光动力疗法对增生性瘢痕成纤维细胞中Smad3蛋白磷酸化的影响

【摘要】 目的 探讨增生性瘢痕成纤维细胞（HSF）经过光敏剂血卟啉单甲醚（HMME）诱导,Smad3蛋白在光动力疗法（PDT）中的磷酸化效应。方法 将原代培养的HSF分为对照组、PDT组、单纯光敏剂（PS）组和单纯（Laser）激光照射组,经Smad3-FITC染色后在荧光显微镜上观察各组细胞内Smad3的荧光强度;收集各组细胞经Western印迹法检测Smad3和磷酸化Smad3蛋白的含量。结果 在荧光显微镜下观察到各组总体荧光强度相近,但与对照组核内荧光聚集较明显相比,PDT组HSF核内荧光微弱;HSF中磷酸化Smad3蛋白经PDT治疗后含量降低,与对照组相比,二者差异有统计学意义（0.92 ± 0.15比0.20 ± 0.02,P < 0.05）,PS组和Laser组中磷酸化Smad3蛋白表达,差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。结论 PDT能够降低Smad3蛋白磷酸化水平,从而抑制HSF增殖。 【关键词】 瘢痕,肥大性; 成纤维细胞; 血卟啉光照疗法; Smad3蛋白质     

病理性瘢痕成纤维细胞的研究进展

成纤维细胞是瘢痕形成的效应细胞,瘢痕疙瘩和肥厚性瘢痕成纤维细胞存在着广泛的异质性。成纤维细胞胶原合成增加、降解减少导致病理性瘢痕中胶原过度积聚。成纤维细胞的增殖异常是病理性瘢痕过度增生和持续存在的主要原因。成纤维细胞对细胞因子等因素反应性有明显异常。肥厚性瘢痕的收缩性和成纤维细胞的异质性有直接关系。     

几丁糖对瘢痕疙瘩成纤维细胞形态及增殖的作用

目的：探讨几丁糖对瘢痕疙瘩成纤维细胞形态及生长增殖的作用，为临床应用几丁糖治疗瘢痕疙瘩提供理论基础：方法：用组织块法进行瘢痕疙瘩、正常皮肤成纤维细胞的体外培养；用光学显微镜和电子显做镜观察细胞的形态结构；用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和流式细胞仪检测不同浓度几丁糖对不同来源的成纤维细胞生长增殖和细胞周期的影响．结果：随着几丁糖浓度的增高，瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞细胞器萎缩，4值减小，C0 G1期的细胞百分比增多，S期G2 M期的细胞百分比减少．结论：几丁糖对正常皮肤和瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞的生长增殖均有抑制作用，几丁糖可能在瘢痕疙瘩的防治中有一定的作用．     

扁平苔藓皮损中钙激活蛋白酶Ⅰ和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达及其与细胞凋亡的关系

目的 探讨凋亡相关蛋白钙激活蛋白酶Ⅰ（Calpain Ⅰ）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）在扁平苔藓皮损中的表达及其与细胞凋亡的关系。方法 分别采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记（TUNEL）法和免疫组化法对20例扁平苔藓患者皮损组织和10例健康人皮肤组织中细胞凋亡和Calpain Ⅰ、Caspase-3表达进行检测。采用SPSS 13. 0软件,两组凋亡指数比较采用t检验,两组Calpain Ⅰ和Caspase-3表达量比较采用秩和检验,Calpain Ⅰ和Caspase-3表达量与凋亡指数相关性分析采用 Spearman 等级相关分析。结果 扁平苔藓组表皮层角质形成细胞的凋亡指数（67.59 ± 13.50）显著高于健康对照组（28.26 ± 7.56）,两组比较,差异有统计学意义（t = 8.52,P < 0.01）;Calpain Ⅰ和Caspase-3表达均高于健康对照组（T = 78.00 和77.00,P < 0.01）。扁平苔藓皮损中Calpain Ⅰ和Caspase-3阳性表达强度均与其自身角质形成细胞的凋亡指数呈正相关（r = 0.71和0.74,P < 0.01）。结论 扁平苔藓皮损中Calpain Ⅰ和Caspase-3表达上调,且与角质形成细胞凋亡亢进关系密切。     

天冬氨酸/半胱氨酸组织蛋白酶在光老化成纤维细胞中的表达变化

目的 探讨天冬氨酸组织蛋白酶（cathepsin D）及半胱氨酸组织蛋白酶（cathepsin K）在光老化成纤维细胞中的表达变化。方法 培养原代人皮肤成纤维细胞,在50 mg/L的8-甲氧沙林（8-MOP）培养基中避光孵育24 h后,用80 kJ/m2 UVA照射,体外诱导培养细胞光老化。衰老相关-β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色证明老化诱导成功。Western印迹及实时定量RT-PCR对比检测光老化成纤维细胞及正常成纤维细胞cathepsin K和cathepsin D蛋白及基因表达。结果 Western印迹结果显示,光老化组表达的cathepsin D的灰度值为3.25 ± 0.33,对照组为14.18 ± 2.25,t = 30.61,P < 0.01,两组间差异有统计学意义;光老化组表达的cathepsin K灰度值为2.39 ± 0.66,对照组为29.38 ± 4.62,t = 12.63,P < 0.01,两组差异有统计学意义。光老化组cathepsin D mRNA的ΔCt值为2.79 ± 0.17,对照组为4.54 ± 0.34,根据2-ΔΔCt值计算得cathepsin D mRNA在光老化组的表达下调为对照组的0.24 ± 0.021（t = 20.78,P < 0.01）;光老化组cathepsin K mRNA的ΔCt值为-0.92 ± 0.06,对照组为2.57 ± 0.13,根据2-ΔΔCt值计算得cathepsin K mRNA在光老化组的表达下调为对照组的0.09 ± 0.005（t = 28.50,P < 0.01）。结论 cathepsin D及cathepsin K在光老化成纤维细胞中表达均下调。     

槲皮素对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的影响

目的研究槲皮素对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的影响,探讨其作用机理。方法体外培养瘢痕疙瘩及正常皮肤成纤维细胞,应用羟脯氨酸比色法对不同药物浓度处理后成纤维细胞胶原合成量进行分析;RT-PCR及Real-timePCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGFβ-1基因表达水平。结果槲皮素可抑制体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成,该作用呈剂量依赖效应;槲皮素可降低Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGFβ-1基因mRNA水平。结论槲皮素对于瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成有显著抑制效应,其作用机制之一为通过抑制TGFβ-1基因在转录水平降低了前胶原mRNA水平,因而使成纤维细胞胶原合成减少。     

地塞米松对瘢痕疙瘩成纤维细胞基质金属蛋白酶1调控的研究

目的：探讨地塞米松对瘢痕疙瘩成纤维细胞基质金属蛋白酶1（又被称为间质胶原酶1）蛋白的分泌合成和mRNA表达的影响。方法：采用酶联免疫吸附实验（ELISA）和Northem杂交技术检测了培养瘢痕疙瘩成纤维细胞基质金属蛋白酶1蛋白的合成分泌和mRNA的表达。结果：培养瘢痕疙瘩成纤维细胞对照组基质金属蛋白酶1蛋白的浓度为（151．02±27．70）pg／mL；加入10^-9M和10^-6M含地塞米松培养基24小时后，基质金属蛋白酶的浓度分别为（121．27±45．57）pg／mL（P〈0．05）和（101．78±35．82）pg／mL（P〈0．01）。加入地塞米松24小时后，培养瘢痕疙瘩成纤维细胞的基质金属蛋白酶1mRNA的表达被显著抑制，经密度扫描定量分析：基质金属蛋白酶1mRNA的表达分别下降了大约36％和53％。结论：地塞米松可抑制培养瘢痕疙瘩成纤维细胞基质金属蛋白酶1蛋白的合成分泌及其mRNA的表达，可能是地塞米松在抗瘢痕疙瘩纤维化作用中，尤其是纤维化形成后，疗效欠佳的原因。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的实验研究

目的 探讨瘢痕疙瘩中胶原过度聚集的原因.方法 从正常皮肤与活跃增生瘢痕疙瘩标本分别培养真皮成纤维细胞,采用³H-脯氨酸掺入法分别检测单层培养及胶原凝胶三维培养体系中成纤维细胞的胶原合成量.用斑点杂交法检测单层培养细胞的人前.α1(Ⅰ)型胶原mRNA水平.结果 瘢痕疙瘩成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA水平升高,其胶原合成量也显著高于正常真皮成纤维细胞(P<0.01).结论 在增生活跃瘢痕疙瘩中,成纤维细胞胶原合成功能处于活化状态,胶原合成增加是导致胶原过度积聚的重要原因.     

扁平苔藓皮损中肿瘤坏死因子α和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8、3的表达

目的 研究扁平苔藓皮损中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8(Caspase-8)和Caspase-3的表达及意义.方法 采用免疫组化法和原位末端标记技术(TUNEL)检测20例扁平苔藓患者皮损和20例健康人皮肤组织中TNF-α、Caspase-8、Caspase-3的表达和细胞凋亡情况.采用SPSS 11.5统计软件,组间比较采用成组t检验,指标间相关性采用Pearson相关分析.结果 扁平苔藓组TNF-α、Caspase-8和Caspase-3的积分光密度值分别为12580±2330、11690±3520和11450±2820,均明显高于健康对照组(分别为5120±1780、3870±3360、4760±1930),两组比较,t值分别为11.38、7.19、8.76,P值均＜0.01;扁平苔藓组角质形成细胞凋亡指数(71.35±7.93),明显高于健康对照组(33.62±8.75),两组比较,t=14.29,P＜ 0.01.扁平苔藓组TNF-α、Caspase-8的表达强度与角质形成细胞凋亡指数间均呈正相关,r分别为0.72、0.75,P值均＜0.01;同时两者与Caspase-3的阳性表达也均呈正相关,r分别为0.68、0.73,P值均＜0.01.结论 TNF-α、Caspase-8和Caspase-3的高表达可能参与了扁平苔藓中角质形成细胞的凋亡.     

田积颗粒对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响

以四甲基偶氮唑(MTT)法,琼脂糖凝胶电泳检测田积颗粒对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响.田积颗粒低、中、高剂量组与空白组比较,DNA的含量均有不同程度的下降,随着浓度的增加,DNA含量亦随之降低,表明田积颗粒对瘢痕疙瘩成纤维细胞的凋亡有一定程度的促进作用.     

Effect of hematoporphyrin monomethyl ether-mediated photodynamic therapy on hypertrophic scar fibroblasts

Background: Clinical studies have demonstrated that photodynamic therapy (PDT) for hyperplastic dermatosis results in a beneficial outcome. Hypertrophic scar (HS) is a pathological process characterized by fibroblastic hyperproliferation. However, it is unclear whether photochemical interactions between PDT and fibroblasts contribute to a beneficial outcome. To investigate the primary photochemical effects of PDT, we studied the efficacy of 630 nm PDT on human fibroblasts from HS using hematoporphyrin monomethyl ether (HMME) as a photosensitizer. Methods: Fibroblasts were cultured from nontreated HSs, and cells at passage 4–6 were used for the experiments. Morphological and biochemical changes in fibroblasts were assessed by Hoechst 33258 staining and annexin V‐FITC/PI flow cytometry (FCM). Caspase‐3 activity assay and immunofluorescence staining were performed to investigate caspase‐3 expression in fibroblasts. Results: The morphological features of cell apoptosis were viewed under a fluorescent microscope by Hoechst 33258 staining. FCM indicated that the apoptotic rate was significantly increased after HMME–PDT, and caspase‐3 activity was observed. Conclusions: Low‐level exposure to 630 nm PDT mediated by HMME appears to induce fibroblast apoptosis and stimulate caspase‐3 activation. However, the effect of HMME–PDT on fibroblasts needs further investigation to determine its therapeutic potential for HS.     

血管内皮细胞和角质形成细胞对血卟啉单甲醚吸收特性的比较

目的 探讨血管内皮细胞(ECV304)和角质形成细胞(HaCaT)对光敏剂血卟啉单甲醚(hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)的吸收特性.方法 取对数生长期的ECV304和HaCaT细胞分别与50、100、150、200、250 mg/L HMME孵育16 h,或与150 mg/L HMME孵育15 min、30 min、1h、3h、8h、12h、24 h.激光扫描共聚焦显微镜检测孵育浓度及孵育时间对两种细胞吸收HMME的影响.结果 与上述5种浓度HMME孵育后,ECV304细胞的平均荧光强度分别为74.00、125.57、135.24、141.99、132.09,HaCaT细胞的平均荧光强度分别为93.88、102.45、112.59、108.23、104.70.与150 mg/LHMME孵育上述时间后,ECV304细胞的平均荧光强度分别为95.07、103.97、105.96、108.99、112.93、115.36、122.91,HaCaT细胞的平均荧光强度分别为104.25、106.60、108.72、113.75、117.66、114.90、118.14.结论 ECV304和HaCaT细胞对HMME的吸收在一定浓度范围和时间范围内均呈浓度和时间依赖性.     

JAK2/STAT3信号通路选择性抑制剂AG490对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的生物行为学影响及可能机制

目的 观察JAK2/STAT3信号通路选择性抑制剂AG490对人瘢痕疙瘩成纤维细胞（HKF）生物行为学的影响及可能机制。方法 将体外培养的人正常真皮成纤维细胞（HSF）、HKF分别用浓度为12.5、25、50、75、100 μmol/L AG490处理为实验组,以不加AG490组为阴性对照组。CCK?8检测各实验组和阴性对照组HSF和HKF培养24、48、72 h后的细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测各组HKF培养24 h后的细胞周期分布及细胞凋亡;RT?PCR检测各组HKF培养24 h后,STAT3、细胞周期蛋白D1 mRNA的表达情况,同时检测不予任何药物处理的HSF、HKF中STAT3 mRNA表达;Western印迹法检测各组HSF、HKF培养24 h后STAT3、p?STAT3蛋白表达情况。结果 CCK?8法显示,随AG490药物浓度的增加和作用时间的延长,AG490对HSF、HKF增殖的抑制率增加,且该抑制作用呈浓度和时间依赖性（均P < 0.05）。在相同浓度AG490作用相同时间的情况下,HKF增殖抑制率大于HSF（P < 0.05）。流式细胞仪显示,随AG490药物浓度的增加,HKF G1期细胞比例逐渐增加（P < 0.01）,G2期细胞比例逐渐减少（P < 0.01）,S期细胞无明显变化（P > 0.05）,细胞凋亡率逐渐增加（P < 0.01）。RT?PCR显示,在不予任何加药处理的情况下,体外正常培养HSF、HKF 24 h后,HKF组STAT3 mRNA相对表达量显著高于HSF组（P < 0.05）。AG490作用HKF 24 h后,STAT3、细胞周期蛋白D1 mRNA相对表达量随AG490浓度的增加而逐渐降低。相关分析显示,经AG490处理的HKF细胞中细胞周期蛋白D1 mRNA的表达量与STAT3 mRNA的表达量呈正相关（r = 0.855,P < 0.01）。Western印迹显示,随AG490药物浓度的增加,HSF、HKF中STAT3、 p?STAT3的表达均逐渐降低（P < 0.05）,且HKF中STAT3、p?STAT3蛋白表达量低于HSF（P < 0.05）。结论 AG490可通过选择性阻断JAK2/STAT3信号通路,有效抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖。     

4-羟苯基维胺在不同载体中对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及凋亡影响

目的 探讨4-羟苯基维胺(4-HPR)在不同载体中对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKF)增殖及凋亡的影响.方法 采用薄膜-超声分散法制备4-HPR脂质体溶液及4-HPR微泡溶液.用不同浓度(0～80 mg/L)4-HPR脂质体溶液作用原代HKF 6～48 h后,噻唑蓝(MTF)法检测细胞增殖情况.将部分HKF分成3组,分别用15 mg/L 4-HPR溶液、4-HPR脂质体溶液、4-HPR微泡处理,每组再分成两个亚组,一个亚组在给药后接受超声处理,另一亚组不做超声处理.作用24 h后,噻唑蓝(MTT)法检测HKF的增殖情况.流式细胞仪检测15 mg/L 4-HPR脂质体或4-HPR微泡处理24 h后HKF的凋亡情况.结果 成功制备4-HPR脂质体溶液及4-HPR微泡溶液.MTT检测显示,4-HPR脂质体溶液在1 ～ 80 mg/L浓度范围内对HKF增殖有抑制作用,且增殖抑制率与药物浓度呈正相关(r=0.633,P＜0.01).超声处理后4-HPR微泡组与4-HPR溶液及4-HPR脂质体组对HKF的增殖抑制作用差异均有统计学意义(P＜0.01).4-HPR脂质体组和4-HPR微泡组HKF凋亡率分别为(21.81±3.73)％和(39.79±1.61)％,较对照组(6.18±0.61)％均显著增加(均P＜0.01).结论 成功制备4-HPR微泡,不同载体中4-HPR可促进HKF凋亡,进而抑制增殖,其中4-HPR微泡结合超声抑制作用较4-HPR脂质体强.     

人瘢痕疙瘩成纤维细胞裸鼠荷瘤模型的建立

目的 建立一种简单、成功率高的人瘢痕疙瘩裸鼠荷瘤模型。 方法 27只雌性BALB/c裸鼠随机分为5组,A、B、C组每组5只,在每只裸鼠腋窝下接种人瘢痕疙瘩成纤维细胞和Matrigel胶混悬液0.1 ml,细胞浓度分别为1.0 × 104个/μl Matrigel胶（A组）、3.0 × 104个/μl Matrigel胶（B组）、5.0 × 104个/μl Matrigel胶（C组）。取C组成形瘤块修剪成若干个5 mm × 5 mm × 5 mm大小的组织块移植于D组裸鼠（8只）的腋窝皮下;E组裸鼠（4只）皮下注射100 μl Matrigel胶作为对照组。A、B、C组出瘤后30 d、D组瘤块移植后30 d肉眼观察瘤体的形成过程及变化,并在第31天处死裸鼠进行组织病理学检查,分析其移植后成形的瘤体组织学变化及裸鼠的心、肝、脾、肺、肾组织的变化。 结果 A、B、C组裸鼠成瘤率为100%,出瘤时间分别为（90.20 ± 3.96） d、（61.00 ± 2.92） d、（39.60 ± 3.20） d。出瘤30 d时3组瘤体体积分别为（288.34 ± 25.29） mm3、（1 370.63 ± 105.24） mm3、（1 940.98 ± 184.37） mm3,3组差异有统计学意义（F = 138.74,P < 0.05）。D组裸鼠成形瘤块移植后瘤块体积先略增大后逐渐减小,移植第14天始持续增大,8只中7只成瘤。E组裸鼠未见瘤体形成。组织病理学检查,各组瘤体的组织形态在镜下一致,与人瘢痕疙瘩组织相似,未见其他脏器组织学改变及转移瘤灶。结论 裸鼠皮下接种人瘢痕疙瘩成纤维细胞可建立瘢痕疙瘩裸鼠荷瘤模型,而且已成瘤组织修剪成一定体积再次移植于裸鼠皮下也可以建立瘢痕疙瘩裸鼠荷瘤模型。     

Hexose sugars differentially alter collagen gene expression and synthesis in fibroblasts derived from granulation tissue,hypertrophic scar and keloid

Clinical observations have suggested that sugar and honey enhance granulation tissue formation and in vitro studies have shown that monosaccharide sugars stimulate mesenchymal and endothelial cells. In this study, the effects of glucose, fructose, galactose and mannose on type I and type III collagen gene expression and synthesis were studied in granulation tissue, hypertrophic scar and keloid fibroblast cultures. Glucose elevated both type I and type III collagen mRNAs in hypertrophic scar fibroblasts. Fructose increased type III collagen mRNA almost sevenfold in granulation tissue fibroblasts. Galactose caused an increase in type I and type III collagen mRNAs in granulation tissue fibroblasts and hypertrophic scar fibroblasts but, in contrast, mannose decreased type I and type III collagen levels in hypertrophic scar and keloid fibroblasts. Analysis of aminoterminal propeptides of type I and type III collagen (PINP and PIIINP) revealed that glucose decreased the amount of PINP in granulation tissue and keloid fibroblasts, whilst fructose decreased the amount in all the fibroblast cell lines studied. Galactose caused a decrease in the synthesis of type I collagen in all cell lines but a decrease was seen in type III collagen only in hypertrophic scar fibroblasts. Mannose decreased the amount of PINP in all cell lines but a decrease in the amount of PIIINP was seen only in granulation tissue fibroblasts. The effect of sugars on the ratio type I/type III collagen was negligible or decreasing with the exception of galactose, which increased the ratio in hypertrophic scar fibroblasts. The results suggest that glucose, fructose and galactose have no significant value in the stimulation of collagen synthesis in vitro. Mannose may have value in the prevention or treatment of abnormal scars.     

积雪苷体外对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及结缔组织生长因子表达的影响

目的 探讨积雪苷体外对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和对结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。方法 取手术切除的瘢痕疙瘩组织作成纤维细胞的原代培养,加入不同浓度积雪苷,观察细胞的形态变化,MTT法检测细胞活性,免疫组化和Western印迹法检测积雪苷对瘢痕疙瘩成纤维细胞结缔组织生长因子表达的影响。结果 细胞形态学观察显示,经不同浓度积雪苷处理的成纤维细胞呈现明显的抑制及凋亡征象。积雪苷在1 ～ 100 mg/L范围内,在24、48、72 h时积雪苷浓度与细胞活性抑制率均呈正相关,r分别为0.95、0.90和0.92,P值均 ＜ 0.01;且各浓度不同时间段细胞活性抑制率间单因素方差分析,P值均 ＜ 0.01。瘢痕疙瘩成纤维细胞中CTGF呈强阳性表达,而经积雪苷处理瘢痕疙瘩成纤维细胞48 h后,CTGF表达有所减弱,每100个成纤维细胞中CTGF表达阳性细胞数均值未加药组为73个,1 mg/L积雪苷组为54个,10 mg/L积雪苷组为46个,未加药组与1 mg/L、10 mg/L积雪苷组比较,差异均有统计学意义（t值分别为4.34和6.26,P值均 ＜ 0.01）;1 mg/L积雪苷组与10 mg/L积雪苷组比较,差异亦有统计学意义（t = 1.95,P ＜ 0.05）。Western印迹显示,积雪苷作用48 h后,成纤维细胞中CTGF的表达量比未加药的细胞明显减弱,且表达量随药物剂量的加大有递减趋势。结论 积雪苷能有效抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和结缔组织生长因子的表达。     

咪喹莫特对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原产生的影响

目的 探讨咪喹莫特对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原产生的影响.方法 从手术切除的瘢痕疙瘩组织中培养成纤维细胞,加入不同浓度的咪喹莫特作用后,观察细胞的形态学变化,MTT法检测细胞的活性.免疫组化和蛋白免疫印迹法检测咪喹莫特对瘢痕疙瘩成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型前胶原产生的影响.结果 在10～100μg/mL范围内,咪喹莫特能显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,且存在剂量和时间依赖性;进一步检测到咪喹莫特作用后瘢痕疙瘩成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型前胶原表达减弱.结论 咪喹莫特能有效抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和Ⅰ型、Ⅲ型前胶原的产生.