人结肠癌裸小鼠肝转移模型的建立

人结肠癌（ｈｕｍａｎｃｏｌｏｎｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＨＣＣ）发生肝转移极为常见。我们用ＨＣＣ细胞（ＬＳ１７４Ｔ细胞系）悬液，建立了ＢＡＬＢ／Ｃ裸小鼠ＨＣＣ肝转移模型。现报道如下。一、材料与方法１．实验动物４～６周龄的ＢＡＬＢ／Ｃｎｕ／ｎｕ裸小鼠８只（...     

理想小鼠结直肠癌肝转移模型的建立及研究进展

结直肠癌是世界上第三大常见的恶性肿瘤,尽管对结直肠癌的发病机制、病理、预防和治疗方面的认识有了许多进展,但患者仍有较高的病死率,其病死率与肝脏转移密切相关,因此研究结直肠癌肝转移的机制和控制疾病进展是改善这些患者生存期的重要措施。近年来小鼠结直肠癌肝转移模型已广泛应用于转移研究,笔者就目前应用于结直肠癌肝转移的小鼠模型及其特点进行综述并分析它们的优缺点。以期为研究者在选择小鼠结直肠癌肝转移模型时提供参考,并为开发更为理想的小鼠结直肠癌肝转移模型指明方向,并为结直肠癌肝转移机制研究提供线索。     

人结肠癌SW480细胞BALB/c小鼠建立肝转移模型的实验研究

肝脏是结肠癌最常见的转移部位,15%-25%的结肠癌患者确诊时已发现肝转移[1],肝转移成为结肠癌患者死亡的最主要因素[2]。本法采用脾脏种植法构建人结肠癌SW480细胞BALB/c小鼠肝转移模型,旨在为研究结肠癌肝转移机制和抗转移治疗     

不同途径裸鼠大肠癌肝转移模型的比较

目的建立并比较四种不同途径的裸鼠大肠癌肝转移模型,从而根据不同需要选择较为理想的裸鼠模型。方法 BALB/c(nu/nu)裸鼠共80只随机分为4组(每组20只),分别经脾脏背膜下、肝脏背膜下、盲肠浆膜下、门静脉注射5×10~6个HCT116细胞建立大肠癌肝转移模型,观察并记录各组小鼠生存状态,小鼠死亡后进行剖腹探查观察腹腔内肿瘤生长、肝脏转移情况,对肿瘤组织进行常规病理组织学观察。结果脾脏被膜下注射组、肝被膜下注射组、盲肠浆膜下注射组注射位置均成功成瘤;肝转移率:脾被膜下注射组为94.7%,盲肠浆膜下注射组为44.4%,门静脉注射组为66.7%;各模型的原发肿瘤及转移瘤均为典型的低分化腺癌。肝被膜下注射组肿瘤进展迅速,门静脉注射组围手术期死亡率高,盲肠浆膜下注射组生存时间较长。结论四种模型具有各自的优势和缺点,应根据实验需要来选择恰当的动物模型。     

人原发性胃恶性淋巴瘤裸鼠原位移植高转移模型的建立

目的 建立人原发性胃恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植高转移模型.方法 采用人原发性胃恶性淋巴瘤术中新鲜瘤组织块植入裸小鼠胃壁黏膜下层,观察原位移植的成瘤率和移植瘤的侵袭、转移,并进行形态学（光镜、电镜、免疫组织化学）、染色体核型和流式细胞分析.结果在裸小鼠体内建成了一株人原发性胃恶性淋巴瘤原位移植高转移模型（HGBL-0305）.移植瘤的组织病理学为原发性胃弥漫性大B细胞淋巴瘤.免疫组织化学显示,CD19、CD20、CD22、CD79α阳性,CD3、CD7阴性.染色体众数范围56～69条;移植瘤细胞DNA指数为1.47±0.12,均为异倍体.目前该瘤株在裸鼠体内生长4年,已经传至45代,共移植裸鼠156只;肿瘤移植生长率和液氮冻存复苏成活率均为100%.人胃恶性淋巴瘤在裸鼠胃内自主侵袭性生长,浸润破坏胃壁各层组织结构.HGBL-0305模型的肝转移率为69.5%,脾转移率为55.6%,淋巴结转移率为45.7%,腹腔种植转移率为30.5%.结论 HGBL-0305模型是成功的人原发性胃恶性淋巴瘤裸鼠原位移植自发性高转移模型,完整地模拟了人原发性胃恶性淋巴瘤患者的自然临床病理过程,为研究原发性胃恶性淋巴瘤发病机制、转移生物学和抗转移治疗提供了理想的动物模型.     

保持人肝癌生物学特性的人肝癌组织裸鼠肝内种植模型的建立

目的建立保持人肝癌特性的裸鼠肝内种植模型。方法用新鲜的人肝癌组织种植于裸鼠肝脏 ;B型超声观察种植瘤的体积变化 ;解剖及显微镜下观察种植瘤的转移情况及组织细胞病理特征 ;免疫组化和RT PCR法测定其MDR1和LRP ;SPECT检测荷瘤鼠骨转移情况。结果第 1代种植 8只裸鼠 ,2w后种植瘤 10 0 %存活 ,并分泌AFP ;8～ 10w内有肝内转移的占 75 0 % ,骨转移占37 5 % ,10w末处死模型鼠 ,有肺转移的占 37 5 % ;种植瘤的病理特征与瘤源患者肝癌一致 ;种植瘤与原肿瘤源组织MDR1、LRP蛋白及其mRNA表达差异均无显著性 (P >0 0 5 )。第 2和第 3代模型鼠各 8只 ,种植后 2w 10 0 %存活 ;10～ 14w裸鼠出现衰竭症状后其肝内、肺和骨均有转移。结论该模型保持了人肝癌生物学特性 ,可用于体内研究人肝癌的模型。     

结直肠癌肝转移的外科治疗

目的探讨结直肠癌肝转移的手术疗效。方法1996年8月～2000年8月手术治疗结直肠癌肝转移患者31例,行原发癌与转移癌同时切除者9例,结直肠癌根治术后6月再切除肝转移灶者18例;切除肝转移灶后2月再切除原发病灶者4例。原发灶行右半结肠切除5例,横结肠切除4例,左半结肠切除7例,Dixon术12例,Miles术3例。肝转移灶行左外叶切除5例,左半肝切除2例,右后叶切除4例,右前叶切除2例,左或右肝不规则切除18例。结果全组无手术死亡。术后粘连性肠梗阻1例,切口感染3例,经对症治疗后均痊愈出院。平均随访6.4(0.5～8)年,1、2、5年生存率分别为100%、80.6%、29.0%。同期手术者与分期手术者5年生存率分别为33.3%和27.3%,无统计学差异(P>0.05)。结论对结直肠癌肝转移患者应积极争取手术切除,术后可配合其他综合治疗;对原发灶早期诊断、早期手术治疗及辅助化疗有利于防止结直肠癌肝转移。     

人原发性胃恶性淋巴瘤裸鼠原位移植高转移模型的建立

Objective To construct a mouse model of highly metastatic gastric lymphoma with orthotopic transplantation of human primary gastric lymphoma specimen. Methods A fresh surgical specimen of primary gastric lymphoma was obtained intraoperatively and implanted into the submucosa of stomach in nude mice. Tumor formation, invasion, metastasis, morphological characteristics under light microscopy and electron microscopy, immunohistochemistry,and the karyotype of orthotopically transplanted tumor cells were studied. Results An orthotopic highly metastatic model of human primary gastric lymphoma in nude mice (HGBL-0305) was successfully established. Histopathology of transplanted tumors showed primary gastric diffuse large B cell lymphoma. CD19, CD20, CD22 and CD79α were positive, while CD3 and CD7 were negative. The number of chromosome ranged from 56 to 69. DNA index(DI) was 1.47±0.12(i.e. heteroploid). Until now, HGBL-0305 model has been maintained for 45 generations by orthotopic passage for almost 4 years in nude mice. A total of 156 nude mice were used for transplantation. The growth rate and resuscitation rate of liquid nitrogen cryopreservation of transplanted tumor cells were both 100%. The autonomic growth of the transplanted tumor cells invaded and destructed all the layers of the nude mice stomach. The metastasis rates of liver, spleen, lymph node, and peritoneal seeding were 69.5%, 55.6%, 45.7%, and 30.5%, respectively. Conclusions An orthotopic highly metastatic model of human primary gastric lymphoma in nude mice is successfully established. HGBL-0305 model may simulate the natural course of primary gastric lymphoma in human and provides an ideal animal model for studies on pathogenesis, metastasis biology and anti-metastatic therapies of primary gastric lymphoma.     

人原发性胃恶性淋巴瘤裸鼠原位移植高转移模型的建立

Objective To construct a mouse model of highly metastatic gastric lymphoma with orthotopic transplantation of human primary gastric lymphoma specimen. Methods A fresh surgical specimen of primary gastric lymphoma was obtained intraoperatively and implanted into the submucosa of stomach in nude mice. Tumor formation, invasion, metastasis, morphological characteristics under light microscopy and electron microscopy, immunohistochemistry,and the karyotype of orthotopically transplanted tumor cells were studied. Results An orthotopic highly metastatic model of human primary gastric lymphoma in nude mice (HGBL-0305) was successfully established. Histopathology of transplanted tumors showed primary gastric diffuse large B cell lymphoma. CD19, CD20, CD22 and CD79α were positive, while CD3 and CD7 were negative. The number of chromosome ranged from 56 to 69. DNA index(DI) was 1.47±0.12(i.e. heteroploid). Until now, HGBL-0305 model has been maintained for 45 generations by orthotopic passage for almost 4 years in nude mice. A total of 156 nude mice were used for transplantation. The growth rate and resuscitation rate of liquid nitrogen cryopreservation of transplanted tumor cells were both 100%. The autonomic growth of the transplanted tumor cells invaded and destructed all the layers of the nude mice stomach. The metastasis rates of liver, spleen, lymph node, and peritoneal seeding were 69.5%, 55.6%, 45.7%, and 30.5%, respectively. Conclusions An orthotopic highly metastatic model of human primary gastric lymphoma in nude mice is successfully established. HGBL-0305 model may simulate the natural course of primary gastric lymphoma in human and provides an ideal animal model for studies on pathogenesis, metastasis biology and anti-metastatic therapies of primary gastric lymphoma.     

裸鼠原位种植大肠癌肝转移三种建模方法的比较

Objective To establish and compare three orthotopic implantation nude mice models of colorectal cancer metastasis to liver. Methods Human SW1116 cell line was inoculated into 5 BALB/ C nude mice. Eighty-four nude mice were divided equally into pouch, fibrin glue, 1×106 cell and 1 × 105 cell microinjection groups. After animals were killed, the metastasis of cancer in situ, the liver, the lung, the spleen, the pancreas, and the mesentery was observed under the microscopy after HE staining. Results The metastasis rate in groups of pouch, fibrin glue, 1×1106 cell and 1×105 cell microinjection was 100% , 100% , 50. 0% and 14. 3% respectively. The liver metastasis tumor in fibrin glue group was bigger than other groups. HE staining indicated that the liver metastasis tumor was derived from colon tumor. Conclusion Among the three orthotopic implantation nude mice models of colorectal cancer metastasis to liver, the fibrin glue method has a high success rate of operation, a high metastasis rate of the liver, and is simple to manipulate.     

裸鼠原位种植大肠癌肝转移三种建模方法的比较

目的 比较3种不同的人大肠癌裸鼠原位种植肝转移模型,建立稳定有效的人大肠癌裸鼠原位种植肝转移模型.方法 逐步传代法皮下成瘤传5代,采用84只BALB/C-nu/nu裸鼠,随机分为4组,结肠原位荷包缝合法和结肠原位纤维蛋白胶黏合法和结肠微注射1×106和1×105SW1116细胞法建立大肠癌裸鼠原位种植肝转移模型.各组裸鼠死亡后立即解剖观察原位以及肝脏、肺、脾脏、胰腺、肠系膜等脏器组织的转移并且进行苏木素-伊红(HE)染色进行镜下观察有无转移.结果 荷包缝合组和纤维蛋白胶组结肠原位种植肝转移成功率均为100%比微注射法50.0%和14.3%高,纤维蛋白胶法比其他两种方法所形成的结肠原位肿瘤和肝转移瘤均大而多.HE染色表明肝转移肿瘤性质与结肠原位种植瘤相同.结论 结肠原位纤维蛋白胶黏合法比较其他二种原位种植肝转移模型的手术成功率高,肝转移率高、操作简单.     

裸鼠原位种植大肠癌肝转移三种建模方法的比较

Objective To establish and compare three orthotopic implantation nude mice models of colorectal cancer metastasis to liver. Methods Human SW1116 cell line was inoculated into 5 BALB/ C nude mice. Eighty-four nude mice were divided equally into pouch, fibrin glue, 1×106 cell and 1 × 105 cell microinjection groups. After animals were killed, the metastasis of cancer in situ, the liver, the lung, the spleen, the pancreas, and the mesentery was observed under the microscopy after HE staining. Results The metastasis rate in groups of pouch, fibrin glue, 1×1106 cell and 1×105 cell microinjection was 100% , 100% , 50. 0% and 14. 3% respectively. The liver metastasis tumor in fibrin glue group was bigger than other groups. HE staining indicated that the liver metastasis tumor was derived from colon tumor. Conclusion Among the three orthotopic implantation nude mice models of colorectal cancer metastasis to liver, the fibrin glue method has a high success rate of operation, a high metastasis rate of the liver, and is simple to manipulate.     

内源性光动力疗法抑制人结肠癌裸鼠种植瘤的实验研究

目的　探讨基于 5 氨基乙酰丙酸 (ALA)的光动力疗法 (PDT)对结肠癌的生长抑制作用。方法　建立人结肠癌SW 480细胞裸鼠种植瘤模型 ,经尾静脉注入ALA液 (2 5 0mg/kg体重 ) ,光敏化 3h后半导体激光仪垂直照射肿瘤 3 0min(能量密度 9J/cm2 ) ,照射后连续观察肿瘤体积 ,瘤体HE染色病理分析。结果　ALA PDT在治疗后早期产生明显的抑制肿瘤增殖作用 ,瘤体组织坏死 ,腺腔样结构解离破坏 ,延命率 40 .2 % ,体积抑瘤率达 64 .1% ,治疗后期 ,肿瘤体积仍会缓慢增长 ,但增长速度明显小于对照组。结论　SALA PDT治疗可明显抑制裸鼠结肠种植瘤生长 ,延长荷瘤裸鼠生存期 ,但仍不能完全抑制肿瘤生长。     

人结肠癌裸鼠原位种植癌及转移模型的建立

目的 建立人结肠癌裸鼠原位种植瘤模型，为研究结肠癌的转移机制和抗转移治疗提供动物模型。方法 采用人结肠腺癌细胞株SWlll6接种于裸鼠皮下，形成稳定传代的皮下种植瘤。再取该肿瘤组织块原位种植于裸鼠结肠壁，建立类似于临床的结肠癌模型。观察原位种植肿瘤的成瘤率，生长情况，转移率和腹水出现率。结果 原位种植成瘤率为l00％(24／24)，区域淋巴结转移率l00％(24／24)，腹膜转移率为9l.7％(22／24)，肝转移率为75．0％(19／24)，腹水出现率为25．0％(6／24)。荷瘤裸鼠晚期出现消瘦和全身衰竭，中位生存期为l0周。结论 该实验的裸鼠原位种植转移模型的生物学行为与临床病程非常相似，为研究结肠癌转移机制和抗转移治疗提供理想的动物模型。     

TK/GCV、CD/5-Fc系统对结肠癌肝转移抑制作用的实验研究

目的：研究胸苷激酶／丙氧鸟苷（TK／GCV）系统和胞嘧啶脱氨酶／5-氟胞嘧啶（CD／5-Fc）系统对结肠癌肝转移的抑制作用。方法：将40只裸鼠随机分为四组：对照组、TK组、CD组、TK-CD组，每组10只。脾内注射法建立结肠癌肝转移动物模型。对照组：脾内注射SW480细胞，腹腔注射生理盐水；TK组：脾内注射SW480／TK-CD细胞，腹腔注射GCV；CD组：脾内注射SW480／TK-CD细胞，腹腔注射5-Fc；TK-CD组：脾内注射SW480／TK-CD细胞，腹腔注射GCV、5-Fc。观察各组裸小鼠的肝转移率、肝转移瘤数目、电镜下肿瘤组织病理学变化、肿瘤细胞凋亡指数（AD、生存期等指标。结果：各治疗组裸鼠肝转移白9发生率下降，平均肝转移瘤数减少，其动物的生存期延长，肝转移瘤内的癌细胞凋亡率增高。联合基因治疗组效果更好，且TK／GCV与CD／5-Fc有交互协同作用。结论：TK/GCV、CD／5-Fc系统联合应用具有协同效应，可有效地抑制结肠癌肝转移的形成。     

红色荧光蛋白标记的裸鼠胰腺癌转移模型的建立

目的 建立稳定、高表达红色荧光蛋白标记的裸鼠胰腺痛转移模型.方法 将RFP基闪转入人胰腺癌细胞株SW1990.评价转染前后细胞生物学行为有无改变,并采用SW1990-RFP建立实验性肺转移模型和实验性肝转移模型.应用整体荧光成像系统评价各组转移模型肿瘤转移的发生.结果 获得稳定,高表达RFP的单克隆细胞系SW1990-RFP,转染前后细胞生物学行为无明显改变.成功建立了裸鼠胰腺癌实验性肺转移模型和肝转移模型,并应用整体荧光成像系统检测到各脏器微小转移的发生.建模成功率均为66.7%(4/6).结论 RFP基因不改变SW1990的细胞生物学行为,本实验所建立的裸鼠胰腺癌转移模型稳定、可靠,具有较强的灵敏性及特异性.     

人胃癌裸鼠原位移植高转移模型的建立

目的 为探讨胃恶性淋巴瘤的发病机制和实验治疗提供理想的动物模型。方法 采用显微外科原位移植技术,将人胃癌新鲜组织移植裸鼠胃（黏膜层）壁内,观察原位移植成瘤率,侵袭和转移,及形态学特征（光镜,免疫组化电镜）。结果 从47例胃癌标本中筛选出一株人胃腺癌。裸鼠原位移植高转移模型已传至27代,一株人胃鳞腺癌裸鼠原位移植转移模型,已传至25代和一株人胃鳞癌裸鼠原位移植模型,已传至21代。共移植裸鼠426只。肿瘤的移植生长率为96.5％。自发转移率和液氮冻存复苏成活率均为100％。人胃癌在裸鼠胃壁内自主侵袭性生长,侵袭破坏胃壁各层组织结构,并直接侵袭到邻器官和组织。经血行转移到肝、肺、脾、肾等。淋巴道转移到胃的黏膜和黏膜下淋巴丛。局部及远处淋巴结。多伴发幽门梗阻癌性腹水,卵巢和腹腔内广泛种植转移。具有分泌癌胚抗原CEA的功能。移植瘤对p53、C-erbB-2、rasp21癌基因呈阳性表达,并与肿瘤的生长方式侵袭的深度和淋巴结转移有关。移植瘤细胞病理学,超微结构观察,流式细胞仪DNA含量测定,染色体核型分析,结果表明与人胃癌细胞相似。结论 三株人胃癌裸鼠原位移植高转移模型,完整的模拟了人胃癌患者的临床过程,且转移模式与临床患者相似。为研究人胃癌转移机制及实验治疗提供了理想的动物模型。     

前药热化疗对裸鼠结肠癌肝转移的作用

目的 观察胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶(CD/5-FC)系统热化疗对裸鼠结肠癌肝转移的作用.方法 45只裸鼠随机分为3组,分别给予不同的治疗方法,观察各组肝转移率、肝转移瘤数目、病理学变化、肿瘤细胞凋亡指数,检测肿瘤组织中CD基因的表达情况.结果 对照组、5-FC治疗组、5-FC热疗组平均肝脏转移瘤数和肝脏转移率分别为4.6000±1.2649、2.2000±0.9189、0.5000±0.8498;100%、40%、20%;肿瘤细胞凋亡指数平均为4.59%、9.87%和17.40%,5-FC热疗组可见较多的凋亡小体形成.结论 CD/5-FC系统热化疗对裸鼠转CD基因LoVo细胞结肠癌肝转移有明显的抑制作用.     

肿瘤转移抑制基因Kiss-1对构建原代人结直肠癌裸鼠肝转移瘤模型的影响

目的 构建原代人结直肠癌裸鼠盲肠原位移植瘤模型(肝转移模型),探讨Kiss-1基因在移植瘤存活、生长和转移中的作用.方法 选择Kiss-1基因阳性和阴性表达的人结直肠癌组织块各1块,分别建立裸鼠皮下移植瘤和裸鼠盲肠原位移植瘤模型,并观察移植瘤生长和肝转移.结果 裸鼠第2代皮下移植瘤模型构建成功率Kiss-1基因阳性组为37.50％,阴性组为100.00％,差异有统计学意义(P＜0.05);裸鼠盲肠原位移植瘤模型构建成功率,第1代为41.67％(Kiss-1阳性组为12.25％,阴性组75.00％),第2代为75.00％(Kiss-1阳性组为56.25％,阴性组为93.75％);Kiss-1阴性组成功率均高于阳性组,差异有统计学意义(P＜0.05);皮下移植瘤模型和第1代盲肠原位移植瘤模型中均未发现肝转移,第2代盲肠原位移植瘤模型中肝转移率Kiss-1阳性组为33.33％,阴性组80.00％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Kiss-1基因表达缺失有助于提高原代人结直肠癌裸鼠盲肠原位移植瘤肝转移模型构建的成功率,提示它具有抑制结直肠癌移植瘤存活、生长和转移的作用.