大鼠慢性肢体缺血模型的建立及其与急性肢体缺血模型的比较

目的建立大鼠慢性后肢缺血模型并与其急性后肢缺血模型比较,分析两者术后血流灌注和基因表达的差异。方法 40只SD大鼠随机均分为2组,分别建立大鼠慢性(结扎、离断右侧髂股动脉分支,股动脉内置入抗凝硅胶管并固定)和急性后肢缺血模型(结扎、离断右侧髂股动脉分支后直接结扎并切除股动脉)。用激光多普勒血流检测仪记录术前至术后连续4周肢体血流灌注情况。用实时荧光定量PCR法检测术后24 h患肢股内收肌缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)基因的表达。结果术后24 h,急性缺血组患肢股内收肌HIF-1α和VEGF表达水平均明显高于慢性缺血组(均P<0.05)。急性缺血组血流灌注在术后即刻降至对侧肢体的24%,但恢复较迅速,至术后28 d达到并稳定在82%;慢性缺血组于术后7 d达到血流灌注谷值(48%),随后缓慢恢复,至术后28 d至最高值(67%)。两组血流灌注水平在各观察时间点均有统计学差异(均P<0.05)。结论大鼠慢性和急性后肢缺血模型的病变特点及基因表达存在差异,慢性后肢缺血模型更符合临床严重肢体缺血的病理过程。     

2型糖尿病大鼠后肢缺血模型的建立及评价

目的建立2型糖尿病大鼠后肢缺血模型并进行评价,为后续的干预实验提供研究平台。方法将15只SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组及糖尿病后肢缺血组,每组5只。糖尿病组及糖尿病后肢缺血组的10只大鼠均给予高脂饮食喂养4周后,腹腔注射链脲佐菌素（STZ,40mg／kg）以建立2型糖尿病模型。糖尿病后肢缺血组大鼠建模成功后行双侧髂总动脉结扎术以建立后肢缺血模型,正常对照组和糖尿病组大鼠仅分离髂总动脉,不予结扎。2周后对3组大鼠股动脉的起始段行彩色多普勒超声检查,以检测股动脉的血流峰值速度和血流加速时间;取缺血部位的小腿三头肌及大腿股四头肌组织,分别行HE染色及免疫组化SP染色,以观察3组大鼠肌细胞的营养状况及血管再生情况。结果后肢缺血模型建模2周后,正常对照组、糖尿病组和糖尿病后肢缺血组大鼠的血流峰值速度分别为（22．49±3．02）cm／s、（17．36±2．60）cm／s和（11．23±1．26）cm／s,血流加速时间分别为（0．080±0．009）S、（0．120±0．009）S和（0．160±0．020）s,糖尿病后肢缺血组大鼠的股动脉血流峰值速度小于正常对照组和糖尿病组（P〈0．05）,而血流加速时间较长（P〈0．05）。HE染色结果显示：糖尿病后肢缺血组大鼠小腿三头肌的结构破坏,有大量炎症细胞浸润,肌肉损伤程度重于正常对照组和糖尿病组。免疫组化sP染色结果显示：糖尿病后肢缺血组大鼠大腿股四头肌的毛细血管密度[（1．40±0．55）个／HPF]小于正常对照组[（6．80±0．84）个／HPF]及糖尿病组[（4．60±0．55）个／HPF],差异均有统计学意义伊〈O．05）。结论对SD大鼠给予高脂饮食联合小剂量STZ注射可以成功诱导2型糖尿病模型,在此模型基础上结扎髂总动脉可以成功制备糖尿病后肢缺血模型。     

小鼠后肢缺血肌肉及骨髓氧分压与HIF-1α蛋白水平的关系

目的探讨正常血供及缺血状态下小鼠后肢肌肉氧分压水平及其与HIF-1α蛋白表达的关系,为血管新生的体外低氧研究提供理论基础。方法选用成年雄性Balb/c小鼠30只〔体质量(20±2)g〕制备小鼠后肢缺血模型,实验分为正常对照组和缺血24 h、1周、2周及3周组,检测各组小鼠双侧后肢腓肠肌和股骨骨髓的氧分压,并对不同缺血时间的腓肠肌组织中HIF-1α蛋白表达水平采用Western blot法进行检测。结果腓肠肌及股骨骨髓正常的氧分压基线水平分别为(47.78±4.37)mm Hg和(21.55±3.40)mm Hg(1 mm Hg=0.133 k Pa)。不同缺血时间组小鼠患肢腓肠肌组织的氧分压均较健侧明显下降(P0.05),并在缺血1周时达到最低,此时肌肉组织的炎症反应也最严重,HIF-1α蛋白的表达水平也最高;随着缺血时间的延长,腓肠肌组织的氧分压有所回升,HIF-1α蛋白表达水平也下调,但肌肉组织HIF-1α蛋白的表达与氧分压的相关性无统计学意义(r=-0.86,P0.05)。股骨骨髓的氧分压在不同缺血时间点的变化不明显。结论缺血组织HIF-1α蛋白的表达水平能够反映肢体的缺血程度;不同组织的生理氧分压水平不同,为组织细胞的体外低氧研究提供了依据。     

bFGF联合骨髓干细胞动员剂促进兔缺血后肢血管新生的研究

目的: 观察局部应用碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）联合干细胞动员剂对促进兔缺血后肢血管新生的作用。方法: 40只大耳白兔均切断左侧股动脉及其分支，制作兔后肢缺血模型。成模后随机分4组(每组10只):(1)bFGF组,在缺血后肢肌内多次注射重组人bFGF蛋白;(2)G-CSF组,皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）;(3) bFGF+G-CSF组，按bFGF组和G-CSF组的方法给予bFGF和G-CSF;（4）对照组，给予等量生理盐水。术后4周，各组兔行腹主动脉造影，观察侧支血管形成情况。取内收肌和腓肠肌肌组织行病理切片检查;用图像分析系统统计血管密度;用免疫组化检测内收肌和腓肠肌中VEGF阳性表达的血管数。结果: 兔侧支循环血管条数、血管密度及VEGF阳性表达的血管数均依次为：bFGF+G-CSF组 > bFGF组 > G-CSF组 > 对照组 (均P<0.05)。结论: 在缺血下肢肌内注射bFGF蛋白和皮下注射骨髓干细胞动员剂均可促进血管新生，改善肢体缺血状态;但在骨髓干细胞动员的同时，联合应用bFGF蛋白效果更好，缺血肢体改善更明显。     

大鼠缺血后肢骨骼肌血管内皮生长因子及其受体的表达

目的 研究大鼠缺血后肢侧枝代偿和血管内皮生长因子（VEGF）及其受体表达的动态变化。为外源性VEGF治疗下肢缺血性疾病提供理论依据。方法 切除SD大白鼠右后肢全长股动脉，随机分为9个时间组：造模后1、3d、1、2、3、4、6、8及12周，各组5只动物。分别于造模前后和观察期末检测双后肢大、小腿肌肉Fit-1、Flk-1蛋白及mRNA表达，各组观察期末实验动物后肢动脉DSA检查。结果 （1）缺血后3d，5只大鼠右后肢出现溃疡（11．11％）；2周后，4只大鼠后肢溃疡愈合，而1只趾端坏疽（2．22％）。（2）缺血后2周，患肢侧枝形成达到高峰，12周时仍可见侧支血管显影。（3）缺血早期（3周内），VEGF及其受体的表达均较健侧显著增强（P〈0．05）；缺血中期（3～8周）。VEGF和Flt-1表达迅速下降，Flk-1仍表达；缺血后期（8周后），VEGF及其受体的表达均低至极低水平，与对侧差异无统计学意义（P〉0．05）。结论（1）肢体缺血后自身的血管新生不能完全满足缺血组织的需要。（2）缺血早期外源性的VEGF补充是不必要的；缺血中期补充VEGF是适宜的；缺血后期在应用VEGF治疗的同时，也需要干预受体的表达。     

碱性成纤维细胞生长因子促进兔缺血后肢血管新生的实验研究

目的:了解局部应用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对促进兔缺血后肢血管新生的作用。方法:25只日本大耳白兔随机分2组,外科结扎切断各兔股动脉及其分支,制作兔后肢缺血模型。试验组各兔在缺血后肢肌肉内多次注射重组人bFGF蛋白(n=15);对照组给予等剂量生理盐水(n=10)。术后4周,各兔行腹主动脉造影观察侧支血管形成情况,取内收肌和腓肠肌肌肉行病理切片HE染色应用图像分析系统统计血管密度,并用免疫组织化学方法检测内收肌和腓肠肌中VEGF阳性表达的血管数。结果:试验组兔侧支循环血管条数、血管密度及VEGF阳性表达的血管数均大于对照组(P<0.01),缺血状态得到改善。结论:在兔缺血后肢肌肉中注射bFGF蛋白可促进血管新生,增加兔缺血后肢血液灌注,改善肢体缺血状态。     

Lewis大鼠慢性后肢缺血模型的制备与评价

目的通过线栓法制备大鼠慢性后肢缺血模型,将其与急性后肢缺血模型进行比较研究。方法采用线栓法制备Lewis大鼠慢性后肢缺血模型,分别于术后第7、14、28、42及49天进行激光多普勒血流分析及血管造影。每组动物在血管造影后处死,分别取其健侧和患侧股四头肌和腓肠肌行HE染色及α-actin免疫组织化学染色,并计算小动脉密度。结果慢性后肢缺血模型组动物术后未出现明显的跛行和肢体坏死。血流分析发现,慢性后肢缺血模型在术后第49天仍处于缺血状态。后肢肌肉组织病理学检查未发现急性坏死和肌肉纤维化的表现。术后第7天,慢性缺血组股四头肌的小动脉密度低于急性缺血组(0.015 2比0.036 4)。结论线栓法制备大鼠慢性后肢缺血模型与目前采用的急性动物后肢缺血模型制备方法有显著的不同,其缺血肢体较少受到代偿机制的影响且缺血时间维持较长,此为进一步研究缺血后血管新生的机理和治疗严重的下肢缺血提供了一种新的动物模型。     

生肌玉红胶原促进大鼠后肢缺血组织血管新生的实验研究

目的探讨生肌玉红胶原在缺血组织中促进血管新生的作用效果及其作用机理。方法 Wistar大鼠48只按随机配对方法随机均分为空白组、对照组（胶原）及实验组（生肌玉红胶原）3组;在大鼠后肢缺血模型基础上于大鼠右后肢缺血组织中植入不同的胶原制剂,分别于模型制作术后3,7、14及28 d取埋植的胶原制剂标本及标本周围约0.5 cm范围的缺血肌肉组织。通过激光散斑成像系统观察大鼠右后肢缺血模型制作术后各时点的血流灌注情况,采用光度计法测定胶原制剂（生肌玉红胶原）内的血红蛋白含量,采用免疫组化染色方法检测标本周围肉芽组织中的微血管计数,采用实时荧光定量RT-PCR方法检测缺血肌肉组织中各时点低氧诱导因子（HIF）-1αmRNA以及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的表达。结果大鼠右后肢缺血模型制作成功即刻大鼠患肢呈现明显的缺血状态,其血流灌注值明显低于术前（P〈0.01）;在术后3 d却呈明显的充血状态,其血流灌注值明显升高,且略高于术前水平,但差异无统计学意义（P〉0.05）;在术后7～14 d大鼠患肢的血流灌注值呈逐渐下降趋势,至术后28 d又开始回升,该3个时点实验组大鼠患肢的血流灌注值均高于空白组（P〈0.05）,对照组与空白组比较其差异均无统计学意义（P〉0.05）;术后7及14 d实验组大鼠肢体的血流灌注值高于对照组（P〈0.05）。各时点实验组胶原标本内血红蛋白含量均高于对照组（P〈0.01）。实验组微血管计数于术后7及14 d高于对照组（P〈0.05）;实验组术后各时点HIF-1αmRNA及VEGF mRNA的表达水平均高于对照组和空白组（P〈0.05）,而对照组与空白组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论生肌玉红胶原通过诱导HIF-1αmRNA及VEGF mRNA血管新生相关基因的表达而改善缺血组织的血流灌注,促进微血管新生,从而达到促进组织修复的功效。     

大鼠后肢急性缺血模型的构建及评估

目的：探讨大鼠后肢急性缺血后血流、血压的动态变化及肌肉组织的变化,为进行后续干预实验摸索条件。方法：取Lewis大鼠10只采用切除左后肢股动脉及其分支至膝关节附近的方法制备急性后肢缺血模型,分别于术后2,7,14,28,42,49 d对患侧和健侧肢体进行血流、血压及血管造影分析。取材后行后肢肌肉HE常规染色,观察病理变化。结果：动物术后均成活,但部分出现后肢跛行(n=2),紫绀（n=2）,苍白(n=3),肌肉的萎缩(n=1)。急性缺血下肢部分肌肉坏死,大量炎性细胞浸润;后期出现纤维化。患肢血流在术后7 d明显下降,术后28 d下降至最低点,术后49 d基本恢复正常（正常肢体的90%）。患肢血压在术后2 d明显下降,14 d下降至最低点,后逐渐恢复,至49 d基本恢复正常。结论：结扎并切除大鼠后肢股动脉及分支可以成功制备下肢缺血模型,但血流及血压在术后42~49 d基本恢复正常,术后14~28 d是缺血最严重的阶段,适于进行各种干预实验研究。     

骨髓间充质干细胞治疗慢性后肢缺血机理的初步研究

目的利用细胞示踪技术探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）治疗慢性后肢缺血的相关机理。方法采用密度梯度离心法结合直接贴壁法分离和培养大鼠MSCs,并以5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记。采用线栓法制备8只Lewis大鼠慢性后肢缺血模型,将其随机均分为MSCs移植组和对照组,分别于患侧后肢肌肉注射MSCs和生理盐水。分别于移植术后第7天和第14天,对其进行临床观察、后肢血流量测定及后肢血管造影,再于相应时间点处死大鼠,取患侧后肢股四头肌和腓肠肌,行HE染色及BrdU免疫组化染色。结果移植术后14 d,8只大鼠全部成活,移植部位均无坏死和肿瘤形成;MSCs移植组大鼠患侧/健侧后肢的血流灌注比值明显增高（1.773比1.279）,而血管造影结果提示2组大鼠的侧支血管数量比值未见显著增加（0.908比0.835）。HE染色结果示2组大鼠的股四头肌及腓肠肌并未发生特殊的病理学变化。BrdU免疫组化结果显示,阳性颗粒定位为股四头肌及腓肠肌的间质细胞和血管内皮细胞;且MSCs的分布存在差异,移植术后7 d腓肠肌内阳性细胞所占比例明显高于股四头肌,而14 d时则相反。结论 MSCs移植在术后早期可以提高血流灌注量,但这并非为增加了侧支血管数量使然,MSCs移植后所引起的旁分泌效应可能在术后早期起着重要的作用。     

The effect of gradual or acute arterial occlusion on skeletal muscle blood flow, arteriogenesis, and inflammation in rat hindlimb ischemia

BACKGROUND: Current experimental models of critical limb ischemia are based on acute ischemia rather than on chronic ischemia. Human peripheral vascular disease is largely a result of chromic ischemia. We hypothesized that a model of chronic hindlimb ischemia would develop more collateral arteries, more blood flow, and less necrosis and inflammation than would acute hindlimb ischemia. We therefore developed a rat model of chronic hindlimb ischemia and compared the effects of chronic ischemia with those of acute ischemia on hindlimb skeletal muscle. METHODS: Acute or chronic ischemia was induced in 36 male Sprague-Dawley rats. Chronic ischemia caused blood flow, as measured by laser Doppler scanning and confirmed by muscle oxygen tension measurements, to gradually decrease over 1 to 2 weeks after operation. RESULTS: Histologic analysis showed chronic hindlimb ischemia better preserved muscle mass and architecture and stimulated capillary angiogenesis, while lacking the muscle necrosis and inflammatory cell infiltrate seen after acute ischemia. Surprisingly, the chronic ischemia group recovered dermal blood flow more slowly and less completely than did the acute ischemia group, as measured by laser Doppler (0.66 +/- 0.02 vs 0.76 +/- 0.04, P < .05) and tissue oxygen tension (0.61 +/- 0.06 vs 0.81 +/- 0.05, P < .05) at 40 days postoperatively. Consistent with poorer blood flow recovery, chronic ischemia resulted in smaller diameter collateral arteries (average diameter of the five largest collaterals on angiogram was 0.01 +/- 0.0003 mm vs 0.013 +/- 0.0007 mm for acute, P < .005 at 40 days postoperatively). Acute ischemia resulted in decreased tissue concentrations of vascular endothelial growth factor (VEGF) (0.96 +/- 0.23 pg/mg of muscle for acute vs 4.4 +/- 0.75 and 4.8 +/- 0.75 pg/mg of muscle for unoperated and chronic, respectively, P < .05 acute vs unoperated), and in increased tissue concentrations of interleukin (IL)-1beta (7.3 +/- 4.0 pg/mg of muscle for acute vs undetectable and 1.7 +/- 1.6 pg/mg of muscle for unoperated and chronic, respectively, P < 0.05 acute vs unoperated). CONCLUSIONS: We describe here the first model of chronic hindlimb ischemia in the rat. Restoration of blood flow after induction of hindlimb ischemia is dependent on the rate of arterial occlusion. This difference in blood flow recovery correlates with distinct patterns of muscle necrosis, inflammatory cell infiltration, and cytokine induction in the ischemic muscle. Differences between models of acute and chronic hindlimb ischemia may have important consequences for future studies of mechanisms regulating arteriogenesis and for therapeutic approaches aimed at promoting arteriogenesis in humans suffering from critical limb ischemia. CLINICAL RELEVANCE: Despite the substantial clinical differences between acute and chronic ischemia, researchers attempting to develop molecular therapies to treat critical limb ischemia have only tested those therapies in experimental models of acute hindlimb ischemia. We present here a novel model of chronic hindlimb ischemia in the rat. We further demonstrate that when hindlimb ischemia is developed chronically, collateral artery development is poorer than when hindlimb ischemia is developed acutely. These findings suggest that further tests of molecular therapies for critical limb ischemia should be performed in chronic hindlimb ischemia models rather than in acute hindlimb ischemia models.     

结扎大鼠冠状动脉对心脏神经节细胞表达P物质及乙酰胆碱的影响

目的：通过观察急性心肌缺血对心脏神经节细胞表达P物质（SP）和乙酰胆碱（Ach）及其共表达特性的影响．探讨心脏神经节在急性心肌缺血中的病理生理学功能。方法：健康成年雄性SD大鼠16只．采用结扎左冠状动脉前降支的方法制备急性心肌缺血动物模型。采用随机数字表法分为两组：手术对照组（Sham）及结扎冠脉（CAO,30分钟）组。采用HE、NISSLbody染色．原位杂交及免疫荧光的方法．从心脏神经节分布和细胞形态观察急性心肌缺血对心脏神经节P物质和Ach表达的影响。结果：心脏神经节主要存在于心房肌、心脏脂肪组织及大血管周围．偶见散在于心室肌间;心脏神经节内存在SP和Ach的共表达神经节细胞．在未缺血心脏中SP和Ach共表达细胞占所观察神经节细胞的65％．而缺血心脏中共表达细胞占76％。缺血心脏神经节细胞周围可见共表达SP和Ach的卫星细胞。结论：结扎冠脉可诱发心脏神经节共表达SP及Ach细胞增加．提示心脏神经节细胞通过表达SP和Ach参与心肌缺血的病理学过程。     

缺血后处理对缺血-再灌注心肌的保护作用及其与线粒体ATP敏感性钾通道的关系

目的探讨缺血后处理（IPo）的心肌保护作用及与心肌线粒体三磷酸腺苷（ATP）敏感性钾通道（mitoKATP）的关系,为药物后处理的研发提供依据。方法40只Wistar大鼠,建立大鼠离体心脏Langendorff灌注模型,采用随机数字表法分为5组,每组8只,正常对照组（NC组）：用K-H液持续灌注100min,不做任何处理;缺血-再灌注（I/R）组：全心缺血40min,再灌注60min;IPo组：全心缺血40min,再灌注10s,缺血10s,反复6次,然后持续再灌注58min;5-羟基癸酸（5-HD）组：全心缺血40min后,先用含5-HD（100μmol/L）的K-H液再灌注15min,再用不含5-HD的K-H液再灌注45min;IPo＋5-HD组：全心缺血40min后,先用含5-HD（100μmol/L）的K-H液再灌注10s,缺血10s,反复6次,再用含5-HD的K-H液持续灌注13min,然后用不含5-HD的K-H液再灌注45min。观察比较各组心功能、冠状动脉流量（CF）、冠状动脉流出液中心肌肌钙蛋白I（cTnI）含量、心肌梗死（AMI）面积和心肌细胞超微结构改变。结果再灌注末IPo组左心室发展压（74.3±3.3mmHgvs.57.1±3.3mmHg,t=13.00,P=0.000）、＋dp/dtmax（1706.6±135.6mmHg/svs.1313.3±96.2mmHg/s,t=6.28,P=0.000）、-dp/dtmax（1132.8±112.1mmHg/svs.575.7±67.7mmHg/s,t=13.48,P=0.000）、CF（6.49±0.30ml/minvs.3.70±0.24ml/min,t=28.60,P=0.000）与I/R组比较均升高;左心室舒张期末内压（10.9±1.7mmHgvs.26.2±1.5mmHg,t=-19.21,P=0.000）,冠状动脉流出液中cTnI含量（0.62±0.01ng/mlvs.0.71±0.01ng/ml,t=-12.00,P=0.000）均降低,AMI面积与I/R组比较减少20.8%（P〈0.05）。IPo＋5-HD组对心肌的保护作用与IPo组相似,但作用轻于IPo组。电子显微镜观察结果表明,IPo和IPo＋5-HD可减轻I/R引起的心肌纤维和线粒体损伤。结论IPo对I/R心肌有保护作用,其作用与mitoKATP的激活有关。     

应用转血管内皮生长因子基因治疗肢体缺血的研究

目的研究肌肉内转血管内皮生长因子(VEGF)基因治疗肢体缺血的可行性,比较各种治疗方法的疗效. 方法雄性新西兰大白兔50只,完全切除股动脉后随机分为3组.实验组为明胶海绵携载法转基因组(n=18)和肌肉内注射转基因组(n=18);只注射pcDNA3为对照组(n=14).通过直接注射法及明胶海绵携载法将构建的质粒pcDNA3-VEGF121基因转入缺血肌肉内,立即测定各组肢体髂内动脉血流量,在术后2天,1、2、3和4周应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定基因表达,术后30天通过测定缺血肢体髂内动脉血流量、动脉血管造影及组织学观察测定血管密度,评价侧支循环变化. 结果术后2天,转VEGF基因治疗的两实验组均测到基因表达,并均维持2周.术后立即测定的髂内动脉血流量各组间无明显差异.术后30天,缺血肢体髂内动脉血流量、肢体血管造影血管数目和肌肉组织血管密度转VEGF基因的两实验组均比对照组明显增高,差异有统计学意义(P<0.01),明胶海绵携载组较直接注射组亦有明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论肌肉内转VEGF基因治疗可促进急性缺血肢体侧支循环、改善血供,明胶海绵携载法较直接注射法有更好的疗效.     

超声微泡联合Ad-EGFP/HIF-1α介导EPCs移植治疗大鼠心肌梗死

目的探讨超声微泡联合Ad-EGFP/HIF-1α介导内皮祖细胞（EPCs）移植治疗大鼠心肌梗死的可行性。方法将Ad-EGFP/HIF-1α转染EPCs。将30只SD大鼠建立心肌梗死模型后随机分为5组：空白对照组（C组）、超声＋微泡组（US＋MB组）、单纯EPCs组、超声＋EPCs组（US＋EPCs组）及超声＋微泡＋EPCs组（US＋MB＋EPCs组）。EPCs移植后4周,用超声心动图检测大鼠左心室收缩功能,免疫组织化学（I HC）染色法检测CD34的表达及微血管密度（MVD）,Western blot检测VEGF蛋白的表达。结果 US＋MB＋EPCs组射血分数、短轴缩短率高于其他各组（P〈0.05）,MVD计数高于其他各组（P〈0.05）且VEGF蛋白表达水平最高（P〈0.05）。结论超声微泡联合Ad-EGFP/HIF-1α介导EPCs移植可通过促进VEGF的高效表达、刺激心肌梗死周边区血管生成等途径改善心肌梗死大鼠的心功能。     

缺血预处理对大鼠肝细胞凋亡及HIF-1α和Survivin蛋白表达的影响

目的:观察缺血预处理(IP)对缺血再灌注(IR)损伤引起的肝细胞凋亡及对调控基因Survivin、HIF-1α蛋白表达的影响,探讨IP对鼠肝IR损伤保护作用的机制。方法:将90只SD大鼠分为假手术(SO)组10只、IR组和IP组各40只。SO组术中只牵拉分离肝十二指肠韧带,操作完成后关腹;IR组阻断十二指肠韧带,造成缺血30min;IP组缺血30min前持续5min缺血及5min再灌注。IR组及IP组分别于再灌注2、6、12和24h后各处死10只动物,取肝脏标本;SO组于术后2h取肝组织标本。检测细胞凋亡指数(AI)及Survivin、HIF-1α蛋白表达水平。结果:IR组、IP组AI较SO组明显增加(P<0.05),相同时相点IP组较IR组细胞AI明显降低(P<0.05)。IR组、IP组Survivin、HIF-1α蛋白表达先升后降,6h左右达高峰;HIF-1α(除24h时)和Survivin蛋白表达在相同时相点IP组较IR组高(P<0.05)。结论:IP对肝组织IR损伤的保护作用机制之一可能是通过上调HIF-1α、Survivin蛋白的表达抑制细胞凋亡,从而发挥肝脏保护作用。     

缺血预适应对老年大鼠缺血-再灌注心肌的影响

目的探讨缺血预适应（ischemic preconditioning,IPC）对老年大鼠缺血-再灌注损伤（I/R）后心肌的影响。方法取Wistar大鼠56只,其中21~23月龄（老年鼠）和4~5月龄（青年鼠）各28只,建立离体心脏Langendorff灌注模型,按随机数字表法分为7组（每组8只）：青年对照组、青年I/R组、青年IPC组、老年对照组、老年I/R组、老年IPC组、老年强化IPC组。对照组采用全心灌流90 min,不做任何处理;I/R组采用心脏平衡灌流30min后,缺血30 min,再复灌30     

抑制低氧诱导因子-1α表达对小鼠肠缺血／再灌注所致肺损伤的影响

目的探讨通过低氧诱导因子-1α（hypoxiainduciblefactor-1α,HIF—1α）抑制剂YC-1预先抑制该基因表达对肠缺血,再灌注（ischemia／reperfusion,I／R）致急性肺损伤的影响。方法6周～8周龄健康雄性C57BL／6小鼠36只,采用随机数字表法随机分为3组（每组12只）：假手术组（S组）、I／R组和I／R±YC—I预处理组（YC—I组）。YC-1组于术前10min腹腔注入YC-1（1mg／kg）,采用夹闭C57BL／6小鼠肠系膜前动脉45min后再灌注6h的方法造成肠YR损伤模型,取小鼠肺标本称重后计算肺湿干重比,苏木素-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色后观察肺组织病理学改变,分光光度法测定髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）活性、酶联免疫吸附测定法检测肺组织肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和白细胞介素（interleukin,IL）-1β表达,反转录-PCR法检测HIF-1α、Toll样受体4（toll—likereceptor4,TLR4）mRNA的表达。结果与I／R组比较,预先抑制HIFqct表达使肺实质水肿及中性粒细胞浸润聚集减少,肺组织病理学损伤减轻,肺湿干重比显著降低（RnOI）,MPO活性下调[（1．88±0．82）u／g],TNF-α[（187±20）ng／L）]、IL一1β[（536±54）ng／L）]、HIF-1α、TLR4mRNA的表达水平下降（P〈0．05）。结论YC-1预处理可使肺组织TLR4mRNA表达下调,抑制肠I／R肺组织中促炎细胞因子的释放,明显减轻小鼠肠I／R后急性肺损伤。