA法的基础上，应用3个针对日本血吸虫抗原的不同表位的单克隆抗体标记胶体金，建立检测日本血吸虫病患者血清中血吸虫抗原的斑点金免疫渗滤法。抗原与抗体通过渗滤在硝酸纤维薄膜上进行反应，数分钟用肉眼观察结果。结果：本法检测SEA的敏感度为16ng／ml，在69例慢性日本血吸虫病患者血清的检测中，阳性率为60．8％，特异性为95．2％；同时用dot－ELISA检测137例慢性日本血吸虫病患者，阳性率为54．7％、特异性为94．6％；夹心ELISA检测118例 慢性日本血吸虫病患者，阳性率为61．9％、特异性为95．7％。结论：经数理统计G检验证实斑点金免疫渗滤法的敏感性和特异性同ELISA 相近, 且操作更简便且快速。     

斑点—ELISA和独特型／抗独特型抑制试验...

A monoclonal antibody (designated 8SE) against membrane antigen of adult Schistosoma japonicum labeled with HRP was used in dot-ELISA (direct method) to detect schistosomal circulating membrane antigen. Sera from 48 parasitologically confirmed schistosomiasis cases were tested, 39 (81.3%) were positive. No false positive reaction was found in sera from 24 healthy controls. No cross reaction was detected in sera from clonorchiasis or paragonimiasis in 18 cases each. This results suggest that circulating membrane antigen does exist in patients with schistosomiasis and it might be used as a complementary method for diagnosis of schistosomiasis. A preliminary result of idiotype/antiidiotype interaction inhibition reaction for detecting circulating membrane antigen was also presented.     

血吸虫循环抗原检测的现场试验Ⅱ

制备血吸虫病单克隆抗体诊断试剂盒,将其用于Dot—ELISA,分别检测江苏、安徽流行区急性血吸虫病患者及四川、江西、安徽流行区慢性血吸虫病患者血清中循环抗原。结果不同流行区Dot—ELISA反应的平均“+”值、阳性率和抗原滴度的几何均数不同,循环抗原水平可以反映流行区的疫情。另将Dot—ELISA、ELISA检测四川慢性血吸虫病人治前及治后半年、1年的血清循环抗原及抗体,结果循环抗原在病人治疗后很快下降,治后1年77.8％(35/45)病人的循环抗原转为阴性。循环抗体在病人治疗后也逐渐下降,但速度甚为缓慢。治疗后1年,仅21.7％(10/46)病人转为阴性。上述结果表明,循环抗原能更直接、更真实地反映防治效果。     

金标渗滤法快速检测血吸虫循环抗原的现场应用研究

将抗重组蛋白ＳＶＬＢＰ－ＩｇＧ用于ＤＩＧＦＡ检测２２２１例血清中血吸虫循环抗原,其中急性血吸虫病人血清７０份,慢性血吸虫病人血清３０７份,循环抗原检出率分别为１００％和６８．４％。非流行区健康人血清２００份,未见阳性反应。除肺吸虫外,与其它寄生虫或非寄生虫感染病人血清无明显交叉反应。用ＤＩＧＦＡ单盲法检测２批血清,结果显示对急性血吸虫病人的敏感性均为１００％;对慢性血吸虫病人的敏感性分别为６９．４     

单克隆抗体Dot-ELISA检测血吸虫病循环抗原的研究.Ⅰ.

将血吸虫肠相关阴极抗原的单克隆抗体3D8A联结过氧化物酶后用于直接法Dot-ELISA检测急性、慢性与晚期血吸虫病人血清中循环抗原,阳性率分别为90.6、83.2及30.7％。正常人血清及非寄生虫感染病人血清均未见阳性反应。EPG>100组血清阳性率及抗原水平高于EPG<100。慢性血吸虫病人经吡喹酮治疗后一年,粪检阴性者大部分血清抗原转为阴性;粪检阳性者血清检查仍为阳性。结果表明,肠相关阴极抗原单克隆抗体3D8A能用于Dot-ELISA检测各期病人血清中循环抗原,并能反映病人感染度与药物治疗效果。     

血吸虫肝卵免疫酶试验切片载体的改进

应用PVC薄膜代替载玻片作肝卵组织切片载体,进行免疫酶染色试验(简称PVC-IEST)。与玻片法免疫酶染色试验(IEST)比较,两法同时检测78份血吸虫病患者血清,结果PVC-IEST和IEST阳性率分别为96.2％和97.4％。此外,用PVC-IEST检测粪便孵化阳性的血吸虫病患者血清164份和粪便孵化阴性而COPT阳性的血清15份,其PVC-IEST阳性率为97.2％(174/179)。检测6份并殖吸虫病患者血清及并殖吸虫病犬血清6份,均为阴性。健康人血清63份,62份阴性,仅1例假阳性。     

应用特异单克隆抗体测定猪囊尾蚴病人血清和脑脊液中的循环抗原

我们应用特异的抗猪囊尾蚴抗原的单克隆抗体(CCy1),建立了单克隆抗体抑制性ELISA方法以测定囊尾蚴病患者的循环抗原(CAg)。测定灵敏度为ng水平。83例囊尾蚴病患者血清的CAg阳性率为71.1％。其范围为0.16-128μg/ml。对41例囊尾蚴病患者,同时测定了血清和脑脊液中的CAg。单项或两项阳性的总阳性率为90.2％。114例正常人血清、107例其它寄生虫病患者(包括30例包虫病患者)的血清及10例非寄生虫病患者的脑脊液的CAg量均为零。有23例囊尾蚴病患者治疗半年到1年后,有21例抗原浓度为零。另2例分别为0.64μg/ml和1.6μg/ml。表明测定CAg不仅可以确定活动性囊尾蚴感染,而且可考核疗效。     

重组Sj26(rSj26)抗原免疫酶测定新方法诊断日本血吸虫病的研究

将日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)和重组Sj26(rSj26)抗原致敏的硝酸纤维素膜片(NCD)用于膜片免疫酶测定(D-IEA),分别检测同批日本血吸虫病人、卫氏并殖吸虫病人、华支睾吸虫病人和健康人血清104例的特异性抗体,同时用目测及光密度(OD)值测定两种方法判断反应结果。结果显示,分别采用上述两种抗原检测所获的阳性率或假阳性率间无显著性差异。此结果首次提示rSj26抗原的血清诊断效果与目前血吸虫病血清学方法常用抗原SEA相似。本文报告的免疫酶测定新方法,可同时采用两种方法判断结果,迄今尚未见到类似报道。试验结果均表明用D-IEA检测时显示高度的敏感性(92.1％—94.7％)和特异性(0.0％—2.9％),具有实用价值。     

用抗日本血吸虫虫卵单克隆抗体NP28-5B检测循环抗原的研究

本研究使用杂交瘤技术制备鼠抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)单克隆抗体NP28-5B,其同型鉴定为IgGl,针对的靶抗原分子量为140kD。将酶标记单抗NP28-5B进行Dot-ELISA直接法检测急性患者血清100份和慢性血吸虫病患者血清200份中循环抗原,阳性率分别为96％和98％,检测正常人血清200份,仅3例假阳性(1.5％)。用双盲法检测血吸虫病流行区江西矶山岛居民血清339份,其中粪检阳性血清114份,阳性率为89.47％,粪检阴性血清225份,阳性率为69.33％,研究证明NP28-5B具有高度诊断潜能。     

抗杜氏和什曼原虫单克隆抗体的应用——Ⅱ.内脏利什曼病治疗前后循环抗原的检测

以抗杜庆利什曼单克隆抗体L_(12)F_7检测黑热病病人的循环抗原。文中对1986～1989年收集并低温保存的118份血清加以检测,阳性率为88.9％;另检测经锑剂治疗后的患者血清57份,结果均为阴性。同时又以IFA检测体内抗体,阳性率为68.4％。这57例治愈者经追踪观察并未出现复发及抗锑现象。因而用单克隆抗体检测循环抗原的另一优越性,可以作为疗效考核的新方法。     

Dot－ELISA检测抗原与IHA、COPT检测抗体诊断血吸虫病的比较

本文比较了斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测循环抗原，间接血凝试验（ＩＨＡ）、环卵沉淀试验（ＣＯＰＴ）检测抗体诊断血吸虫病的效果。１２例急性血吸虫病患者血清３种方法检测均为阳性；２７７例慢性血吸虫病患者血清３种方法检测阳性率分别为７９．４２％、６４．６２％和６３．１８％。１４例华支睾吸虫病患者血清和８９例健康人血清Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测均为阴性。１０例急性血吸虫病患者，在离开流行区经吡喹酮治疗后３７周时粪检全部转阴，检测血清循环抗原４例转阴，其余６例滴度大幅度下降；ＩＨＡ检测３例转阴，其余７例几何平均倒数滴度（ＧＭＲＴ）由４７．５７降至９．３５；ＣＯＰＴ检测平均环沉率由２１．５％降至４．１２％。结果表明Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测血吸虫循环抗原具有较好的敏感性和特异性。这３种方法在血吸虫病诊断及疗效考核中均有一定价值。