乙醇及其代谢产物对心肌祖细胞的毒性及H3K9表突变作用

目的 探讨乙醇及其代谢产物对心肌祖细胞的毒性作用及H3K9表突变作用.方法 以心肌祖细胞株为研究对象,分别用不同剂量乙醇(200、100、50 mmol/L)、乙醛(16、12、8、4 mmol/L)和乙酸(16、12、8、4 mmol/L)处理.应用MTT实验筛选出乙醇及其代谢产物的干预浓度,Western blot检测组蛋白H3K9乙酰化作用,实时定量PCR检测心脏发育相关基因GATA4、Mef2c、Tbx5 mRNA表达量的变化.结果 MTT结果显示低浓度组50 mmol/L乙醇、4 mmol/L乙醛、4 mmol/L 乙酸的细胞活力与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),不影响心肌祖细胞增殖;高浓度组200 mmol/L乙醇、12 mmol/L乙醛、16 mmol/L乙酸对心肌祖细胞抑制率分别为31.5%、36.0%、32.1%,抑制细胞增殖(P<0.05).低浓度组乙醇、乙酸分别使组蛋白H3K9乙酰化水平升高2.4、2.2倍(P<0.05).心脏发育相关基因表达无明显变化(P>0.05);高浓度组乙醇、乙酸分别使组蛋白H3K9乙酰化水平升高5.3、5.6倍,同时心脏发育相关基因GATA4、Mef2c表达均增加,与对照组及相应低浓度组比较均有统计学差异(P<0.05);乙醛则无论低浓度还是高浓度对组蛋白H3K9乙酰化水平及基因表达均无明显影响(P>0.05).结论 高浓度的乙醇及其代谢产物对心肌祖细胞均有毒性作用,而乙醇及乙酸具有组蛋白H3K9表突变作用,可能为酒精致先心病发病机制之一.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对人骨肉瘤细胞生长的影响

目的 观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)在体内及体外对人骨肉瘤细胞的作用机制.方法 本实验应用两种不同类型的HDACIs:辛二酰基酰替苯胺异羟肟酸(SAHA)和丁酸钠(SB),评价其在体内和体外对人骨肉瘤细胞(SaOS2、U2OS)生长的影响.应用甲基甲苯基硫细胞检测(MTS)法检测细胞增殖活性,流式细胞技术和蛋白免疫印迹法检测细胞周期和组蛋白乙酰化程度.结果 MTS显示SAHA及SB浓度由0,0.04 μmol/L每5倍递增,最大剂量625 μmol/L,SaOS2 A值分别由1.8降至0.46,1.8降至0.7;U2OS细胞A值分别由1.62降至0.37,1.63降至0.53.SAHA和SB对SaOS2和U2OS细胞生长的抑制具有明显的浓度依赖性.蛋白免疫印迹法显示HDACIs治疗后,组蛋白H3乙酰化水平上升,SAHA处理后SaOS2和U2OS细胞的乙酰化H3与对照组组蛋白乙酰化水平比值分别为1.4和1.7;SB处理后的比值分别为1.2和1.3.流式细胞技术显示SAHA将细胞阻滞在分裂周期的G1和G2/M期,而SB将细胞阻滞在分裂周期的G2/M期.同时,肿瘤抑制因子的效果在小鼠动物模型上得到了有效的验证,SAHA组(2.0 mg/kg)第1天肿瘤体积103.8 mm3,28 d后相比对照组明显减小(1040 mm3比1465 mm3);SB组(50 mg/kg)第1天肿瘤体积103.0 mm3,第28天后相比对照组明显减小(1040 mm3比1465 mm3).结论 SAHA和SB能够阻滞小鼠模型体内的SaOS2细胞.SAHA和SB可抑制了人骨肉瘤细胞生长,阻碍了细胞周期进程.     

Islet-1诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化过程中对心肌特异蛋白基因上组蛋白乙酰化的促进作用

目的研究Islet-1诱导C3H10T1/2细胞定向分化为心肌样细胞过程中表达增加的心肌特异蛋白基因GATA4、NKX2.5、MEF2c上组蛋白乙酰化水平的变化情况。方法 Islet-1基因慢病毒感染小鼠骨髓间充质干细胞C3H10,Western blot检测转染后乙酰化的组蛋白H3表达情况,逆转录及实时荧光定量PCR时序性检测出心肌特异性蛋白基因GATA4、NKX2.5、MEF2c的mRNA表达达高峰的时间点,采用染色质免疫共沉淀技术(chromatin immunoprecipitation,CHIP),用CHIP级乙酰化H3抗体免疫沉淀与其所结合的DNA,采用实时荧光定量PCR扩增抗体所富集的心肌特异性蛋白基因GATA4、NKX2.5、MEF2c启动子区域的DNA量,比较感染组和未感染组与抗体所结合的上述3种心肌特异蛋白基因的表达情况。结果感染高表达Islet-1的C3H10T1/2细胞组蛋白H3的乙酰化水平较未感染组升高3.04倍(P<0.05),在心肌特异性蛋白基因GATA4、NKX2.5、MEF2C的mRNA表达达高峰的2周时间点,乙酰化的H3抗体所结合的心肌特异性蛋白基因GATA4、NKX2.5、MEF2c与未转染Islet-1的细胞组相比较,表达增加(P<0.05)。结论高表达Is-let-1之后C3H10T1/2细胞定向分化为心肌样细胞过程中表达增加的心肌特异蛋白基因上组蛋白乙酰化水平增高。     

Promotion effects of islet-1-induced C3H10T1/2 cells differentiation into myocardial cells on histone acetylation of cardiac-specific genes

目的 研究Islet-1诱导C3 H10 T1/2细胞定向分化为心肌样细胞过程中表达增加的心肌特异蛋白基因GATA4、NKX2.5、MEF2c上组蛋白乙酰化水平的变化情况.方法 lslet-1基因慢病毒感染小鼠骨髓间充质干细胞C3H10,Western blot检测转染后乙酰化的组蛋白H3表达情况,逆转录及实时荧光定量PCR时序性检测出心肌特异性蛋白基因GATA4、NKX2.5、MEF2c的mRNA表达达高峰的时间点,采用染色质免疫共沉淀技术(chromatin immunoprecipitation,CHIP),用CHIP级乙酰化H3抗体免疫沉淀与其所结合的DNA,采用实时荧光定量PCR扩增抗体所富集的心肌特异性蛋白基因GATA4、NKX2.5、MEF2c启动子区域的DNA量,比较感染组和未感染组与抗体所结合的上述3种心肌特异蛋白基因的表达情况.结果 感染高表达Islet-1的C3H10T1/2细胞组蛋白H3的乙酰化水平较未感染组升高3.04倍(P＜0.05),在心肌特异性蛋白基因GATA4、NKX2.5、MEF2C的mRNA表达达高峰的2周时间点,乙酰化的H3抗体所结合的心肌特异性蛋白基因GATA4、NKX2.5、MEF2c与未转染Islet-1的细胞组相比较,表达增加(P＜0.05).结论 高表达Islet-1之后C3H10T1/2细胞定向分化为心肌样细胞过程中表达增加的心肌特异蛋白基因上组蛋白乙酰化水平增高.     

CBP/P300介导的组蛋白H3K9乙酰化修饰对GATA4表达的影响

目的 明确GATA4在小鼠胚胎心脏发育过程中的时序表达,并阐明其组蛋白修饰调控机制.方法 选取胎龄11.5 d(E11.5)至新生0.5d胎鼠心脏,RT-PCR检测胎鼠心肌细胞中GATA4mRNA表达水平,CHIP-QPCR检测GATA4启动子区组蛋白H3K9ac水平及与CBP/P300的结合水平.用CBP30干预心肌祖细胞,RT-PCR检测心肌祖细胞在不同浓度CBP30(0.5、1、2、4μmol/L)干预不同时间点(6、12、24、36 h)后GATA4 mRNA表达水平,CHIP-QPCR检测心肌祖细胞中GATA4启动子区组蛋白H3 K9 ac水平及与CBP/P300的结合水平.结果 ①小鼠胚胎心脏发育过程中GATA4表达量,E14.5明显高于E11.5(P ＜0.05);CHIP结果显示E14.5 GATA4启动子区组蛋白H3 K9 ac水平高于E11.5(P ＜0.05);E14.5与CBP/P300的结合水平亦高于E11.5(P ＜0.05).②CBP30干预心肌祖细胞后,GATA4表达量较对照组明显降低(P＜0.05).CHIP结果显示CBP30组GATA4启动子区组蛋白H3K9ac水平及与CBP/P300的结合水平较对照组显著降低(P＜0.05).结论 CBP/P300可通过介导组蛋白H3 K9乙酰化修饰参与调控GATA4在小鼠胚胎心脏发育过程中的时序表达.     

心肌祖细胞中Tbx5启动子区的组蛋白乙酰化调控机制研究

目的 研究心肌祖细胞中Tbx5启动子区p300和CBP介导的组蛋白乙酰化修饰对Tbx5表达的调控及其修饰位点,探讨Tbx5的组蛋白乙酰化修饰调控网络。方法 体外培养胚胎心肌祖细胞,分为对照组、二甲基亚砜(DMSO)组和姜黄素组,对照组不给予额外干预,DMSO组给予DMSO干预,姜黄素组给予30 mmol/L姜黄素干预。同时,采用慢病毒载体转染胚胎心肌细胞48 h,分为对照组、GFP组和p300-RNAi组,对照组不转染,GFP组采用GFP慢病毒载体转染,p300-RNAi组采用p300-RNAi慢病毒载体转染。Western blot方法检测各组的组蛋白H3的乙酰化水平;实时荧光定量逆转录PCR检测各组Tbx5和p300 mRNA水平的表达;染色质免疫共沉淀(CHIP)-实时荧光定量逆转录PCR检测Tbx5启动子区组蛋白H3不同位点H3K4、H3K9和H3K27的乙酰化水平及Tbxt5启动子结合的p300和CBP水平。结果 姜黄素组Tbx5 mRNA相对表达水平及H3ac水平较对照组和DMSO对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。p300-RNAi组p300 mRNA...     

TGF-β2对心肌细胞H9C2转录因子表达的影响及其组蛋白H3乙酰化调控机制

目的 探讨转化生长因子-β2(transforming growth factor beta2,TGF-β2)对心肌细胞H9C2转录因子Mef2c和GATA4的影响及其与组蛋白H3乙酰化的关系.方法 比较TGF-β2对细胞生长的影响.利用Real-time PCR检测心肌细胞的心脏相关转录因子Mef2c和GATA4mRNA的相对表达量,筛选合适的TGF-β2干预浓度.采用Western blot检测心肌细胞乙酰化组蛋白H3(acetylated histone H3,acH3)的表达差异.染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP) Real-time PCR检测Mef2c和GATA4启动子区与acH3结合DNA的相对表达水平.比色分析法检测TGF-β2对心肌细胞的总体组蛋白乙酰化酶(HATs)活性的影响.结果 ①TGF-β2干预组相对于对照组心肌细胞的增殖能力增强(P＜0.05).②心肌细胞的心脏相关转录因子Mef2c和GATA4mRNA的相对表达量随着TGF-β2浓度的升高呈现先升高后降低的趋势,在5 μg/L的浓度时均达到最高,Mef2c mRNA相对表达量是对照组的1.8倍,GATA4mRNA是对照组的2.3倍(P＜0.05).③TGF-β2干预72 h后acH3蛋白表达量是对照组的4倍(P＜0.05),HATs活性是对照组的1.34倍(P＜0.05).④TGF-β2干预组Mef2c和GATA4启动子区组蛋白H3的乙酰化水平分别是对照组的2.56和2.16倍(P＜0.05).结论 5μg/L TGF-β2可以促进心肌细胞H9C2的分裂与增殖,并上调心脏相关转录因子Mef2c和GATA4的表达,组蛋白H3乙酰化水平的升高可能是Mef2c和GATA4表达上调的机制之一.     

SAHA对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞胶原蛋白表达的影响

目的探讨辛二酰苯胺异羟肟酸（SAHA）对转化生长因子-β1(TGF-β1)所诱导的人胚肺成纤维细胞（HELF）胶原表达的影响。方法体外培养人胚肺成纤维细胞系HELF,并分为空白对照组、SAHA组、TGF-β组以及SAHA＋TGF-β组。其中空白对照组加入等体积PBS;SAHA组加入5 μmol/L SAHA;TGF-β组加入终浓度为5 ng/mL TGF-β1孵育24 h;SAHA＋TGF-β组在TGF-β组基础上分别加入0.5、2.0、和5.0 mol/L SAHA,共同孵育24 h。处理结束后,获取培养上清,比色法测量羟脯氨酸(HYP)的含量,并用逆转录－聚合酶链反应（RT-PCR）检测HELF细胞中Ⅰ、Ⅲ型前胶原的mRNA表达水平。结果对照组脯氨酸表达极低,TGF-β1处理后,羟脯氨酸含量达12.684±1.485 μg/mL。当分别用0.5、2.0、和5.0 mol/L SAHA处理后,HYP含量随着SAHA浓度的增加而减少（P<0.05）;SAHA孵育24 h后,能够明显抑制TGF-β1刺激后的细胞表达Ⅰ型和Ⅲ型前胶原蛋白mRNA,并且具有明显的剂量依赖性（P<0.05）。结论SAHA能减少TGF-β1诱导的HELF羟脯氨酸含量及Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白表达,这可能是其抗纤维化的重要机制。     

KLF4上调角质形成细胞中Keratin 17表达的分子机制

  目的  通过探讨转录因子KLF4在调节角蛋白17（Keratin 17, KRT17）表达中的作用,揭示银屑病患者皮损中KRT17过度表达的分子机制。  方法  以18例寻常型银屑病患者皮损组织为银屑病组,10例健康人皮肤为对照组。采用实时荧光定量PCR和Western blot检测银屑病皮损组织及正常皮肤标本中KLF4的表达水平,检测HaCat细胞中KLF4过表达叠加组蛋白乙酰转移酶EP300（E1A binding protein p300,EP300）干扰后KRT17的表达水平。染色质免疫共沉淀（chromatin immunoprecipitation, ChIP）检测银屑病皮损组织及正常皮肤样本中KRT17启动子区KLF4结合水平及组蛋白H3乙酰化水平,检测HaCat细胞中KLF4过表达叠加EP300干扰后KRT17启动子区KLF4结合水平及组蛋白H3乙酰化水平。免疫共沉淀（co-immunoprecipitation, Co-IP）检测KLF4与EP300的相互作用。  结果  银屑病组皮损组织KLF4表达水平、KRT17启动子区KLF4结合水平及组蛋白H3乙酰化水平均高于对照组皮肤标本（P<0.01）。与转染对照组相比,KLF4过表达组KRT17表达水平升高（P<0.01）;KLF4过表达叠加EP300干扰组KRT17表达水平低于KLF4过表达组（P<0.01）和转染对照组（P<0.05）。与转染对照组相比,KLF4过表达组KRT17启动子区组蛋白H3乙酰化水平升高（P<0.01）;KLF4过表达叠加EP300干扰组KRT17启动子区组蛋白H3乙酰化水平低于KLF4过表达组（P<0.01）和对照组（P<0.01）。Co-IP证实KLF4与EP300能形成蛋白复合体。  结论  过度表达的KLF4通过协同EP300上调KRT17启动子区组蛋白H3乙酰化水平,介导银屑病患者皮损中KRT17的过度表达。     

组蛋白高乙酰化介导的Egr-1结合促进gdnf基因高转录

目的探讨大鼠C6 胶质瘤细胞中gdnf 基因启动子II 区组蛋白H3K9 高乙酰化引发该基因高转录的机制。方法采用
ChIP-PCR技术检测了大鼠C6星形胶质瘤细胞和正常星形胶质细胞中gdnf基因启动子II区转录因子Egr-1结合位点处H3K9
的乙酰化水平以及Egr-1与该启动子的结合能力;利用Real-time PCR和ChIP-PCR技术,检测了组蛋白乙酰基转移酶抑制剂姜
黄素（Curcumin）和去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（TSA）处理对C6 胶质瘤细胞中gdnf 基因启动子II 区Egr-1 结合位点处
H3K9的乙酰化水平、Egr-1与之的结合能力以及该基因转录水平的影响。结果较之正常星形胶质细胞,C6胶质瘤细胞中gdnf
基因启动子II 区Egr-1 结合位点处H3K9 的乙酰化水平显著升高,并且Egr-1 与之的结合能力也显著升高（P<0.01）。当
Curcumin显著降低了Egr-1结合位点处H3K9乙酰化水平时,Egr-1与启动子II区的结合量以及gdnf基因mRNA的表达量都显
著下调（P<0.05）;而当TSA显著升高了Egr-1 结合位点处H3K9 乙酰化水平时,Egr-1 与启动子II 区的结合量以及gdnf 基因
mRNA的表达量都显著升高（P<0.05）。结论在大鼠C6胶质瘤细胞中gdnf基因启动子II区H3K9高乙酰化介导的Egr-1结合
量升高可能是其高转录的原因。
     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

喉癌主癌灶手术切缘的临床特点分析

目的探讨研究喉癌主癌灶手术的安全切缘在临床上的特点。方法回顾性分析2007年6月—2011年3月已经确诊喉癌的患者100例,随机分成A、B两组,A组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取镜下观察分析;B组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取肉眼观察分析,将结果进行临床特点分析比较。结果早期的喉癌患者和晚期的喉癌患者的阳性切缘例数,差异无统计学意义（P〉0.05）;晚期的阳性切缘发生次数高于早期的阳性切缘发生次数,差异有统计学意义（P〈0.05）。声门上区[SG]2、3和5、10mm;跨声门型[TG]2、3mm和5、10mm的切缘对比,差异有统计学意义（P〈0.05）。SG、G、TG、IG的2mm和3mm,5mm和10mm对,差异无统计学意义（P〉0.05）。肉眼阳性切缘观察39个,镜下阳性切缘观察43,两者差异无统计学意义（P〉0.05）。结论依据原发不同部位、不同分期和不同范围选取适合的切线,就可以有效地减少阳性切缘的发生。     

儿童腹痛328例病因诊断及分析

目的：根据儿童急性腹痛的特点,诊断儿童腹痛应综合临床及相关检查提供的依据,做出准确诊断,给予适当治疗。方法：对临床328例腹痛患儿进行选择性辅助检查和分析。结果：小儿腹痛病因复杂,腹腔内疾病占64．63％,共17种病因;腹腔外疾病占35．37％,共6种病因。结论：仔细询问病史、认真体格检查、密切观察病情、针对性地选择辅助检查,在儿童腹痛的诊断上具有重要的意义。