血管内皮细胞生长因子对内皮细胞凋亡拮抗作用的研究

目的 :初步探讨缺氧对培养人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及血管内皮生长因子的干预性影响。方法 :( 1)人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定。 ( 2 )建立人脐静脉内皮细胞缺氧模型 ,TUNEL法观测不同缺氧时间 ( 0、12、2 4、48h)对内皮细胞凋亡的影响及不同剂量血管内皮生长因子的拮抗作用。结果 :随缺氧时间延长 ,HUVECs凋亡率显著升高 ,呈时间相关性 ;血管内皮生长因子显著抑制缺氧导致的内皮细胞凋亡 ,呈剂量相关性。结论 :缺氧作为一种致病因素 ,对内皮细胞凋亡的促发作用是随缺氧时间的延长而加重的。内皮细胞的过度凋亡是引起内皮功能障碍的一个重要因素 ,血管内皮生长因子通过抑制内皮细胞凋亡 ,而具有内皮细胞保护作用。     

血管内皮生长因子对OX-LDL诱导的内皮细胞凋亡的影响及其机理

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）对氧化型低密度脂蛋白（OX—LDL）诱导的血管内皮细胞凋亡的拮抗作用及其机理，以探讨VEGF预防血管成形术后再狭窄的机制。方法将对数生长期的人脐静脉内皮细胞分成对照组、OX—LDL处理组和OX—LDL＋VEGF处理组，12h后采用原位末端标记法和流式细胞术观察各组细胞的凋亡发生情况，并通过逆转录聚合酶链反应研究各组细胞中凋亡相关基因Bcl-2与Fas mRNA的表达情况。结果OX—LDL处理组凋亡细胞和Fas mRNA表达明显多于对照组和OX-LDL＋VEGF处理组，而Bcl-2 mRNA表达情况相反。结论VEGF能部分拮抗OX—LDL诱导的血管内皮细胞凋亡，可能与其上调Bcl-2 mRNA表达及下调Fas mRNA表达有关，为VEGF预防血管成形术后再狭窄进一步提供了理论依据。     

丁苯酞对缺氧缺糖条件下血管内皮细胞VEGF和HIF-1α表达的影响

目的: 探讨丁苯酞(NBP)保护缺氧缺糖(OGD)细胞损伤的机制。方法: 对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)予以OGD损伤,MTT法检测细胞活性;Hoechst 33342染色检测细胞核形态;免疫荧光法观察血管内皮生长因子(VEGF)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达,IPP软件分析荧光强度,进行定量分析;Western blotting检测加以验证。结果: NBP在0.01- 10 μmol/L浓度之间剂量依赖性减少了OGD导致的细胞活性下降和细胞核形态改变。NBP促进了OGD后HUVECs内VEGF和HIF-1α的表达,均高于OGD组,荧光定量分析差异显著。两者表达的高峰分别为OGD后6 h和8 h。结论: NBP可以促进内皮细胞在缺氧缺糖条件下HIF-1α的表达,从而引起下游VEGF的表达增多,最终保护内皮细胞免受缺氧缺糖损伤。     

血管内皮生长因子和缺氧诱导因子对软骨细胞凋亡的作用

背景：骨关节炎是一种关节疾病,主要影响软骨,随着软骨细胞胞外基质的变化,软骨细胞发生凋亡,血管内皮生长因子在促进血管内皮细胞分裂与增殖、诱导血管生成中起重要作用。缺氧诱导因子是一种在细胞环境中的转录因子,因氧含量而产生不同反应,血管内皮生长因子和缺氧诱导因子在抑制软骨细胞凋亡中的作用受到研究者的重视。 目的：阐述血管内皮生长因子和缺氧诱导因子及其他可能因素对软骨细胞凋亡的影响。 方法：分析、总结近年来软骨细胞凋亡的影响因素的相关文献,从骨关节炎进程中软骨细胞血管内皮生长因子表达变化,血管内皮生长因子和缺氧诱导因子对软骨细胞凋亡的调控等方面进行阐述。 结果与结论：血管内皮生长因子通过上调抑制细胞凋亡因子的表达促进软骨细胞存活,缺氧诱导因子能增加软骨细胞活性和细胞外基质合成,成为抑制骨细胞凋亡的重要靶点,血管内皮生长因子与缺氧诱导因子的相关性还有待进一步研究。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

TGF-β对缺氧环境下HepG2细胞表达VEGF的影响

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)和低氧(CoCl2)对肝癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法体外培养肝癌细胞系HepG2细胞,实验分为对照组、不同浓度TGF-β1和CoCl2的分别处理组、TGF-β1(100 pmol/L) CoCl2(200 μmol/L)组;用免疫细胞化学法检测VEGF蛋白表达;半定量RT-PCR技术检测细胞中VEGFmRNA相对表达量。结果各处理组VEGF蛋白表达均为阳性;TGF-β1或CoCl2组中VEGF mRNA相对表达量明显高于对照组(P<0.01),并且呈浓度依赖性;TGF-β1 CoCl2组中VEGFmRNA表达高于单因素刺激组(P<0.05)。结论TGF-β1能够刺激HepG2细胞表达VEGF,并且可以协同CoCl2增加VEGF的表达。     

Persephin基因转染对缺氧诱导的神经干细胞凋亡的影响

目的:探讨重组腺病毒介导Persephin基因治疗对缺氧状态下对神经干细胞凋亡的作用。方法:体外培养C17.2神经干细胞,建立神经干细胞缺氧模型;将携带人类Persephin基因的重组腺病毒感染C17.2神经干细胞;Western-blotting法分析Persephin蛋白的表达;TUNEL法检测凋亡指数,显微镜观察凋亡小体;流式细胞术测定细胞凋亡率的变化。结果:转染pAdPersephin的C17.2神经干细胞成功表达Persephin蛋白;缺氧后神经干细胞凋亡指数为(25.54±4.30)%,而转染pAdPersephin后的细胞凋亡指数显著减少至(10.04±1.32)%(P<0.01),而转染pAdCMVPersephin Persephin反义寡核脱氧核酸细胞凋亡指数为(24.05±3.05)%,与对照组无显著差异(P>0.05)。结论:腺病毒介导的Persephin基因能高效表达Persephin;外源性Persephin对C17.2神经干细胞具有抗凋亡作用,能够提高C17.2神经干细胞对缺氧的耐受性。     

缺氧对肺动脉内皮细胞PDGF基因及PDGF—B链蛋白表面的影响

应用核酸杂交和定量免疫细胞化学分析技术研究了缺氧对猪肺动脉内皮细胞血小板源性生长因子ＰＤＧＦ基因及ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白表达的影响。结果，缺氧能明显增强肺动脉内皮ＰＤＧＦ－Ｂ细胞边ｍＲＮＡ的表达，而ＰＤＧＦ－Ａ链ｍＲＮＡ表达水平无明显改变。免疫细胞化学定量分析与证实ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白染色比正常对照明显增强，与ＰＤＧＦ－Ｂ链基因表达的改变基本一致。提示缺氧可以刺激肺动脉内皮细胞ＰＤＧＦ的表达。ＰＤＦＧ在     

姜黄素抑制HGF诱导血管内皮细胞迁移和VEGF表达的体内外研究

目的:探索姜黄素抑制肝细胞生长因子(HGF)诱导血管生成的分子机制。方法:利用管腔形成实验、划痕实验、Western blot实验和动物实验观察姜黄素、c-Met抑制剂SU11274、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂LY294002和m TOR抑制剂rapamycin对HGF诱导的内皮细胞迁移、管腔形成能力、血管内皮生长因子(VEGF)表达、相关信号通路和瘤体内血管密度的影响。结果:姜黄素可显著抑制HGF诱导内皮细胞发生迁移、小管形成及VEGF的表达,同时抑制c-Met/AKT/m TOR/S6通路的磷酸化,并可减少瘤体内VEGF的表达和微血管密度。使用c-Met抑制剂SU11274、PI3K抑制剂LY294002或m TOR抑制剂rapamycin能得到和姜黄素相似的效应。结论:姜黄素抑制HGF诱导的血管生成可能是通过抑制c-Met/AKT/m TOR/S6信号通路活化实现的。     

人VEGF165基因真核表达质粒的构建及其对血管内皮细胞增殖的影响

目的 :构建人VEGF16 5基因的真核表达质粒pBudCE4 .1/VEGF16 5 ,观察其在血管内皮细胞 (VEC)中的表达和表达产物对VEC增殖的影响。方法 :用RT PCR法从引产胎儿心脏组织中克隆VEGF16 5基因 ,并将其克隆至真核表达质粒pBud CE4 .1中 ,对重组真核表达质粒pBudCE4 .1/VEGF16 5进行酶切鉴定和测序。以脂质体转染法将pBudCE4 .1/VEGF16 5导入VEC中 ,用Northernblot和免疫细胞化学染色法 ,分别从mR NA水平和蛋白质水平检测它们在转染的VEC中的表达 ,并检测表达产物对VEC增殖的影响。结果 :人VEGF16 5基因的RT PCR产物为 5 76bp。测序结果显示 ,扩增的VEGF16 5基因的序列与基因文库中登录的序列完全一致。经HindⅢ和BamHI酶切鉴定证实 ,VEGF16 5基因已成功地克隆至真核表达质粒pBudCE4 .1中。以其转染血管内皮细胞 (VEC)后 ,经Northernblot杂交和免疫细胞化学染色法检测均证实VEGF16 5基因表达。表达产物对VEC增殖有明显的促进作用。结论 :所构建的pBudCE4 .1/VEGF16 5真核表达质粒可在VEC中表达 ,表达产物可明显促进VEC增殖 ,为通过VEGF16 5基因转染防治移植器官内血管的狭窄奠定了基础     

缺氧促进猪肺动脉内皮细胞sis／PDGF—B链基因的表达

应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｓｌｏｔ－ｂｌｏｔ杂交技术研究了缺氧对猪肺动脉内皮细胞血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）基因表达的影响，结果表明，缺氧能明显中肺动脉内皮细胞ＰＤＧＦ－Ｂ链ｍＲＮＡ的表达，而ＰＤＧＦ－Ａ链ｍＲＮＡ表达无明显影响，提示缺氧可能是体内刺激肺动脉内皮细胞ｓｉｓ／ＰＤＧＦ－Ｂ链基因表达的因素之一，通过肺动脉平滑机细胞增生和收缩，在肺动脉高压血管改建中可能具有重要作用。     

缺氧对高原藏族、汉族人脐静脉内皮细胞VEGF、iNOS和eNOS mRNA表达影响的比较

目的：比较缺氧对世居高原藏族人和移居高原汉族人脐静脉内皮细胞（UVECs）血管内皮生长因子（VEGF）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和内皮型一氧化氮合酶（eNOS） mRNA表达的影响。 方法： 分离脐静脉内皮细胞，体外原代培养，分为①世居高原藏族组和②移居高原汉族组两组，每组包括常氧对照和缺氧(0.5% O2)2 h、4 h、12 h和24 h时点。分离细胞总RNA，分别用RT-PCR检测VEGF、iNOS和eNOS mRNA表达。 结果： 缺氧可以诱导世居高原藏族人UVECs表达iNOS和VEGF mRNA表达增加，同时抑制eNOS mRNA表达。移居高原汉族人UVECs表达上述基因mRNA的特点与世居高原藏族人相似。 结论： 缺氧时世居高原藏族人UVECs VEGF、iNOS和eNOS mRNA表达特点与移居高原汉族人相似，提示上述基因表达的改变可能是缺氧反应机制的共同过程。     

缺氧诱导培养的人脑微血管内皮细胞VEGF表达及超微结构的变化

目的探讨缺氧条件下体外培养人脑微血管内皮细胞VEGF基因表达与细胞超微结构变化。方法取材于手术中切除的脑动静脉畸形周围黏连的新鲜脑组织,采用匀浆、过滤和酶消化技术分离微血管内皮细胞。免疫组化方法检测第八因子相关抗原(FⅧ-RA)表达。选用RT-PCR技术观察静态和缺氧状态下(体积分数95%N2,5%CO2;2 h、4 h和8 h)内皮细胞VEGF mRNA表达,同时以ELISA方法检测每组细胞上清液中VEGF蛋白含量,透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果相差显微镜下,培养的活细胞具有单层“卵石样”排列的典型特征,90%以上的细胞为FⅧ-RA阳性染色。缺氧4 h细胞VEGFmRNA和蛋白表达较对照组显著升高(P<0.01),8 h后表达下调,并出现线粒体肿胀、内质网扩张及溶酶体多囊泡形成。结论缺氧条件下脑血管内皮细胞的VEGF表达水平可能与其细胞超微结构变化有重要关系。     

缺氧内皮细胞培养液对肺动脉平滑肌细胞表型的影响

用细胞培养和形态定量分析方法观察缺氧对肺动脉平滑肌细胞表型的影响。结果显示，缺氧性内皮细胞条件培养液组肺动脉平滑肌细胞的二倍体细胞和α－ｓｍ－ａｃｔｉｎ含量均少于常氧性内皮细胞条件培养液组（Ｐ＜０．０５），尤以肌丝成份减少最明显；粗面内质网和线粒体却显著增多。而直接缺氧组与常氧组无明显差异。提示：缺氧可促使内皮细胞产生和释放某种促平滑肌细胞表型转化的物质或因子，从而改变了肺动脉管壁细胞之间的正常调控关系，导致平滑肌细胞肥大，合成细胞外基质增多。     

GM-CSF对诱导人血管内皮细胞血管形成的影响及VEGF的作用

目的： 研究炎性因子粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）对诱导人血管内皮细胞血管形成的影响及血管内皮生长因子（VEGF）的作用，为探讨GM-CSF和VEGF与动脉粥样硬化斑块内血管新生及斑块稳定性之间的关系提供实验基础。方法： 在 Matrigel上诱导人脐带静脉内皮细胞（HUVECs）形成管腔结构，从而建立稳定的血管形成的体外培养体系，然后施加实验因素。分别检测rhGM-CSF的浓度效应和时间效应，及加入VEGF165的作用。然后各实验组用CD34免疫细胞化学染色，光学显微镜下计数各组管腔数。最后用统计学方法进行分析。结果： 应用Matrigel可在体外诱导培养的HUVECs形成管腔结构。rhGM-CSF作用后，培养体系的管腔数逐渐增多，呈剂量及时间依赖效应；加入VEGF165后，管腔数显著增多。结论： 应用Matrigel可在体外诱导培养的HUVECs形成管腔结构。GM-CSF可以促进体外诱导人血管内皮细胞血管形成，并在一定范围内呈剂量及时间依赖效应。VEGF可以促进体外诱导人血管内皮细胞血管形成。     

VEGF家族新成员:VEGF-B,VEGF-C和VEGF

血管内皮生长因子（ Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ） 近年又发现了下列新成员： Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ Ｂ, Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ Ｃ 及 Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ Ｄ,三种因子与 Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ 具有相似的结构、功能及分布。 Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ Ｂ 的受体尚未明确,该因子具有促进内皮细胞生长的功能; Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ Ｃ 主要作用于淋巴管内皮,其受体为 Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ Ｒ２ 和 Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ Ｒ３ ; Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ Ｄ 与 Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ Ｃ 的作用及结构相似,受体相同。     

血管内皮生长因子(VEGF)对培养内皮细胞VEGF受体表达的影响

目的 :为探讨VEGF对培养内皮细胞 (EC)VEGF受体表达的影响。方法 :将培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)随机分为 4组 :( 1)正常对照组 ;( 2 )低氧培养组 ;( 3)VEGF 10ng/ml组 ;( 4)低氧 +VEGF10ng/ml组。HUVEC低氧培养参照Kuwara等介绍的方法并加以改进。HUVECVEGF受体的检测采用免疫组织化学方法。结果 :采用简易低氧培养法 ,48h内培养液氧分压维持在 5 8mmHg ;与对照组相比 ,低氧培养组、VEGF组和低氧 +VEGF组HUVECVEGF受体Flk 1/KDR阳性细胞数增多 ,强度增加 ;但未检测到VEGF受体Flt 1表达。结论 :低氧可使HUVEC表面的VEGF受体Flk 1/KDR表达增加 ,VEGF同源上调其受体Flk 1/KDR ,低氧和VEGF在调节VEGF受体Flk 1/KDR方面有协调作用。     

缺氧对培养的猪肺内皮细胞胞浆游离钙的影响

本文应用荧光探针Ｆｕｒａ－１／ＡＭ测定胞浆游离钙浓度（［Ｃａ＾２＋］ｉ）技术，观察培养的猪肺动脉内皮细胞［Ｃａ＾２＋］ｉ在缺氧时变化。实验发现：向细胞悬液中充氮气造成缺氧时，肺动脉内皮细胞［Ｃａ＾２＋］ｉ升高８１±２１％（Ｐ＜０．０５，ｎ＝８）。结果提示肺动脉内皮细胞钙信使系统可能参与缺氧所致血管反应。     

VEGF基因特异性siRNA转染后对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨利用干扰RNA（RNAi）抑制血管内皮生长因子（VEGF）基因表达对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响。方法：设计针对VEGF基因的小干扰RNA（siRNA）,合成DNA模板,体外转录siRNA。以脂质体转染法将双链siRNA导入MCF-7细胞后,用MTT比色法检测siRNA对MCF-7细胞增殖的影响。通过Hoechst33258染色观察MCF-7细胞的凋亡。用流式细胞术检测细胞周期的改变,RT-PCR检测VEGF mRNA表达的变化,免疫细胞化学法检测VEGF蛋白的表达。结果：所设计的两个靶位点siRNA,均能有效地抑制MCF-7细胞的增殖,诱导细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G0/G1期,VEGFmRNA及其蛋白的表达明显减少;而作为阴性对照的错义序列组siRNASCR则没有上述效应。结论：体外转录合成的siRNA可抑制MCF-7细胞中VEGF基因的表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。     

氯化钴诱导缺氧对血管周细胞血管生成素-1表达影响的研究

目的检测缺氧环境下缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成素-1(Ang-1)表达变化,探讨氯化钴诱导缺氧对血管周细胞Ang-1表达的影响。 方法体外培养人脑血管周细胞,予不同浓度氯化钴诱导缺氧环境,分为对照组和试验组。对照组使用不含氯化钴的血管周细胞培养基培养;试验组使用血管周细胞培养基溶解六水合氯化钴稀释至终浓度分别为50 μmol/L(50 μmol/L氯化钴组)、100 μmol/L(100 μmol/L氯化钴组)、200 μmol/L(200 μmol/L氯化钴组)、300 μmol/L(300 μmol/L氯化钴组)、400 μmol/L(400 μmol/L氯化钴组)。通过蛋白质印迹法检测HIF-1α蛋白表达、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HIF-1α、Ang-1 mRNA合成以及酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测VEGF、Ang-1蛋白分泌。对数据行单因素方差分析、Dunnett-t检验及t检验。 结果对照组和各试验组(50、100、200、300、400 μmol/L氯化钴组)HIF-1α蛋白表达组间差异有统计学意义(F＝215.7,P<0.05);HIF-1α蛋白表达随氯化钴浓度先升高后降低,在200 μmol/L处相对灰度达到峰值8.6140±0.3445,200 μmol/L氯化钴组相对灰度值与对照组,50、100、300、400 μmol/L氯化钴组比较,差异均有统计学意义(t＝38.28、22.18、10.16、5.60、25.47,P值均小于0.05)。对照组与试验组HIF-1α mRNA表达组间比较,差异有统计学意义(F＝195.5,P<0.05);HIF-1α mRNA表达呈氯化钴浓度依赖性降低,400 μmol/L氯化钴组HIF-1α mRNA表达达到最低值5.107×10^－3±8.138×10^－5,与对照组,50、100、200 μmol/L氯化钴组比较,差异均有统计学意义(t＝21.40、17.75、14.96、5.36,P值均小于0.05)。对照组与试验组VEGF蛋白表达组间比较,差异有统计学意义(F＝93.34,P<0.05);VEGF蛋白表达随氯化钴浓度先升高后降低,在200 μmol/L处VEGF蛋白表达达到峰值(901.000±6.798) pg/mL,200 μmol/L氯化钴组与对照组,50、100、300、400 μmol/L氯化钴组比较,差异均有统计学意义(t＝27.70、10.56、4.65、10.49、17.97,P值均小于0.05)。对照组与试验组Ang-1蛋白表达组间比较,差异有统计学意义(F＝279.3,P<0.05);Ang-1蛋白分泌随氯化钴浓度升高先增加,在100 μmol/L处达到峰值(4 364.0±117.3) ng/mL,随后蛋白分泌随氯化钴浓度升高逐渐减少,100 μmol/L氯化钴组与对照组,50、200、300、400 μmol/L氯化钴组组间比较,差异均有统计学意义(t＝8.57、4.33、17.03、19.48、23.30,P值均小于0.05)。对照组与试验组Ang-1 mRNA表达组间比较,差异有统计学意义(F＝172.0,P<0.05);Ang-1 mRNA表达随氯化钴浓度升高先增加,在100 μmol/L处达到峰值6.732×10^－4±7.140×10^－6,随后mRNA表达随氯化钴浓度升高逐渐减少,100 μmol/L氯化钴组与对照组,200、300、400 μmol/L氯化钴组组间比较,差异均有统计学意义(t＝10.05、20.21、110.20、34.25,P值均小于0.05)。 结论轻度缺氧环境下,血管周细胞Ang-1表达随缺氧程度加剧而受到促进;重度缺氧环境下,血管周细胞Ang-1表达随缺氧程度加剧而受到抑制。     

VEGF与VEGFR1通路相关基因的多态性与子痫前期的相关性分析CSCD

目的探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血管内皮生长因子受体1(vascular endothelial growth factor receptor 1,VEGFR1)通路相关基因的多态性与子痫前期发病风险的相关性。方法选择178例子痫前期孕妇和100例正常孕晚期孕妇分别纳入病例组及对照组,采用PCR-限制性片段长度多态性方法检测VEGF基因rs3025039、rs2010963以及VEGFR1基因rs3812867、rs55875014、rs722503位点的多态性,同时测定孕妇血清的VEGF及sVEGFR1水平,分析结果与子痫前期发生的相关性。结果病例组收缩压、舒张压、sVEGFR1均显著高于对照组,VEGF显著低于对照组(P<0.05)。所有位点的基因型分布均满足Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。病例组VEGF rs3025039位点的T等位基因频率高于对照组,在显性、共显性模型下均有统计学意义(P<0.05)。与CC型相比,CT和TT型患病风险较高,其收缩压、舒张压、sVEGFR1显著偏高,VEGF水平显著偏低(P<0.05)。两组其余位点的等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论VEGF基因rs3025039位点与子痫前期的发生相关,该位点的变异可能影响VEGF的活性,介导子痫前期的发生及发展。