ABC—ELISA检测白色念珠菌芽管特异性抗原的临床研究

本文制备了白色念珠菌芽管特异性抗体,采用ABC-ELISA法对系统性念珠菌病临床患者血清中的相应抗原进行检测,结果表明:该检测方法的敏感性为92.9％,检测的最低敏感浓度约为15—15.6ng/ml,在对照组患者和正常人血清中均未测出芽管特异性抗原。作者认为此检测方法对该病的诊断有重要价值。     

白念珠菌芽管特异性抗原的研究

运用ⅡＦ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和免疫印迹技术，证实８株临床分离的白念珠菌芽管表面存在芽管特异性抗原。白念珠菌菌丝相胞壁提取物中含有比孢子相更多的、不同的蛋白成份；发现白念珠菌菌丝相胞壁提取物中有一分子量大约为３９ ０００蛋白抗原成份很可能是白念珠菌芽管特异性抗原；认为白念珠菌孢子相和其它念珠菌孢子相胞壁中有以隐蔽状态存在的芽管抗原成份。     

系统性白念珠菌病患者血清中芽管抗体的检测

目的 探讨一种诊断深部白念珠菌病的新方法.方法 以间接免疫荧光法测定白念珠菌系统感染患者血清中芽管抗体的滴度,并与常规真菌检测结果及菌株磷脂酶活性相比较.结果 血清中芽管抗体检测与常规检测方法(镜检+培养)阳性率比较,有较好的一致性(P<0.001).磷脂酶活性测定结果显示,感染组患者分离株较定植组的磷脂酶活力差异有统计学意义(P<0.05);磷脂酶活性与芽管抗体滴度具有相关性,P<0.001.结论 检测白念珠菌芽管抗体在系统件白念珠菌感染诊断中具有一定的诊断意义.     

寻常型天疱疮患者血清骨桥蛋白的检测北大核心CSCD

目的 探讨寻常型天疱疮（PV）患者血清中骨桥蛋白在PV发病中的作用.方法 用酶联免疫吸附试验对31例寻常型天疱疮患者和35例健康对照组血清骨桥蛋白的浓度进行测定.用SPSS17.0及Excell统计软件对数据进行处理.结果 PV患者血清骨桥蛋白的表达水平显著高于健康对照组（P＜0.01）.皮肤黏膜同时受累患者血清骨桥蛋白水平高于仅皮肤受累组（P＜0.05）.合并感染组血清骨桥蛋白水平高于未合并感染组（P＜ 0.01）; PV患者的血清骨桥蛋白水平与抗Dsg3抗体呈正相关（rs=0.489,P＜ 0.01）.结论 骨桥蛋白在PV患者血清中高表达,特别是皮肤黏膜同时受累的患者,且与天疱疮抗体滴度呈正相关.     

三种梅毒螺旋体特异性抗体检测方法性能评价

目的:比较电化学发光免疫分析(ECLIA)、化学发光免疫分析(CLIA)、酶联免疫吸附实验(ELISA)三种方法检测梅毒螺旋体特异性抗体的性能差异.方法:通过梅毒螺旋体抗体颗粒凝集试验(TPPA)实验筛选阳性样本和阴性样本各60例,对所有样本的梅毒螺旋体特异性抗体采用三种方法检测,通过受试者工作曲线(ROC)确定不同方...     

口腔黏膜渗出液快速诊断试剂与血清ELISA试剂检测不同人群HIV-1抗体的评价

目的探讨口腔黏膜渗出液(OMT)快速诊断试剂与酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂检测不同人群HIV-1抗体的一致性.方法对已经过生物梅里埃ELISA试剂检测血清HIV-1抗体阳性并经蛋白印迹(WB)试验确诊的HIV感染者200例(HIV阳性组),和经过生物梅里埃ELISA试剂检测血清HIV-1抗体阴性的健康人群600例(HIV阴性组)采集OMT标本,使用OMT快速诊断试剂进行HIV-1抗体检测.同时评价口腔黏膜渗出液快速诊断试剂在实际应用中的影响因素.结果 HIV阳性组200例中198例OMT标本检测为阳性,其中192例(96%)检测线清楚,易做阳性结果判断.4例(2%)"模糊",2例(1%)"很模糊",需经专业人员判断;2例(1%)检测线"看不见",为阴性.HIV阴性组600例OMT标本检测HIV抗体全为阴性.结论口腔黏膜渗出液快速诊断试剂与生物梅里埃血清ELISA诊断试剂检测HIV-1抗体相比,在HIV阳性标本中检测一致性为99.0%,在HIV阴性标本中检测一致性为100%,总体一致性为99.75%.

Abstract：

Objective To evaluate the consistence in the detection of antibodies against HIV-1 between a new rapid test using oral mucosal transudate (OMT) samples and ELISA using serum samples. Methods Two-hundred patients who were positive for anti-HIV-1 antibodies by serum ELISA and confirmed by Western blot to be infected with HIV, and 600 healthy human controls negative for anti-HIV-1 antibodies by serum ELISA, were eligible for this study. OMT samples were collected from these subjects and subjected to a rapid test for anti-HIV-1 antibodies. The factors influencing the performance of the rapid test were analyzed. Results Of the 200 OMT specimens from HIV-infected patients, 198 showed positive reaction, 2 showed negative reaction. Among the 198 positive reactions, 192 (96%) were "clear" and easy to make decisions, 4 (2%) were "faint", 2(1%) were "very faint" and required professionals to make decisions. The rapid test was negative in all the 600 OMT specimens from the control group. Conclusions The consistence in the detection of anti-HIV-1 antibodies between the OMT rapid test and serum ELISA was 99% in HIV-positive specimens, 100% in HIV-negative specimens, and 99.75% in all the specimens.     

口腔黏膜渗出液快速诊断试剂与血清ELISA试剂检测不同人群HIV-1抗体的评价

目的探讨口腔黏膜渗出液(OMT)快速诊断试剂与酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂检测不同人群HIV-1抗体的一致性.方法对已经过生物梅里埃ELISA试剂检测血清HIV-1抗体阳性并经蛋白印迹(WB)试验确诊的HIV感染者200例(HIV阳性组),和经过生物梅里埃ELISA试剂检测血清HIV-1抗体阴性的健康人群600例(HIV阴性组)采集OMT标本,使用OMT快速诊断试剂进行HIV-1抗体检测.同时评价口腔黏膜渗出液快速诊断试剂在实际应用中的影响因素.结果 HIV阳性组200例中198例OMT标本检测为阳性,其中192例(96%)检测线清楚,易做阳性结果判断.4例(2%)"模糊",2例(1%)"很模糊",需经专业人员判断;2例(1%)检测线"看不见",为阴性.HIV阴性组600例OMT标本检测HIV抗体全为阴性.结论口腔黏膜渗出液快速诊断试剂与生物梅里埃血清ELISA诊断试剂检测HIV-1抗体相比,在HIV阳性标本中检测一致性为99.0%,在HIV阴性标本中检测一致性为100%,总体一致性为99.75%.     

微卫星基因分型法分析生殖器白念珠菌感染的传播特点

目的 建立适用于株间鉴别的白念珠菌快速微卫星基因分型方法,探索生殖器白念珠菌感染特点.方法 采集39例女性和27例男性生殖器念珠菌病患者生殖器、肛管和口腔的白念珠菌分离株.以三色荧光标记引物,PCR扩增白念珠菌保守基因CDC3、EF3和HIS3微卫星序列,经聚丙烯酰胺凝胶电泳,行微卫星多态性基因分型.结果 三基因联合分析显示,男女生殖器白念珠菌感染者共获18种基因型,主要致病菌株基因型为116:124、122:131、160:200,占感染者的50%以上.3种共有基因型占71%.女性患者中肛管部位菌株基因型与生殖器部位完全一致的占80%,男性则仅占3.8%.女性患者口腔部位的菌株基因型与生殖器部位完全一致的仅占2.7%,男性未见口腔和生殖器一致的菌株基因型.71%的夫妻共患者间生殖器白念珠菌基因型完全相同,其中80%的致病菌株基因型为两性皆感染的主要致病性白念珠菌.结论 改良的白念珠菌微卫星多态性基因分型法能够特异、准确、稳定和快速地进行菌株间鉴别.生殖器白念珠菌感染存在优势基因型.     

白念珠菌的药物敏感性与基因型的研究

目的 探讨甲紫等5种抗真菌药物对白念珠菌的药物敏感性,分析白念珠菌药物敏感性与其基因型的关系。 方法 根据M27－A2方案检测甲紫、两性霉素B、酮康唑、伊曲康唑、氟康唑对67株白念珠菌的药物敏感性。提取白念珠菌基因组DNA,应用PCR扩增白念珠菌25S核糖体 rDNA基因内含子区,根据PCR扩增片段将白念珠菌分为A（36株）、B（23株）、C（8株）基因型,分析白念珠菌不同基因型与药物敏感性的关系。结果 药敏实验结果显示,67株白念珠菌中,8.96%对氟康唑、2.98%对伊曲康唑、1.49%对酮康唑耐药,两性霉素B无耐药菌株。甲紫的最低抑菌浓度在0.125 ~ 4 mg/L。统计学分析显示,白念珠菌对5种抗真菌药物的敏感性与其基因型无明显相关关系,P值均 > 0.05。结论 氟康唑和伊曲康唑耐药菌株的增多在临床用药选择上应引起注意,甲紫的抗真菌作用值得重视。白念珠菌基因型与抗真菌药物耐药的发生可能无明显相关关系。     

白念珠菌经汉防己甲素作用前后的差异蛋白质组学分析

目的 研究汉防己甲素对白念珠菌蛋白质表达的影响,寻找汉防己甲素作用相关蛋白质.方法 以白念珠菌氟康唑敏感株CA-3为研究对象,常规培养白念珠菌,实验分两组,分别为不加药的CA-3组及加汉防己甲素(终浓度为250 mg/L)的CA-3组,汉防己甲素作用6 h后收集细胞,提取两组样本的总蛋白质,运用固相pH梯度双相凝胶电泳分离,Image Master 2D Platinum软件分析蛋白图谱的差异,以经基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)对蛋白质进行质谱鉴定.结果 成功建立汉防己甲素作用前后白念珠菌敏感株蛋白质双相凝胶电泳图谱,图像重复性好.图像分析出差异蛋白质26个,最终质谱鉴定出差异蛋白质7个,其中上调蛋白质1个,为Pst1;下调蛋白质6个,分别为Idh1、Asc1、Rps5、Asn1、Asn1、Srb1.结论 汉防己甲素作用于白念珠菌敏感株前后蛋白质有差异,Pst1、Idh1、Asc1、Rps5、Asn1、Asn1、Srb1在汉防己甲素对白念珠菌作用中起重要作用.

Abstract：

Objective To study the effects of tetrandrine on the protein expression profile of C. albicans,and to screen for proteins associated with the effect of tetrandrine. Methods Fluconazole-sensitive C. albicans CA-3 was cultured with or without tetrandrine (250 mg/L) for 6 hours followed by the collection of Candida cells. Total proteins were extracted from these cells and separated by using immobilized pH gradient two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis. Protein spots were detected and analyzed by Image Master 2D Platinum software, and MALDI-TOF/TOF-MS-based method was used to identify these proteins. Results The two-dimensional gel electrophoresis maps of C. albicans proteins before and after the treatment with tetrandrine were successfully obtained with high repeatability. Image analysis revealed a total of 26 differentially expressed protein spots in C. albicans treated with tetrandrine, and 7 differentially expressed proteins were identified by the mass chromatographic analysis, including 1 up-regulated protein (Pst1), and 6 down-regulated proteins (Idh1,Asc1, Rps5, Asn1, Asn1, Srb1 ). Conclusions The expressions of some proteins in fluconazole-sensitive C. albicans experience significant changes after tetrandrine treatment, and Pst1, Idh1, Asc1, Rps5, Asn1, Asn1 and Srb1 may considerab1y contribute to the effects of tetrandrine on C. albicans.     

单克隆天然抗角蛋白抗体384抑制白念珠菌芽管生成的研究

目的观察单克隆天然抗角蛋白抗体384与自念珠菌结合及对芽管生成的影响。方法采用ELISA和流式细胞仪检测单克隆天然抗角蛋白抗体384与白念珠菌结合，并将抗体与真菌共孵育，检测白念珠菌芽管生成的变化。结果ELISA和流式细胞仪检测均发现384可以与白念珠菌结合；相对于同型对照组，384作用组真菌芽管生成率显著下降，两组差异有统计学意义。结论单克隆天然抗角蛋白抗体384可以与白念珠菌结合并抑制其芽管生成，提示天然IgM在机体抗真菌天然免疫中可能具有一定的作用。     

白念珠菌基因组结构与遗传、致病相关基因

白念珠菌是一种重要的机会致病菌,在人的多个系统或器官与宿主共栖生存,可导致口腔和阴道念珠菌病,在免疫力低下或患严重疾病的患者,可引起系统疾病.由于早期准确诊断系统性念珠菌病存在困难,合适有效的抗真菌药物数量有限,病原体的耐药性增加,导致系统性念珠菌病病死率居高不下.因此,对白念珠菌基因组序列及结构、功能的研究对指导临床的诊断和治疗显得尤为重要.     

树突细胞相关C型凝集素-1受体介导的抗白念珠菌免疫作用及机制

树突细胞相关c型凝集素-1是一种主要的C型凝集素样受体,存在于多种细胞和组织中.它能够特异性识别白念珠菌细胞壁主要成分β-葡聚糖,进而诱导机体产生固有免疫反应和适应性免疫反应.其可单独或与其他模式识别受体相互协同完成上述过程.白念珠菌β-葡聚糖的暴露、树突细胞相关C型凝集素-1表达水平等因素可影响机体免疫效应的强度,对其进行调控将为自念珠菌感染预防和治疗提供一个新的方向.

Abstract：

Dectin-1, a principal C-type lectin pattern-recognition receptor, exists in various types of cells and tissues. It can specifically recognize β-glucans, which are the major cell wall component of Candida albicans, and then trigger the innate and adaptive immune responses in hosts. Dectin-1 can independently, as well as collaboratively with other pattern recognition receptors, induce above mentioned processes. The intensity of immune responses in hosts is modulated by multiple factors such as the exposure of β-glucans on Candida albicans and the expression level of Dectin-1, and this modulation may provide a new direction for the prevention and therapy of Candida albicans infection.     

白念珠菌临床株多药耐药蛋白基因表达与氟康唑耐药的关系

目的 探讨临床分离白念珠菌氟康唑耐药株/敏感株多药耐药蛋白基因CDR1、CDR2、MDR1的表达情况。方法 试剂盒法抽提白念珠菌氟康唑耐药株/敏感株的总RNA后，逆转录成cDNA，采用实时定量PCR技术观察白念珠菌多药耐药蛋白基因的表达。结果 白念珠菌耐药株组CDR2基因的△CT值为7.52 ± 2.53，敏感株组为9.28 ± 3.15，两组比较，t = 2.37，P ＜ 0.05，耐药株的表达量要高于敏感株。结论 白念珠菌CDR2基因的高表达与氟康唑耐药有关。     

复发性念珠菌颈部淋巴结炎1例易感基因筛查及免疫学研究

【摘要】 目的 探究1例复发性念珠菌性颈部淋巴结炎患者的遗传学病因及抗真菌免疫功能。方法 采用二代测序技术筛查患者及父母真菌病易感基因,提取患者及6例健康对照者外周血单个核细胞（PBMC）以及中性粒细胞,与白念珠菌进行体外共培养,采用Western印迹检测患者PBMC中胱天蛋白募集域蛋白9（CARD9）表达水平,酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-6、IL-17A、IL-1β和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）的分泌水平,菌落计数法检测中性粒细胞处理后白念珠菌存活率。两组间均数比较采用t检验。结果 患者CARD9基因存在2号外显子c.68C>A（p.S23X）和6号外显子c.820dupG（p.D274Gfs*61）复合杂合突变,两突变分别来自其父母。Western印迹显示,健康对照组PBMC中CARD9蛋白相对表达水平为0.41 ± 0.07,而患者表达缺如。热灭活白念珠菌孢子刺激后,患者PBMC的TNF-α、IL-6、IL-17A、IL-1β和GM-CSF分泌水平均低于健康对照组（P < 0.001）。体外培养30、120 min时,与患者中性粒细胞共培养的白念珠菌存活率（78.00%、74.00%）均高于健康对照（70.91% ± 1.75%、34.55% ± 5.35%）,差异有统计学意义（t值分别为3.743、6.988,P <0.05）。结论 1例复发性念珠菌颈部淋巴结炎患者CARD9基因存在复合杂合突变,导致CARD9蛋白表达缺如,该患者存在抗白念珠菌免疫功能缺陷。