P糖蛋白抑制X射线诱导凋亡及对线粒体膜电位的影响

目的　观察P糖蛋白 (P gp)对X射线诱导凋亡和线粒体膜电位 (ΔΨm)的影响。方法运用流式细胞仪检测X射线照射后不同时间点细胞凋亡率和ΔΨm的动态变化。结果　P gp功能抑制组细胞在X射线照射后 6、12、2 4h细胞凋亡率分别为 2 5 5 3%± 2 85 % ,30 4 3%± 2 2 1%和39 0 3%± 2 6 0 % ;对照组分别是 16 13%± 1 16 % ,2 1 73%± 1 31%和 2 7 5 3%± 2 5 5 %。抑制组显著高于对照组 (P <0 0 1)。在X射线照射后 6、12、2 4hP gp抑制组和对照组细胞ΔΨm平均荧光强度 (MIF)均较照射前降低 ,但P gp抑制组各时间点ΔΨmMIF值较对照组细胞下降更显著 (P <0 0 1)。结论　P糖蛋白对X射线诱导凋亡具有显著抑制效应 ,其机理可能和其稳定的ΔΨm有关。     

AT细胞系辐射敏感性与细胞凋亡的相关研究

目的 探讨AT细胞高辐射敏感性与细胞凋亡之间的联系。方法 以液体闪烁测量法测3H-TdR掺入百分率来观察^60Co γ射线照射对AT5BIVA（AT）和GM0639（GM）细胞增殖的影响;实验于照射后0、24、48和72 h,用细胞流式术动态检测AT和GM细胞的自发凋亡率及^60Co γ射线照射诱发的凋亡率。结果 ^60Co γ射线0～6 Gy照射后,AT和GM两种细胞3H-TdR掺入百分率均呈剂量依赖性降低,且AT细胞降低得比GM细胞快,两种细胞3H-TdR掺入百分率与受照射剂量间可拟合成指数方程：SAT=0.9718e^-0.6855D（R^2=0.9950）、SGM=1.0928e^-0.3731D（R^2=0.9777）;AT细胞的自发凋亡率高于GM细胞;2～6 Gy照后24 h,两种细胞由辐射诱发的凋亡率均随照射剂量增大而升高,且在同一剂量点,前者凋亡率高于后者;2 Gy照射后0～72 h,AT和GM细胞的凋亡率均呈时间依赖性增加,且随照后时间延长两者间差异逐步增大,在72 h达到显著水平。结论 AT细胞高辐射敏感性与其较高的自发及辐射诱发的凋亡密切相关。     

电离辐射对EL-4细胞凋亡与坏死的影响

目的 研究不同剂量电离辐射对EL－4细胞凋亡和细胞坏死的影响。方法 采用PI和Hoechst 33342双染、流式细胞术检测。结果 实验结果表明：给予50－200mGy低剂量照射后6h,EL－4细胞凋亡和坏死较对照组没有升高,而给予1．0－8．0Gy大剂量X射线照射后6h,细胞凋亡较对照组有明显升高,4．0Gy以上剂量,细胞坏死显著升高。结论 一定剂量的电离辐射不仅可以诱导凋亡的产生,而且可直接导致细胞坏死,即细胞的死亡模式与受照剂量有关。     

细胞凋亡拮抗剂AS1501对急性放射病小鼠的保护作用研究

目的 为研究死亡受体5(DR5)介导的细胞凋亡在放射损伤效应中的作用及其作为放射损伤防护药物研发新靶标的可行性,采用重组表达的DR5细胞凋亡拮抗剂(AS1501)对⁶⁰Co-γ射线单次全身照射急性放射病(ARS)小鼠的治疗效果进行评价。方法 45只C57BL/6小鼠随机分成模型对照组、阳性对照组、AS1501低(5 mg/kg)、中(10 mg/kg)、高(15 mg/kg)剂量给药组,观察不同剂量AS1501对8.5 Gy⁶⁰Co-γ射线照射后小鼠3个月长期生存率的影响;63只C57BL/6小鼠随机分成正常对照组、AS1501治疗组和模型对照组,AS1501组经4.0 Gy⁶⁰Co-γ射线单次全身照射后尾静脉注射AS1501(15 mg/kg),各组动物分别于照射后2 h,1和4 d流式细胞仪检测骨髓造血干/祖细胞(LSK/LK)数量;照射后2 h,1、4、7、11和14 d细胞计数检测骨髓有核细胞(BMNC)数量,称重法计算脾脏及胸腺脏器指数;照射后第3天取小鼠胸腺组织,免疫荧光双标记检测小鼠受照射前后及AS1501...     

大鼠脊髓照射后细胞凋亡及其与细胞增殖的关系

目的:评价大鼠脊髓照射后少突神经胶质细胞凋亡与细胞增殖的关系。方法:选择9～10周龄Fisher雌性大鼠,用氟烷吸入法麻醉,对2cm脊髓胸2～腰2(C2～T2)段行X射线照射。用2、8和22Gy单次剂量或2、8和22Gy初次剂量照射后1～63天间再次给予8Gy照射。大鼠在单次剂量22Gy照射前30分钟和照射后2小时给予腹腔注射环己酰亚胺(2mg/kg),以延迟细胞凋亡的出现。在不同剂量照射后0、4、8、12或24小时杀鼠,心脏用10%福尔马林灌注10分钟,取C2～T2段中部,石蜡包埋,染色,计算细胞凋亡指数和总凋亡产量(TAY,为照射后24小时内总凋亡细胞的百分数)。细胞增殖…     

pEgr-hPTEN稳定转染联合辐射诱导人胶质瘤SHG-44细胞凋亡及Bcl-2表达下调

目的 探讨辐射诱导表达载体pEgr-hPTEN体外稳定转染人胶质瘤SHG-44细胞后联合X射线照射，诱导细胞凋亡的作用及凋亡相关蛋白Bcl-2表达的变化。方法 以脂质体介导携有外源野生型PTEN基因的辐射诱导表达载体pEgr-hPTEN，体外转染SHG-44细胞，筛选稳定转染的细胞克隆并扩增培养；应用电子显微镜、流式细胞仪等方法，检测稳定转染联合X射线照射对胶质瘤细胞超微结构、细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达等特性的影响。结果 稳定转染细胞超微结构有明显的退行性改变，可见核内染色质趋边的类似早期凋亡的改变；稳定转染联合X射线照射可诱导肿瘤细胞凋亡，5Gy以内随吸收剂量的增加，早期凋亡细胞百分数明显增加，稳定转染不同剂量照射组早期凋亡细胞百分数分别为稳定转染0Gy假照组的1．5—2．3倍、为未转染照射组的1．9—4．4倍、为未转染0Gy假照组的3．4—5．1倍；同时稳定转染细胞Bcl-2蛋白表达则呈剂量依赖性下降。结论 体外PTEN基因转染联合X射线照射可诱导肿瘤细胞凋亡明显增多，Bcl-2蛋白表达下调，具有显著的肿瘤抑制作用。     

青蒿琥酯对人宫颈癌HeLa细胞的放射增敏作用

目的 探讨青蒿琥酯对人宫颈癌HeLa细胞的放射增敏作用。方法 应用⁶⁰Co γ射线照射细胞,吸收剂量率为0.635 Gy/min,照射剂量为0、1、2、4和6 Gy。采用MTT法检测青蒿琥酯对HeLa细胞的抑制作用,确定青蒿琥酯的最适实验作用浓度。克隆形成法检测青蒿琥酯对HeLa细胞放射敏感性的影响;采用"多靶单击数学模型"拟合HeLa细胞的剂量-存活曲线,得出平均致死剂量、准阈剂量及放射增敏比,评价其增敏效果。用流式细胞术检测HeLa细胞凋亡率,进一步检测青蒿琥酯对HeLa细胞的放射增敏性。结果 青蒿琥酯对HeLa细胞的抑制作用随药物浓度的增加而增加,单纯照射1、2、4和6 Gy细胞的克隆形成率分别为91.67%、82.02%、58.60%和25.01%,加入青蒿琥酯后,相同照射剂量下克隆形成率分别降低为74.93%、60.53%、22.38%和5.05%;单纯照射组与药物+照射组的平均致死剂量(D₀)分别为2.95和2.07 Gy,准阈剂量(D_q)分别为2.01和1.24 Gy,放射增敏比(SER)为1.43。单纯2和6 Gy照射组细胞凋亡率分别是12.26%和40.08%,加入青蒿琥酯后,相同照射剂量下细胞凋亡率分别上升至22.71%和59.92%。结论 青蒿琥酯对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用成药物浓度依赖性;青蒿琥酯对HeLa细胞具有一定的放射增敏作用。     

节律基因Period2对肿瘤细胞生长及放射敏感性的影响

目的探讨Period2（Per2）基因对细胞生长及放射敏感性的影响。方法体外培养C6神经胶质瘤细胞（C6 glioma cells）,使用脂质体包裹法将nr2表达质粒（pcDNA3．1-Per2）转导入C6细胞内;以免疫组化及流式细胞术检测Per2表达;通过流式细胞术和克隆形成试验检测稳定转染Per2阳性表达的C6细胞在正常情况下和γ射线照射后的凋亡、生长。结果未经γ射线照射的Per2阳性表达的C6细胞较对照组细胞增殖减慢、凋亡率增加,但γ射线照射后的较对照组细胞增殖速度快、凋亡率减少。结论节律基因Per2过表达会增加肿瘤细胞的凋亡,但在射线照射情况下会降低肿瘤细胞对射线的敏感性。     

NADH对X射线诱导的细胞凋亡信号传递的影响

目的　研究NADH抗辐射诱导的细胞凋亡及其作用机制。方法　通过MTT法和流式细胞仪检测L 0 2细胞受照后加和不加NADH(4 0 0 μg·ml-1)条件下细胞活性、细胞凋亡率和凋亡相关蛋白p5 3、p2 1、p16、bcl 2阳性细胞表达率。结果　细胞活性随X射线辐射剂量增大而减少 ,细胞凋亡率增加 ,NADH能增加肝细胞受照后细胞活性和减少细胞凋亡率。与假照射组相比 ,L 0 2细胞离子辐射后p5 3、p2 1和p16阳性表达率上升 ,bcl 2下降 ;加入NADH后 ,明显上调受照后肝细胞bcl 2蛋白表达和下调p5 3、p2 1和p16表达 ,差异非常显著 (P <0 .0 5 )。结论　X射线诱导正常肝细胞L 0 2凋亡及NADH抗辐射作用可能与p5 3信号传递途径有关     

103Pd对平滑肌细胞凋亡的影响

目的　探讨1 0 3Pd低能γ射线对体外培养血管平滑肌细胞 (VSMC)凋亡的作用。方法　体外猪VSMC原代、传代培养 ,不同剂量1 0 3Pd照射 2 4h后 ,分别用伊红染色测定细胞活力 ,以四唑盐(MTT)测定细胞增殖力 ,以流式细胞仪测定细胞周期阻滞情况及凋亡率 ,凋亡细胞DNA断裂末端标记 (TUNEL)法测定细胞凋亡 ,放射免疫分析法测定 6酮 前列腺素 (6 K PGF1α)、血栓素 (TXB2 )及血管紧张素Ⅱ (AⅡ )。结果　不同剂量1 0 3Pd照射 2 4h后 ,可见随剂量增加 ,培养液中悬浮死细胞增多 ;伊红染色细胞总数降低 ,死亡率上升 ,呈剂量依赖关系 ;MTT测定示各照射组VSMCA570nm 值均降低 ;流式细胞仪测定示受照射细胞大部分停留于G0 G1 期 ,而对照组进入S期 ,并可见亚二倍体峰 ;TUNEL法测定可见照射组阳性细胞中核固缩和核碎裂 ;细胞培养液中 6 K PGF1α TXB2 比值明显增加 ,并呈剂量依赖性 (P <0 .0 5 )。 5 .5 5～ 9.2 5MBq范围内 ,VSMC增殖明显受抑制 ,而凋亡细胞增加。 2 2 .2MBq1 0 3Pd照射 2 4h后 ,会导致细胞死亡。结论　低剂量1 0 3Pd可用于内照射治疗血管损伤后再狭窄。     

茶多酚诱导肝癌细胞凋亡

为进一步研究茶多酚诱导体外培养的肝癌细胞株HepG-II细胞发生凋亡的作用,采用MTT法、形态学观察、琼脂糖凝胶电泳和末端脱氧核苷酸转移标记法观察被茶多酚处理后的ＨepG－II细胞的形态学和生化等指标的变化。MTT法研究结果显示,当茶多酚浓度为250μg/ml时即时诱导HepG-II细胞凋亡,并与浓度呈正相关;当茶多酚浓度＞2000μg/ml时,抑制率增强的幅度明显减慢。透射电镜下观察到核染色质浓集呈块并可见凋亡小体;荧光染色在荧光显微镜下可见部分细胞核或细胞质内出现致密浓染的黄绿色块状和颗粒状荧光等凋亡细胞的形态学改变。琼脂糖凝胶电泳呈典型的DNA梯形图像。末端脱氧核苷酸转移标记法进一步证实茶多酚可诱导HepG-II细胞的凋亡。提示茶多酚可诱导体外培养的肝癌细胞株HepG-II细胞发生凋亡,具有抗肝癌的作用。     

X射线诱导多形性胶质母细胞瘤细胞系的凋亡

辐射诱导肿瘤细胞的凋亡是近年来放射生物学研究的热点，为了进一步探讨辐射诱导肿瘤细胞凋亡的机制，采用光镜、电镜及ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳法观察Ｘ射线诱导多形性胶质母细胞瘤细胞系凋亡的特征。结果表明：①剂量率和分次照射组（１０Ｇｙ）诱导出典型细胞凋亡的特征（如凋亡小体，ＤＮＡ梯状带等）。②剂量诱导肿瘤细胞凋亡，高剂量导致肿瘤细胞坏死。③凋亡出现时间因组织细胞类型的不同而各有差异。④射线诱导肿瘤细胞的凋亡以     

辐射诱发细胞凋亡中DNA大片段的生成

目的与方法：ＤＮＡ在核小体间断裂,琼脂糖凝胶电泳时出现梯形谱（ＤＮＡｌａｄｄｅｒ）通常被认为是细胞凋亡的特征性生化标志,利用脉冲场凝胶电泳,对人外周血淋巴细胞受照后ＤＮＡ梯形谱形成前,ＤＮＡ断裂情况进行了观察。结果人外周血淋巴细胞受照者凋亡过程中,ＤＮＡ的断裂分成两步,首先是产生３００ｋｂ到５０ｋｂ的ＤＮＡ大片段,随后才是通常所描述的ＤＮＡ梯形谱。结论;细胞凋亡中核酸内切酶对ＤＮＡ的降解不是一步完     

快中子诱导人鼻咽癌细胞系凋亡的研究

目的　研究中子不同剂量照射人鼻咽癌（ＣＮＥ２） 细胞凋亡发生特点及与Ｘ射线所致凋亡的差异。探讨凋亡在中子治疗肿瘤中的作用及临床意义。方法　采用琼脂糖凝胶电泳及ＤＮＡ特异性荧光染色方法（Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２） 检测照射后不同时间人鼻咽癌（ＣＮＥ２）细胞。结果　发现中子可诱导人鼻咽癌细胞发生凋亡,这种凋亡发生存在着一定的时间剂量相关性。在相同剂量照射下,同一时间点上,中子照射所致的凋亡反应强于Ｘ 射线所致的凋亡。结论　快中子照射离体细胞可引起较强的凋亡反应。中子杀伤肿瘤的机理可能也是主要通过凋亡途径来实现的。     

缺氧和机械损伤诱导大鼠神经细胞凋亡的体外研究

目的 探讨神经细胞调亡与缺氧和机械损伤的关系。方法 体外原代培养大鼠神经元细胞，经低氧或机械损伤处理后，应用光镜、电镜、末端脱氧核苷酸介导的Ｘ－ｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴｄＴ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｄＵＴＰ ｎｅｉｋ ｅｎｄ ｌａｂｅｌｉｎｇ，ＴＵＮＥＬ）法、流式细胞仪、ＤＮＡ凝胶电泳及免疫组化分析细胞凋亡及其相关基因表达的改变。结果 经低氧或机械损伤后神经细胞出现恨的形态改变；其ＤＮＡ呈现“梯状”断裂     

X射线对小鼠胸腺细胞凋亡的影响

采用荧光分光光度法对裂解ＤＮＡ进行定量，并用琼脂糖凝胶电泳法定性研究Ｘ射线全身照射后小鼠胸腺细胞凋亡。结果表明，４ＧｙＸ射线照后２小时胸腺细胞凋亡开始增加，于照后１４小时达峰值，尔后呈下降趋势。ＤＮＡ裂解率在照后２４小时降至１４小时的５０％，这可能是内环境中巨噬细胞吞噬凋亡小体所致。在照射后１４小时研究其剂量－效应关系发现，高剂量照射使ＤＮＡ裂解明显增多，形成１８０ｂｐ（ｂａｓｅｐａｉｒｓ）左右或其整倍数的ＤＮＡ断片，电泳呈现＂梯形图谱＂；而低剂量辐射可使ＤＮＡ裂解率降低。剂量－效应曲线呈Ｊ型。     

急性脑创伤后迟发性神经元死亡的实验观察

目的：探讨急性脑创伤后迟发性神经元损伤的病理形式及过程。方法：以大鼠脑创伤模型和体外培养海马神经元为研究对象,采用光镜、电镜方法对模型的损伤情况进行形态观察;以DNA－Ladder、TUNEL法对神经DNA损伤情况进行观察。结果：光镜下观察见神经元出现变性;电镜下观察神经元坏死、凋亡、伤后1d时最严重;DNA Ladder实验可见梯度电泳带,TUNEL法伤后2h神经元即有染色,伤后1d时最明显,伤后7d时仍高。体外实验神经元划伤后崩解、坏死,正常神经元在划伤神经元培养液中培养后出现凋亡。结论：急性脑创伤后由于多种因素的作用,导致迟发性神经元死亡,主要表现为坏死和凋亡,凋亡持续时间较长。     

放射性核素147Pm诱发Molt-4细胞和Ana-1细胞凋亡

对放射性核素１４７Ｐｍ内照射诱发Ｍｏｌｔ－４细胞和Ａｎａ－１细胞的死亡形式进行研究。方法通过形态学变化、琼脂糖电泳、ＭＴＴ和ＪＡＭ实验对核素诱发的细胞死亡形式进行了定性及定量分析。结果表明放射性核素１４７Ｐｍ诱发的细胞死亡具有典型的细胞凋亡形态学特征，且细胞凋亡的程度及ＤＮＡ链断裂量与１４７Ｐｍ作用的时间和内照射的累积吸收剂量有关。结论放射性核素１４７Ｐｍ内照射可诱发细胞凋亡。     

大鼠急性脑损伤后神经元类凋亡的观察

目的：观察急性脑损伤后神经元凋亡现象。方法：以大鼠急性弥漫性脑创伤模型为研究对象，采用光镜、电镜观察方法对模型的损伤情况进行组织、细胞形态观察；以DNA－梯形凝胶电泳、凋亡细胞原位末端标记法（TUNEL）对急性脑损伤后鼠脑皮层、海马区神经元DNA损伤情况进行观察。结果：大鼠致伤后，光镜下观察到神经元出现皱缩变性；电锏 上观察发现，伤后2h可观察到神经元类凋亡，24h最为严重，持续到7d；DNA－梯形凝胶电泳显示伤后24h海马及皮层区出现DNA梯状电泳；神经元TUNEL染色伤后2h即可见，24h最为明显，7d时仍高于正常。结论：大鼠急性脑创伤后脑组织中存在神经元类凋亡现象，并在创伤后较长时间内持续存在。     

Dose-response for radiation-induced apoptosis, residual 53BP1 foci and DNA-loop relaxation in human lymphocytes

The purpose was to compare the radiation-induced apoptosis in human lymphocytes with DNA-loop relaxation and DNA damage as a function of radiation dose and time after exposure. Morphological changes were analysed by staining with fluorescent dyes and apoptotic fragmentation of DNA with conventional agarose gel electrophoresis, pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) and alkaline comet assay. Viability was estimated by trypan blue assay. The levels of protein p53 (TP53) were determined with Western blot. Relaxation of DNA-loops was analysed by the method of anomalous viscosity time dependence (AVTD) and neutral comet assay. Induction and repair of double-strand breaks (DSB) was studied by PFGE and by immunostaining of the TP53 binding protein 1 (53BP1). At various time points of apoptosis, there was a linear dose dependence for all apoptotic end-points up to 1-2 Gy followed by a plateau at higher doses. Immediately after irradiation, relaxation of DNA-loops due to strand breaks was observed. This relaxation had a similar dose-response with saturation at 2-3 Gy. This dose induced approximately one single-strand break (SSB) per 2 Mb of DNA, a value close to the average size of DNA-loops in resting lymphocytes. Similar saturations in dose-responses for apoptosis and DNA-loop relaxation were also observed if cells were treated by camptothecin (CPT) or etoposide VP-16, drugs that relax DNA-loops by induction of SSB and DSB, respectively. The PFGE data showed that the vast majority of DSB were repaired within few hours after irradiation. However, approximately 1.4 foci/Gy/cell, that corresponded to around 3.5% of initial DSB, remained in cells even 24 h after irradiation as measured with immunostaining. The probability to produce one or more than one residual foci per cell was calculated. Radiation at 2-3 Gy induced at least one residual 53BP1 focus per cell. The dose-responses for DNA-loop relaxation, induction of at least one residual 53BP1 foci per cell and apoptosis saturated at 2-3 Gy. The correlation between dose-responses obtained suggested that the DSB in residual foci and relaxation of DNA-loops may be linked to induction of radiation-induced apoptosis in lymphocytes.