贵州省水族和仡佬族永生细胞系建立

目的建立贵州省水族和仡佬族少数民族永生细胞系,为生命科学研究提供技术支持。方法采用EB病毒(EBV)感染和环孢霉素A(Cy A)处理方法,对来自贵州省三都县的144名水族和来自务川县的124名仡佬族人群外周静脉血B淋巴细胞进行转化,并对转化的细胞进行细胞形态学观察,用直接计数法绘制转化细胞的生长曲线并计算细胞倍增时间,对转化的细胞进行传代、冻存和复苏实验,采用培养法进行支原体污染检测。结果成功建立了138个水族和115个仡佬族人群的永生化B淋巴细胞株,转化率分别为95.8%和92.7%;转化的B淋巴细胞呈现典型的细胞变形和克隆化生长特点,能持续传代、冻存复苏后生长良好,无支原体污染。结论贵州省水族和仡佬族人群B淋巴细胞被成功转化为永生化细胞系。     

三氯乙烯对接触工人外周血微核率的影响

目的　研究空气中三氯乙烯 (trichloroethylene ,TCE)浓度和接触工人外周血淋巴细胞微核发生率及尿中三氯乙酸 (trichloroacticacid ,TCA)浓度的剂量 反应关系 ,在染色体水平上探讨三氯乙烯对人体可能产生的危害以及接触 反应关系。方法　选择接触三氯乙烯至少三个月的工人和无接触三氯乙烯及其它有毒物质的某防疫站就业前体检工人作为研究对象 ,测定空气中三氯乙烯浓度、个体接触三氯乙烯浓度、外周血淋巴细胞微核发生率和尿中三氯乙烯的浓度。结果　接触组外周血淋巴细胞微核发生率 ,与对照组相比有升高 (P <0 0 1) ;个体接触三氯乙烯浓度和尿中三氯乙酸浓度呈正相关关系 (r =0 .761,P <0 0 0 1) ,而个体接触三氯乙烯浓度、尿中三氯乙酸浓度与外周血微核发生率均无相关关系。结论　①本现场研究表明三氯乙烯接触可导致微核生成增加 ;但不能确定三氯乙烯的遗传毒性作用 ;②尿中三氯乙酸浓度可以作为三氯乙烯接触水平的评价指标。     

三氯乙烯接触工人外周血淋巴细胞染色体畸变分析

目的探讨三氯乙烯(TCE)对接触工人有否致淋巴细胞染色体畸变作用.方法选接触TCE工人32名,另选对照工人30名.用人外周血体外培养法检测淋巴细胞染色体畸变(CA)率,并用气相色谱法测定车间空气中TCE浓度和分光光度吡啶法测定尿中三氯乙酸(TCA)含量.结果车间空气中TCE浓度分别为41.2mg/m3和83.1mg/m3,均超过国家最高容许浓度,接触组尿中TCA含量为对照组的81.5倍,并与个体接触TCE浓度成正相关(r＝0.761,P＜0.001);接触组人外周血淋巴细胞CA率(1.15±0.84)%与对照组CA率(1.06±0.78)%比较差异无显著性(P＞0.05).结论未见接触TCE工人外周血淋巴细胞染色体畸变率增加.接触人群尿中TCA含量随接触TCE浓度的增加而升高,有较好的相关,提示暴露者尿中TCA含量能反映TCE的接触水平.     

三氯乙烯对接触工人外周血淋巴细胞微核的影响

通过对 34名三氯乙烯作业工人外周血淋巴细胞微核率检测及作业环境的卫生学调查 ,发现三氯乙烯接触工人微核率明显高于对照组 (P <0 0 1 ) ,提示三氯乙烯可导致接触者外周血淋巴细胞微核率增高。     

EB病毒相关淋巴母细胞样细胞系的建立及鉴定

目的由于EB病毒与肿瘤的关系极为复杂且存在争议,淋巴母细胞样细胞系LCLs(lymphoblastoid celllines)没有肿瘤形成过程中的复杂因素,从而成为了研究EBV介导的细胞永生化的最佳模型。本实验旨在建立EBV原型株相关的永生化淋巴母细胞系,为后期LCLs的端粒酶活性及其体内外成瘤性的相关研究提供基础。方法利用体外培养B95.8细胞产生EB病毒原型株感染正常人外周血淋巴细胞培养传代得到5株EB病毒相关淋巴母细胞,并用RT-PCR对其进行了基因表达、流式细胞仪进行细胞表面标记以及核型的鉴定。结果淋巴母细胞样细胞系能不断传代,能表达EBV基因,具有成熟B细胞表面标记;细胞传代过程早期未发生核型改变。结论建立了5株永生化细胞株,分别为LCL1-5、LCL2-5、LCL3-5、LCL4-30、LCL5-30。     

三氯乙烯对作业工人淋巴细胞DNA损伤的研究

目的 观察三氯乙烯作业工人的DNA损伤情况,探讨三氯乙烯对作业工人的遗传毒性.方法 检测作业工人工作场所空气中三氯乙烯时间加权平均浓度,测定作业工人班后尿中三氯乙酸浓度,运用单细胞凝胶电泳(SCGE)检测50名三氯乙烯作业工人外周血淋巴细胞DNA损伤情况.结果 三氯乙烯作业工人班后尿中三氯乙酸浓度大于对照组(P＜0.01),DNA损伤情况与对照组比,差异有统计学意义(P＜0.05),三氯乙烯作业工人尿中三氯乙酸浓度与淋巴细胞DNA损伤水平存在剂量-效应关系.结论 长期接触三氯乙烯可导致作业工人淋巴细胞DNA损伤.     

口腔脱落细胞微核技术在丙烯腈接触人群中的应用

目的探讨口腔脱落细胞微核技术在接触丙烯腈人群遗传损伤监护中的应用价值。方法选择生产过程中接触不同浓度丙烯腈的2个工厂工人为接触组,按空气中丙烯腈浓度高低分为低浓度组(41名男性工人)和中浓度组(47名男性工人),另选择不接触任何毒物的男性工人31名为对照组,分别进行口腔黏膜脱落细胞微核和外周血淋巴细胞微核测试。结果2个丙烯腈接触组的口腔黏膜脱落细胞微核率(低浓度组:3.68‰±2.72‰;中浓度组:4.00‰±2.38‰)明显高于对照组(2.03‰±2.20‰),中浓度接触组的血淋巴细胞微核率(4.23‰±3.34‰)明显高于对照组(2.48‰±1.46‰),差异均有统计学意义(P<0.05)。在丙烯腈接触人群中,口腔黏膜脱落细胞微核试验和外周血淋巴细胞微核试验有相关关系(r=0.299~0.359,P<0.05)。结论在丙烯腈接触人群遗传损伤监护时,可用口腔黏膜脱落细胞微核试验代替外周血淋巴细胞微核试验作为筛查指标之一。     

放射性核素内照射诱发体细胞HPRT基因突变

[目的] 研究放射性核素内照射诱发大鼠外周血淋巴细胞次黄嘌呤乌嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)基因位点突变及其剂量-效应关系.并比较多核细胞法和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-Brdurd)法测定HPRT基因位点突变的检出率.[方法] 用多核细胞法和Brdurd法研究的两批大鼠均分别随机分为1个对照组和4个不同剂量组,每组6只.对照组尾静脉注射生理盐水(pH 3.0),注射容积为0.5 ml/100 g体重,注射后1 d心脏穿刺取血.多核细胞法的不同剂量实验组大鼠尾静脉注射比活度为3.64×105 Bq/ml放射性晚期混合裂变产物,注射容积同对照组,于注射后1、3、6和9 d心脏穿刺取血.Brdurd法的不同剂量实验组大鼠尾静脉注射比活度为3.40×105 Bq/ml的放射性晚斯混合裂变产物,注射容积同前,于注射后1、5、15和20 d心脏穿刺取血.每鼠分别取抗凝血1.5 ml于离心管中,加入Hanks液8 ml,混匀后1 500 r/min离心10 min,去上清后再重复洗涤一次.将沉积细胞悬浮于生长培养液(内含90%RPMI1640,10%灭活小牛血清,庆大霉素100 IU/ml,PHA适量)中至1.5 ml,取上述血细胞0.5 ml接种于4.5 ml生长培养液中.每个样本培养2瓶,其中1瓶加入6-巯基乌嘌呤(6-TG).终浓度为1×10-5 mol/L.①多核细胞法将样本置于(38.2±0.3)℃培养56 h,加入细胞松弛素-B(Cyt-B),终浓度为6 μg/ml,再继续培养至96 h.培养物离心、固定、制片.每个样本计数6 000个转化的淋巴细胞(其中加与不加6-TG各计数3 000个),统计其中双核或多核淋巴细胞数.将含有6-TG样本的1 000个转化的淋巴细胞中双核或多核淋巴细胞数除以不含有6-TG样本的1 000个转化的淋巴细胞中双核或多核淋巴细胞数,所得结果则为HPRT基因位点突变率(‰).并用计算机拟合剂量-效应关系模型.②Brdurd法将样本置于(38.2±0.3)℃培养24 h后,加入250 μg/ml Brdurd 0.1 ml,避光培养48 h.培养物离心、固定、制片.空气干燥后用Hoechst 33258染色30 min,再进行Giemsa染色.不加6-TG样本计数转化及未转化的淋巴细胞3 000个.加6-TG样本计数全部突变的淋巴细胞数.并按下式计算淋巴细胞转化率和HPRT基因突变率淋巴细胞转化率=(转化的淋巴细胞数/3 000个转化及未转化淋巴细胞)×100%;HPRT基因突变率=(突变淋巴细胞数/0.5 ml外周血淋巴细胞数×淋巴细胞转化率).[结果] 随着放射性核素内照射剂量的增加,HPRT基因位点突变率增加.用多核细胞法检测的放射性核素内照射诱发的淋巴细胞HPRT基因位点突变率(y,‰)与累积剂量(D,cSv)相关模型为y=1.149 8+0.119 9 InD,r=0.970 6;用Brdurd法检测的放射性核素内照射诱发的淋巴细胞HPRT基因位点突变率(y,‰)与累积剂量(D,cSv)相关模型为y=6.531 0×10-2+3.454 2×10-3D,r=0.984 6.多核细胞法检测HPRT基因突变的检出率比Brdurd法高11～17倍之多.[结论] 淋巴细胞HPRT基因对电离辐射敏感.本文研究的辐射剂量范围内,辐射诱发淋巴细胞HPRT基因位点突变率与照射剂量呈正相关.多核细胞法对HPRT基因位点突变的检出率高于Brdurd法.     

版纳微型猪近交系外周血淋巴细胞cDNA文库的构建

[目的]构建版纳微型猪近交系(BMI)外周血淋巴细胞中cDNA文库.[方法]取新鲜BMI外周血,分离淋巴细胞,并进行体外诱导培养,提取总RNA,纯化mRNA.按照SMART cDNA library construction kit提供的方法构建BMI外周血淋巴细胞cDNA初始文库,进行滴度测定及文库扩增.[结果]初始文库和扩增文库的滴度分别为1.1×106 pfu/ml和2.5×109 pfu/ml,重组率分别为98.2%和89.1%,插入片段平均长度大于1200bp.[结论]成功地构建了BMI外周血淋巴细胞cDNA文库.     

氟暴露工人免疫功能的检测及氟化钠对体外培养淋巴细胞转化的影响

将62名受检者分为3组,采用单向免疫扩散方法和~3H标记的胸腺嘧啶同位素测定法检测其血清中免疫球蛋白IgG、IgA、IgM含量和外周血淋巴细胞转化情况。发现A组工人(氟暴露时间大于20年)的血清IgG含量,外周血淋巴细胞转化功能明显低于B组工人(氟暴露时间2—3年)和C组工人(非氟暴露者)。同时观察氟化钠对体外培养的淋巴细胞转化的影响,发现氟离子浓度在5mg/100ml时,即可抑制淋巴细胞的转化,并随离子浓度增加而加强。实验结果提示,氟对机体的细胞免疫功能和体液免疫功能均有一定的抑制作用。     

仿生表面湿化防止氧气湿化中微生物传播的试验研究

目的 研究常规氧疗时氧气加湿和输送过程中微生物的传播规律,寻找杜绝微生物传播的方法,探讨解决吸氧相关医院感染肺炎的方案.方法 对仿生表面湿化和常规入水湿化两种装置中的湿源物质分别以金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色假丝酵母菌污染,在加菌后第1～3天的相同时间均供氧20 min,对每个标本瓶分别进行细菌和真菌的培养并计数.结果 置入与仿生表面湿化装置连接的吸氧管终端的标本瓶中均未检测到金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色假丝酵母菌,置入与常规入水湿化装置连接的吸氧管终端标本瓶中可检测到金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌;第1～3天金黄色葡萄球菌的计数分别为低浓度组39.5、52.4、117.3 CFU/ml,高浓度组83.1、125.2、263.2 CFU/ml,大肠埃希菌的计数分别为低浓度组12.9、29.4、37.3 CFU/ml,高浓度组26.5、55.2、65.2 CFU/ml,未检测到白色假丝酵母菌;在与两种装置连接的吸氧管终端榆测到的金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌在统计学上差异有统计学意义(P<0.01).结论 独特的仿生学表面湿化装置即使在湿源物质遭到污染的情况下仍可以防止污染细菌随氧气通过吸氧管进入患者的呼吸道,这对切断微生物的传播途径,避免与吸氧相关的医院感染肺炎的发生,保让患者安全具有重要意义.     

甲基丙烯酸环氧丙酯致人支气管上皮细胞恶性转化研究

目的 研究潜在致癌化学物甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)诱发人支气管上皮细胞恶性转化的作用.方法 分别采用1、2、4、8μg/ml浓度的GMA多次处理人支气管上皮细胞(16HBE),连续动态地观察细胞形态学的改变,通过刀豆凝集素A(conA)试验、软琼脂集落形成试验、电镜扫描和裸鼠体内致瘤性试验观察细胞的恶性转化表型,并运用免疫化学方法对细胞和肿瘤组织来源特性进行鉴定.试验同时设二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组和三甲基胆蒽(MCA)阳性对照组.结果 1～8 μg/ml浓度范围的GMA多次攻击可使16HBE细胞发生恶性转化,转化率随染毒剂量的增加而升高,其中8μg/ml染毒组的转化率(8.48×10-6)与对照组(4.5×10-7)相比差异有统计学意义(P<0.01).转化细胞失去接触抑制呈交错重叠生长并能在软琼脂上形成集落,各剂量组的集落形成率随染毒剂量的增加而升高,其中2、4、8μg/ml染毒组的集落形成率分别为1.20‰、2.35‰和5.70‰,与溶剂对照组(0.30‰)相比差异有统计学意义(P<0.01).转化细胞对conA的凝集敏感性增加,扫描电镜下细胞表面微绒毛增多、变粗、变长.将转化细胞接种于裸鼠皮下可形成肿块,经病理组织学检查诊断为鳞状上皮细胞癌.16HBE细胞和肿块组织经免疫组织化学检测角蛋白呈阳性表达.结论GMA可在体外诱发16HBE细胞发生恶性转化.     

葡萄酒中槲皮素和山奈酚的高效液相色谱化学发光测定法

目的建立葡萄酒中槲皮素和山奈酚的高效液相色谱化学发光测定法。方法基于在NaOH碱性介质中铁氰化钾可以直接氧化槲皮素和山奈酚产生化学发光原理,用高效液相色谱分离柱后化学发光法测定葡萄酒中槲皮素和山奈酚含量。结果槲皮素和山奈酚浓度分别在2.0×10-6～1.6×10-2g/m(lr=0.9990)和3.2×10-6～2.0×10-4g/m(lr=0.9998)范围内与化学发光强度呈良好的线性关系,检出限(S/N=3)分别为1.4×10-9g/ml和3.4×10-7g/ml,回收率分别为99.31%和99.06%。RSD分别为2.07%,1.29%。结论该法具有简便、快速、准确等优点,适合葡萄酒中槲皮素和山奈酚的测定。     

1-磷酸鞘氨醇对体外培养的人视网膜色素上皮细胞α-SMA表达的影响

目的 研究1-磷酸鞘氨醇对人视网膜色素上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的影响.方法 对RPE细胞常规培养,取传3～4代生长良好的细胞用于实验,以106个/ml接种于24孔培养板中,加入含1-磷酸鞘氨醇无血清培养液,使1-磷酸鞘氨醇终浓度为1、1×10-1、1×10-2、1×10-3、1×10-4 μg/ml,加入不含1-磷酸鞘氨醇的无血清培养液为对照组,采用免疫荧光法分析1-磷酸鞘氨醇对α-平滑肌肌动蛋白表达的影响.结果 1、1×10-1、1×10-2 μg/ml 1-磷酸鞘氨醇组中表达α-平滑肌肌动蛋白阳性的细胞与对照组相比差异具有明显统计学意义（P=0.000、0.000、0.000） 而1×10-3、1×10-4 μg/ml组表达α-平滑肌肌动蛋白阳性细胞与对照组相比差异无明显的统计学意义（P=0.832、0.781）.结论 α-平滑肌肌动蛋白主要在RPE细胞的胞浆中表达.随着1-磷酸鞘氨醇浓度的增加,RPE细胞α-平滑肌肌动蛋白的表达增强.     

rAAV-hBMP2-GFP载体感染滴度测定方法的建立

目的建立携骨形态发生蛋白2基因的重组腺相关病毒载体（rAAV-hBMP2-GFP）感染滴度测定的方法,并制备高滴度的rAAV-hBMP2-GFP病毒液,为进一步实验hBMP2诱导大鼠牙槽骨骨缺损修复的基因治疗提供有利的工具。方法通过分析腺相关病毒-HT1080（AAV-HT1080）细胞接种量、培养时间及病毒吸附时间等参数,建立应用荧光计数法测定rAAV-hBMP2-GFP病毒感染滴度的方法,并分析其精密性及检测病毒的稳定性。结果 AAV-HT1080细胞的最佳接种浓度、培养时间及病毒吸附时间分别为3×105个/孔、24h及48h,在此条件下收获的病毒液的感染滴度最高可达3.82×1011/ml,所建立的荧光计数检测方法精密性较好。制备的病毒液的平均感染滴度为3.60×1011/ml,4℃和37℃保存7d及反复冻融5次,稳定性良好。结论建立了rAAV-hBMP2-GFP感染滴度的测定方法,并制备了高滴度及滴度稳定的rAAV-hBMP2-GFP病毒液。     

Changes in circulating lymphocytes and lymphoid tissue associated with vaccination of colostrum deprived calves

The objective of this study was to compare immunological responses and lymphoid depletion in young, colostrum deprived calves following administration of vaccines containing modified-live bovine viral diarrhea virus (BVDV). A group of calves exposed to a typical virulence non-cytopathic (ncp) BVDV-2 field strain (ncp exposed) was included to compare responses of calves receiving vaccine to responses generated against a field strain (mimicking a natural infection). A negative control group administered a placebo was used in all comparisons. All vaccines used in the study were administered per manufacturer recommendations while ncp BVDV exposed calves received 5 ml intranasally (2.5 ml/nare; 4.2 × 10⁶ TCID₅₀/ml) of the BVDV-2 field strain. Samples collected at each time point included nasal swabs for virus detection, blood samples for complete blood counts and detection of viremia, PBMCs for flow cytometric analysis, serum for virus neutralization titers, and thymus tissue at necropsy for evaluation of lymphoid depletion. A measurable neutralizing BVDV titer was observed for all treatment groups excluding the control animals, which remained negative during the study period. Virus shedding was only detected from the ncp vaccinated and ncp exposed calves. A decline from baseline was observed for peripheral lymphocyte and CD4⁺ cells for the groups receiving the adjuvanted cytopathic (cp) vaccine, the double deleted genetically modified (ddGM) vaccine, the ncp vaccine and ncp exposed calves, but not for the control group or groups receiving cp vaccines. Thymus depletion was observed for the ncp vaccine and ncp exposed calves and to a lesser extent for the ddGM vaccine calves. Collectively, these data suggest that the virus biotype, method of attenuation, presentation, and use of adjuvant will influence vaccine impacts on lymphoid tissues and the immune response. As such, multiple variables should be considered when determining costs and benefits of vaccination.     

结直肠癌根治术后辅助化疗无病生存多因素分析

目的分析影响结直肠癌根治术后辅助化疗无病生存的危险因素。方法回顾性分析2003年2月至2010年12月Ⅱ～Ⅲ期结直肠癌接受FOLFOX辅助化疗患者222例。所有病例收集术前白蛋白、术前CEA、分化程度、性别、年龄、部位、淋巴结转移、淋巴细胞计数等临床病理资料。ROC曲线分析淋巴细胞计数预测结直肠癌辅助化疗后复发最佳临界值,Cox多因素风险模型分析各临床病理因素对结直肠癌辅助化疗无病生存的影响。结果 ROC分析显示0.66×109/L为淋巴细胞计数预测结直肠癌辅助化疗后复发的最佳临界值。Cox多因素回归模型显示CEA≥10ng/ml(HR,2.296;95%CI=1.301～4.053)、淋巴结转移(HR,2.952;95%CI=1.661～5.247)、淋巴细胞计数<0.66×109/L(HR,2.294;95%CI=1.241~4.240)是影响辅助化疗无病生存的独立不利因素。结论术前CEA≥10ng/ml、淋巴结转移、化疗期间淋巴细胞计数<0.66×109/L的结直肠癌患者是辅助化疗后复发的高危人群,需要加强随访。     

某海上油田职业病危害控制效果评价

目的通过我国对某海上油田的职业病危害控制效果评价,分析油田各系统的工艺特征,识别存在的职业病危害因素。方法依据《工业企业设计卫生标准》《工作场所空气中有害物质监测的采样规范》等标准,采用定量检测、检验、检查表及综合分析等方法进行评价。结果作业现场空气中有毒物质浓度均处于较低水平。其中,中控初级操作工接触非甲烷总烃的TWA浓度为2.0×10^0mg/m^3,STEL浓度为8.9×10^1mg/m^3,外委维修工接触电焊烟尘的TWA浓度为1.6×10^0mg/m^3,STEL浓度为4.7×10^0mg/m^3;生产性噪声及高温超出卫生标准。其中,初级动力工和初级机械工接触噪声的40h等效声级分别达到98.4和96.1dB（A）。结论该油田总体评价结果符合国家卫生标准要求,但在噪声和高温方法需要重点加强作业人员个体防护,从而保护劳动者健康。     

间日疟长潜伏期研究进展

间日疟的潜伏期一般为12-20d^[1]，长潜伏期间日疟是指在传播期被感染后不发病，经过一个长的潜伏期（一般在6个月以上）后初次发病，通常为跨年度发病。