重组人甲状旁腺素（1-34）对银屑病样小鼠模型的影响

目的 研究重组人甲状旁腺素(1-34)对银屑病样小鼠模型的影响.方法 采用小鼠阴道上皮及鼠尾鳞片表皮实验模型,观察重组人甲状旁腺素(1-34)乳膏外用对鼠尾鳞片及阴道上皮细胞分裂的影响.结果 重组人甲状旁腺素(1-34)乳膏具有显著抑制阴道上皮细胞有丝分裂、促进表皮颗粒层生成的作用.结论 重组人甲状旁腺素(1-34)局部外用有望治疗银屑病.     

姜黄素对肿瘤坏死因子-α诱导的HaCaT细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨姜黄素对肿瘤坏死因子（TNF）-α诱导的HaCaT细胞增殖及凋亡的影响。方法 MTT法检测不同浓度重组TNF-α（0、1、5、10、25、50、100 ng/ml）、姜黄素20 μmol/L对HaCaT细胞增殖的影响。蛋白印迹实验检测25 ng/ml TNF-α和20 μmol/L姜黄素作用下HaCaT细胞PCNA、 Notch-1 的蛋白表达。使用Annexin-V/PI试剂盒在流式细胞仪上检测25 ng/ml TNF-α和20 μmol/L姜黄素作用下HaCaT细胞早期凋亡情况。结果 TNF-α呈浓度依赖性促进HaCaT细胞增殖,25 ng/ml TNF-α对HaCaT细胞的促增殖基本达到最大,20 μmol/L姜黄素有效抑制25 ng/ml TNF-α对HaCaT细胞的促增殖作用,25 ng/ml TNF-α对HaCaT细胞无明显促凋亡作用,而20 μmol/L姜黄素有效促进HaCaT细胞发生凋亡,并可激发25 ng/ml TNF-α对HaCaT细胞的凋亡诱导作用。 结论 姜黄素可激发TNF-α对HaCaT细胞的促凋亡作用,同时抑制TNF-α对HaCaT细胞促增殖作用。     

罗格列酮对HaCaT细胞增殖及β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达的影响

目的 探讨罗格列酮对体外培养的角质形成细胞株HaCaT细胞体外增殖的影响.方法 用不同浓度的罗格列酮处理HaCaT细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HaCaT细胞增殖活性;蛋白免疫印迹法测定HaCaT细胞β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达水平.结果 不同浓度的罗格列酮对HaCaT细胞体外增殖均具有抑制作用,药物作用48 h后对HaCaT细胞体外增殖的抑制率分别为18.9％、23.7％、35.1％、44.6％,与溶媒组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).罗格列酮处理HaCaT细胞后,β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达明显下调.结论 罗格列酮抑制HaCaT细胞的体外增殖的机制可能与β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1的表达下调有关.     

罗格列酮对HaCaT细胞增殖及β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达的影响北大核心CSCD

目的探讨罗格列酮对体外培养的角质形成细胞株HaCaT细胞体外增殖的影响。方法用不同浓度的罗格列酮处理HaCaT细胞,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测HaCaT细胞增殖活性;蛋白免疫印迹法测定HaCaT细胞B-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达水平。结果不同浓度的罗格列酮对HaCaT细胞体外增殖均具有抑制作用,药物作用48h后对HaCaT细胞体外增殖的抑制率分别为18．9％、23．7％、35．1％、44．6％,与溶媒组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。罗格列酮处理HaCaT细胞后,p-连环蛋白、细胞周期蛋白D1表达明显下调。结论罗格列酮抑制HaCaT细胞的体外增殖的机制可能与B-连环蛋白、细胞周期蛋白D1的表达下调有关。     

决银方对HaCaT细胞增殖及细胞周期的影响北大核心CSCD

目的观察决银方对HaCaT细胞增殖及细胞周期的影响。方法用CCK-8法检测1%,2%,5%和10%浓度决银方作用HaCaT细胞后细胞增殖的变化,以相同体积的DMEM作为空白对照;用流式细胞仪检测1%,2%,5%和10%浓度决银方作用HaCaT细胞后细胞周期的变化,以相同体积的DMEM作为空白对照。结果 CCK-8法检测显示5%浓度的决银方作用HaCaT细胞24h,细胞增殖受到明显抑制(P<0.05);流式细胞仪检测显示,5%浓度的决银方作用于HaCaT细胞24h,G_1期细胞比例明显减少(P<0.05)。结论 5%浓度的决银方对HaCaT细胞增殖有明显抑制作用,其主要作用在细胞周期的G_1期。     

依曲替酸和黄芪对HaCaT细胞增殖及细胞周期的影响

目的: 研究依曲替酸和黄芪对HaCaT细胞增殖及凋亡的影响.方法: 采用MTT比色法检测依曲替酸和黄芪对HaCaT细胞增殖的影响;应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡并于透射电镜下观察凋亡细胞形态.结果: 依曲替酸和黄芪均对HaCaT细胞增殖有明显的抑制作用;在一定浓度范围内其抑制率呈时间和剂量依赖性,但黄芪的抑制率较依曲替酸为低.细胞明显阻滞于G1期,有明显的凋亡峰出现,电镜下见典型的凋亡细胞形态学特征.结论: 依曲替酸和黄芪均可抑制HaCaT细胞的增殖并诱导其凋亡,提示二者治疗银屑病机制可能与此有关.     

白藜芦醇对中波紫外线照射的人角质形成细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:探讨白藜芦醇对中波紫外线（UVB）照射后人原代角质形成细胞（HEK）凋亡和细胞周期的影响。方法:0、25、50、100、150和200 μmol/L白藜芦醇处理人原代角质形成细胞12 h,分别采用CCK-8、BrdU和LDH法检测白藜芦醇对细胞增殖活性和死亡的影响。分别采用50 mJ/cm 2 UVB...     

FoxM1对HaCaT细胞增殖、细胞周期的影响

目的:确定FoxM1对HaCaT细胞增殖及细胞周期的影响。方法:采用DNA重组技术构建FoxM1的表达载体pEGFP-N2-FoxM1,脂质体法转染HeLa细胞并将其上清液按原浓度、1:1、1:2稀释后作用于HaCaT细胞。采用MTT法检测HaCaT细胞增殖情况;采用流式细胞仪测定HaCaT细胞周期变化。结果:FoxM1促进HaCaT。细胞的增殖,随着浓度增加,增殖作用愈明显;HaCaT细胞经FoxM1作用后,G1期细胞比例显著降低,S期与G2期比例则显著升高。结论:FoxM1对HaCaT细胞具有诱导增殖作用,呈剂量依赖性。     

重组人甲状旁腺素(1-34)对角质形成细胞分泌IL-6和IL-8的影响

目的研究人甲状旁腺素(PTH)(1-34)对角质形成细胞分泌IL-6和IL-8的影响,探讨其治疗银屑病的分子机理。方法体外培养人角质形成细胞株(HaCaT),研究中设空白对照组、骨化三醇组、骨化三醇和PTH(1-34)联合组以及1.0×10-7mol/L～1.0×10-10mol/L4个不同剂量的PTH(1-34)给药组。48h后收集上清液,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测HaCaT细胞分泌至培养液中IL-6和IL-8的含量。结果在1.0×10-7mol/L～1.010-10mol/L四个梯度浓度PTH(1-34)及联合骨化三醇处理48h后,HaCaT细胞分泌IL-6量和空白对照组、骨化三醇组比较,差异无统计学意义,而IL-8的分泌量明显降低(P<0.05),且1.0×10-7mol/LPTH(1-34)处理组IL-8分泌量明显低于其他各组。结论PTH(1-34)治疗银屑病的作用机制可能部分通过调节IL-8的表达和分泌来实现。     

沙利度胺对HaCaT细胞分泌血管内皮细胞生长因子及肿瘤坏死因子α的影响

目的 探讨沙利度胺对HaCaT细胞增殖及血管内皮细胞生长因子（VEGF）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达的影响。方法 体外培养的HaCaT细胞分为阴性对照组及不同浓度沙利度胺实验组;采用水溶性四氮唑法（WST-1）检测沙利度胺对HaCaT细胞增殖的影响,实时定量PCR法检测HaCaT细胞VEGF及TNF-α mRNA的表达水平,ELISA法检测HaCaT细胞VEGF及TNF-α蛋白的表达水平。采用单因素方差分析进行统计分析。结果 沙利度胺浓度在0.01 ～ 100 nmol/L之间时,可抑制VEGF mRNA（0.439 ～ 0.634,P ＜ 0.01）与蛋白（0.587 ～ 0.923,P ＜ 0.05）的表达;浓度在0.1 ～ 100 nmol/L之间时,可抑制TNF-α mRNA（0.493 ～ 0.587,P ＜ 0.05）与蛋白（0.408 ～ 0.617,P ＜ 0.01）的表达。结论 沙利度胺在一定浓度范围可抑制角质形成细胞增殖及减少VEGF及TNF-α表达。 【关键词】 角蛋白细胞; 沙立度胺; 血管内皮生长因子类; 肿瘤坏死因子α     

棕榈酸对HaCaT细胞增殖及产生炎症因子的影响

目的 探讨棕榈酸对HaCaT细胞增殖及产生炎症因子的影响.方法 将不同浓度棕榈酸(0、25、50、75、100、125、150、175、200 μmol/L)刺激HaCaT细胞3～ 24h,用细胞计数试剂盒CCK8检测HaCaT细胞增殖情况.选取一定浓度棕榈酸(0、75、100、125、150 μmol/L)刺激HaCaT细胞24 h后,分别用免疫组化荧光染色法在共聚焦显微镜下观察核因子(NF)-κB p65细胞核转位情况.酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清液中白介素6(IL-6)分泌量,实时PCR法检测过氧化物酶增殖体激活受体α(PPARα)mRNA及IL-6mRNA的表达,免疫印迹法检测PPARα、总蛋白NF-κB p65及核蛋白NF-κB p65表达量.用GraphPad Prism 5.0软件进行单因素方差分析.结果 与空白对照组相比,50～175 μmol/L棕榈酸均可刺激HaCaT细胞增殖(均P＜ 0.05).75、100、125、150 μmol/L棕榈酸可剂量依赖性增强HaCaT细胞NF-κB p65向细胞核内转位,各浓度组核蛋白的相对表达量分别为0.4536±0.0173、0.5184±0.0206、0.5333±0.0231、0.6160±0.0297,与空白对照组相比,差异有统计学意义(均P＜0.01).PPARα mRNA及其蛋白产物、IL-6 mRNA及分泌量呈剂量依赖性增加,各浓度组IL-6分泌量分别为(31.5677±0.2268)、(32.3773±0.4156)、(32.9837±0.0029)、(33.6890±0.0936) ng/L,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05或0.01).结论 棕榈酸可促进HaCaT细胞增殖,并在一定浓度内剂量依赖性增强NF-κB核转移、IL-6及PPARα表达量,在激活和促进相关炎症因子表达中起到一定作用.     

窄谱中波紫外线对HaCaT细胞增殖及Gadd45α表达的影响北大核心CSCD

目的探讨窄谱中波紫外线（NB-UYB）对HaCaT细胞表达Gadd45α及对细胞增殖、周期的影响。方法分别以100、200、400mJ／cm^2NB-UVB照射HaCaT细胞后,于6、12、24h收集细胞,采用RT-PCR和Western印迹检测Gadd45amRNA和蛋白水平的变化;CCK8法检测照射后对HaCaT细胞增殖的影响;流式细胞术检测照射后对HaCaT细胞周期的影响。结果HaCaT细胞表达Gadd45α,分别经100、200、400mJ／cm^2NB-UVB照射后,Gadd45α mRNA及蛋白表达水平均在6h升高,12h升高明显,24h表达下降,与未照射组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。三个剂量组照射后12h,Gadd45α mRNA相对A值分别为1．4360±0．6551、1．8633±0．0979、1．9266±0．1724,均高于对照组（0．6000±0．1276）（P〈0．05）;Gadd45α蛋白A值分别为0．0773±0．0005、0．1936±0．0015、0．2373±0．0015,较对照组（0．0290±0．0010）增高（P〈0．05）。NB-UVB照射对HaCaT细胞有抑制作用,其抑制增殖作用呈量效及时效关系;三组照射后HaCaT细胞周期发生改变,G2期细胞比例依次为13．53±1．03、17．77±2．25、30．03±4．29,较对照组（9．24±0．97）显著增高（P〈0．05）,细胞周期被阻滞于G2期。结论NB-UVB照射后HaCaT细胞上调Gadd45α表达;Gadd45α可能参与了紫外线照射后HaCaT细胞增殖抑制、周期阻滞过程。     

维胺酯对HaCaT细胞增殖和分化的影响

目的 探讨维胺酯对体外培养角质形成细胞(HaCaT细胞)增殖和分化的影响.方法 将浓度为2,5,10,15,20,25,30 μg/mL的维胺酯作用于培养的HaCaT细胞,采用MTT法检测维胺酯对HaCaT细胞体外增殖的影响,流式细胞仪测定细胞周期及凋亡率变化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测分化标记物角蛋白10及内披蛋白mRNA的表达水平.结果 2 μg/mL维胺酯处理的HaCaT细胞,48 h时表现出对细胞增殖的抑制作用,随着时间延长和药物剂量加大,抗增殖作用愈明显;当药物质量浓度达到30 μg/mL时,48 h和72 h时的抑制率分别为57.67%和82.00%.与对照组相比,经维胺酯作用48 h后,细胞G₁期比例显著增加,S期与G₂期比例则显著下降,并可抑制G₁/G₂期转换,但对细胞凋亡无影响.细胞内披蛋白mRNA表达水平随维胺酯处理浓度增高而上升,药物浓度达30μg/mL时,表达水平由对照组的40.80%增高至156.12%;而角蛋白10 mRNA表达水平则下降,由96.46%降至14.60%.结论 维胺酯具有抑制角质形成细胞增殖及诱导其分化的作用.     

沉默c-Met对宫颈癌细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响

目的探讨沉默c-Met对宫颈癌细胞Hela生物学特性的影响。方法利用小RNA干扰技术在宫颈癌细胞Hela中沉默c-Met,将实验分为Sic-Met(实验组)和SiCon(阴性对照组),平板克隆实验检测Hela细胞生长情况,流式细胞术检测Hela细胞的周期和凋亡情况。Western blot检测抑凋亡基因Bcl-2和促凋亡基因Bax的蛋白表达情况。结果平板克隆实验显示,沉默c-Met 7天后,Hela细胞形成的克隆团少于SiCon (P0.05)。流式结果显示,Hela细胞中Sic-Met组的凋亡细胞数量明显多于SiCon组(P0.05)。细胞周期分布结果显示,沉默c-Met对宫颈癌Hela细胞周期变化没有影响(P0.05)。Western blot结果显示,沉默c-Met后Bcl-2的蛋白表达量下降而Bax的蛋白表达量升高。结论沉默c-Met抑制了宫颈癌Hela细胞的生长增殖,并且通过增加Bax、降低Bcl-2的蛋白表达量来促进细胞凋亡,但沉默c-Met对宫颈癌Hela细胞周期变化没有影响。     

缺氧诱导因子-1α小干扰RNA对HaCaT细胞VEGF表达的影响

目的 探讨缺氧诱导因子-1α( HIF-1α )RNA干扰对低氧条件下HaCaT细胞HIF -1α和血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响。方法 将HaCaT细胞分为4组：常氧对照组(无干预因素)、低氧组(缺氧培养24h)、脂质体对照组(转染空载脂质体后缺氧培养24h)、RNA干扰组(转染脂质体介导的RNA干扰序列后缺氧培养24 h)。荧光实时定量PCR法检测各组HaCaT细胞HIF-1α和VEGF mRNA表达水平,Western印迹检测各组HaCaT细胞HIF-1α和VEGF蛋白表达水平。结果 低氧组和常氧对照组HIF-1α mRNA的表达水平分别为0.907±0.032和0.878±0.034,两者比较差异无统计学意义(F=1.108,P＞0.05),而低氧组VEGF mRNA和HIF-1α及VEGF蛋白的表达水平分别为0.935±0.032和0.813±0.047,0.791±0.030,均较常氧对照组(分别为0.652±0.053、0.236±0.014和0.316±0.013)明显增高(P值均＜ 0.05);RNA干扰组HIF-1α mRNA及蛋白的表达水平为0.230±0.044和0.213±0.026,VEGF为0.497±0.033和0.249±0.028,均较脂质体对照组(分别为0.978±0.030、0.817±0.049和0.806±0.040、0.833±0.052)显著降低(P值均＜0.05)。结论 低氧可以使HaCaT细胞HIF-1α和VEGF的表达增加,而抑制HIF-1α的表达可以使低氧条件下HaCaT细胞VEGF的表达减少。     

rhPTH(1-34)诱导的角质形成细胞Hedgehog信号通路差异表达基因的筛选

目的利用PCR芯片技术,研究重组人甲状旁腺素(1-34)[recombinanthumanparathyroidhormone,rhPTH(1-34)]对角质形成细胞Hedgehog(Hh)信号通路的影响,探讨其治疗银屑病的机制。方法培养HaCaT角质形成细胞株,用rhPTH(1-34)诱导细胞后,抽提rhPTH(1-34)组和空白对照组细胞的总RNA,用紫外吸收测定法和变性琼脂糖凝胶电泳法进行RNA产量和质量检测;合成cDNA,与含有84条人类基因的Hh信号通路的基因芯片进行杂交,并进行实时定量PCR扩增,最后对所得数据进行处理和分析。结果在84条基因中,rhPTH(1-34)组与空白对照组比较,25条基因表达差异2倍以上,其中23条显著上调,2条显著下调。这些差异表达基因涉及细胞增殖与分化、胚胎形成,细胞信号传导和多组织器官发育等。结论 rhPTH(1-34)可能通过影响Hh信号通路中PTCHD1,C6orf138,BMP4,BMP6,BMP7等相关基因表达,对角质形成细胞的增殖分化发挥调节作用。     

中药清热利湿饮对HaCaT细胞周期的影响

目的 探讨中药清热利湿饮水提液对经肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导活化的人永生化角质形成细胞（HaCaT）细胞周期的影响.方法 采用MTT法检测TNF-α对HaCaT细胞增殖的影响,流式细胞仪技术检测清热利湿饮提取液对HaCaT细胞周期的影响.结果 经2.5×10^5 u/L的TNF-α诱导的HaCaT细胞增殖率比对照组增加了（14.11±2.97）％,12.5g/L和15 g/L清热利湿饮可使HaCaT细胞阻滞于S期,与TNF-α对照组相比,S期比率分别增加了10.63％和21.55％.结论 TNF-α可使HaCaT细胞活化及过度增殖,一定浓度的清热利湿饮以浓度依赖的方式干扰正常的HaCaT细胞周期,通过阻滞细胞的周期时相而抑制HaCaT细胞的分裂和过度增殖.     

白芍总苷对经肿瘤坏死因子-α诱导的HaCaT细胞细胞因子分泌的影响

目的观察白芍总苷（TGP）对体外培养的Hacalr细胞白细胞介素（IL）-6、IL-8、IL-10、干扰素（IFN）-γ分泌的影响，以及肿瘤坏死因子（TNF）-α诱导的HaCaT细胞IL-6、IL-8、IL-10、IFN-γ分泌在白芍总苷的作用下是否发生变化，从而进一步探讨银屑病的发病机制及白芍总苷治疗银屑病的可能作用机制。方法本实验运用TNF—α诱导HaCaT细胞，并用不同浓度的TGP进行处理，通过ELISA法检测TGP作用前后细胞因子分泌的变化。结果TGP对经TNF-α诱导的HaCaT细胞IL-6、IL-8、IFN-γ分泌有抑制作用，而对IL-10分泌有促进作用。且这两种作用均与药物作用浓度相关。结论TGP可能通过抑制HaCaT细胞IL-6、IL-8及IFN-γ的分泌，提高IL-10的分泌，进而发挥一定的免疫调节作用，从而达到治疗银屑病的作用。