大鼠神经损伤视网膜病理改变的实验研究

目的 研究神经损伤早期视网膜的病理改变。方法 采用大鼠球后视神经横断务和钳夹伤模型,观察视网膜组织学及超微铁改变。结果 １）光镜：早期表现为神经纤维层血管扩张,损伤后７、１４天可见散在的核染色质边聚。空化的节细胞。２）电镜：损伤后１天节细胞出现胞浆成分疏松,内质网扩张等变性样改变,横断作３天及钳夹伤７天可见节细胞坏死,部分节细胞凋亡。结论 视神经损伤导致节细胞出现迟发性死亡,提示早期治疗具有重要意     

视神经损伤后突触后密度蛋白-95在大鼠视网膜中的分布及表达研究

目的研究视神经损伤后突触后密度蛋白-95（PSD-95）在神经损伤后sD大鼠视网膜中的定位及表达的变化。方法采用钳夹法制作SD大鼠视神经损伤模型。分别于损伤后1d、3d、5d,7d及14d摘除眼球,以正常大鼠视网膜为对照,应用免疫组织化学方法和Westernblot法检测视神经损伤后PSD-95蛋白水平表达变化;免疫荧光双标技术检测PSD-95的细胞定位情况。结果在正常对照组中,视网膜外丛状层有大量的PSD-95存在。视神经损伤后,PSD-95在视网膜中的表达显著减少,损伤后1d,PSD-95在视网膜外层表达量最低,在损伤后7dPSD-95的表达恢复正常水平并维持到损伤后14d。免疫荧光双标染色结果显示视神经损伤后1dPSD-95与视杆细胞的标记物rhodopsin共定位减少,损伤后7d部分恢复。结论视神经钳夹伤导致了视网膜PSD-95表达量的减少和分布的改变,可能是视网膜神经元损伤后自我保护的一种反应。     

地塞米松对兔视神经钳夹伤后视网膜神经节细胞存活及Nogo-A表达的影响

目的观察地塞米松对家兔视神经钳夹伤后视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)存活的影响及损伤视神经、视网膜Nogo-A表达的变化。方法采用兔球后视神经钳夹伤模型,健康成年家兔分为正常对照组、损伤组、治疗组。分别于损伤后3d、7d、14d处死动物,观察单位面积RGC存活数量及损伤后Nogo-A在视神经、视网膜的表达变化。结果视神经损伤后,治疗组RGC的存活数高于损伤组及对照组(P<0.01)。对照组、损伤组损伤后3d、7d、14d视神经、视网膜Nogo-A表达增强,至损伤后7d达高峰;治疗组视神经、视网膜表达亦增强,各时间点均弱于损伤组、对照组,差异有显著统计学意义(P<0·01)。结论视神经损伤后,地塞米松能够增加RGC的存活数量,能够下调No-go-A的表达,这可能是地塞米松治疗作用机制之一。     

大鼠视神经损伤视网膜内P38丝裂原活化蛋白激酶活性的表达

目的:动态观察视神经损伤后视网膜中P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活性的表达变化和早期细胞凋亡情况。方法:制作大鼠视神经钳夹伤模型后设立对照组、假手术组和视神经夹伤组,应用免疫组化方法及流式细胞仪分别检测视神经损伤后1,6,12,24h;15,30d共6个时间点3组大鼠视网膜中磷酸化(活化)P38MAPK的表达和早期细胞凋亡率,同时对视网膜形态学改变进行观察。结果:视神经损伤诱导视网膜神经节细胞(RGC)严重丧失,损伤后1~15dRGC快速减少,15d后缓慢减少。在正常对照组、假手术组磷酸化P38MAPK表达阴性,视神经损伤后P38MAPK活性的表达于6h检测到表达,逐渐增加至24h阳性表达达高峰,15d表达下降,30d消失,具有统计学意义(P<0.01)。视神经损伤后早期细胞凋亡率逐渐上升,24h达最高8.9%,随后下降。结论:视神经不完全损伤刺激了大鼠视网膜中P38MAPK的活性表达,与早期细胞凋亡率变化相似。P38MAPK通路与视神经损伤诱导的大鼠视网膜RGC凋亡密切相关。     

视神经损伤后视网膜CNTF及CNTFRα免疫组织化学检测

目的研究视神经损伤后睫状神经营养因子（ciliary neurotrophic factor，CNTF）及其受体（ciliary neurotrophic factor recepterα，CNTFRα）在大鼠视网膜中的定位表达变化、方法采用钳夹法制作大鼠视神经损伤模型。分别于伤后1d、3d、7d、14d、28d取眼球，以正常大鼠视网膜为对照，运用免疫组织化学方法检测视神经损伤后CNTF和CNTFRα的表达变化,结果在正常对照组中，由视锥视杆细胞外节组成的视网膜视锥视杆细胞层均有大量的CNTF及CNTFRα存在，在其它各层也存在散在颗粒状分布的CNTF及CNTFRα，视神经损伤后，CNTF及CNTFRα在视网膜各层显著增加，并呈弥漫性分布，在损伤后3d、7d、14d与正常对照组比较相差非常显著（P〈0．01）。损伤后7d．CNTF及CNTFRα在视网膜各层表达达高峰，在损伤后28d2者的表达均显著高于正常对照组（CNTF：P=0．02〈0．05；CNTFR：P=0．015〈0．05）。结论视神经不全损伤导致了视网膜CNTF和CNTFRα表达量的增加和分布的改变，可能是视网膜神经元损伤后自我保护的一种反应。     

利用荧光金逆行示踪技术评价视神经不完全损伤后视网膜神经节细胞的存活率

目的　利用荧光金逆行示踪技术评价正常及视神经不完全损伤后的视网膜神经节细胞 (retinalganglioncells,RGCs)的数目。 方法　正常成年LongEvans大鼠 2 0只 ,体重(2 70± 2 0 ) g ,雌雄不限。按对照组、损伤后 7d、14d、2 1d分组 ,每组 5只大鼠。在球后视神经钳夹伤前 7d行荧光金逆行标记。 7d后损伤组大鼠用反向血管夹于左眼球后 2mm处夹视神经 10s。对照组大鼠只暴露视神经不行钳夹 ,分别于各时间点将大鼠用 4 %多聚甲醛灌注固定后 ,行全视网膜铺片 ,3h内在荧光显微镜下观察。在每张视网膜的上、下、鼻、颞侧距视盘 1/ 6、1/ 2、5 / 6半径处共拍摄 12张荧光照片。对照片上标记的RGCs进行计数 ,求平均值 ,计算损伤后各时间点剩余的RGCs与正常视网膜中RGCs的百分比。结果　视网膜铺片的RGCs边界清晰 ,并可见明显的细胞突起 ,血管走行区未见节细胞分布。正常组每张铺片的平均节细胞数为 (2 0 31± 2 87)个·mm-2 ,损伤后 7d的RGCs存活率为 71% ,14d存活率为 5 1% ,2 1d存活率为 35 %。结论　荧光金逆行标记是评价视神经损伤后RGCs存活率可靠并且有效的方法。     

碱性成纤维生长因子在视神经中的表达及在视神经损伤后的反应

目的 观察碱性成纤维生长因子（bFGF）在视神经中的表达及在视神经损伤后的反应，探讨bFGF在视神经损伤中的作用。方法 采用大鼠球后视神经钳夹伤模型，利用免疫组化法和计算机图像分析技术，于术后1，3，7，14天检测视神经bFGF的表达。结果 视神经损伤后1－14天bFGF的表达明显增高，与假伤对照组相差显著（P＜0．05）。结论 视神经损伤提高bGFG在视神经中的表达，对视神经损伤的修复具有积极的作用。     

晶状体损伤对视神经损伤后RGCs的保护作用及其机制

背景大鼠Miiller细胞提取液能够促进离体培养的视网膜神经节细胞（RGCs）存活及轴突的再生,伴晶状体损伤的视神经外伤眼RGCs存活率提高,但Milller细胞和晶状体损伤在促进RGCs存活方面的关系鲜见报道。目的探讨伴晶状体损伤的视神经外伤眼Mtiller细胞对RGCs存活的促进作用及其机制。方法清洁级成年Wistar大鼠48只按随机数字表法随机分为伪手术组、视神经损伤组、晶状体联合视神经损伤组。伪手术组大鼠手术中暴露但不损伤视神经,视神经损伤组大鼠行视神经横断伤,晶状体联合视神经损伤组行视神经横断伤联合晶状体针刺伤,并导致晶状体混浊。术后7d及14d各组分别取8只大鼠处死后制备视网膜标本。采用苏木精一伊红染色观察各组大鼠视网膜和RGCs的形态学改变,采用免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜内核层胶质纤维酸性蛋白（GFAP）标记的Muller细胞,光学显微镜下计数各组大鼠RGCs数量及GFAP阳性标记的Muller细胞数量。结果术后7d及14d,伪手术组大鼠RGCs的数量分别为（52．98±1．90）个／高倍视野和（51．81±3．09）个／高倍视野,差异无统计学意义（t=0．910,P=0．378）;术后14d视神经损伤组大鼠RGCs数量为（22．67±1．94）个／高倍视野,明显少于术后7d的（36．61±1．69）个／高倍视野,差异有统计学意义（t=15．312,P=0．000）;术后14d晶状体联合视神经损伤组RGCs数量为（35．69±1．80）个／高倍视野,明显少于术后7d的（50．76±2．77）个／高倍视野,差异有统计学意义（t=12．920,P=0．000）。术后7d及14d,晶状体联合视神经损伤组存活的RGCs数量均多于视神经损伤组,差异均有统计学意义（7d：t=102．840,P=0．000;14d：t=164．020,P=0．000）;术后14d晶状体联合视神经损伤组存活的RGCs：牧量少于伪手术组,差异有统计学意义（t=187．04,P=0．034）。术后7d及14d,伪手术组大鼠视网膜内核层均未见GFAP阳性标记的Muller细胞;视神经损伤组大鼠内核层GFAP阳性标记Muller细胞数量分别为（29．38＋2．04）个／高倍视野和（19．07±2．14）个／高倍视野,差异有统计学意义（t=-9．868,P=0．000）。晶状体联合视神经损伤组大鼠内核层GFAP阳性标记的Muller细胞数量分别为（48．96±2．80）个／高倍视野和（46．73±1．50）个／高倍视野,差异无统计学意义（t=1．987,P=0．067）。术后7d及14d,晶状体联合视神经损伤组大鼠内核层GFAP阳性Muller细胞数量均较视神经损伤组增多,差异均有统计学意义（7d：t=-15．997,P=0．000;14d：t=-29．938,P=0．000）。结论在视神经损伤合并晶状体刺伤时,晶状体损伤可诱导Muller细胞活化,进而促进视神经损伤后RGCs的存活。     

大鼠视神经横断伤及夹挫伤后视网膜神经节细胞变化及与损伤时间关系

目的 观察大鼠视神经横断伤及夹挫伤后,视网膜神经节细胞(RGCs)形态学变化、区别及在不同时间的计数变化,探讨其与视神经损伤经过时间的关系,为视神经损伤的病理机制及损伤经过时间的推断提供一定的依据.方法 采用大鼠球后视神经横断伤/夹挫伤动物模型,在伤后不同时间处死动物并取材,HE 染色,光镜下观察RGCs的动态变化.结果 视神经损伤后RGCs数日均严重下降,2周内RGCs快速减少,3～7 d为RGCs快速减少期,2周以后缓慢减少;但横断伤组3 d以后各个时期RGCs计数下降幅度与夹挫伤组相比更明显.结论 视神经损伤导致了视网膜形态结构的变化,RGCs丢失的严重程度与损伤类型及时问呈相关性.     

急性眼压升高所致视网膜、视神经及视交叉胶质细胞的早期反应北大核心CSCD

背景中枢神经系统以及视网膜中的胶质细胞与神经元关系十分紧密,胶质细胞在神经元损伤和修复过程中发挥着重要作用。急性眼压升高引起的视网膜、视神经及视交叉各部位胶质细胞的早期反应特点以及其与视神经损伤的关系目前尚不清楚。目的探讨大鼠视网膜、视神经及视交叉的胶质细胞对急性高眼压的早期反应,同时观察神经前体细胞标志物巢蛋白（nestin）在反应性胶质细胞中的表达。方法成年雌性Wistar大鼠9只,分为正常对照组3只和急性高眼压组6只,急性高眼压组大鼠采用右眼前房灌注生理盐水的方法升高大鼠眼压至110mmHg,持续60min。于术后第3天和第7天用过量麻醉法处死各组动物各3只,摘出眼球分离视神经和大脑标本,并制作冰冻切片。利用Nissl染色的方法测量高眼压眼视网膜内层厚度,观察视网膜和视交叉的大体形态。用BIU-tubu｜in免疫荧光染色法标记视神经内的视网膜神经节细胞（RGCs）轴突,用胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和nestin双重标记显示视网膜、视神经及视交叉的胶质细胞反应,并对两组结果进行比较。结果正常大鼠的视网膜、视神经以及视交叉内均可见到一定量的GFAP阳性胶质细胞,但nestin的表达量很低。急性眼压升高后的第3天,视网膜内丛状层厚度明显变薄,RGCs数目较损伤前减少约46％。视网膜内胶质细胞GFAP的表达显著增加,细胞突起由神经纤维层伸展至整个视网膜,增生的胶质细胞内可见nestin的明显表达。视神经内RGCs轴突发生变性样改变,GFAP阳性胶质细胞内nestin的表达较眼压升高前明显增加。同损伤眼相对应的一侧视交叉的横断面积减小,出现大量星状GFAP和nestin共表达的胶质细胞。以上改变在眼压升高后第7天更趋明显。结论急性眼压升高早期即可引起RGCs的丢失及轴突的变性,视觉神经元改变的同时伴随胶质细胞的反应,增生的胶质细胞表达神经前体细胞的标志物。视网膜与视神经和视交叉的改变在时间上具有一定的同步性。     

大鼠视神经夹挫伤视网膜视神经病理学动态观察及功能检测

目的 :动态观察视神经夹挫伤后视网膜、视神经形态学和视功能变化 ,揭示其病理过程的内在规律 ,为视神经保护研究提供依据。方法 :应用光镜、电镜观察正常及视神经夹挫伤 2 4、4 8、72小时 ,1、2、4周大鼠的视神经和视网膜形态学改变 ,闪光视觉诱发电位检测正常及视神经损伤后 1小时、4周大鼠的视功能状况。结果 :视神经部分损伤诱导视网膜神经节细胞 (RGCs)严重下降 ,损伤后的前 2周RGCs快速减少 ,2周以后缓慢减少 ;电镜下可见RGCs染色质明显聚集 ,胞体皱缩 ,核膜、胞膜完整 ;也可见核膜溶解 ,细胞器水肿、崩解 ;视神经纤维在损伤过程交错存在着轴突空泡样变 ,髓鞘崩解、消失 ,胶质细胞增生 ;视神经急性损伤F VEP波形较正常变得低而宽 ,损伤 4周波形消失。结论 :神经元继发性损伤是视功能进行性下降的重要原因 ,保护神经元免受继发性损伤是视神经保护的重要方面 ,对改善视功能有极其重要的意义     

血管内皮生长因子B对小鼠视神经保护作用的研究

目的 探讨血管内皮生长因子B(VEGF-B)在视网膜组织的表达及其对视网膜神经节细胞的保护作用.方法 对照实验研究.35只成年雌性健康C57BL/6小鼠,分为正常对照组,视神经损伤后6 h、1 d、1周、2周组.其中10只鼠用于原位杂交,每组2只鼠;25只鼠用于实时定量逆转录聚合酶链反应(real time RT-PCR),每组5只鼠.采用原位杂交法观察实验鼠视网膜组织VEGF-B的mRNA表达;用real time RT-PCR法观察视网膜组织损伤后不同时间VEGF-B的mRNA定量表达;从双侧上丘行荧光金逆行标记和视网膜神经节细胞计数,评估玻璃体腔内注射重组人VEGF-B(450 mg/L)对视网膜神经节细胞的保护作用.应用SAS统计学软件进行数据分析.对组间real timeRT-PCR检测结果比较采用方差分析,对组间视网膜神经节细胞计数的计量资料比较采用秩和检验.以P<0.05作为差异有统计学意义.结果 小鼠视神经损伤后的视网膜组织VEGF-B表达显著增强,损伤后1周达高峰.玻璃体腔内注射重组人VEGF-B蛋白,可显著增加视网膜神经节细胞的存活数量,分别是单纯视神经损伤组和损伤加玻璃体腔内注射的阴性对照组的1.7倍(t=0.1301,P<0.01)和1.9倍(t=0.001,P<0.01).结论 VEGF-B参与小鼠视神经损伤后的修复,并对视网膜神经节细胞有保护作用.(中华眼科杂志,2009,45:38-42)     

经瞳孔温热疗法对大鼠视神经钳夹视网膜神经节细胞的保护作用

目的探讨经瞳孔温热疗法（TTT）阈下反应对BN大鼠视神经钳夹后视网膜神经节细胞（RGCs）的保护作用。方法采用阈下TTT对BN大鼠视网膜进行照射后3d,通过逆行标记RGCs的方法,对TTT＋视神经钳夹组（A组）、TTT＋假手术组（B组）、单纯视神经钳夹组（C组）和空白对照组（D组）在视神经钳夹后1、2、4周进行RGCs计数并比较;检测视网膜TTT阈下反应的热休克蛋白70（HSP70）表达;观察TTT阈下反应对视网膜的影响。结果视神经钳夹后4周,A组RGCs数显著高于C组（P=0.006）,而1周和2周时2组之间差异无统计学意义（P〉0.05）;各时间点B组和D组的RGCs数差异无统计学意义（P〉0.05）。视网膜经阈下TTT干预后,HSP70表达高于对照眼。阈下TTT照射能引起视网膜组织形态上的改变。结论阈下TTT可显著提高视神经钳夹4周后RGCs的存活数量;其保护机制可能与诱导视网膜内源性HSP70表达、启动内源性保护机制有关。     

蛇毒神经生长因子对大鼠视神经夹伤保护的电镜观察

目的研究蛇毒神经生长因子在视神经损伤后对视网膜神经节细胞的保护作用。方法将Wistar大鼠40只随机分为实验对照组和实验治疗组。制作实验性视神经夹伤模型,用头部宽1mm的微型血管夹夹伤大鼠右眼视神经后,实验治疗组向伤眼玻璃体腔内注入蛇毒神经生长因子100BU(0.025mL)。实验对照组向伤眼玻璃体腔内注入0.025mL平衡盐液。于损伤后第3d、7d、14d、30d、60d取材,用透射电镜观察不同时间段各组视网膜形态学变化。结果电镜下大鼠视网膜改变:实验治疗组和对照组电镜下均可见坏死和凋亡。伤后14d,实验治疗组视网膜微管数目比实验对照组较多,排列比较整齐。结论在视神经损伤早期,蛇毒神经生长因子能减轻视神经夹伤后微管的损坏,提高视网膜神经节细胞的存活数量,对视网膜神经节细胞有明显的保护作用。     

大鼠视神经夹伤模型中莫尼定的视网膜节细胞保护作用

目的 :研究莫尼定对大鼠视神经夹伤模型视网膜神经节细胞的保护作用。方法 :实验用SD大鼠 2 0只随机分为用药组 8只和对照组 12只。所有大鼠右眼用 40 g微型视神经夹紧贴球后夹持视神经 60秒 ,左眼未做夹持。用药组于夹伤前1小时及夹伤后每日腹腔注射莫尼定 1mg/kg ,阴性对照组于夹伤前 1小时及夹伤后每日腹腔注射生理盐水 5ml/kg ,实验观察2 8天。实验结束前 4天双上丘注射 3 %荧光金逆行标记视网膜神经节细胞。做视网膜铺片 ,距离视乳头中心上下左右各2mm拍摄照片 ,使用CPAS图像分析软件做节细胞定量分析 ,节细胞存活率 =右眼节细胞密度 /左眼节细胞密度× 10 0。结果 :用药组、对照组节细胞存活率分别为 61 0 1%和 53 48% ,两者之间存在显著性差异 (P =0 .0 3 5)。结论 :在大鼠视神经夹伤模型中 ,莫尼定具有明显的视网膜节细胞保护作用     

Neuroprotective effect of sulfhydryl reduction in a rat optic nerve crush model

PURPOSE: The signaling of retinal ganglion cell (RGC) death after axotomy is partly dependent on the generation of reactive oxygen species. Shifting the RGC redox state toward reduction is protective in a dissociated mixed retinal culture model of axotomy. The hypothesis for the current study was that tris(2-carboxyethyl)phosphine (TCEP), a sulfhydryl reductant, would protect RGCs in a rat optic nerve crush model of axotomy. METHODS: RGCs of postnatal day 4 to 5 Long-Evans rats were retrogradely labeled with the fluorescent tracer DiI. At approximately 8 weeks of age, the left optic nerve of each rat was crushed with forceps and, immediately after, 4 muL of TCEP (or vehicle alone) was injected into the vitreous at the pars plana to a final concentration of 6 or 60 microM. The right eye served as the control. Eight or 14 days after the crush, the animals were killed, retinal wholemounts prepared, and DiI-labeled RGCs counted. Bandeiraea simplicifolia lectin (BSL-1) was used to identify microglia. RESULTS: The mean number of surviving RGCs at 8 days in eyes treated with 60 microM TCEP was significantly greater than in the vehicle group (1250 +/- 156 vs. 669 +/- 109 cells/mm(2); P = 0.0082). Similar results were recorded at 14 days. Labeling was not a result of microglia phagocytosing dying RGCs. No toxic effect on RGC survival was observed with TCEP injection alone. CONCLUSIONS: The sulfhydryl-reducing agent TCEP is neuroprotective of RGCs in an optic nerve crush model. Sulfhydryl oxidative modification may be a final common pathway for the signaling of RGC death by reactive oxygen species after axotomy.     

The Protective Role of Mecobalamin Following Optic Nerve Crush in Adult Rats

IntroductionProgressivelossofganglioncellsandtheiraxonsisafeatureofoculardiseasessuchasopticnervedamage,glaucoma,ischemia,andinfla鄄mmation.Thelossofganglioncellsaffectsbothopticnervefibersandtheirsheaths.Thisresultsinalossofneuralnutritionandalossofbloodandoxygensupplythatcanleadtotheaccum鄄ulationofextracellularglutamateresultinginexcitoxitywhichinfluencestheconductionofvisualelectricsignals.Thesetwofactorsresultinapoptosisofretinalganglioncells[1].Furthermore,degenerationcontinuestoprogres…     

Survival of retinal ganglion cells after transection of the optic nerve in adult cats: a quantitative study within two weeks

We have previously reported that a small number of retinal ganglion cells (RGCs) of adult cats survive 2 months after transection of the optic nerve (ON) and that alpha cells have the greatest ability to survive among different types of RGCs (Watanabe et al., 1995). Here we report the time course of RGC survival within 15 days after ON transection using retrograde labeling with DiI injected into the bilateral lateral geniculate nuclei of cats. The density of DiI-labeled RGCs in the central retina as well as in the periphery did not change until day 3 after ON transection, then decreased rapidly, to 43% of the original density on day 7, and falling to 19% by day 14. We then intracellularly injected Lucifer yellow into the DiI-labeled RGCs to examine the difference in the time course between surviving alpha and beta cells. Similar to the density change in total surviving RGCs, the proportion of surviving beta cells did not change until day 3, then decreased rapidly to 65% of the original density on day 4, falling to 12% by day 14. By contrast, 64% of alpha cells survived for 14 days after axotomy. Analysis of regression lines for survival time courses indicated that death of beta cells was characterized with a rapid period phase from day 3 to day 7 after axotomy whereas that of alpha cells lacked it. Axon-like sprouting from surviving beta cells was first recognized in the nerve fiber layer on day 3, and were later more conspicuous.