GPC3基因和肝癌研究进展

磷脂酰肌醇蛋白聚糖(glypican)是由蛋白质、脂质和糖三者共价连接的复杂糖复合物,广泛存在于细胞表面,通过糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定在细胞膜表面,能和多种细胞外生长因子结合, 在机体的发育中具有重要作用,并与肿瘤发生、发展有着密切关系,其中glypican-3在原发性肝癌中过度表达并与浸润转移密切相关。     

GPC3与肝癌的研究进展

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3,GPC3)是一种细胞膜表面的硫酸乙酰肝素糖蛋白(heparan sulfate proteoglycan,HSPG),GPC3在肝癌组织中高表达,而在正常肝组织不表达,有可能是目前发现在AFP阴性肝癌中表达率最高的基因.GPC3在肝细胞性肝癌中的作用机制已成为研究热点,本文就GPC3在肝癌发生、发展中的作用机制及其在肝癌诊断和治疗中的作用作一综述.     

GPC3在人胃癌中的表达及促瘤机制初探

目的:研究GPC3基因在人胃癌中的表达,并结合wnt-β-catenin的表达研究其相关性,进一步研究GPC3的促瘤效应及其机制。方法:荧光定量PCR及免疫组织化学检测GPC3及wnt-β-catenin通路在人胃癌中的激活情况,胃癌细胞系SGC-7901体外研究GPC3体外促瘤效应。分别采用MTS及Annexin-PI共染法检测GPC3的促增殖抗凋亡效应。Western blot检测wnt-β-catenin信号通路的激活及下游基因的表达。结果:与癌旁正常胃组织相比,GPC3在人胃癌组织中高表达,且其表达与wnt-β-catenin信号通路呈正比。体外研究发现GPC3能够促进胃癌细胞的增殖,降低胃癌细胞的凋亡率,而其机制在于GPC3能够激活wnt-β-catenin通路及下游促癌基因。结论:GPC3基因在人胃癌组织中高表达,并通过激活wnt-β-catenin通路发挥癌基因生物学效应。     

GPC3、Hep-Par-1在肝细胞癌中的表达及其价值

目的探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)、Hep-Par-1在原发性肝细胞癌(HCC)诊断与鉴别诊断中的应用价值。方法应用免疫组化EliVision法,对已确诊的64例HCC、12例肝内胆管细胞癌(ICC)、11例肝转移性腺癌(MAC)、6例局灶结节性增生(FNH)、2例肝细胞腺瘤(HA)及28例癌旁肝组织进行GPC3、Hep-Par-1抗体标记,检测2种抗体在上述组织中的表达情况。结果 GPC3在HCC中表达率为91%(58/64),其中75%(48/64)为强阳性(+++),在其他组织中无表达,表达差异具有统计学意义(P<0.05)。Hep-Par-1在HCC中表达率为81%(52/64),在FNH、HA及癌旁肝组织中表达率均为100%,在MAC中表达率为9%(1/11),在其余组织中无表达,表达差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 GPC3和Hep-Par-1对HCC的诊断均具有较高的敏感性及特异性,GPC3可取代Hep-Par-1成为HCC诊断的一线抗体。     

老年丙肝相关肝癌组织中GS、GPC3蛋白和血清AFP联合检测的临床意义

目的:探讨血清AFP水平和组织中谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（glypican-3,GPC3）蛋白在老年丙肝相关肝硬化（HCV-related liver cirrhosis,HCV-Crri）和老年丙肝相关肝癌（HCV-related hepatocellular carcinoma,HCV-HCC）中的表达及其临床意义。方法:采用电化学发光分析和免疫组织化学检测40例老年丙肝相关肝硬化、32例老年丙肝相关肝癌材料和30例老年对照组血清AFP水平和组织中GS、GPC3蛋白的表达,分析评价老年丙肝相关肝癌及癌前病变中血清AFP水平和组织中GS、GPC3蛋白的表达及其与临床病理因素之间的关系。结果:老年HCV-Crri组和HCV-HCC组中血清AFP水平均高于正常对照组（P＜0．05）,而老年HCV-Crri组与HCV-HCC组之间血清AFP水平差异无统计学意义（P>0．05）。GS和GPC3蛋白在HCV-Crri组和HCV-HCC组中的阳性表达率分别为10.0%（4/40）、87.5%（28/32）和27.5%（11/40）、78.1%（25/32）,HCV-HCC组均显著高于HCV-Crri组（P＜0．05）,而两者在对照组中均为阴性表达。HCV-HCC组中11例AFP阴性病例中GS和GPC3联合检测阳性率为72.7%（8/11）,HCV-HCC组中GS蛋白的表达与GPC3蛋白的表达呈显著正相关(r=0.486,P=0.02)。HCV-HCC组中GPC3蛋白在肿瘤病理分级III-IV级和TNM分期III-IV期中的阳性表达率均显著高于I-II级和I-II期（P=0.03）,而GS蛋白的表达与肿瘤病理分级和TNM分期无关。结论:GS、GPC3蛋白在老年丙肝相关肝癌组织中的高表达,与老年丙肝相关肝癌的发生、发展和转移有关,联合检测组织中GS和GPC3蛋白的表达有助于临床提高对老年丙肝相关肝癌的诊断率和科学评价预后,尤其在血清AFP水平呈阴性的老年丙肝相关肝癌患者中。     

原发性肝癌患者外周血中肝细胞特异性白蛋白mRNA的检测及意义

目的：寻找一敏感的方法以发现循环中的肝癌细胞。方法：巢式ＲＴ－ＰＣＲ检测外周血有核细胞成分中白蛋白（ＡＬＢ）ｍＲＮＡ。结果：３０例肝癌中１７全检出ＡＬＢｍＲＮＡ,阳性率５６．６％,其中１０例证实有转移的全部阳性。５例急性肝炎中的１例和９例慢性活动性肝炎中的１例可检出ＡＬＢｍＲＮＡ。肝硬化、肝转移癌患者、良性肝肿瘤和健康对照组均为阴性。外周血细胞ＡＬＢｍＲＮＡ的存在与肝癌的远处器官转移密切相关。结论     

RUNX3基因在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中的表达及意义

[目的]探讨乳腺癌组织和细胞系中RUNX3基因mRNA与蛋白表达及在乳腺癌发生中的作用。[方法]运用RT-PCR、WesternBlot方法研究5种乳腺癌细胞系、1种正常乳腺细胞系和30对新鲜乳腺癌及癌旁对照组织中RUNX3mRNA和蛋白表达。[结果]5种乳腺癌细胞系中有3种(T47D、MCF7和SKBR3)RUNX3mRNA和蛋白表达阴性。30例新鲜的乳腺癌组织中RUNX3mRNA和蛋白表达明显低于癌旁正常对照组织,差异具有统计学意义。RUNX3蛋白表达与乳腺癌临床分期、淋巴结转移相关,而与患者的年龄、病理分级无关。[结论]RUNX3基因可能作为一个抑癌基因参与乳腺癌的发生。     

外周血GPC3在肝细胞癌临床诊断中的价值

目的 探讨血清磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3,GPC3)蛋白和外周血GPC3 mRNA及其联合检测在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）中的诊断价值。方法 采用免疫组化法检测1例肝癌组织标本中GPC3的表达情况。检索PubMed、Web of Science、Embase和Cochrane library数据库中关于GPC3诊断HCC的文献,根据纳入和排除标准筛选文献,对纳入文献进行数据提取和质量评价,采用MetaDisc 1.4软件进行Meta分析,计算合并的诊断评估指标,绘制综合受试者工作特征（summary receiver operating characteristic,SROC）曲线评估其诊断效能。结果 免疫组化结果显示肝癌组织中特异性表达GPC3。进一步纳入19篇文献（其中血清GPC3蛋白16篇,外周血GPC3 mRNA 5篇）评价外周血中GPC3分子对HCC的诊断效能,结果显示,单独血清GPC3蛋白诊断HCC的合并敏感度、特异度、SROC曲线下面积分别为0.62(95%CI:0.60～0.64)、0.67(95%CI:0.65...     

HBV感染对原发性肝癌患者血清AFP值的影响

本文报道测定１０８例ＰＨＣ者的血清ＡＦＰ值和ＨＢＶ感染标记。７１例（６８．５％）ＡＦＰ值〉２０μｇ／Ｌ，其中６５例ＡＦＰ值〉１００μｇ／Ｌ；ＨＢｓＡｇ阳性者９６例（８８．９％），ＨＢｓＡｇ阴性者１２例（１１．１％），ＨＢｓＡｇ阳性者ＡＦＰ值的中位数为５０５μｇ／Ｌ（２０～２２３４μｇ／Ｌ）显著高于ＨＢｓＡｇ阴性者的２０μｇ／Ｌ（２０～３８３μｇ／Ｌ），ＨＢｓＡｇ阳性者ＡＦＰ值升高的峰值年龄组与ＰＨ     

金属蛋白酶抑制基因RECK在肝细胞癌中的表达及生物学意义

目的探讨金属蛋白酶抑制基因RECK在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）中的表达及其临床意义。方法用实时逆转录聚合酶链反应（real-time RT-PCR）技术和免疫组化方法分别检测61例HCC、癌旁组织及18例正常肝组织中RECK mRNA和蛋白表达情况。结果 RECK mRNA在HCC中表达水平（0.0269±0.0026）低于癌旁肝组织（0.0378±0.0031,P〈0.05）。RECK蛋白在HCC组织中阳性表达率（59.0%）也显著低于癌旁肝组织（78.7%,P〈0.05）。RECK在HCC组织中的阳性检出率与肿瘤大小、是否复发、有无门脉癌栓、肿瘤有无完整包膜等临床因素显著相关（P〈0.05）,而与年龄、性别、有无肝硬化、乙肝表面抗原、AFP水平等无关。对61例患者的随访资料进行生存分析显示,RECK阳性组3年生存率83.9%,明显高于RECK阴性组52.1%（P〈0.05）。结论 RECK可能参与HCC的发生发展,有可能成为预测HCC浸润与转移的参考指标。     

靶向肝癌的GPC3-CAR-T细胞的构建与功能鉴定

目的:构建靶向GPC3阳性肝癌细胞的嵌合抗原受体修饰T细胞[chimeric antigen receptor-modified T cell,CAR-T cell],并评估其对GPC3阳性肝癌细胞的杀伤效能.方法:选择偏爱密码子技术改造基因序列,以增强CAR分子表达效率,设计靶向GPC3抗原的CAR分子基因并构建携带GPC3-CAR基因的慢病毒表达载体pCDH-GPC3-CAR,感染T细胞;采用Western blotting、流式细胞术、实时细胞监测和ELISA技术分别检测GPC3-CAR分子在CAR-T细胞的表达、慢病毒感染T细胞效率、GPC3-CAR-T细胞对GPC3阳性肝癌细胞的杀伤活性和特异性.结果:双酶切pCDH-GPC3-CAR重组慢病毒质粒可见分子质量和GPC3-CAR分子一致的基因片段,成功构建pCDH-GPC3-CAR慢病毒质粒.约54.38％的GPC3-T细胞表达GPC3-CAR分子,称为GPC3-CAR-T细胞.GPC3-CAR-T细胞对GPC3阳性的肝癌细胞Huh-7比GPC3阴性的肝癌细胞SK-HEP-1具有更高效的杀伤能力[(78.96±4.76)％ vs (6.87±3.15)％,P＜0.01].与GPC3阳性Huh-7肝癌细胞共培养的肝癌GPC3-CAR-T细胞分泌IFN-γ水平比Mock组高效[(21 371.4±1 808.3) vs (152.8±12.5) pg/ml,P＜0.01],这可能是其高效杀伤肝癌细胞的机制之一.结论:靶向肝癌的GPC3-CAR-T细胞具有高效分泌IFN-γ细胞因子并特异高效杀伤GPC3阳性肝癌细胞的能力,为进一步推进GPC3-CAR-T临床前和临床研究奠定基础.     

胸腺素β10在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者组织胸腺素β10 (Thymosin beta-10,Tβ10) mRNA的表达及其临床意义.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测70例HCC患者癌组织、癌旁肝组织及18例正常肝组织中Tβ10 mRNA的表达情况,分析Tβ10 mRNA表达水平与肝癌患者的临床分期、有无术后复发、有无肝外转移、有无门静脉癌栓、肿瘤个数、肿瘤直径、血清AFP水平和病理分级等指标的关系.结果 Tβ10 mRNA在正常肝组织(1.30±0.53)及癌旁肝组织(1.21±0.50)中的表达水平明显高于在HCC组织(1.01±0.41)中的表达水平(P＜0.05),而在正常肝组织及癌旁肝组织中的表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).Tβ10 mRNA在人HCC组织中的表达与门静脉癌栓、肿瘤个数及肿瘤直径明显相关(P＜0.05),而与临床分期、肝外转移及术后复发、血清AFP 水平及分化程度无明显关系(P＞0.05).结论 Tβ10 mRNA在HCC组织中低表达,可能与HCC的发生、发展的早期阶段有关.     

肝癌组织CD24基因表达及其临床意义

目的:探讨CD24基因在原发性肝细胞癌(HCC)组织中表达的特征及其临床病理意义.方法: 应用RT-PCR及免疫组化方法检测CD24基因在42例肝癌组织、相应42例癌旁组织中的表达,分析其与临床病理特征的相关性.结果: RT-PCR显示,CD24 mRNA阳性表达与肝细胞癌组织分化程度(P=0.019)及有否肝内转移有关(P=0.031),与肝细胞癌患者性别、HBsAg状态、术前AFP水平、肿瘤是否有包膜、肿瘤大小、癌肿数目无关(P>0.05);Elivision法显示,CD24蛋白阳性表达与肿瘤的组织分化程度(P=0.025)、有无肝内转移密切相关(P=0.008), 而与患者性别、HBsAg状态、术前AFP水平、肿瘤是否有包膜、肿瘤大小、癌肿数目无关(P>0.05).HCC组织中CD24表达较癌旁组织明显升高.结论: HCC组织中CD24基因表达能促进HCC的发生、发展和转移,可作为判断HCC恶性程度、评价预后的指标.     

PFKFB3在肝癌中的表达及其临床意义

目的 探讨6-磷酸果糖激酶-2／果糖双磷酸酶-2同工酶3（PFKFB3）在肝细胞癌（HCC）组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法 采用逆转录 聚合酶链反应（RT-PCR）检测PFKFB3在42例HCC组织及其对应癌旁组织中的表达情况,并研究其与临床病理参数（性别、年龄、肿瘤直径、淋巴转移、静脉癌栓、治疗前甲胎蛋白、分化程度及肝内转移）间的关系,采用Kaplan-Meier法分析PFKFB3 mRNA表达对HCC患者生存的影响。结果 HCC和癌旁组织中PFKFB3 mRNA的阳性表达率分别为73.81％（31／42）和52.38％（22／42）,相对表达量为1.075±0.171和0.877±0.451,HCC组织中PFKFB3 mRNA的阳性表达率及相对表达量均高于癌旁组织（P＜0.05）;PFKFB3 mRNA的表达与肿瘤TNM分期、分化程度、肝内转移及总生存期有关（P＜0.05）。结论 PFKFB3在HCC的发生发展中发挥作用,且影响肝癌的分化、转移并提示肝癌患者预后不佳;可作为评估HCC恶性程度的生物学指标。     

肝细胞肝癌组织14-3-3zeta表达及其临床意义探讨

目的:探讨肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中14-3-3zeta蛋白的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学染色法检测134例HCC组织中14-3-3zeta表达,并分析14-3-3zeta的表达与临床相关特征的关系。结果:14-3-3zeta在HCC组织表达升高,癌组织中14-3-3zeta蛋白表达阳性率为56.72%(76/134),显著高于癌旁组织18.03%(22/122),差异有统计学意义,P<0.01。14-3-3zeta在炎性细胞浸润的癌组织中表达阳性率为73.53%(25/34),显著高于无炎性细胞浸润癌组织50.52%(49/97),差异有统计学意义,P=0.020。14-3-3zeta表达水平与TNM分期、分化程度以及肿瘤大小无相关性。结论:HCC癌组织中14-3-3zeta蛋白表达显著高于癌旁组织,同炎性细胞的浸润相关,提示14-3-3zeta可能在HCC免疫应答中起到一定的作用。     

uPA和uPAR mRNA高表达与肝细胞癌的关系

目的检测uPA、uPAR在肝癌组织中的表达并探讨其临床意义。方法用RT-PCR法对肝癌、癌旁、正常组织各27例进行uPA、uPAR检测,并结合临床病理资料进行分析。结果uPA、uPAR在肝癌组织中阳性率分别为70.4%(19/27)和77.8%(21/27);相对表达强度分别为0.964±0.458和0.784±0.322,均较癌旁组织及正常组织高,差异有显著性。阳性患者相对表达强度与肿瘤大小及部分侵袭转移指标中表达呈显著相关。结论uPA、uPAR在肝癌组织及部分侵袭转移指标中表达升高,提示二者可能参与了肝细胞癌的发生及侵袭转移。