7种microRNAs在原发性肝癌组织和癌旁组织间的差异表达及与血清肿瘤标志物水平的相关性研究

目的 分析小RNA(microRNAs)在原发性肝细胞癌组织和癌旁组织中的表达差异及与血清肿瘤标志物水平的相关性,探索肝癌诊断和预后可能的新标志.方法 使用实时定量PCR技术检测7种MicroRNAs在原发性肝细胞癌组织和癌旁组织中的表达差异.结果 7种microRNAs在原发性肝细胞癌组织和癌旁组织中的表达差异均有统计学意义(P<0.05).与癌旁组织相比,miR-34c、miR-21、miR-16及miR-10b在肝癌组织中表达上调,miR-200a、miR-148b及miR-Let-7i在肝癌组织中表达下调,其中miR-200a 和 miR-148b下调明显.miR-200a在肝癌和癌旁组织中的表达差异与患者血清AFP水平呈正相关(r=0.848 9,P<0.01),而其余microRNAs的表达差异与患者血清各肿瘤标志物水平均无相关关系(P>0.05).结论 原发性肝细胞癌和癌旁组织中存在microRNAs的表达差异,miR-200a可能成为新的肝癌早期诊断标志.     

微小RNA-342-3p靶向调节单羧酸转运蛋白1对肝癌细胞增殖、周期和迁移的影响

目的探讨微小RNA(miRNA, miR)-342-3p靶向调节单羧酸转运蛋白1(MCT1)对肝癌细胞增殖、周期核迁移的影响。方法选取2019年9月至2021年9月黄淮学院附属驻马店市中心医院和河南省人民医院收治的100例肝癌组织和癌旁组织作为研究对象, 采用荧光定量PCR分析肝癌组织和癌旁组织中miR-342-3p表达水平。人肝癌细胞系HepG2分为对照组和miR-342-3p组, 分别采用对照miRNA和miR-342-3p慢病毒感染, 建立稳定细胞系。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、EdU染色、流式细胞术、划痕实验和Transwell分析两组细胞增殖、周期和迁移水平。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-342-3p靶基因;蛋白质免疫印迹分析肿瘤组织和细胞系靶基因表达水平。组间比较采用t检验。结果肝癌组织中miR-342-3p表达水平(0.51±0.14)明显低于癌旁组织(1.22±0.22), 差异有统计学意义(t=27.800, P<0.05)。对照组细胞吸光度(A)值(1.98±0.13)明显高于miR-342-3p组(1.29±0.12), 差异有统计学意...     

直肠癌中差异表达的microRNA及其与预后因子的关系

目的：检测直肠癌组织中差异表达的microRNA（miRNA）,并分析其与预后因子的关系。 方法：选20例直肠癌患者手术所得癌组织标本与癌旁组织,用q-PCR方法筛选在癌组织与癌旁组织中有差异表达的miRNA以及相关的预后因子。 结果：筛选得到26个在直肠癌组织中有差异表达的miRNA,其中15个miRNA表达上调,11个表达下调。相关分析显示,下调的miR-4770、miR-4790-5p与CK20表达呈负相关;上调的miR-182、miR-125a-5p、miR-126与p53表达呈正相关、miR-143和k-ras呈负相关、miR-9与vilin基因呈负相关（均P<0.05）。 结论：直肠癌组织中差异表达的miRNA与预后因子密切相关,可作为直肠癌诊断或预后判断的生物标记。     

早期胃癌特征性miRNA筛选

目的检测早期胃癌组织中微小RNA（miRNA）表达谱,筛选出早期胃癌的特征性miRNA。方法应用中通量基因芯片技术来检测5例早期胃癌组织及其癌旁组织标本中miRNA的表达。结果相对于癌旁组织,早期胃癌组织中共有36个miRNA表达下调,如miR-9．1、miR-103、miR-141等;12个miRNA表达上调,如miR．196a、miR．142．3p、miR-25等。结论在早期胃癌组织中表达异常的miRNA可能与胃癌发生发展有着一定的相关性。     

MCM2p、p16INK4A和Ki-67在肝癌组织中的表达

目的 探讨MCM2p在肝癌中的表达及其与肿瘤细胞增殖活性的关系.方法 采用免疫组织化学法检测MCM2p、p16INK4A和Ki-67在肝细胞肝癌及其相应的癌旁正常组织中的表达.结果 肝癌组织MCM2p和Ki-67的表达显著高于癌旁肝组织(P《0.01),而p16INK4A表达显著低于癌旁肝组织(P《0.01).MCM2p的表达和Ki-67的表达状况关系密切,呈正相关,而与p16INK4A表达呈负相关.结论 MCM2p和Ki-67在肝癌组织中呈高表达,并与肝癌的发生发展及肿瘤的增殖活性有关.     

miR-139-5p对人肝癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨微小RNA(miRNA)-139-5p在肝癌组织中的表达及其对人肝癌细胞增殖、侵袭的影响和潜在的分子机制。方法 采用生物信息学方法,从GEO数据库中下载GSE36915数据集,进行差异miRNA分析,结合TCGA-LICH数据集中的生存数据,筛选与预后显著相关的miRNA。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-139-5p在肝癌及其癌旁组织中的表达。利用CCK-8实验、Transwell实验观察miR-139-5p对人肝癌细胞SK-Hep-1和SMMC-7721的表型变化。采用高通量测序检测过表达miR-139-5p的SK-Hep-1细胞中基因表达的变化,确定miR-139-5p调控的潜在的信号通路和靶基因,并采用免疫印迹实验和报告基因实验进行验证。结果 通过对GSE36915数据集进行分析,共鉴定到50个显著差异表达的miRNA。结合TCGA-LICH数据集中的生存数据,发现在差异最显著的20个miRNA中,miR-15b-3p、miR-1180-3p、miR-139-5p、miR-139-3p与预后显著相关,最终确定miR-139-5p为进一步研究对象。mi...     

基于TCGA数据库肝细胞癌microRNA-324-5p表达与预后危险因素分析

目的:探究microRNA-324-5p(miR-324-5p)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达与病人预后危险因素.方法:通过TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库获得的肿瘤组织和正常肝组织miRNA表达谱数据与病人临床信息,分析miR-324...     

miR-125a在胃癌组织中的表达及临床意义

探讨miR-125a在胃癌中的表达及临床意义。选取2014年7月—2015年12月我院收治的50例胃癌患者的肿瘤组织和癌旁组织。采用RT-PCR技术检测miR-125a-3p和miR-125a-5p的表达水平。胃癌组织中miR-125a-3p、miR-125a-5p表达量均低于癌旁组织,差异有统计学意义(P0.05)。胃癌组织中miR-125a-3p、miR-125a-5p的表达与分化程度、肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移有关(P0.05)。随着患者肿瘤恶性程度的增加,miR-125a-3p、miR-125a-5p的表达不断降低,胃癌患者在miR-125a-3p、miR-125a-5p表达水平方面,肿瘤直径≤5 cm高于肿瘤直径5 cm、临床分期Ⅰ~Ⅱ期高于Ⅲ~Ⅳ期、无淋巴结转移高于淋巴结转移,且差异均有统计学意义(P0.05)。胃癌组织中miR-125a-3p与miR-125a-5p的表达呈正相关(r=0.397,P=0.016)。胃癌组织中miR-125a低表达;miR-125a的表达与胃癌分化程度、肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移有关;miR-125a在胃癌发病、进展中起类似于抑癌基因的作用。     

微小RNA-181b及其靶基因肝癌缺失基因-1在肝癌发生中的作用

目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-181b对肝癌缺失基因-1(DLC-1)的调控及其在肝癌发病中的作用.方法 通过实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Western blot检测4份正常肝脏组织,17份癌旁组织、肝癌组织及肝癌SMMC7721细胞、胚肝LO2细胞中miR-181b和DLC-1的mRNA和蛋白质表达水平.应用miR-181b抑制剂下调肝癌细胞SMMC7721中miR-181b表达后,实时定量聚合酶链反应和Westem blot检测SMMC7721细胞中DLC-1表达水平的变化.结果 miR-181b在正常肝组织、癌旁组织和肝癌组织中的相对表达量分别为0.162 ±0.004、0.175±0.021和0.656±0.034,肝癌组织高于正常肝组织(P＜0.05).miR-181b在SMMC7721细胞中的表达较LO2细胞上调(0.723±0.042和0.262±0.037,P＜0.01).DLC-1 mRNA在正常肝组织、癌旁组织和肝癌组织中的相对表达量分别为0.392±0.094、0.187 ±0.043和0.081 ±0.012,肝癌组织低于正常肝组织(P＜0.05);DLC-1蛋白在正常肝组织、癌旁组织和肝癌组织中的相对表达量分别为0.423±0.026、0.214±0.029和0.112±0.021,差异有统计学意义(P＜0.01).miR-181b抑制剂转染SMMC7721细胞后,DLC-1蛋白在空白组、转染组和阴性对照组的相对表达量分别为0.132±0.027、0.379±0.019和0.125±0.015,转染组较其他两组明显升高(P＜0.05).结论 miR-181b在肝癌组织中表达上调,其抑制DLC-1的表达可能是肝癌发生的重要机制.     

应用液相芯片分析肝细胞癌及癌旁组织小分子RNA表达谱差异

目的运用液相芯片技术研究肝细胞癌（HCC）及毗邻癌旁组织中小分子RNA（miRNA）表达谱差异。方法常规抽提20例HCC及对照癌旁组织中总RNA，采用含有114种miRNA的液相芯片及配套的Luminex 100检测系统进行miRNA差异表达谱分析；选取部分筛选出的差异表达miRNA，以半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot分析其相对应的靶mRNA和目的蛋白表达状况。结果HCC的miRNA表达谱中差异表达miRNA共有28个，其中上调6个，下调22个，20例标本中共存性差异表达miRNA有9个（上调2个，下调7个，P〈0．01）；选取表达明显上调的miR-222作为进一步研究对象，半定量RT—PCR和Western blot分别证实其调节的靶目标-结缔组织生长因子（CTGF）在mRNA水平HCC和癌旁组织中差异无统计学意义。而蛋白质水平在HCC中表达明显下降。结论液相芯片筛选差异表达miRNA为HCC发病机制和诊断治疗的研究提供了新的思路；miR-18可能通过转录后基因沉默机制抑制CTGF mRNA翻译，从而促进HCC浸润转移。     

microRNA-616在肝癌中的表达及临床意义

目的:探讨micro RNA-616(mi R-616)在肝细胞癌(HCC)中的表达及临床意义。方法:应用实时定量PCR检测80例HCC患者的肿瘤组织与癌旁组织标本,以及正常肝细胞与不同分化程度的HCC细胞mi R-616表达;分析mi R-616表达与HCC患者临床病理因素及预后的关系;观察HCC细胞过表达或抑制mi R-616表达后侵袭及转移能力的变化。结果:与癌旁组织比较,HCC组织中mi R-616的表达明显升高,且复发患者明显高于非复发患者,有转移患者明显高于无转移患者(均P0.05);所有HCC细胞株的mi R-616表达均明显高于正常肝细胞,且在高侵袭性HCC细胞株中的表达明显高于低侵袭性HCC细胞株(均P0.05);mi R-616表达与HCC患者是否存在门静脉癌栓、Edmondson-Steiner分级、TNM分期有关(均P0.05);mi R-616表达是影响HCC患者生存的独立危险因素(P0.05),mi R-616高表达患者的总生存率和无病生存率均明显低于mi R-616低表达患者(均P0.05)。HCC细胞过表达mi R-616后侵袭迁移能力明显增强,mi R-616表达抑制后侵袭迁移能力明显减弱(均P0.05)。结论:mi R-616在HCC中表达升高,且mi R-616高表达与HCC不良预后密切相关。     

原发性肝细胞癌以及近癌旁组织微血管密度CD105表达及其临床意义

目的 研究肝细胞癌(HCC)及其近癌旁组织微血管密度(MVD-CD105)分布,探讨MVD-CD105在HCC、近癌旁组织的分布规律、临床意义以及CD105标染HCC组织微血管的特异性.方法 采用免疫组织化学方法检测63例HCC组织、近癌旁组织MVD-CD105,比较HCC组织和近癌旁组织MVD-CD105分布特点及其与临床参数的关系.结果 63例HCC及其近癌旁组织血管CD105阳性表达率为100％,近癌旁组织表达强度高于癌组织(χ2=9.184,P＜0.01).HCC组织MVD-CD105为(58.37±21.45)/0.74mm2,近癌旁组织为(81.62±19.86)/0.74mm2,近癌旁组织MVD-CD105分布显著高于癌组织(t=2.438,P＜0.05).HCC组织中的MVD-CD105阳性表达分布与肿瘤转移及TNM分期有关(P＜0.01).近癌旁组织的MVD-CD105阳性表达分布与肿瘤TNM分期及2年存活时间有关(P＜0.05).结论 CD105标染HCC组织MVD未体现出肿瘤微血管标染特异性.HCC组织MVD-CD105高表达、分布意味着肿瘤的局部转移和进展.CD105分子不能作为抗肝癌肿瘤血管生成靶向治疗的靶标,但肝癌MVD-CD105的检测对于后续综合治疗有指导意义.     

基于生物信息学的肝细胞癌组织miR-1180表达与临床意义分析

目的:通过生物信息学数据分析探讨肝细胞癌(HCC)组织中miR-1180的表达及其临床意义。方法:下载GEO(Gene Expression Omnibus)和TCGA(The Cancer Genome Atlas)相关数据集,比较HCC组织和癌旁组织中miR-1180表达量,并分析miR-1180表达量与肝癌患者临床病理特征及预后之间的相关性。利用生物信息学方法对mi R-1180的靶基因进行预测及功能富集分析,并结合预后分析结果筛选miR-1180关键靶基因。结果:mi R-1180在HCC组织中较癌旁组织高表达,且对于HCC具有良好的诊断效能(AUC0.8,均P0.05);miR-1180的表达量与患者年龄、肿瘤家族史、肿瘤分化程度以及AFP等指标明显有关(均P0.05)。生存分析表明HCC组织中miR-1180高表达是影响HCC患者预后的独立危险因素(P0.05)。富集分析提示miR-1180的靶基因主要富集于脂质代谢、细胞迁移、转录调控等功能和脂肪酸降解等通路。PPARGC1A、ALDH2、SARDH、HMGCS2、ESR1、ETS2等为miR-1180关键靶基因,在HCC组织中均表达下调(均P0.05),且相对低表达者预后较差(均P0.05)。结论:mi R-1180在HCC组织中表达升高,其可能作为一种促癌miRNA参与HCC的发生、发展,并具有成为HCC诊断标志物、预后指标及治疗靶点的潜在应用价值。     

上皮间质转化相关蛋白在肝细胞肝癌组织中的表达鉴定及其小分子RNA表达谱的研究

目的 检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)及其相应小分子RNA(miRNA)在原发性肝细胞肝癌(HCC)中的表达.方法 免疫组织化学检测32例HCC组织中E-cadherin和vimentin的表达,分析其与临床病理资料的关系.应用miRNA芯片筛选HCC转移相关差异表达miRNAs.选取部分差异表达miRNAs以实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法进行验证,利用在线靶基因预测软件对其靶基因进行预测.结果 E-cadherin在转移、低分化/未分化、大于3 cm组中的阳性表达率分别为25.0%(2/8)、35.7%(5/14)、52.9%(9/17),vimentin在上述三组的阳性表达率分别为87.5%(7/8)、71.4%(10/14)、52.9%(9/17).E-cadherin表达下调、vimentin表达上调与HCC分化(低分化/未分化)和转移明显相关(P＜0.05),而与其大小无关.miRNA芯片筛选获得36个HCC转移相关miRNAs(8个上调,28个下调).在E-cadherin(-)/vimentin(+)转移HCC中,miR-21、miR-221的表达(2.22±1.79、2.36±1.05)明显高于E-cadherin (+)/vimentin(-)无转移HCC(4.35±1.90、3.90±1.23,P＜0.05);miR-199a、miR-126的表达(4.42±0.61、3.62±0.54)明显低于E-cadherin(+)/vimentin(-)无转移HCC(2.43±0.85、2.54±1.10,P＜0.05).结论 E-cadherin(-)/vimentin(+)转移HCC与E-cadherin(+)/vimentin(-)无转移HCC的miRNA明显差异表达,其中部分差异表达miRNAs可能通过调控上皮间质转化相关分子的表达参与HCC的转移.

Abstract：

Objective To detect the expression of E-cadherin and vimentin, and their corresponding microRNAs (miRNAs) in primary heptocellular carcinoma (HCC). Methods The expression of E-cadherin and vimentin in 32 cases of HCC tissues was examined by using immunohistochemistry, and the relationship between the expression and clinicopathology was analyzed. miRNA array was used to investigate the differentially expressed miRNAs between E-cadherin ( - )/vimentin ( + ) metastasis HCC and E-cadherin ( + )/vimentin ( - ) no-metastasis HCC. Real-time polymerase chain reaction (PCR) was applied to verify the reliability of miRNA array results. We predicted target genes of the four miRNAs by combination anticipated algorithms. Results The positive rate of E-cadherin in the metastasis, poor/no differentiation, ＞3 cm groups was 25.0% (2/8), 35.7% (5/14), 52. 9% (9/17) respectively, and that of vimentin was 87.5% (7/8), 71.4% (10/14), 52.9% (9/17)respectively. The low expression of E-cadherin and high expression of vimentin in HCC was significantly correlated with metastasis and poor differentiation of HCC (P＜0. 05). miRNA array showed that 8 miRNAs were up-regulated and 28 miRNAs were down-regulated in E-cadherin ( - )/vimentin ( + ) metastasis HCC. The expression levels of miR-21 and miR-221 in E-cadherin ( - )/vimentin ( + ) metastasis HCC were 2. 22 ± 1.79 and 2. 36 ±1.05, significantly higher than those in E-cadherin ( + )/vimentin ( - ) no-metastasis HCC (4. 35 ±1.90, 3.90 ± 1.23,P＜0.05). The expression levels of miR-126 and miR-199a in E-cadherin (-)/vimentin ( + ) metastasis HCC were 4. 42 ± 0. 61 and 3.62 ± 0. 54, notably lower than those in E-cadherin ( +)/vimentin (-) no-metastasis HCC (2.43±0.85, 2.54±-1.10,P＜0.05). Conclusion miRNA differential expression profile of E-cadherin ( - )/vimentin ( + ) HCC was obtained, and some of miRNAs may play a role in metastasis of HCC by regulating epithelial to mesenchymal transition.     

上调miR-101对肝细胞癌生物学行为的影响

目的：探讨miR-101在肝细胞癌（HCC）细胞生物学行为的影响。 方法：分别将miR-101模拟物或miRNA阴性对照序列转染HepG2和SMMC-7721两种HCC细胞,以无处理自然生长的两种细胞为各自空白对照,观察miR-101对两种细胞增殖、集落形成能力、凋亡及周期的影响,以及对侵袭和迁移能力的影响。 结果：与各自的空白对照细胞比较,转染miR-101模拟物后的HepG2和SMMC-7721细胞的增值能力明显降低、细胞集落的形成明显减少、G0/G1期的细胞比例升高、细胞凋亡率明显增加、迁移与侵袭细胞数明显减少（均P<0.05）;转染miRNA阴性对照序列对两种细胞的以上指标无明显影响（均P>0.05）。 结论：miR-101可能在HCC细胞中起到了抑癌基因的作用,上调其表达能抑制HCC的恶性生物学行为。     

miR-96的表达对肝细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-96在肝细胞癌(HCC)细胞中的表达及作用。方法:用qRT-PCR测定miR-96在不同HCC细胞系(HepG2、7721、huh7)及正常肝细胞系L02中的表达;将HepG2细胞分别转染miRNA随机序列(阴性对照组)、miR-96模拟物(miR-96模拟物组)和miR-96抑制物(miR-96抑制物组)后,用细胞划痕实验及Transwell细胞侵袭实验分别检测细胞迁移及侵袭能力,qRT-PCR及Western blot分别测定PTPN9 mRNA及蛋白的表达。结果:miR-96在各肝癌细胞系中的相对表达量均明显高于其在正常肝细胞系L02的相对表达量(均P0.01)。与阴性对照组比较,细胞划痕愈合率在miR-96模拟物组明显升高,而在miR-96抑制物组明显降低(均P0.05);侵袭细胞数在miR-96模拟物组明显增多,而在miR-96抑制物组明显减少(均P0.05);PTPN9 mRNA与蛋白相对表达量在miR-96模拟物组均明显下调,而在miR-96抑制物组均明显上调(均P0.05)。结论:miR-96在HCC细胞中表达升高,并可能通过下调PTPN9表达促进HCC细胞的迁移与侵袭。     

miR-19 在肝细胞肝癌中的表达及其临床意义

目的：探讨肝细胞肝癌（HCC）组织中miR-19的表达情况及其临床意义。 方法：用qRT-PCR的方法检测51例HCC组织及其癌旁组织以及10例正常肝组织中miR-19的表达;分析了miR-19表达与HCC患者临床病理因素及预后的关系。 结果：miR-19的表达量在正常肝组织、癌旁组织、HCC组织中依次增高,差异均有统计学意义（均P<0.05）。miR-19表达与HCC患者的肿瘤大小（P=0.029）、转移（P=0.011）、静脉侵犯（P=0.002）及AJCC分期（P=0.008）有关,而与年龄、性别、肿瘤分化、卫星灶、肿瘤数量及AFP无相关（均P>0.05）。miR-19高表达的患者5年生存率明显低于低表达的患者（P<0.05）。miR-19高表达以及转移、静脉侵犯均为影响HCC患者生存的独立风险因素（均P<0.05）。 结论：miR-19在HCC组织中表达上调,并可能与HCC的增殖、转移有关;miR-19高表达提示预后不良。