磷脂酰肌醇蛋白聚糖3在肝细胞肝癌中的表达及意义

目的:探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)在肝细胞肝癌中的表达及临床意义.方法:利用免疫组织化学方法检测60例肝细胞肝癌及癌旁组织中GPC3及AFP的表达,评价GPC3在肝细胞肝癌诊断中的意义,并分析其乌肿瘤临床病理特征的关系.结果:GPC3在肝细胞肝癌组织中高表达[75%(45/60)],明显高于AFP表达[35%(21/60)](P<0.005);而在距肿瘤不同距离的癌旁组织中未见表达.CPC3主要表达在肝癌细胞的细胞浆和细胞膜.根据阳性细胞比例及染色强弱,其表达模式可分为弥漫强阳性表达(27例)、弥漫弱阳性表达(8例)、局灶强阳性表达(2例)和局灶弱阳性表达(8例).统计学分析表明GPC3在肝细胞肝癌组织中的表达与患者性别、年龄、血清AFP值、HBsAg定性、是否合并肝硬化及肿瘤大小、生长方式、分级、分期等临床病理特征无关.结论:GPC3更特异地广泛存在于肝细胞肝癌组织中,对比AFP的免疫组化结果,GPC3对肝细胞肝癌有更显著的敏感性及特异性,可能成为新的肝癌病理诊断标志物.     

MAGE-1 MAGE-3及AFP基因在肝癌组织中的表达

目的：探讨MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA在肝癌组织中的表达及用于检测微小转移的可能性。方法：应用聚合酶链反应（PCR）检测86例原发性肝癌患者肝癌组织中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的表达。结果：86例原发性肝癌患者肝癌组织中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的阳性率分别为34.9%（30/86）、60.5%（52/86）和69.8%（60/86）;所有患者肝癌组织至少表达其中一种mRNA。结论：MAGE-1、MAGE-3结合AFP mRNA在肝癌组织中表达率较高,有可能用于联合检测肝癌血行微小转移。     

组织hTERT基因及GGTmRNA-H亚型与血清AFP对小肝癌早期诊断意义的比较

目的 :研究小肝癌组织中端粒酶逆转录酶hTERT基因及谷氨酰转移酶GGTmRNA H亚型表达 ,通过与小肝癌血清AFP的比较 ,探讨其在小肝癌早期诊断中的意义。方法 :应用RT PCR法检测 65例原发性肝癌患者癌组织hTERT与GGTmRNA H亚型的表达 ,同时通过放免法检测血清AFP阳性表达情况。结果 :在 65例原发性肝癌中 ,癌组织hTERT基因的阳性例数 5 6例 ( 86 2 % ) ,GGTmRNA H亚型的阳性例数为 61例 ( 93 8% ) ,肝组织血清AFP阳性 40例 ( 61 5 % ) ,P <0 0 5 ;hTERT基因在2 0例小肝癌癌组织阳性表达例数为 16例 ,阳性率为 80 0 % ;GGTmRNA H亚型阳性表达例数为 18例 ,阳性率为 90 0 % ;与血清AFP组比较 ,差异有统计学意义 ,P <0 0 5。结论 :肝癌组织中hTERT基因、GGTmRNA H亚型联合检测可弥补AFP测定的不足 ,对提高肝癌早期诊断具有重要意义。hTERT基因及GGTmRNA H亚型的检测比AFP更敏感、特异性更高 ,有望成为小肝癌早期诊断的理想指标     

血清Glypican-3检测在肝癌诊断中的临床意义

目的:探讨血清中Glypican-3(GPC3)检测在肝癌诊断中的临床意义。方法:采用鼠抗GPC3(25-358aa)单克隆抗体和兔抗GPC3(379-393aa)多克隆抗体建立双抗夹心ELISA法,对364例原发性肝细胞肝癌、96例慢性乙型肝炎及106例正常人血清中GPC3进行定量。同时采用放射免疫法检测AFP。结果:原发性肝细胞肝癌患者血清GPC3平均浓度为86.96±422ng/mL;慢性乙型肝炎患者血清GPC3平均浓度为11.7±12.23 ng/mL;正常人血清GPC3平均浓度为6.04±9.21 ng/mL。原发性肝细胞肝癌患者血清GPC3含量与慢性乙型肝炎组和正常组比较差异显著(P<0.001),慢性乙型肝炎组和正常组间差异无统计学意义(P>0.05)。当以30 ng/mL为诊断界值时,GPC3诊断肝癌的敏感性和特异性分别为40%和93%。在151例同时检测AFP和GPC3的HCC血清中,AFP阳性率为49%,GPC3阳性率为40%。AFP联合GPC3检测时,能将HCC的检出率提高至72%。结论:血清GPC3可作为一新的肿瘤标志物用于原发性肝细胞肝癌的临床诊断。     

Glypican-3基因在甲胎蛋白阴性肝癌中的表达(英文)

目的通过检测 Glypican-3基因在甲胎蛋白阴性肝癌中的表达,探讨了 Glypican-3在肝癌,特别是甲胎蛋白阴性肝癌诊断中的作用。方法对41例甲胎蛋白阴性肝癌的癌组织及其相应的癌旁组织的总 RNA 进行 Northern 杂交分析。制备特异性多克隆抗体,应用免疫组化技术检测 Glypican-3在其中25例肝癌中的表达,并分析与临床病理指标之间的关系。结果 41例 AFP 阴性肝癌中有30例为 Glypican-3 mRNA 阳性,表达率为73.17%。但癌旁组织中只有4例弱表达。Glypican-3mRNA 的表达与肿瘤大小明显相关,在大肝癌(>5cm)中的表达率为79.31%,在小肝癌(≤5cm)中的表达率为41.67%,两者相差非常显著(p<0.01)。Glypican-3 mRNA 的表达还与肿瘤分化程度相关,在低分化肝癌(Ⅲ-Ⅳ级)中的表达率为76.47%,在高分化肝癌(Ⅰ-Ⅱ级)中的表达率为42.86%,两者相差显著(P<0.05)。Glypican-3 mRNA 的表达与年龄、性别、乙肝感染状况、包膜、门脉癌栓及肝内转移情况均无关。Glypican-3蛋白定位于肿瘤细胞中。阳性细胞表现为棕黄色颗粒均匀分布在细胞膜上和胞浆中。正常肝细胞、胆管细胞、血管内皮细胞、Ito 细胞及成纤维细胞均呈阴性。结论 Glypican-3基因在甲胎蛋白阴性肝癌中特异性高表达,且和肿瘤大小、分级明显相关。Glypican-3在原发性肝癌的发生发展中有重要作用。Glypican-3基因可成为原发性肝癌特别是甲胎蛋白阴性肝癌的一个新的基因标志。     

Glypican-3基因在甲胎蛋白阴性肝癌中的表达

目的通过检测Glypican-3基因在甲胎蛋白阴性肝癌中的表达,探讨了Glypiean-3在肝癌,特别是甲胎蛋白阴性肝癌诊断中的作用。方法对41例甲胎蛋白阴性肝癌的癌组织及其相应的癌旁组织的总RNA进行Nonthern杂交分析。制备特异性多克隆抗体,应用免疫组化技术检测Glypican-3在其中25例肝癌中的表达,并分析与临床病理指标之间的关系。结果41例AFP阴性肝癌中有30例为Glypican-3mRNA阳性,表达率为73.17%。但癌旁组织中只有4例弱表达。Glypican-3mRNA的表达与肿瘤大小明显相关,在大肝癌(>5cm)中的表达率为79.31%,在小肝癌(≤5cm)中的表达率为41.67%,两者相差非常显著(P<0.01)。Glypiean-3mRNA的表达还与肿瘤分化程度相关,在低分化肝癌(Ⅲ-Ⅳ级)中的表达率为76.47%,在高分化肝癌(Ⅰ—Ⅱ级)中的表达率为42.86%,两者相差显著(P<0.05)。Glypican-3mRNA的表达与年龄、性别、乙肝感染状况、包膜、门脉癌栓及肝内转移情况均无关。Glypican-3蛋白定位于肿瘤细胞中。阳性细胞表现为棕黄色颗粒均匀分布在细胞膜上和胞浆中。正常肝细胞、胆管细胞、血管内皮细胞、Ito细胞及成纤维细胞均呈阴性。结论Glypican-3基因在甲胎蛋白阴性肝癌中特异性高表达,且和肿瘤大小、分级明显相关。Glyrpican-3在原发性肝癌的发生发展中有重要作用。Glypican-3基因可成为原发性肝癌特别是甲胎蛋白阴性肝癌的一个新的基因标志。     

DKK-1、DKK-2和GPC3蛋白在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨DKK-1、DKK-2和人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican3,GPC3)蛋白在肝细胞癌组织中的表达及临床意义.方法:采用组织芯片联合免疫组织化学法检测DKK-1、DKK-2和GPC3蛋白在10例正常肝、12例肝硬化、57例肝细胞癌及癌旁肝组织中的表达差异,并分析其临床意义.结果: 免疫组织化学检测结果发现,DKK-1和DKK-2在肝细胞癌组织中阳性染色率分别为59.65%(34/57)和57.89%(33/57);GPC3只在肝细胞癌组织中表达,其阳性染色率为47.37%(27/57),而在正常肝、肝硬化及癌旁肝组织中均呈阴性表达.DKK-1与DKK-2阳性表达之间存在密切相关性(χ2=0.570, P=0.000),DKK-2与GPC3阳性染色之间也存在相关性(χ2=0.272, P=0.041).统计分析DKK-1、DKK-2及GPC3在肝细胞癌组织中阳性染色与肝癌患者性别、年龄、血清甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)水平、乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen, HBsAg)、肿瘤大小、病理学分级、静脉浸润以及是否伴随肝硬化等的相关性,结果表明血清AFP水平与GPC3表达呈正相关(P=0.007),HBsAg与DKK-1表达呈正相关(P=0.037),DKK-1阳性染色与肝细胞癌组织分级存在相关性(P=0.014),与其他参数则无相关性.结论:GPC3在肝细胞癌组织的阳性染色率为47.37%,GPC3染色阴性的肝细胞癌组织中DKK-1和DKK-2双阳性染色率为40.00%,而GPC3(+)联合DKK-1(+)/DKK-2(+)/GPC3(-)可将肝细胞癌的免疫组织化学检出率提高至68.42 %(39/57),降低肝癌免疫组织化学检测中的假阴性率.     

生长抑素受体亚型SSTR-2和SSTR-3mRNA在原发性肝癌中的表达

目的：了解原发性肝癌组织中生长抑素受体（somatostatin receptor,SSTR）亚型SSTR-2和SSTR-3基因的表达情况。方法：采用逆转录-PCR法检测27例原发性肝癌患者组织和癌旁组织中生长抑素受体亚型SSTR-2和SSTR-3 mRNA的表达。结果：27例原发性肝癌患者的癌组织和癌旁组织SSTR-2 mRNA的表达阳性率分别为81.5%(22/27)和96.3%(26/27);SSTR-3 mRNA在肝癌组织中表达的阳性率为66.7%(18/27),在癌旁组织中的阳性率为51.9%(14/27)。结论：大多数原发性肝癌肿瘤组织中有一种以上生长抑素受体亚型基因的表达。     

肝癌及癌旁组织中p53基因及AFP、CEA等表达异常及相关性研究

目的 :从分子生物学及病理学角度对肝癌中抑癌基因p5 3和肿瘤标志物甲胎蛋白 (AFP)、癌胚抗原 (CEA)的表达及相关性进行研究。方法 :收集 4 0例肝细胞癌 (HCC)患者癌组织连带部分癌旁组织 ,用免疫组织化学法检测p5 3基因、AFP、CEA等。结果 :p5 3基因癌内表达率为 80 % ,癌旁组织为5 0 % ;AFP癌内表达率为 87 5 % ,癌旁组织为 80 % ;CEA癌内表达率为 5 5 % ,癌旁组织表达不明显。结论 :检测p5 3基因表达 ,并与AFP、CEA一起 ,对诊断肝癌、估计预后及制定术后治疗方案等有重要作用     

老年丙肝相关肝癌组织中GS、GPC3蛋白和血清AFP联合检测的临床意义

目的:探讨血清AFP水平和组织中谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（glypican-3，GPC3）蛋白在老年丙肝相关肝硬化（HCV-related liver cirrhosis，HCV-Crri）和老年丙肝相关肝癌（HCV-related hepatocellular carcinoma，HCV-HCC）中的表达及其临床意义。方法:采用电化学发光分析和免疫组织化学检测40例老年丙肝相关肝硬化、32例老年丙肝相关肝癌材料和30例老年对照组血清AFP水平和组织中GS、GPC3蛋白的表达，分析评价老年丙肝相关肝癌及癌前病变中血清AFP水平和组织中GS、GPC3蛋白的表达及其与临床病理因素之间的关系。结果:老年HCV-Crri组和HCV-HCC组中血清AFP水平均高于正常对照组（P＜0．05）,而老年HCV-Crri组与HCV-HCC组之间血清AFP水平差异无统计学意义（P>0．05）。GS和GPC3蛋白在HCV-Crri组和HCV-HCC组中的阳性表达率分别为10.0%（4/40）、87.5%（28/32）和27.5%（11/40）、78.1%（25/32），HCV-HCC组均显著高于HCV-Crri组（P＜0．05），而两者在对照组中均为阴性表达。HCV-HCC组中11例AFP阴性病例中GS和GPC3联合检测阳性率为72.7%（8/11），HCV-HCC组中GS蛋白的表达与GPC3蛋白的表达呈显著正相关(r=0.486，P=0.02)。HCV-HCC组中GPC3蛋白在肿瘤病理分级III-IV级和TNM分期III-IV期中的阳性表达率均显著高于I-II级和I-II期（P=0.03），而GS蛋白的表达与肿瘤病理分级和TNM分期无关。结论:GS、GPC3蛋白在老年丙肝相关肝癌组织中的高表达，与老年丙肝相关肝癌的发生、发展和转移有关，联合检测组织中GS和GPC3蛋白的表达有助于临床提高对老年丙肝相关肝癌的诊断率和科学评价预后，尤其在血清AFP水平呈阴性的老年丙肝相关肝癌患者中。     

肿瘤-睾丸抗原SSX1和SSX4的mRNA在肝细胞肝癌中的表达

目的检测肿瘤-睾丸抗原(Cancer-Testis antigens,CT)SSX1和 SSX4基因 mRNA 在肝细胞肝癌(HCC)中的表达,探讨 CT 抗原 SSX1和 SSX4 mRNA 在 HCC 中表达有无特异性。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法对35例 HCC 患者癌组织和相应的癌旁组织 SSX1和 SSX4基因表达进行检测,对其中6例 RT-PCR 扩增产物的目的片段进行 DNA 序列测定。结果 35例 HCC 患者中,SSX1和 SSX4的表达率分别为81%(27/35)和73%(23/35);癌旁组织、12例肝硬化和15例正常组织未检测到 SSX1和 SSX4的表达。6例 DNA 序列测定结果显示 RT-PCR 产物为 SSX1和 SSX4基因的 cDNA。SSX1和 SSX4的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、血清甲胎蛋白(AFP)水平、乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染无显著相关性(P>0.05)。结论 SSX1和 SSX4在 HCC 中呈高特异性表达,是制备 HCC 疫苗理想的靶向分子,多种 CT 抗原联合表达为多效价疫苗治疗 HCC提供了理论基础。     

肿瘤-睾丸抗原SSX1和SSX4的mRNA在肝细胞肝癌中的表达

目的 检测肿瘤-睾丸抗原(Cancer-Testis antigens，CT)SSX1和SSX4基因mRNA在肝细胞肝癌(HCC)中的表达，探讨CT抗原SSX1 和SSX4 mRNA在HCC中表达有无特异性。 方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法对35例HCC患者癌组织和相应的癌旁组织SSX1和SSX4基因表达进行检测，对 其中6例RT-PCR扩增产物的目的片段进行DNA序列测定。 结果 35例HCC患者中，SSX1和SSX4的表达率分别为81％(27／35)和73％(23／35)；癌旁组织、12例肝硬化和15例正常组织未 检测到SSX1和SSX4的表达。6例DNA序列测定结果显示RT-PCR产物为SSX1和SSX4基因的cDNA。SSX1和SSX4的表达与患 者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、血清甲胎蛋白(AFP)水平、乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染无显著相关性(P >0．05)。 结论 SSX1和SSX4在HCC中呈高特异性表达，是制备HCC疫苗理想的靶向分子，多种CT抗原联合表达为多效价疫苗治疗HCC 提供了理论基础。     

CpG island methylator phenotype association with elevated serum alpha-fetoprotein level in hepatocellular carcinoma.

PURPOSE: CpG island methylator phenotype (CIMP) involves hypermethylation targeted toward the promoters of multiple genes. To gain insight into the role of epigenetic aberration of tumor-related genes in hepatocarcinogenesis, we determined a hypermethylation profile in hepatocellular carcinoma (HCC). EXPERIMENTAL DESIGN: We examined the promoter methylation status of nine genes in 50 HCCs, 50 paired nontumor tissues, and 6 normal liver tissues by methylation-specific PCR. CIMP+ was defined as having five genes that are concordantly methylated. RESULTS: The frequency of promoter methylation of nine genes in 50 HCCs varied from 10% in P53 to 94% in c-Myc. The methylation status of P14, P15, P16, ER, RASSF1A, WT1, and c-Myc was significantly correlated with HCC and nontumor tissues (P<0.05). Hypermethylation of one or more genes was found in 96% of HCC. CIMP was more frequent in HCC than in nontumor tissues (70% and 12%, P<0.001). There is a significant association between CIMP and methylation of P14, P15, P16, ER, RSAAF1A, and WT1 (P<0.05) and serum alpha-fetoprotein (AFP) level (P=0.017). CIMP+ was more frequent in HCC with AFP>or=30 microg/L than those with AFP<30 microg/L (P=0.005). In addition, the promoter hypermethylation of P15 and P16 was associated with elevated serum AFP levels in 35 HCC samples with CIMP+ (P<0.05). CONCLUSIONS: Positive correlation of CIMP and AFP levels in HCC suggests that CIMP can serve as a molecular marker of late-stage HCC development.     

EFNA1 ligand and its receptor EphA2: potential biomarkers for hepatocellular carcinoma

Novel biomarkers are needed for early detection and progression evaluation of hepatocellular carcinoma (HCC). The purpose of this study was to identify useful biomolecular markers for HCC. The 26 genes that encode membrane or secretory proteins were identified from cDNA microarray data. We further examined the expression of EFNA1 and its receptor EphA2 and determined their biological implications during the development and progression of HCC. The EFNA1 mRNA was overexpressed in most HCCs as compared with its expression in corresponding nontumor tissues (36 out of 40 cases, 90%), but EphA2 expression was noted in only half of the HCC tissues (20 of 40 cases, 50%). In most of the hepatoma cell lines, the EFNA1 protein expression was positively associated with alpha‐fetoprotien (AFP) expression but inversely associated with EphA2 expression. Furthermore, EFNA1 levels were detectable in the supernatant of the cultured hepatoma cells and in the serum of patients with HCC. In contrast, EphA2 expression was prominent in highly invasive hepatoma cells, and its overexpression was significantly correlated with decreased differentiation (r = 0.0248, p < 0.010) and poor survival (p = 0.0453) for HCC patients. EFNA1 and EphA2 may be useful serum markers for the detection of HCC development and progression, respectively.     

血清磷脂酰肌醇蛋白聚糖3在肝细胞癌中的表达及其与临床病理因素的相关性

目的 初步探讨肝细胞癌（HCC）患者血清和组织中磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）在HCC诊断中的临床应用价值.方法 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法和免疫组织化学染色法检测79例HCC患者血清和组织中GPC3表达水平,并与35例肝炎后肝硬化患者和30例健康体检者GPC3含量检测结果进行比较,采用Logistic回归模型对HCC患者GPC3表达水平与影响因素进行分析.结果 HCC组患者血清GPC3水平[（143.02±40.26） μg/L]明显高于肝硬化患者组[（6.15±4.31） μg/L]和健康对照组[（4.47±3.22）μg/L],三组间比较差异均有统计学意义（均P＜0.01）;GPC3阳性表达水平在HCC组织高于癌旁和远癌肝组织;GPC3蛋白表达与患者年龄、性别、肿瘤大小及甲胎蛋白（AFP）水平无明显相关性;与临床分期（x2 =4.250,P＜0.05）及肿瘤有无远处转移（x2=13.182,P＜ 0.001）关系密切.结论 GPC3检测对于HCC的诊断具有较好的特异性,联合血清AFP更有利于提高HCC诊断的敏感性,可作为HCC患者诊断及预后评估的标志物.     

血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶-9在原发性肝癌中的表达及其临床意义

目的：研究血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）与基质金属蛋白酶－９（ＭＭＰ－９）在原发性肝癌中的表达与肝癌复发、转移的关系。方法：采用逆转录－聚合酶链式反应技术,对３９例原发性肝癌的手术切除标本（包括癌组织及癌旁肝组织）中的ＶＥＧＦ及ＭＭＰ－９基因表达进行了检测。结果：ＶＥＧＦ分别在９２％（３６／３９）的肝癌组织７９％（２６／３３）的肝硬变组织和５７．１％（４／７）的下沉肝组织中表达,ＭＭＰ－９分别基因表     

肝组织和外周血中AFPmRNA定量分析及临床应用的研究

目的 :通过检测AFPmRNA在肝细胞癌 (hepatocellularcarcinoma ,HCC)患者肝组织和外周血中的基因表达 ,探讨AFPmRNA相对定量值作为HCC微转移指标的可能性 ,建立HCCAFPmRNA相对定量分析法。方法 :建立敏感的巢式逆转录聚合酶链反应体系 (Nested RT PCR) ,对肝组织和外周血中的AFPmRNA进行相对定量值分析。结果 :在 49例HCC及其癌旁和远癌组织、12例非肝肿瘤组织和 8例正常肝组织中AFPmRNA相对定量值阳性分别为 3 5例 ( 71 4% )、2 0例 ( 4 0 8% )、3例 ( 6 1% )、0例、0例 ;3 5例肝癌患者中有2 3例术前外周血AFPmRNA相对定量值为阳性 ( 65 7% ) ,明显高于肝硬化、急性肝炎、慢性肝炎患者和正常人外周血 ;HCC患者外周血术后 72hAFPmRNA相对定量值的阳性率 2 2 9% ( 8/3 5 ) ,与术前比较差异有统计学意义 ,P <0 0 1。结论 :肝组织和外周血中AFPmRNA相对定量分析可提高HCC阳性诊断率 ,并可作为HCC微转移的早期检测指标。治疗前后的变化对指导临床治疗及评价HCC治疗效果有重要参考价值