牡荆素对大鼠心肌缺血再灌注损伤诱导细胞凋亡的影响

目的 探讨牡荆素(vitexin)对大鼠缺血/再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响及其相关机制.方法 成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为6组:对照(CON)组,缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)组,牡荆素3个剂量组(VT,100、50、25 μmol/L)及葛根素阳性对照组(120μmol/L).应用Langendorff灌注技术,给予心脏30 min缺血/60 min再灌注,通过TUNEL检测和电镜观察细胞超微结构研究细胞凋亡以及免疫组化技术检测Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 与CON组相比,I/R组心肌缺血/再灌注后心肌凋亡细胞(TUNEL染色)数量、凋亡率明显增加;与I/R组相比,VT(100、50、25 μmol/L)组心肌缺血/再灌注后心肌凋亡细胞(TUNEL染色)数量明显减少(P＜0.01);I/R组心肌Bax蛋白表达明显高于VT组心肌(P＜0.01),VT组心肌Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax比值明显高于I/R组心肌(P＜0.05).结论 牡荆素可通过增加Bcl-2蛋白表达,减少Bax蛋白表达而减少I/R诱导的大鼠心肌细胞凋亡.     

益气活血方对心肌梗死大鼠梗死边缘区心肌细胞舒缩功能和Ca2+调节相关蛋白表达的影响

目的：探讨益气活血方对心梗大鼠梗死边缘区心肌细胞舒缩功能和Ca²⁺调节相关蛋白表达的影响。方法：雄性SD大鼠随机分组,制备心肌梗死动物模型,分为模型组、益气活血方组、美托洛尔组、假手术组,4周后取材及行急性心肌细胞分离实验,进行单细胞收缩与钙瞬变同步测量、检测肌浆网钙泄漏、测定大鼠心肌RYR2,SERCA2α蛋白表达情况。结果：与模型组比较,益气活血方能够显著提高心肌梗死边缘区心肌细胞最大收缩速率、最大舒张速率、50%收缩时间、50%舒张时间(P<0.01),增加心肌细胞收缩幅度(P<0.01),减少心肌细胞收缩达峰时间(P<0.01)。益气活血方组钙离子消除时间常数显著下降(P<0.01),心肌细胞钙泄漏显著下降(P<0.05);RYR2的表达显著增加(P<0.05)。结论：益气活血方对心肌梗死边缘区心肌细胞的舒缩能力有显著的改善作用,这种作用通过影响心肌细胞钙瞬变产生,益气活血方对心肌梗死后肌浆网和线粒体重要的Ca²⁺调节蛋白有调节作用,这种调节作用与心律失常的易感性和心功能改善表现相一致。     

卡维地洛和美托洛尔对大鼠缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响

目的观察卡维地洛和美托洛尔对大鼠缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡及caspase-3、p53的影响。方法取SD大鼠32只,随机分为假手术组、I/R组、卡维地洛组、美托洛尔组,每组8只。通过结扎和放松大鼠左冠状动脉前降支（LAD）造成心肌缺血再灌注损伤。采用末端标记原位细胞凋亡法检测心肌凋亡细胞,采用免疫组化法测caspase-3、p53蛋白表达。结果 I/R组caspase-3、p53表达和心肌细胞凋亡指数较假手术组明显升高（P〈0.05）,卡维地洛组和美托洛尔组各项指标较I/R组明显降低（P〈0.05）,卡维地洛组各指标较美托洛尔组明显降低（P〈0.05）。结论 p53和caspase-3在缺血诱导的心肌细胞凋亡中发挥重要作用。卡维地洛和美托洛尔均可抑制心肌细胞凋亡,对缺血再灌注损伤心肌细胞有保护作用,且卡维地洛作用优于美托洛尔。     

腺苷对大鼠缺血再灌注心肌IGF-1蛋白的影响

目的观察腺苷对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡与胰岛素样生长因子-1（IGF-1）蛋白的关系。方法取Wistar大鼠24只,随机分成3组,随机分为假手术组（iv组）、缺血再灌注模型组（I/R组）、缺血再灌注后腺苷处理组（AD组）,每组8只。通过结扎大鼠左冠状动脉前降支（LAD）30min和灌注2h造成心肌缺血再灌注损伤。采用TUNEL法观察心肌细胞凋亡;利用免疫组化法检测IGF-1蛋白的表达。结果 I/R组心肌细胞凋亡指数和IGF-1蛋白表达较iv组升高（P〈0.05）;与I/R组相比,AD组心肌细胞凋亡指数明显降低,而IGF-1蛋白表达明显升高（P〈0.05）。结论腺苷可抑制心肌细胞凋亡,明显提高IGF-1蛋白表达水平,对缺血再灌注损伤心肌有保护作用。提示腺苷可减轻心肌缺血再灌注损伤,作用机制与提高IGF-1蛋白表达水平和抗心肌细胞凋亡作用有关。     

腺苷后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤后HSP70表达及心肌细胞凋亡的影响

目的通过观察腺苷后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤后热休克蛋白70（HSP70）表达及凋亡的影响,探讨腺苷后处理对心肌缺血再灌注损伤的保护机制。方法 24只成年雄性Wistar大鼠随机分为假手术对照组（Sham组）、缺血再灌注组（I/R组）、腺苷后处理组（AD组）,采用结扎大鼠左冠状动脉前降支法制备大鼠心肌缺血再灌注模型;免疫组化SABC法检测HSP70表达;采用DNA原位末端缺口标记法（TUNEL）检测心肌细胞凋亡。结果与假手术组比较,I/R组与AD组HSP70表达水平均升高（P〈0.05）,且AD组明显高于I/R组（P〈0.05）。心肌细胞凋亡率,I/R组与AD组较假手术组增高（P〈0.05）,且AD组明显低于I/R组（P〈0.05）。结论腺苷后处理可增加心肌缺血再灌注损伤大鼠HSP70的表达,减轻心肌细胞凋亡,有效保护心肌缺血再灌注损伤。     

心脏"阴阳自和"与心肌细胞自噬

心肌细胞自噬是一种心脏处于自组织调控下的稳态(阴阳自和),可以消除受损的细胞器,产生新的营养物质,协助细胞度过缺血期.本文围绕心肌缺血/再灌注(I/R)过程中的心脏阴阳失和时心肌细胞自噬作用进行综述.     

紫苏梗影响结肠平滑肌细胞收缩作用的实验研究

[目的]观察紫苏梗水提液对肢体缺血再灌注大鼠离体结肠平滑肌细胞运动的影响,并探讨其作用机制.[方法]建立肢体缺血/再灌注大鼠胃肠动力障碍模型.酶法分离大鼠结肠平滑肌细胞,采用图像分析系统测定细胞长度,利用工具药探讨机制.[结果]肢体缺血,再灌注后,结肠平滑肌细胞平均长度明显增加.紫苏梗水提液可明显增加模型大鼠结肠平滑肌细胞的收缩率,最适剂量为50g/L.钙鳌合剂(EGTA)和钙通道阻断剂盐酸维拉帕米均可完全抑制紫苏梗水提液对结肠平滑肌细胞的收缩作用.[结论]紫苏梗水提液对肢体缺血再灌注大鼠离体单个结肠平滑肌细胞有明显的收缩作用,其作用主要通过胞外Ca2+内流介导.     

环孢素A在老龄大鼠心肌缺血再灌注时的细胞保护作用机制探讨

目的研究在体老龄大鼠心肌缺血再灌注模型钙调神经磷酸酶（CaN）活性变化和环孢素A（CSA）的细胞保护作用。方法实验用Wistar老龄大鼠随机分为假手术组（sham组）、缺血再灌注组（I／R组）及CSA组．CSA组给予CSA10mg／（kg·d）腹腔注射．10d后建立大鼠在体心肌I/R模型．IR组及CSA组结扎左冠状动脉前降支30min复灌3h．Sham组仅穿线,不结扎。定磷法检测CaN活性,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率。结果I/R后CaN的活性升高．心肌细胞凋亡率增加。CSA干预后心肌CaN的活性比I/R组明显下降（P〈0．05）．心肌细胞凋亡率也显著下降（P〈0．05）。结论老龄大鼠心肌I/R损伤时．应用CSA能够通过抑制CaN信号转导途径,降低心肌细胞凋亡率．产生心肌细胞保护作用。     

丹参总酚酸对心肌缺血再灌注损伤保护作用的机制研究

目的:研究丹参总酚酸(TSA)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用,阐明其作用机制.方法:采用Langendorff离体心脏恒压灌流模型,30只雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组(I/R组)及丹参总酚酸组(TSA组).空白对照组用Krebs-Henseleit(K-H)液持续灌注100 min;I/R组(K-H液灌流稳定20 min后,停灌40 min,复灌40 min);TSA组(复灌K-H液中含TSA 0.2 g·L-1,其他同I/R组).动态检测心室内压,测定冠脉流量(CF)及心脏再灌流出液肌酸激酶(CK)活性变化,同时光镜下观察心肌细胞病理组织形态学变化,蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测心肌匀浆、细胞胞浆及线粒体蛋白激酶Cε(PKCε)的表达.结果:与I/R组相比,TSA能明显改善缺血/再灌后的心功能,增加冠脉流量,减弱冠脉流出液中CK的活性(P ＜0.05 ～P＜0.01),可使心肌细胞损伤程度减轻,增加心肌细胞PKCε蛋白表达,并促进PKCε由细胞质向线粒体的转位.结论:TSA对心肌I/R损伤具有明显保护作用,PKCε的激活及转位可能是TSA保护心肌细胞信号传导通路的组成部分.     

蜂胶黄酮对培养大鼠乳鼠心肌细胞游离钙离子的影响

目的 探讨蜂胶黄酮对培养大鼠乳鼠心肌细胞内游离钙离子的影响及其作用机制.方法 原代培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,用钙敏荧光探针Fura-2/ AM负载染色后,采用阳离子测定系统,检测给药前后心肌细胞游离钙离子浓度[Ca2+]i及心肌细胞钙瞬变.结果 (1)静息状态下,心肌细胞[Ca2+]i为(83.3±11.7) nmol/L(x±s,n=6),终质量浓度分别为0.2、1、5μg/mL蜂胶黄酮对静息[Ca2+]i无影响.(2) KC1、Iso能明显升高[Ca2+]i(P ＜0.01),预孵蜂胶黄酮能抑制KCl及Iso引起的[Ca2+]i增高(P＜0.01);(3)蜂胶黄酮能降低心肌细胞钙瞬变峰值,抑制钙瞬变频率,对KCl、异丙肾上腺素诱导心肌细胞钙瞬变变化具有抑制作用.结论 蜂胶黄酮可抑制心肌细胞内钙超载,其作用机制可能与影响钙通道及细胞内钙释放有关.     

Effect of the total saponins of Aralia elata (Miq) Seem on cardiac contractile function and intracellular calcium cycling regulation

Ethnopharmacological relevance

Total saponins of Aralia elata (Miq) Seem (AS) from the Chinese traditional herb Longya Aralia chinensis L. can improve cardiac function, although the active mechanism remains poorly understood. The present study aimed to determine the direct effect of AS on cardiac function in dogs and the effects on Ca²⁺ transient and contractions in isolated rat cardiomyocytes.

Material and Methods

In anesthetized dogs, hemodynamic indexes and myocardial oxygen consumption were determined before and after AS was administered. In isolated adult rat cardiomyocytes, contractile and intracellular Ca²⁺ properties were determined simultaneously in real time by using an IonOptix MyoCam system.

Results

Our results showed that AS directly induced a positive inotropic effect and improved coronary blood flow and energy metabolism, indicating that AS induced a beneficial effect to treat myocardial ischemia/reperfusion injury. Moreover, AS increased sarcomere shortening, maximal velocity of shortening/relengthening (±dL/dt), amplitude of [Ca²⁺]_i transients and SERCA activity in a concentration-dependent manner. PKCε was also activated after the cells were treated with AS.

Conclusion

These findings revealed the positive inotropic effect of AS on canine myocardium and isolated rat cardiomyocytes. This effect was possibly associated with an increase in amplitude of the [Ca²⁺]_i transient and PKCε-dependent signaling pathway.     

小檗碱对DHF大鼠血流动力学和心肌细胞内钙离子浓度的影响

目的:观察小檗碱(Ber)对舒张性心力衰竭(diastole heart failure,DHF)大鼠血流动力学和心肌细胞内钙离子浓度[Ca²⁺]_i的影响。方法:Wistar大鼠腹主动脉缩窄法建立DHF模型;术后4周,模型大鼠随机分为DHF模型组,Ber高、中、低剂量组(63,42,21mg·kg^-1.d^-1)4组(n=10),另有假手术组10只。连续给药4周后,应用十六导生理记录仪测定血流动力学指标;用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)扫描用Fluo-3AM负载好的心肌细胞内的荧光强度(FI)来表示[Ca²⁺]_i。结果:模型组与假手术组比,左心室收缩压(LVSP)、左室内压最大上升速率(+dp/dt_max)无显著变化,左心室舒张末期内压(LVEDP)显著升高(P<0.01),左室内压最大下降速率(-dp/dt_max)显著降低(P<0.01),左室松弛时间常数(T)数值显著延长(P<0.01);心肌细胞内[Ca²⁺]_i明显增高(P<0.05)。与模型组比较,Ber高剂量组比中剂量组低剂量组更显著降低LVEDP,显著升高-dp/dt_max(P<0.01),显著缩短T(P<0.01),显著降低心肌细胞内[Ca²⁺]_i(P<0.01)。结论:Ber高剂量组可以明显改善DHF大鼠血流动力学和降低心肌细胞内[Ca²⁺]_i。     

环维黄杨星D对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用和对心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的:研究环维黄杨星D(CVB-D)对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用和对急性分离大鼠心肌细胞内游离Ca²⁺浓度的影响。方法:采用培养的乳鼠心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,测定心肌细胞搏动频率、细胞存活率、肌酸激酶(CK)的含量;应用特异性荧光指示剂Fluo-3/AM负载急性分离的大鼠心肌细胞,用激光共聚焦显微镜检测胞内游离钙的变化。结果:缺氧/复氧损伤+环维黄杨星D组(H/R+CVB-D)乳鼠心肌细胞搏动频率、细胞存活率与缺氧/复氧损伤组比较明显升高,CK含量与缺氧/复氧损伤组比较明显下降。对急性分离大鼠心肌细胞内[Ca²⁺]i逐步升高,并呈剂量依赖性;在有外钙和无外钙时,CVB-D对胞内钙的升高有显著差异(P<0.05);在无外钙并加入内罗啶孵育后,CVB-D引起的胞内[Ca²⁺]i轻度升高,但与无钙组相比无显著性差异(P>0.05)。结论:环维黄杨星D对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤有保护作用,对急性分离大鼠有升高心肌细胞内游离钙离子浓度的作用,[Ca²⁺]的升高既源于内钙释放又源于外钙内流。     

绞股蓝总皂甙和人参总皂甙对大鼠急性心肌缺血心脏舒张功能保护作用的比较

 目的：评价绞股蓝总皂甙(Gyp)对大鼠急性心肌缺血心脏舒张功能保护作用，并同人参总皂甙(Gin)做比较。方法：用SMUP-160心功能测定软件，分别测定正常对照，提前给予Gyp(iv,40 mg/kg)和Gin(iv，40 mg/kg)组大 鼠心脏的舒张功能。结果:Gyp(iv,40mg/kg)对麻醉大鼠基础心功能无影响。Gin(iV,40 mg/kg)可显著降低心室收 缩崃压（LVSP）和心率（HR）（P<0.05或P<0.01),一过性降低心室压最大上升和下降速率（士dP/dt_max)和心肌纤维零负荷下最大缩短速率(V_max)，对等容舒张期压力下降时间常数T无影响。结扎大鼠冠脉左前降支即刻引起左室舒张功能损伤并于10min达到峰值，表现为等容收缩相T值显著延长，-dP/dt_max和-dP/dt_max·LVSP^-1明显降低，心室舒张末压（LVEDP)则明显升高。冠脉结扎前给予Gyp或Gin可显著（P<0.05或P<0.01)拮抗T值的延长，LVEDP的抬高和-dP/dt_max,-dP/dt_max·LVSP^-1的降低。结论:Gyp和Gin对大鼠实验性心肌缺血心脏舒张功能均有明显的保护作用。同Gyp相比,Gin似能更有效地改善急性心肌缺血所致LVEDP的抬高。     

Effects of Total Flavones from Acanthopanax senticosus on L‐type Calcium Channels,Calcium Transient and Contractility in Rat Ventricular Myocytes

Acanthopanax senticosus (Rupr. et Maxim.) Harms (AS), a traditional herbal medicine, has been widely used to treat ischemic heart disease. However, the underlying cellular mechanisms of its benefits to cardiac function remain unclear. The present study examined the effects of total flavones from AS (TFAS) on L‐type Ca²⁺ channel currents (I_Ca‐L) using the whole cell patch‐clamp technique and on intracellular calcium ([Ca²⁺]_i) handling and cell contractility in rat ventricular myocytes with the aid of a video‐based edge‐detection system. Exposure to TFAS resulted in a concentration‐ and voltage‐dependent blockade of I_Ca‐L, with the half‐maximal inhibitory concentration (IC₅₀) of 283.12 µg/mL and the maximal inhibitory effect of 36.49 ± 1.95%. Moreover, TFAS not only increased the maximum current in the current–voltage relationship but also shifted the activation and inactivation curves of I_Ca‐L toward the hyperpolarizing direction. Meanwhile, TFAS significantly reduced amplitudes of myocyte shortening and [Ca²⁺]_i with an increase in the time to 10% of the peak (Tp) and a decrease in the time to 10% of the baseline (Tr). Thus, the cardioprotective effects of TFAS may be attributed mainly to the attenuation of [Ca²⁺]_i through the direct inhibition of I_Ca‐L in rat ventricular myocytes and consequent negative effect on myocardial contractility. Copyright © 2015 John Wiley & Sons, Ltd.     

氧化苦参碱对豚鼠单个心室肌细胞胞浆[Ca2+]i的影响

 目的 观察氧化苦参碱对急性分离的豚鼠单个心室肌细胞内游离钙离子浓度([Ca²⁺]_i)的影响。方法 采用酶解法分离豚鼠单个心肌细胞,用钙敏感的荧光指示剂Fluo-3/AM染色,以荧光强度(FI)来代表[Ca²⁺]_i,应用激光扫描共聚焦显微技术动态监测FI的变化。结果 在静息状态下,10μmol·L^-1氧化苦参碱对[Ca²⁺]_i无明显影响;但10μmol·L^-1氧化苦参碱对60mmol·L^-1KCl介导的外钙内流却有明显抑制作用(P<0.05)。结论 氧化苦参碱对电压依赖性钙通道(VDC)具有明显抑制作用,这可能是其抗心律失常作用机制之一。     

隔山香正丁醇部位对大鼠胸主动脉的舒张作用及机制的影响

目的:研究隔山香(Lemonfragrant Angelica Root,LAR)正丁醇部位对大鼠胸主动脉环的舒张作用,并探讨其可能的作用机制。方法:采用离体大鼠胸主动脉血管环灌流方法,考察0.34,0.65,1.22 g·L-1隔山香正丁醇部位对氯化钾(KCl)和去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)预收缩的血管环张力的影响。在无Ca2+Kreb’s液中,考察0.34,0.65,1.22 g·L-1隔山香正丁醇部位对氯化钙(Ca Cl2)量效曲线的影响和NE预收缩的血管环张力的影响。激光共聚焦扫描显微镜检测平滑肌细胞内[Ca2+]i的变化。结果:隔山香正丁醇部位对KCl和NE预收缩的内皮完整和去除内皮血管环均具有浓度依赖性的舒张作用(P0.01),并且去除内皮后的舒张作用未受影响;无Ca2+条件下,隔山香正丁醇部位能使Ca Cl2,NE预收缩强度显著性降低(P0.01)。激光共聚焦扫描显微镜下,隔山香正丁醇部位(1.22 g·L-1)能抑制KCl,NE和毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)引起的平滑肌细胞内[Ca2+]i升高。结论:隔山香正丁醇部位对大鼠胸主动脉血管有一定的舒张作用,可能通过抑制外钙内流和内钙释放发挥作用。本实验为隔山香水蒸气蒸馏后煎煮入药的成药制备工艺和水溶性药效指标成分的分离提供了依据。     

白藜芦醇对大鼠离体胸主动脉环的舒张作用

目的:观察白藜芦醇(resveratrol,RVL)对大鼠离体胸主动脉血管的舒张作用并探讨其机制。方法:采用离体血管环灌流方法,观察RVL在含Ca²⁺或无Ca²⁺ Krebs液孵育条件下对去甲肾上腺素(NA)引起的血管平滑肌收缩的影响;同法观察RVL对30,80mmol·L^-1的KCl引起的血管平滑肌收缩的影响;RVL对NA引起的依赖于细胞内钙和细胞外钙收缩反应的影响,以及加入N-G-硝基-L-精氨酸(L-NNA)和优降糖后RVL舒张大鼠离体主动脉环效应的变化。结果:RVL呈浓度依赖性舒张NA引起的血管收缩;无Ca²⁺ 组RVL抑制NA所致血管平滑肌收缩效应大于含Ca²⁺ 组;RVL能够拮抗NA诱发的依内钙的收缩反应,而对外钙收缩无抑制。RVL对80,30mmol·L^-1 的KCl引起的血管平滑肌收缩均有抑制作用,且前者量效曲线明显上移。L-NNA使RVL舒血管效应降低(26.0±4.6)%;优降糖组的血管舒张受抑程度与对照组无显著差别(P>0.05)。结论:RVL可呈内皮依赖性舒张血管平滑肌,其作用机制可能与该药促进NO合成释放,开放钙激活的钾通道以及抑制血管平滑肌细胞外钙内流和内钙释放有关。     

木犀草素对大鼠主动脉的舒张作用及相关机制研究

 目的观察木犀草素的舒血管作用并探讨其作用机制。方法大鼠胸主动脉环张力测定法。结果在内皮完整及去内皮血管上,木犀草素均浓度(4.5～36 μmol·L^-1)依赖性地降低苯肾上腺素(PE)预收缩血管的张力,拮抗高钾引起的血管收缩;木犀草素使PE收缩曲线非平行右移,且使最大张力减小;L-NAME,propranolol对木犀草素的舒血管作用无显著影响;钾通道阻断剂TEA,4-AP,BaCl₂,5-HD均能显著减弱木犀草素的血管舒张作用;木犀草素可以显著地对抗无钙、无钾、无钙环境下渐复钙后由PE引起的血管收缩。结论木犀草素对血管的舒张作用表现为非内皮依赖性,其舒张作用与其直接抑制电压依从性钙通道、受体操纵性钙通道、细胞内钙释放,以及激活钾通道有关,而与α,β受体无关。     

莲心碱对家兔主动脉条收缩性能的影响

 目的　观察莲心碱 (liensinine,Lien)对氯化钾(KCl),去甲肾上腺素(NE)和组织胺(Hist)所致家兔主动脉条收缩的作用。并研究其对血管条依内钙性收缩和依外钙性收缩的影响。方法　离体平滑肌实验方法。结果　不同剂量Lien及维拉帕米(Ver)对KCl,NE,Hist诱导的主动脉条均呈抑制作用,并可非竞争性拮抗组胺的量效曲线,PD₂′值分别为4.31,6.89。Lien和Ver均能抑制组胺诱导的依内钙收缩,而对依外钙收缩作用较弱。结论　Lien可舒张兔主动脉条,该作用与钙离子拮抗有关,且对主动脉依内钙性收缩的敏感性大于依外钙性收缩。