左归降糖益肾方对2型糖尿病肾病小鼠足细胞凋亡的影响

目的探讨左归降糖益肾方治疗糖尿病肾病(DN)的效果及可能作用机制。方法 40只MKR小鼠随机分为MKR鼠组、模型组、中药组和西药组,每组10只,同期另设10只C57小鼠为对照组。模型组、中药组、西药组均予高脂饮食联合右肾切除建立糖尿病肾病模型,术后8周中药组给予左归降糖益肾方溶液28g/(kg·d),西药组给予格列喹酮片7.9mg/(kg·d)和贝那普利片1.3mg/(kg·d),其余各组均以等量蒸馏水灌胃,每日1次,连续8周。检测各组小鼠空腹血糖、尿微量白蛋白(Um A1b)、肾小球足细胞凋亡水平及Bcl-2 mRNA、Bax mRNA和蛋白表达水平。结果模型组可见凋亡细胞明显增多,多数为肾小球内的足细胞,中药组及西药组足细胞凋亡情况较模型组明显减少。与对照组比较,MKR鼠组和模型组小鼠空腹血糖、Um A1b和Bcl-2、Bax mRNA和蛋白表达均明显升高,并且模型组明显高于MKR鼠组(P0.01);给药后,中药组与西药组空腹血糖、Um A1b及Bax mRNA和蛋白表达均较模型组明显降低,Bcl-2mRNA和蛋白升高(P0.01),而中药组与西药组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论足细胞凋亡参与了DN的发病,左归降糖益肾方可能通过影响Bcl-2、Bax的表达以及抑制足细胞凋亡从而保护肾脏。     

左归降糖益肾方对2型糖尿病肾病小鼠足细胞nephrin与podocin表达的影响

目的观察左归降糖益肾方对MKR转基因2型糖尿病肾病(DN)小鼠足细胞nephrin、podocin表达的影响,探讨其作用机制。方法 8周龄MKR小鼠40只随机分为4组,空白组(A组)、DN组(B组)、DN+中药组(C组)、DN+糖适平+贝那普利组(D组)。B、C、D组给予高脂饮食联合右侧肾切除造模。手术4周后,各给药组给予相应药物,4周后处死小鼠。电化学法观察小鼠空腹血糖,全自动生化仪检测血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN),ELISA法测定尿微量白蛋白(UmAlb),RT-PCR法检测nephrin、podocin mRNA表达,Western Blotting法测定nephrin、podocin蛋白表达,电镜观测足细胞形态结构。结果与A组比较,B组小鼠空腹血糖、SCr、BUN及UmAlb均明显升高(P0.01),肾小球足细胞nephrin、podocin mRNA及蛋白表达明显下调(P0.01)。给药后,与B组比较,用药组小鼠血糖、SCr、BUN及UmAlb明显下降(P0.01),肾小球足细胞nephrin、podocin mRNA及蛋白表达明显上调(P0.01,P0.05)。电镜结果显示,给药组小鼠肾小球足细胞较B组明显改善。结论左归降糖益肾方通过恢复2型糖尿病肾病小鼠足细胞nephrin和podocin的表达而保护肾脏。     

左归降糖益肾方对糖尿病肾病MKR鼠肾组织TGF-β1及CTGFmRNA表达的影响

目的:探讨左归降糖益肾方对糖尿病肾病骨骼肌特异性胰岛素样生长因子-1受体缺失转基因鼠(MKR鼠)转化生长因子-β1(TGF-β1)及结缔组织生长因子(CTGF)基因mRNA表达的影响。方法:MKR鼠60只,按性别、空腹血糖、体重随机分为4组,即空白组,模型组,左归降糖益肾方组(28.8 g·kg-1),阳性药物组(格列喹酮0.003 9 g·kg-1与盐酸贝那普利0.001 3 g·kg-1),每组15只,同龄C57鼠10只作为正常组,除正常组与空白组外,其余各组高脂喂养联合单侧肾切除造成糖尿病肾病(DN)小鼠模型,造模后8周ig给予相应药物8周,留取尿标本,心脏采血处死各组小鼠。电化学法检测空腹血糖(FBG),常规生化法检测血清肌酐(SCr),尿素氮(BUN)含量,ELISA检测尿微量白蛋白含量;并取新鲜肾组织,RT-PCR检测肾组织TGF-β1及CTGF mRNA的表达水平;其余组织4%多聚甲醛固定24 h,HE及Masson染色观察肾组织病理变化。结果:与空白组比较,模型组小鼠FBG,SCr,BUN及尿微量白蛋白含量明显升高(P0.01);与模型比较,左归降糖益肾方能明显降低DN小鼠FBG,降低SCr,BUN及尿微量白蛋白含量(P0.01);下调TGF-β1mRNA及CTGF mRNA的表达水平(P0.05,P0.01),疗效等同于阳性药物组;与空白组比较,模型组肾组织肾小球体积缩小,肾小球萎缩,球囊腔增宽,球囊腔壁层细胞增多且异形化,左归降糖益肾方能明显改善肾组织病理损伤。结论:左归降糖益肾方可以通过下调TGF-β1mRNA及CTGF mRNA的表达水平,从而抑制肾组织纤维化的发生发展。     

左归降糖益肾方对高脂饮食2型糖尿病MKR小鼠糖脂代谢及炎症反应的影响

目的:探讨左归降糖益肾方对高脂饮食转基因2型糖尿病MKR鼠糖脂代谢及炎症反应的影响。方法:用左归降糖益肾方干预治疗高脂饲料喂养的转基因2型糖尿病MKR鼠,采用电化学法测定空腹血糖浓度,采用全自动生化分析仪检测血脂和超敏C反应蛋白(hs-CRP),采用酶联接免疫吸附剂测定(ELISA)检测血清胰岛素与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果:高脂饲料喂养的MKR小鼠空腹血糖高于MKR组,但无统计学意义;血清胰岛素,血总胆固醇(TCHO),血低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),血高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),LDL-C/HDL-C,血清hs-CRP和TNF-α水平高于MKR组(P0.01),而甘油三酯(TG)下降,低于MKR组(P0.01)。经左归降糖益肾方或文迪雅干预治疗后,高脂饮食MKR小鼠血糖、血清胰岛素,TG,LDL-C/HDL-C,血清hs-CRP和TNF-α水平显著下降(P0.05,P0.01);左归降糖益肾方组TCHO,LDL-C下降(P0.05),HDL-C上升(P0.05),而文迪雅对照组TCHO,LDL-C下降和HDL-C上升无统计学意义。结论:左归降糖益肾方能减轻高脂饮食加重的MKR鼠的胰岛素抵抗,增强外周组织对胰岛素的敏感性,调节高脂饮食MKR鼠糖脂代谢,减少炎症因子的产生。     

针刺血清调控内质网应激反应对无镁诱导培养大鼠海马神经元惊厥性损伤的保护作用

目的:观察针刺血清对无镁诱导惊厥样放电海马神经元凋亡数及内质网应激伴侣葡萄糖调节蛋白78(GRP 78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)和半胱氨酸蛋白酶蛋白-12(Caspase-12)表达的影响,探讨针刺血清对海马神经元惊厥性损伤的保护机制。方法:SD大鼠腹腔注射戊四唑诱发急性惊厥后分为针刺组及对照组。针刺组取"百会""大椎"针刺,每日1次,共7d。末次针刺后,针刺组大鼠取血清作为针刺血清,对照组取血清作为非针刺血清。以无镁诱导惊厥样放电的原代培养胎鼠海马神经元为模型,根据对培养10d海马神经元的不同处理分为正常细胞外液组(简称正常组)、无镁细胞外液组(简称无镁组)、针刺血清组和非针刺血清组。正常组将无血清培养液换成细胞外液培养3h后换液培养,其他各组用无镁细胞外液培养3h后换液培养。4组分别于换液培养2、12、48h3个时间点采用TUNEL法和Western blot法分别检测海马神经元凋亡情况及GRP 78、CHOP和Caspase-12蛋白表达情况。结果:正常组仅见少量凋亡海马神经元;无镁组3个时间点凋亡海马神经元数均较正常组明显增加(P0.01);针刺血清组3个时间点凋亡海马神经元数与无镁组比较明显减少(P0.05,P0.01),与非针刺血清组12、48h比较凋亡海马神经元数明显减少(P0.01)。与正常组比较,无镁组3个时间点海马神经元CHOP和Caspase-12蛋白表达均明显增强(P0.05,P0.01),2h时间点海马神经元GRP 78蛋白表达明显增强(P0.05);与无镁组比较,针刺血清组3个时间点神经元GRP 78蛋白表达均明显增强(P0.01,P0.05),12、48h时间点海马神经元CHOP蛋白表达明显减少(P0.05,P0.01),3个时间点神经元Caspase-12蛋白表达均显著减少(P0.05,P0.01);与非针刺血清组相比,针刺血清组2、12h时间点海马神经元GRP 78蛋白表达均明显增强(P0.01,P0.05),12、48h时间点海马神经元CHOP蛋白表达明显减少(P0.05),3个时间点海马神经元Caspase-12蛋白表达均明显减少(P0.01,P0.05)。结论:针刺血清能明显减少海马神经元凋亡数,上调GRP 78蛋白表达,下调CHOP和Caspase-12蛋白表达,发挥维持内质网稳定性的重要作用。     

龙蛭汤对衣霉素诱导人脐静脉内皮细胞内GRP78和CHOP的影响

目的探讨龙蛭汤对衣霉素(TM)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内质网应激及其标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和特异性蛋白C增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达的影响。方法制备龙蛭汤含药血清,体外培养HUVEC细胞株,分为对照组(10%空白血清),TM组(10%空白血清+3μg/mL TM),TM+龙蛭汤组(10%含药血清+3μg/mL TM),龙蛭汤组(10%含药血清),继续培养6 h。使用CCK-8法比较各组细胞活力,细胞免疫荧光法和Western Blot比较各组GRP78和CHOP蛋白表达,RT-PCR法比较各组GRP78和CHOP mRNA表达。结果与对照组比较,TM组HUVEC细胞活力下降,GRP78、CHOP蛋白及mRNA表达增加(均P0.05);与TM组比较,TM+龙蛭汤组、龙蛭汤组HUVEC细胞活力升高,GRP78、CHOP蛋白及mRNA表达降低(均P0.05)。结论龙蛭汤可通过下调GRP78、CHOP表达,减轻细胞过度的内质网应激反应,提高HUVEC细胞活力。     

蚯蚓活性组分对四氯化碳诱导小鼠内质网应激所致急性肝损伤的保护作用

该研究旨在探讨蚯蚓活性组分(EWAs)对四氯化碳(CCl_4)诱导小鼠内质网应激(ERS)所致急性肝损伤的保护作用。腹腔注射10%CCl_4制备内质网应激所致急性肝损伤模型;血清生化指标检测ALT,AST,SOD,GSH-PX酶活性及MDA含量变化;计算肝、脾指数;HE染色观察肝脏病理学变化;TUNEL法检测肝组织细胞凋亡情况;免疫组织化学法检测ERS标志性蛋白GRP78和CHOP表达情况;Western blot法检测ERS相关蛋白的表达水平。结果显示,与模型组小鼠相比,EWAs的高、中、低剂量组血清学各项指标均有显著改善(P0.05或P0.01),肝脏病变范围减小,且损伤程度明显减轻,小鼠肝脏指数和脾脏指数均有明显变化(P0.05或P0.01);各剂量给药组的肝组织细胞凋亡指数明显下降(P0.05或P0.01);肝组织中ERS相关蛋白GRP78和CHOP表达水平显著降低(P0.05或P0.01),各剂量给药组均能显著下调GRP78和CHOP以及CHOP上游信号通路PERK-eIF2α-ATF4的蛋白表达(P0.05或P0.01)。综上,EWAs对ERS所致的小鼠急性肝损伤具有显著保护作用,其机制可能通过抑制氧化应激和ERS,从而减轻肝脏损伤,并可下调ERS标志性凋亡蛋白CHOP表达,抑制细胞凋亡实现的。     

芪卫颗粒对2型糖尿病KK-Ay小鼠肾脏内质网应激IRE1通路的影响

目的观察芪卫颗粒对2型糖尿病KK-Ay小鼠肾组织内质网应激IRE1通路相关因子表达的影响。方法将12周龄的雄性KK-Ay小鼠随机分为模型组、缬沙坦组和芪卫颗粒组,每组12只;设同周龄12只雄性C57BL/6J小鼠作为正常对照组。连续灌胃12周后,检测各组空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin,HbA1c)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)及24小时尿白蛋白排泄率(24 hours urinary albumin excretion rate,24h UAER); HE染色光镜下观察小鼠肾脏基本病理形态学改变; Western blot法检测大鼠肾组织GRP78、P-IER1及XBP1蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组FBG、BUN、Scr及24h UAER水平均明显升高(P 0. 05),肾脏组织中GRP78和P-IRE1及XBP1的蛋白表达水平明显升高;与模型组组比较,芪味颗粒组的FBG、BUN、Scr及24h UAER水平均明显降低(P 0. 05),肾脏组织中GRP78和P-IRE1及XBP1的蛋白表达水平明显下降(P 0. 05)。肾脏病理结构得到改善。结论芪卫颗粒可通过降低2型糖尿病KK-Ay小鼠的FBG、BUN、Scr、24h UREA,改善肾功能,缓解肾脏病理改变;芪卫颗粒可以抑制内质网应激相关因子GRP78、P-IRE1及XBP1的表达,抑制IRE1通路激活,保护DN足细胞损伤,改善肾功能。     

白芍总苷对心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞内质网应激及凋亡的影响

目的:观察白芍总苷预处理对心肌缺血再灌注大鼠细胞内质网应激及凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:雌性SD大鼠制备大鼠心肌缺血再灌注模型,随机分为假手术组、缺血再灌注组及低、中、高剂量白芍总苷组(造模前分别予以白芍总苷50,100,200 mg·kg-1·d-1ig),观察各组动物心脏功能的变化,三苯基四氮唑(TTC)染色法测定心肌梗死面积,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测心肌组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78),凋亡促进因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及Caspase-12蛋白表达,原位细胞凋亡检测(TUNEL)方法检测细胞凋亡。结果:与假手术组比较,T波上抬及左心室舒张末期压力明显升高,左心室收缩压、左心室最大收缩期及舒张期压力变化率(±dp/dtmax)明显降低,GRP78,CHOP,Caspase-12,Caspase-3蛋白表达明显升高(P0.01),心肌梗死面积及细胞凋亡明显;与缺血再灌注组比较,白芍总苷呈剂量依赖性的降低T波上抬及左心室舒张末期压力,升高心脏左心室收缩压、左心室±dp/dtmax,降低GRP78,CHOP,Caspase-12,Caspase-3蛋白表达(P0.05,P0.01),减少心肌梗死面积及细胞凋亡。结论:白芍总苷能改善缺血再灌注的心功能、心肌梗死及凋亡,作用可能是与抑制心肌内质网应激相关蛋白GRP78表达,下调CHOP,Caspase-12,Caspase-3水平有关。     

四君子颗粒对大鼠糖尿病前期的改善作用

目的探讨四君子颗粒对大鼠糖尿病前期的改善作用。方法采用高糖高脂饮食建立糖尿病前期大鼠模型,随机分为正常组、模型组、四君子颗粒高、低剂量组(10.50、5.25 g/kg),连续灌胃10周。分别于第2、4、6、8、10周末检测FBG、FINS、GHb水平并计算Homa-IR,第10周末采用TUNEL染色法检测胰岛细胞凋亡水平,Western blot法检测胰腺组织p-PERK、GRP78、ATF4、CHOP蛋白表达。结果糖尿病前期大鼠FBG、GHb、FINS水平及Homa-IR均升高(P<0.01),胰岛中凋亡细胞增多,胰腺组织p-PERK、GRP78、ATF4、CHOP蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。给予四君子颗粒后,血清FBG、GHb、FINS水平和Homa-IR降低(P<0.05,P<0.01),胰岛细胞凋亡减少,同时,胰腺组织p-PERK、GRP78、ATF4、CHOP蛋白表达下降(P<0.05,P<0.01)。结论四君子颗粒可明显改善大鼠糖尿病前期状态,其机制可能与减轻糖尿病前期大鼠胰岛素抵抗、抑制内质网应激诱导的胰岛细胞凋亡有关。     

左归降糖舒心方对高脂饮食MKR小鼠糖脂代谢及炎症反应的影响

目的探讨左归降糖舒心方对高脂饮食转基因2型糖尿病MKR小鼠糖脂代谢及炎症反应的影响。方法用左归降糖舒心方干预治疗高脂饮食转基因2型糖尿病MKR小鼠,采用电化学法测定空腹血糖浓度,采用全自动生化分析仪检测血脂和炎症因子超敏C反应蛋白(hs-CRP),采用ELISA法检测血清胰岛素与肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果高脂饲料喂养的MKR小鼠空腹血糖高于MKR组,但无统计学意义(P>0.05);血清胰岛素、血脂(TC、LDL-C、HDL-C)、血清hs-CRP和TNF-α水平高于MKR组(P<0.01),而三酰甘油(TG)下降,低于MKR组(P<0.01)。经左归降糖舒心方或文迪雅干预治疗后,除左归降糖舒心方低剂量组血糖和hs-CRP下降不显著(P>0.05),其他各组MKR小鼠血糖、血清胰岛素、TG、血清hs-CRP和TNF-α水平显著下降(P<0.05、0.01),TC和LDL-C下降无统计学意义(P>0.05);左归降糖舒心方高剂量组HDL-C显著上升(P<0.01),而文迪雅组升高不显著(P>0.05)。左归降糖舒心方作用呈剂量依赖性。结论左归降糖舒心方能调节高脂饮食MKR小鼠糖脂代谢、减少炎症因子的产生、保护血管、降低糖尿病并发血管病变的风险。     

左归降糖方对2型糖尿病MKR小鼠脑NF-κB信号通路炎症因子的影响

目的 探讨左归降糖方对高脂饮食2型糖尿病转基因MKR小鼠脑组织NF-κB信号通路炎症因子的影响.方法 30只MKR小鼠随机分为MKR组、MKR高脂组和左归降糖方组;高脂饲料饲养MKR鼠加重体内糖脂代谢紊乱,左归降糖方组干预治疗高脂饮食MKR鼠4周,测定小鼠空腹血糖、血清胰岛素和血脂浓度,RT-PCR检测小鼠脑组织IKB、TNF-α和MCP-1基因mRNA表达变化.结果 与普通MKR小鼠比较,高脂饮食MKR小鼠空腹血糖、血清胰岛素、总胆固醇水平升高,甘油三酯水平下降,脑组织TNF-α和MCP-1基因mRNA表达水平均增加;左归降糖方降低高脂饮食MKR小鼠空腹血糖、血清胰岛素、总胆固醇以及甘油三酯水平,同时降低脑组织TNF-α、MCP-1基因mRNA表达水平.结论 左归降糖方可通过抑制高脂饮食MKR小鼠脑组织NF-κB信号通路的激活来降低炎症损伤,对脑组织具有保护作用.     

鬼针草乙酸乙酯提取物对内质网应激所致肝细胞损伤的保护作用研究

该研究旨在探讨鬼针草乙酸乙酯提取物对内质网应激所致的肝细胞损伤的保护作用及机制。衣霉素诱导L02细胞建立内质网应激损伤模型;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测鬼针草乙酸乙酯提取物对内质网应激所致L02细胞损伤的存活率;Western blot法检测内质网应激信号通路蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、真核生物翻译起始因子2α(eIF2α)、转录因子激活蛋白4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、B细胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2)、Bcl-2结合抗凋亡基因(Bax)的表达水平,同时检测加入内质网应激抑制剂(4-苯基丁酸)和shRNA沉默CHOP因子后上述表达情况;免疫荧光法检测L02细胞中GRP78、PERK、CHOP的表达水平。结果显示,鬼针草乙酸乙酯提取物显著提高内质网应激所致L02细胞损伤的存活率(P0.05或P0.01),并在一定范围内呈时间剂量依赖性。给药组的GRP78、PERK、eIF2α、ATF4、CHOP、Bax表达水平显著降低(P0.05或P0.01),Bcl-2表达水平显著升高(P0.01);加入内质网应激抑制剂和shRNA沉默CHOP因子后,GRP78、PERK、eIF2α、ATF4、CHOP、Bax表达水平显著降低(P0.01),Bcl-2表达水平显著升高(P0.01)。免疫荧光结果显示GRP78、PERK、CHOP表达情况与Western blot法检测结果一致。综上,鬼针草乙酸乙酯提取物对内质网应激所致的L02细胞损伤具有显著保护作用,其机制可能与抑制内质网应激,下调PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路所介导的细胞凋亡有关。     

黄芪汤对高糖诱导足细胞损伤的保护作用及机制研究

目的观察黄芪汤对高糖诱导足细胞损伤的影响及作用机制。方法实验分为5组:对照组足细胞采用5.5 mmol/L葡萄糖培养液培养,模型组足细胞采用30 mmol/L葡萄糖培养液培养,黄芪汤30μg/mL组、黄芪汤100μg/mL组、黄芪汤300μg/mL组分别采用30 mmol/L葡萄糖培养液和相应浓度黄芪汤进行培养。细胞培养48 h后,采用CCK-8法检测各组细胞存活率,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,采用免疫荧光法检测各组细胞标记蛋白podocin表达情况,采用Western blot检测各组细胞内质网应激通路蛋白[葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(p-PERK)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、磷酸化真核起始因子2α(p-eIF2α)、真核起始因子2α(eIF2α)]及其介导的凋亡相关蛋白[增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)]表达情况。结果模型组细胞存活率明显低于对照组(P<0.05),细胞凋亡率明显高于对照组(P均<0.05);黄芪汤各组细胞存活率均明显高于模型组(P均<0.05),细胞凋亡率均明显低于模型组(P均<0.05),且呈浓度依赖性。模型组podocin表达荧光强度明显弱于对照组,黄芪汤各组随着药物浓度升高podocin表达荧光强度明显增强。模型组GRP78、p-PERK、p-eIF2α、CHOP表达水平均明显高于对照组(P均<0.05);黄芪汤各组GRP78、p-PERK、p-eIF2α、CHOP表达水平均明显低于模型组(P均<0.05),且黄芪汤各组随药物浓度的升高GRP78、p-PERK、p-eIF2α表达水平均逐渐降低(P均<0.05)。模型组Bcl-2表达水平明显低于对照组(P<0.05);黄芪汤100μg/mL组、黄芪汤300μg/mL组Bcl-2表达水平均明显高于模型组(P均<0.05);黄芪汤100μg/mL组与黄芪汤300μg/mL组Bcl-2和CHOP表达水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论黄芪汤可呈浓度依赖性的抑制高糖诱导的足细胞损伤,其作用可能与抑制PERK介导的内质网应激途径有关。     

黄连对2型糖尿病大鼠胰腺内质网应激PERK/ATF4/CHOP信号通路的影响

目的:观察黄连对2型糖尿病大鼠的炎症因子、血糖、内质网应激信号通路蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/活化转录因子4(ATF4)/CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)相关蛋白的干预作用。方法:将80只雄性SPF级大鼠随机分为正常组、模型组、盐酸二甲双胍组、黄连组,每组20只。采用"10周高糖高脂饲料喂养+经腹腔注入低剂量链脲佐菌素(STZ)"方案对非正常组大鼠造模。盐酸二甲双胍组予盐酸二甲双胍0. 2 g·kg~(-1)·d~(-1),黄连组按照剂量为0. 4 g·kg~(-1)·d~(-1)给药,模型组、正常组大鼠均给予同等体积的蒸馏水,每天1次。待灌胃期终止,取血,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组大鼠的空腹血糖(FBG),C反应蛋白(CRP),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用免疫组化法检测各组大鼠胰腺组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78),CHOP,ATF4蛋白的表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠胰腺组织PERK,磷酸化(p)-PERK蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠FBG,TNF-α,CRP水平及ATF4,CHOP,GRP78,p-PERK蛋白表达均明显升高(P 0. 05);与模型组比较,黄连组和盐酸二甲双胍组FBG,TNF-α,CRP水平,ATF4,CHOP,GRP78,p-PERK蛋白表达均明显下降(P 0. 05)。结论:黄连能在一定程度上降低大鼠血糖,缓解炎性反应,可抑制质网应激PERK/ATF4/CHOP信号通道,减少CHOP,ATF4,GRP78,p-PERK的表达。     

针刺对戊四唑诱发惊厥大鼠海马葡萄糖调节蛋白78和C/EBP同源蛋白表达的影响

目的:观察针刺对惊厥大鼠海马神经元内葡萄糖调节蛋白78(Grp 78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)蛋白表达的影响,探讨针刺抗惊厥的可能机制。方法:SD大鼠随机分为正常对照组(n=6)、模型组(n=18)、针刺组(n=18)。腹腔注射戊四唑(50mg/kg)复制惊厥大鼠模型。针刺组立即针刺"百会""大椎"30min。各组分别于造模后2、12、48h采用免疫组化法观察各组大鼠海马CA 1区Grp 78和CHOP蛋白表达情况。结果:模型组大鼠在惊厥发作2、12h海马CA 1区Grp 78蛋白表达与正常组比较明显增强(P0.01);针刺组大鼠在惊厥发作12h和48h与模型组比较Grp 78蛋白表达显著增加(P0.01,P0.05)。在惊厥发作各个时段与正常组比较,模型组大鼠海马CA 1区CHOP蛋白表达明显上调(P0.01);针刺组海马CA 1区CHOP蛋白阳性表达在惊厥发作各个时段与模型组比较明显减少(P0.05,P0.01)。结论:针刺能明显调节惊厥大鼠海马神经元Grp 78蛋白和CHOP蛋白的表达,从而起到保护惊厥性脑损伤作用。     

中药菩人丹对OLETF大鼠视网膜葡萄糖调节蛋白78和C/EBP同源蛋白表达的干预作用

目的探讨中药复方菩人丹(PRD)对OLETF大鼠视网膜葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)表达的干预作用。方法以雄性自发性2型糖尿病大鼠模型OLETF大鼠和非糖尿病对照组LETO大鼠为实验对象,以血糖峰值16.7 mmol·L~(-1)和负荷后120 min血糖11.1 mmol·L~(-1)为2型糖尿病成模标准,将24只成模的OLETF大鼠随机分为PRD治疗组、糖尿病模型组,每组均为12只,同周龄12只雄性LETO大鼠为正常对照组。成功建立模型后,PRD治疗组大鼠连续灌胃PRD(1.8g·kg~(-1)·d~(-1))2个月。Td T介导的d UTP缺口末端标记法(TUNEL)检测OLETF大鼠视网膜神经细胞的凋亡情况;SP免疫组织化学染色法和免疫印迹法检测OLETF大鼠视网膜GRP78和CHOP蛋白的表达。结果糖尿病模型组大鼠视网膜神经细胞凋亡指数、GRP78、CHOP蛋白的表达明显高于正常对照组大鼠(P0.01)。PRD治疗组大鼠视网膜神经细胞凋亡指数、GRP78、CHOP蛋白的表达明显低于模型组大鼠(P0.01)。结论 PRD可减少糖尿病大鼠视网膜神经细胞的凋亡,从而起到保护糖尿病视网膜神经组织的作用,这可能与下调GRP78和CHOP的表达,抑制内质网应激有关。     

益肾化湿颗粒对糖尿病肾病小鼠足细胞保护机制研究

目的观察益肾化湿颗粒对糖尿病肾病(DN)小鼠肾脏足细胞裂孔隔膜蛋白(Nephrin、Podocin)、血小板衍生生长因子受体β(PDGFRβ)表达的影响,探讨其防治糖尿病肾病的机制。方法通过高脂膳食建立DN小鼠模型,随机分为正常组、模型组、益肾化湿治疗组、缬沙坦组,并每周称重。干预4周后处死小鼠,分别检测各组24 h尿蛋白量、血糖、肌酐,光镜观察肾脏病理变化,免疫荧光染色检测肾脏PDGFRβ的表达,Western Blot检测Nephrin、Podocin、PDGFRβ的表达。结果与模型组相比,益肾化湿治疗组小鼠血糖降低[模型组(37.04±2.72)mg/d L;益肾化湿组(32.51±4.65)mg/d L],尿微量白蛋白肌酐比降低[模型组(4.95±1.36)μg/mg;益肾化湿组(1.41±0.17)μg/mg],肾脏病理变化有明显改善,Nephrin、Podocin的表达显著增高(P0.01),PDGFRβ的表达显著降低(P0.01)。结论益肾化湿颗粒通过上调足细胞Nephrin、Podocin及降低肾脏PDGFRβ的表达,减轻DN小鼠尿蛋白排泄,具有肾功能保护作用。     

基于ERK-Calpain2通路探讨黄连素对冠心病大鼠心肌细胞凋亡的影响

[目的]研究黄连素(BBR)对冠心病大鼠心肌细胞凋亡的影响及ERK-Calpain2信号通路在其中的作用。[方法]以高脂饮食喂养并注射脑垂体后叶素建立冠心病大鼠模型。大鼠分为实验组(模型大鼠)、对照组(模型大鼠)和空白组(正常大鼠),实验组大鼠予以BBR 80 mg/(kg·d)灌胃,对照组和空白组予以等量双蒸水灌胃,治疗周期为12周。采用TUNEL免疫荧光检测心肌细胞凋亡情况。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测心肌组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及钙蛋白酶2(Calpain2)m RNA水平。采用蛋白质印迹法检测心肌组织GRP78、CHOP、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase-3)、Caspase-12及Calpain2蛋白表达水平。[结果]心肌TUNEL染色后发现,与对照组比较,实验组细胞凋亡显著减少(P0.01)。与对照组比较,实验组大鼠Caspase-12、Caspase-3、GRP78和CHOP蛋白均有不同程度下调(P0.01),p-ERK和Calpain2蛋白表达下调,Capastatin蛋白表达升高(P0.01)。与对照组比较,实验组大鼠GRP78、CHOP、Calpain2 mRNA表达下降(P0.01)。[结论] BBR能抑制冠心病大鼠心肌细胞发生内质网应激凋亡,该作用可能与抑制ERK-Calpain2信号通路有关。