内皮祖细胞抑制小鼠异基因骨髓移植后肝小静脉血栓形成的作用

目的 探讨内皮祖细胞(EPC)抑制异基因骨髓移植后肝小静脉血栓形成的作用.方法 采用随机数字表法将Balb/c小鼠分为3组,单纯骨髓移植组的小鼠在全身照射后经尾静脉输注C57BL/6小鼠的骨髓单个核细胞5×106/只 ;联合EPC移植组则在单纯骨髓移植的基础上同时输注C57BL/6小鼠的EPC 5×105/只 ;正常对照组的小鼠不作任何处理.分别于移植后第0、5、10、15和20天时,计算各组小鼠的肝脏指数,光镜下观察肝小静脉血栓形成情况以及肝细胞及血管内皮损伤情况,电镜下观察肝小静脉、肝血窦内皮、肝细胞损伤及血小板黏附情况,检测外周血活化血小板的比例及肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度的变化.结果 移植后第0、5、10、15和20天时,单纯骨髓移植和联合EPC移植组的活化血小板比例、肝脏指数和外周血TNF-α浓度均呈现上升趋势,至第15天时达到高峰,随后下降,但仍明显高于正常对照组(P＜0.05) ;各时间点联合EPC移植组的上述指标均明显低于单纯骨髓移植组,差异均有统计学意义(P＜0.05).与单纯骨髓移植组比较,联合EPC移植组的血小板黏附减少,肝小静脉血栓形成较少,肝细胞水肿和坏死程度均较轻,且肝脏损伤修复较快.结论 小鼠骨髓移植时联合输注EPC能显著抑制肝小静脉血栓形成,明显减轻肝脏损伤.     

联合成骨细胞移植促进骨髓移植小鼠的造血功能重建

目的 探讨联合成骨细胞移植对骨髓移植小鼠造血功能重建的影响.方法 Balb/c小鼠60只,取其中18只制备移植用骨髓有核细胞和成骨细胞.将其余42只小鼠分为3组.单纯移植组:小鼠18只,仅进行骨髓移植(BMT);联合移植组:18只,进行BMT的同时每只小鼠输入成骨细胞2×106个;正常对照组:小鼠6只,不做任何处理,仅作为移植前的正常对照.移植组小鼠在全身照射(TBI)预处理后4 h经尾静脉注入骨髓细胞2×106个.移植后第7、14和21天,分别处死移植组小鼠6只,对小鼠的外周血细胞和骨髓单个核细胞(BMMNC)进行计数,采用流式细胞术测定BMMNC中CD34+细胞的百分比,使用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图像系统测量骨髓造血组织面积,采用免疫组化染色法测定骨髓组织微血管密度(MVD).结果 移植后第7天,单纯移植组和联合移植组小鼠外周血细胞计数及BMMNC数均明显低于正常对照(P＜0.01).第21天时联合移植组小鼠白细胞、红细胞及BMMNC数明显恢复,血小板数已接近正常对照组;单纯移植组小鼠外周血细胞数和BMMNC数虽然有所恢复,但其恢复程度明显弱于联合移植组.移植后第7、14和21天,联合移植组外周血细胞计数及BMMNC数均明显高于同期单纯移植组(P＜0.01或P＜0.05).移植后第7、14、21天,单纯移植组和联合移植组小鼠骨髓造血组织面积、BMMNC中CD34+细胞百分比及骨髓组织MVD均明显低于正常对照组(P＜0.01),但联合移植组均高于同期单纯移植组(P＜0.01或P＜0.05).结论 联合成骨细胞移植能有效促进骨髓移植小鼠骨髓造血系统的重建.

Abstract：

Objective To explore the effects of cotransplantation with osteoblasts on hematopoietic reconstitution in mice after bone marrow transplantation (BMT). Methods The typical model of syngeneic BMT was established. 18 Balb/c mice were used to prepare the bone marrow nuclear cells and osteoblasts for BMT. The 42 Balb/c mice were randomly divided into 3 group:normal group (6 mice, without any treatment), the single BMT group ( 18 mice, given 2 × 106 bone marrow nuclear cells/each mouse) and the cotransplantation group of HSC with osteoblaats (18 mice,given 2 × 106 bone marrow nuclear cells and osteoblasts/each mouse). The following factors were measured on day 7, 14, 21 after BMT: peripheral blood cells, bone marrow mononuclear cells (BMMNC), the percentage of CD34+ cells in BMMNC (assayed by flow cytometry), the hematopoietic tissue changes (detected by HPIAS-1000 image analysis system) and micro vascular density (MVD) of bone marrow tissue (with immunohistochemistry). Results The levels of periphral WBC, RBC, PLT, BMMNC in the contransplantation group were higher than those in the single BMT group (P＜0. 01 or P＜0. 05). In the contransplantation group, the percentage of CD34+ cells in BMMNC, the hematopoietic tissue area and the MVD of bone marrow were also higher than the single BMT group on the 7th, 14th, 21st day after BMT(P＜0.01 or P＜0.05). Conclusion Cotransplantation with osteoblasts could significantly promote hematopoietic reconstruction in mice after BMT. Cotransplantation may represent a promising means of achieving higher engraftment rate after BMT.     

环孢素A联合钴原卟啉预防小鼠HSCT后移植物抗宿主病

目的 探讨应用环孢素A(CsA)联合钴原卟啉(CoPP)预防小鼠异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后移植物抗宿主病(GVHD)的作用.方法 以C57BL/6小鼠为供鼠,Balb/c小鼠为受鼠,分为4组:清髓性全身照射(TBI)组,受鼠TBI后经尾静脉注射磷酸盐缓冲液;常规异基因移植组(BS组),受鼠TBI后经尾静脉注射供鼠骨髓细胞与脾细胞的混合悬液(含骨髓细胞5×106个和脾细胞5×105个);CsA组,受鼠HSCT后腹腔注射CsA;CsA联合CoPP干预组(联合组),受鼠HSCT后腹腔注射CsA和CoPP.观察受鼠存活情况,记录体重.获取受鼠肝脏、小肠和皮肤组织样本,观察GVHD的病理变化;行Masson染色,观察肾组织纤维化;检测受鼠肾组织血红素氧合酶1(HO-1)mRNA的表达.结果 与BS组和CsA组相比较,联合组GVHD程度较轻,体重下降较少且恢复较快.移植后30d时BS组累积存活率为36.8％,联合组为69.6％,CsA组为53.5％,差异有统计学意义(P＜0.05).联合组小鼠肝脏、小肠和皮肤组织可见细胞水肿、变性均较轻,坏死少见,炎症细胞浸润较少,其病理改变较BS组和CsA组轻.联合组几乎无肾间质小管纤维化,而CsA组则较明显.联合组HO-1 mRNA表达高于BS组,CsA组HO-1 mRNA表达低于前两组(P＜0.05).结论 CsA和CoPP联合应用可增强CsA抗GVHD效应,并可减轻CsA的不良反应,其机制可能与HO-1表达上调有关.     

同种异基因造血干细胞移植急性移植物抗宿主病小鼠模型的制作

目的 制作同种异基因造血干细胞移植急性移植物抗宿主病(GVHD)小鼠模型.方法 以C57BL/6( H-2b)小鼠为供者,Balb/c( H-2d)小鼠为受者,进行同种异基因骨髓移植.设立全身照射(TBI)对照组(4只)、GVHD组(10只)、单纯骨髓移植组(10只)及正常对照组(4只).TBI对照组仅进行致死性TBI,TBI后不进行骨髓移植;GVHD组于TBI前5d开始饮用含320 mg/L庆大霉素和250 mg/L红霉素的饮用水,移植当天以60Co γ射线行一次性TBI,总剂量8.0Gy,TBI后5h内每只小鼠经尾静脉输注C57BL/6小鼠骨髓细胞2×106个+脾细胞1×107个;单纯骨髓移植组预处理与GVHD组相同,每只小鼠经尾静脉输注C57BL/6小鼠骨髓细胞2×106个.移植后观察小鼠的精神状态、活动能力、体位改变、皮毛、体重和大便等,记录每只小鼠的存活时间,计算存活率,并绘制生存曲线.濒死小鼠的皮肤、肝脏、小肠和骨髓行病理检查.结果 TBI对照组小鼠的存活时间为(9.0±0.7)d,GVHD组为(32.0±3.2)d,单纯骨髓移植组为(17.5±1.6)d,3组间两两比较,存活时间的差异均有统计学意义(P＜0.01).TBI对照组病理检查显示造血功能衰竭.GVHD组于移植后第10～13天出现急性GVHD表现,其皮肤、肝脏和小肠组织的病理表现均符合Ⅰ～Ⅱ度急性GVHD改变,单纯骨髓移植组也于移植后第10～13天出现GVHD表现,但其GVHD表现和组织学改变明显轻于GVHD组,仅为0～Ⅰ度GVHD.结论 Balb/c小鼠经致死性TBI后移植同种异基因小鼠骨髓细胞+脾细胞可成功制作稳定的急性GVHD模型.     

利用脊柱骨来源骨髓细胞建立急性移植物抗宿主病模型

目的探讨利用脊柱骨来源骨髓细胞建立小鼠异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,Allo-HSCT)急性移植物抗宿主病(aGVHD)模型的可行性。方法选择C57BL/6(H-2b)雄性小鼠为供体鼠,BALB/c(H-2d)雌性小鼠为受体鼠。制备供体鼠的脾细胞和脊柱骨来源骨髓细胞悬液。受体鼠采用药物加小剂量辐照的预处理方式,于移植前8d～移植前4d腹腔注射氟达拉滨(200mg/kg),接着移植前3d～移植前1d腹腔注射环磷酰胺(60mg/kg),最后在移植前进行全身照射(total-body irradiation,TBI),照射剂量为4Gy(戈瑞)。18只受体鼠经预处理后随机分为3组,每组6只:(1)骨髓移植组,只输入1×107个脊柱骨来源骨髓细胞;(2)aGVHD组,输注1×107个脊柱骨来源骨髓细胞和5×106个脾细胞,建立aGVHD模型;(3)空白对照组,不输入任何细胞。观察3组小鼠生存状态及存活率,取aGVHD组与骨髓移植组存活21d的受体鼠进行病理学检查,取aGVHD组移植后21～28d存活的小鼠的脾脏进行流式细胞术检测骨髓细胞嵌合度。结果骨髓移植组小鼠全部存活,可重建造血,单纯输注骨髓细胞不会诱发aGVHD。aGVHD组小鼠出现aGVHD表现,100%发生aGVHD相关死亡,中位生存期为18d;病理检查结果显示符合aGVHD病理表现,移植后21～28d存活的小鼠诊断为供受体混合嵌合状态,符合aGVHD诊断标准。结论用脊柱骨来源骨髓建立的aGVHD模型完全符合标准,且更加经济,适合大规模建模。     

输注Wnt3a基因修饰的骨髓间充质干细胞减轻小鼠急性移植物抗宿主病

目的 探讨联合输注经Wnt3a基因修饰的MSC减轻小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的作用及其可能机制.方法 以C57BL/6小鼠为供鼠,以Balb/c小鼠为受鼠,建立小鼠allo BMT模型.采用随机数字表法将受鼠分为4组:(1)移植对照组(A组):经受鼠尾静脉仅输注供鼠骨髓细胞5×106个;(2) aGVHD组(B组):经受鼠尾静脉输注供鼠脾细胞5×106个及骨髓细胞5×106个;(3)aGVHD+空载体组(C组):经受鼠尾静脉输注供鼠脾细胞5×106个、骨髓细胞5×106个及转染了空载体pAd-GFP的MSC 1×106个;(4)实验组(D组):经受鼠尾静脉输注供鼠脾细胞5×106个、骨髓细胞5×106个及经Wnt3a基因修饰的MSC1×106个.移植后监测各组受鼠的一般表现和存活情况,观察aGVHD的发生情况,检测受鼠脾脏中供者来源的T淋巴细胞数量变化及白细胞介素2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)水平.结果 A组受鼠的存活时间均超过60d;B、C、D组受鼠的存活时间分别为(19.1±6.19)d、(32.6±19.6)d和(47.2±15.6)d,D组受鼠的存活时间较B组和C组明显延长(P＜0.05).移植后,B、C、D组受鼠的aGVHD评分分别为(8.0±0.41)分、(6.7±0.29)分和(4.0±1.0)分,D组受鼠的aGVHD评分较B组和C组明显降低(P＜0.05),且病理分级明显减轻.移植后3和5d时D组受鼠脾脏中供者T淋巴细胞的数量和增殖速度均较B组和C组明显降低(P＜0.05),并且移植后7、14、21、28 d时D组受鼠血清IL-2和IFN-γ水平均较B组和C组明显减少(P＜0.05).术后60d时,长期存活受鼠的骨髓细胞中H-2Kb细胞的嵌合率均在95％～100％.结论 联合输注经Wnt3a基因修饰的MSC可更有效的减轻小鼠allo-BMT后的aGVHD,这可能与Wnt3a的过表达激活了MSC的Wnt/β-catenin信号通路,从而抑制供者T淋巴细胞的早期激活和扩增及抑制IL-2和IFN-γ的表达有关.     

造血重建对异基因造血干细胞移植患者早期生活质量的影响

目的探讨造血重建对异基因造血干细胞移植(HSCT)患者早期生活质量的影响,为针对性干预提供参考。方法将122例患者以出净化病房时血小板是否重建分为造血重建组(88例)和造血延迟组(34例),采用癌症治疗功能评价系统-骨髓移植生命质量测评量表(FACT-BMT)测评患者在入净化病房前、移植后1、3、6个月生活质量。结果 122例患者不同时间点生活质量得分差异有统计学意义,其中移植后1个月得分最低,6个月时得到显著改善(P<0.05,P<0.01);造血重建组前3个时间点生活质量得分显著高于造血延迟组(均P<0.05)。多元回归分析结果显示早期造血重建与否是HSCT患者生活质量的主要影响因素,其次为移植物抗缩主病及性别(均P<0.05)。结论早期造血重建可作为HSCT患者术后生活质量的预测因素,护理人员应特别注重对造血延迟患者的针对性护理,以助HSCT患者在术后早期获得较好的生活质量。     

输注供者自然杀伤细胞对小鼠单倍型相合造血干细胞移植的影响

目的 探讨输注供者自然杀伤(NK)细胞对小鼠单倍型相合造血干细胞移植的影响.方法 选取C57BL/6(H-2b)雄性小鼠为供者、CB6F1(H-2d/b)雌性小鼠为受者.移植前制备供者的骨髓细胞(BMC)、脾细胞(SC)及脾NK细胞,NK细胞经体外培养扩增和激活;所有受者均接受直线加速器X线全身照射(TBI)预处理.TBI后将受者分为4组(每组10只),分别进行单倍型相合造血干细胞移植.单纯TBI组:TBI后不输注细胞,仅作为对照;单纯BMC输注组:输注5×106个BMC;诱发GVHD组:输注5×106个BMC+1.5×107个SC;NK细胞输注组:输注5 x 106个BMC+1.5×107个SC+1×107个NK细胞,并腹腔注射100 ng重组人白细胞介素2(rhIL-2)和1μg rhIL-15,持续7 d.移植后观察各组受者GVHD的发生情况,并对各组受者进行组织病理学、供者细胞嵌合度和免疫功能重建等检测.另取TBI后受者20只,设白血病复发组和白血病治疗组,每组10只.白血病复发组:输注5×106个BMC+1×107个SC+2×106个白血病细胞株EL9611;白血病治疗组:在白血病复发组的基础上再输注1 x 107个NK细胞,并腹腔注射100 ng rhIL-2和1μg rhIL-15,持续7 d.观察两组受者白血病复发情况和移植后100 d的存活率.结果 单纯BMC输注组受者无GVHD发生,NK细胞输注组受者GVHD的评分和组织病理学改变均较诱发GVHD组轻(P<0.05)f诱发GVHD组的免疫功能重建较NK细胞输注组延迟.白血病复发组和白血病治疗组移植后100 d的存活率分别为20%和90%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 输注激活的供者NK细胞可以减轻小鼠单倍型相合造血干细胞移植后的GVHD,减少白血病复发,促进免疫功能重建.     

延迟并连续小鼠异基因骨髓移植减轻移植物抗宿主病的探讨

目的 探讨延迟并连续小鼠异基因骨髓移植减轻急性移植物抗宿主病(aGVHD)的作用及其机制.方法 选择BALB/c(H-2d)/b鼠为受者,C57BL/6(H-2b)小鼠为供者.受者接受60Coγ射线全身照射(TBI)后,建立骨髓移植模型.实验分为5组.对照组:TBI后4 h经受者尾静脉输注RPMI 1640液0.4 ml;经典移植组:TBI后4 h经受者尾静脉输注供者的骨髓细胞(BMC)和脾细胞(SC)各1×107个/0.2 ml;连续移植组:TBI后4 h、1 d、2 d和3 d分4次经受者尾静脉输注供者的BMC和SC,每次输注量各为2.5 × 106个/0.05 ml;延迟移植组:TBI后第4天经受者尾静脉输注供者的BMC和SC各1× 107个/0.2 ml;延迟并连续移植组:TBI后第4、5、6和7天分4次经受者尾静脉输注供者的BMC和SC,每次输注量各为2.5×106个/0.05 ml.移植后观察受者的临床表现、病理学改变及存活时间,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定受者外周血中白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-10及γ干扰素(IFN-γ)的水平,应用流式细胞仪测定受者H-2b细胞、T淋巴细胞亚群及自然杀伤(NK)细胞的百分率.结果 对照组和经典移植组受者均在TBI后3周内因造血功能衰竭和/或aGVHD死亡;连续移植组和延迟移植组受者TBI后60 d存活率分别为30%和50%;延迟并连续移植组受者TBI后60 d的存活率为70%,高于其它4组(P＜0.05).延迟并连续移植组IL-4、IL-10的表达高于经典移植组(P＜0.05);IL-2和IFN-γ的表达低于经典移植组(P＜0.05).延迟并连续移植组TBI后20 d时外周血白细胞计数恢复正常,30 d时外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的表达恢复正常,60 d时H-2b细胞的百分率为(98.13±1.11)%.结论 延迟并连续小鼠异基因骨髓移植能减轻移植后的aGVHD.其作用机制主要是避开了TBI后炎症冈子表达的高峰期,下调了炎症因子和Th1类细胞因子的表达,促进了Th2类细胞因子的表达.     

HSCT联合伊马替尼治疗费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病

目的 观察造血干细胞移植(HSCT)联合伊马替尼治疗费城染色体阳性(Ph+)急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的疗效,分析影响预后的因素.方法 Ph+ALL患者32例,全部患者移植前均达血液学完全缓解,其中第1次缓解(CR1)期27例,CR2期5例.19例患者移植前达到分子生物学缓解(MR).32例中,自体移植4例,异基因移植28例.采用全身照射(TBI)+环磷酰胺(Cy)+氟达拉滨(Flu)+阿糖胞苷(Ara-C)的预处理方案.患者输注单个核细胞的中位数为5.6×108/kg,输注CD34+细胞中位数为2.94×106/kg.31例患者于HSCT前应用伊马替尼,口服,400～600 mg/d;16例患者于HSCT后应用伊马替尼,包括预防性治疗7例,剂量为300～400mg/d,治疗9例,剂量为400～600 mg/d.结果 32例患者移植后均获得造血重建.全部患者预期3年总体存活率为(62.1±8.6)%,无白血病存活率为(59.2±8.7)%,复发率为(17.7±7.2)%,移植相关死亡率为(26.2±8.0)%.4例自体移植患者均存活,其中3例已持续缓解14、18和67个月.对异基因移植进行单因素分析显示,行HLA匹配亲缘HSCT者的总体存活率为76.5%,高于行无关供者或HLA半相合亲缘HSCT者(27.3%,P＜0.05),前者无白血病存活率也高于后者(分别为70.6%和27.3%,P＜0.05).移植前获得MR者的复发率为5.6%,低于未缓解者(40.0%,P＜0.05),移植前处于CR1期者的复发率为12.5%,低于CR2期者(50.0%,P＜0.05).结论 伊马替尼联合HSCT可用于治疗Ph+ALL患者,移植前获得MR或于CR1期进行移植者的预后更佳.

Abstract：

Objective To analyze the outcomes and the prognostic factors of hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) in combination with imatinib for Philadelphia chromosome positive acute lymphoblastic leukemia (Ph+ ALL). Methods All 32 patients with Ph+ ALL achieved hematologic complete remission (CR) at time of transplantation, including 27 cases in the first CR (CR1) and 5 in CR2. Nineteen patients achieved molecular remission (MR). Among 32 patients, 4 received autologous HSCT (AHSCT), and 28 allogeneic HSCT (allo-HSCT). The conditioning regimens comprised of total body irradiation (TBI), cyclophosphamide, fludarabine and cytarabine. The median number of transfused mononuclear cells was 5. 6 × 108/kg, and that of CD34+ cells was 2. 94 × 106 /kg. Thirty-one patients were administrated imatinib orally before transplantion, at a dose of 400～600 mg/day, and 16 patients after transplantation, including 7 for prevention at a dose of 300～400 mg/day and 9 for salvage treatment at a dose of 400 ～ 600 mg/day. Results Hematopoietic reconstitution was achieved in all 32 patients. Three-year estimate of overall survival (OS) was (62. 1±8. 6)%, leukemia-free survival (LFS) (59. 2 ± 8. 7)%, relapse rate (RR) (17. 7 ± 7. 2)% and transplant-related mortality (26. 2 ± 8. 0) %. All 4 undergoing AHSCT were alive, and 3 out of them were in continuous CR with durations of 14, 18 and 67 months respectively. The univariate analysis for prognosis in allo-HSCT showed that the OS of HLA-matched sibling donors group was 76. 5 %,higher than that of unrelated or haploidentical donors group (27. 3 %, P＜0. 05), and so was LFS (70. 6 % vs 27. 3 %, P＜0. 05). RR in patients achieving MR at time of transplantation was 5. 6 %,lower than that in those not achieving MR (40. 0 %, P＜0. 05). RR in patients in CR1 at time of transplantation was 12. 5 %, lower than that in those in CR2 (50 %, P ＜0. 05). Conclusion Imatinib improved the outcomes of HSCT for Ph+ ALL, especially to patients achieving MR at time of transplantation and transplantation in early stage (CR1).     

基因工程Treg细胞对小鼠异基因骨髓移植后GVHD和GVL效应的影响

目的 探讨输注慢病毒载体介导的小鼠基因工程调节性T淋巴细胞(Treg细胞)对小鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病(GVHD)及移植物抗白血病(GVL)效应的影响.方法 利用慢病毒载体介导,将小鼠叉状头螺旋转录因子(Foxp3)基因转导入Balb/c小鼠的CD4+CD25-T淋巴细胞,即为基因工程Treg细胞.以Balb/c小鼠为供者.C57BL/6小鼠为受者,进行异基因骨髓移植,移植当天受者接受X线直线加速器全身照射.用随机数字表法将受者分为5组,每组10只.(1)单纯照射组:经受者尾静脉输注RPMI 1640培养液0.2 ml;(2)白血病对照组:经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个+C57BL/6小鼠T淋巴细胞白血病/淋巴瘤细胞株(EL4细胞)500个;(3)移植对照组:经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个+脾细胞5×106个+EL4细胞500个;(4)工程Treg组:经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个+脾细胞5×106个+EL4细胞500个+基因工程Treg细胞5×106个;(5)空载体对照组:经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个+脾细胞5×106个+EL4细胞500个+空载体转导的CD4+CD25-T淋巴细胞5×106个.每天观察受者存活情况;记录GVHD及白血病的发生情况;各组均于小鼠濒死前取其肝脏、小肠、皮肤、脾脏等组织,进行病理学观察;取长期存活(超过60 d)受者的骨髓细胞,检测嵌合情况.结果 单纯照射组、白血病对照组、移植对照组、工程Treg组和空载体对照组小鼠存活时间分别为(10.3±1.5)d、(20.7±1.9)d、(26.0±4.3)d、(49.0±17.7)d和(24.4±4.1)d,工程Treg组小鼠存活时间明显长于其他各组,差异有统计学意义(P＜0.05).白血病对照组小鼠肝、脾组织病理切片均存在白血病细胞浸润表现,移植对照组及空载体对照组小鼠肝脏、皮肤和小肠病理切片存在GVHD病理改变,而工程Treg组长期存活小鼠各组织病理切片结构基本正常,未见GVHD及白血病细胞浸润病理表现,该组GVHD评分明显低于移植对照组及空载体对照组.结论 小鼠异基因骨髓移植时联合输注基因工程Treg细胞可有效减少GVHD的发生并保留GVL效应.     

伊马替尼联合供者淋巴细胞输注治疗造血干细胞移植后慢性粒细胞白血病复发

目的 探讨伊马替尼联合供者淋巴细胞输注(DLI)治疗异基因造血干细胞移植后慢性粒细胞白血病(CML)复发的效果.方法 3例CML(慢性期)患者,在接受预处理后,例1接受其胞妹外周血造血干细胞移植,例2接受其胞兄的骨髓移植,例3接受其胞弟的骨髓与外周血造血干细胞联合移植.例1移植后采用环孢素A(CsA)和霉酚酸酯(MMF)预防移植物抗宿主病(GVHD),例2采用CsA、短程甲氨蝶呤(MTX)、抗胸腺细胞球蛋白及抗CD25单克隆抗体预防GVHD,例3应用CsA、MTX和MMF预防GVHD.采用细胞遗传学及荧光原位杂交技术动态监测治疗效果.移植后发生血液学复发时,给予伊马替尼口服,并行DLI.结果 例1移植后30 d行DLI,输注CD3+T淋巴细胞0.5×107 /kg,移植后50 d和70 d,再次行DLI,分别输注CD3+ T淋巴细胞1.0 × 107 /kg和2.0×107 /kg,短串联重复序列(STR)检测提示为完全供者嵌合(DC).移植后120 d,疾病进展,给予伊马替尼400 mg/d,同时输注供者CD3+ T淋巴细胞2.5 × 107/kg.移植后180 d,STR检查提示仍为DC.患者最终于移植后17个月因髓外复发死亡.例2的染色体核型于移植后35 d转变为46,XY,XY为100%,BCR-ABL融合基因阴性.移植后100 d,原发病复发.停用免疫抑制剂,输入供者CD3+ T淋巴细胞3.9×107 /kg,同时口服伊马替尼500 mg/d.DLI联合伊马替尼治疗后30 d,患者的染色体核型为46,XY,XY为100%,BCR-ABL融合基因阴性,患者至今无病存活53个月.例3移植后5 d造血功能获得重建,移植后60 d,染色体核型为46,XY.移植后120 d,确诊CML复发,遂给予伊马替尼400 mg/d,并行DLI,共输注供者CD3+ T淋巴细胞8×107 /kg,1个月后,患者的染色体核型再次转为46,XY,患者至今无病存活50个月.结论 伊马替尼联合DLI对造血干细胞移植后CML复发具有一定的治疗效果.     

非清髓性无关供者脐血移植与同胞供者骨髓移植治疗再生障碍性贫血的比较

目的 对非清髓性无关供者脐血移植与同胞供者骨髓移植治疗重型再生障碍性贫血(SAA)的临床效果进行评价和比较.方法 回顾性分析15例SAA患者进行非清髓性造血干细胞移植的临床资料,根据造血干细胞(HSC)来源的不同,将患者分为骨髓移植组(BMT组;6例)和脐血移植组(UCBT组;9例).对两组患者术后的外周血象、骨髓象、细胞嵌合体状态、移植物抗宿主病(GVHD)以及存活率等长期随访结果进行了统计学分析.结果 BMT组和UCBT组造血干细胞植入率分别为100%和66.7%,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).UCBT组移植后大多数形成了供、受者型细胞混合嵌合体,BMT组大多数形成了供者型完全嵌合体.BMT组血象恢复正常的中位时间为25 d、UCBT组为120 d,BMT组骨髓象恢复正常的中位时间为25 d,UCBT组为150 d.BMT组慢性GVHD的表现以肝功能异常为主,而UCBT组则以皮疹为主.UCBT组术后早期感染率为33.3%,BMT组为16.7%.结论 非清髓性无关供者脐血移植和同胞供者骨髓移植均可成功治疗SAA;但与BMT比较,UCBT的造血功能恢复较慢、血型转变少而延迟、早期感染率较高、而慢性GVHD的程度却较轻.     

第三方脐血细胞辅助输注对小鼠单倍型造血干细胞移植后造血重建的影响

目的分析以脐血细胞作为第三方细胞辅助输注对小鼠单倍型造血干细胞移植后造血重建的影响。 方法以CB6/F1雄性小鼠为供鼠,以BALB/C小鼠为受鼠。受鼠经Co60全身照射清髓后回输供鼠干细胞,建立单倍型造血干细胞移植模型。将40只受鼠分为对照组和实验组,每组各20只,对照组受鼠回输供鼠干细胞,实验组受鼠回输供鼠干细胞＋脐血单个核细胞。于移植后＋7 d、＋14 d、＋21 d、＋28 d和＋50 d对存活受鼠进行断尾采血,检测白细胞、血红蛋白和血小板,分析造血重建情况。处死小鼠时取外周血1 mL,采用荧光原位杂交技术检测Y染色体比例,计算嵌合率。两组受鼠各时间点白细胞、血红蛋白及血小板检测结果采用成组t检验进行比较,嵌合率采用卡方检验进行比较。P<0.05为差异有统计学意义。 结果移植后＋14 d实验组和对照组白细胞数量分别为(8.4±2.6)×10⁹/L和(3.8±1.0)×10⁹/L,差异有统计学意义(t＝6.968,P<0.05);其他时间点两组白细胞数量差异无统计学意义。移植后两组受鼠各时间点血红蛋白检测结果差异均无统计学意义。移植后＋7 d实验组和对照组血小板数量分别为(125±40)×10⁹/L和(64±15)×10⁹/L,移植后＋14 d分别为(282±47)×10⁹/L和(163±41)×10⁹/L,差异均有统计学意义(t＝6.366和8.093,P均<0.05);其他时间点两组血小板数量差异无统计学意义。 结论使用脐血细胞作为第三方细胞辅助输注后,可促进单倍型造血干细胞移植受鼠早期白细胞和血小板较快恢复。     

经诱导的绿色荧光蛋白转基因C57BL雄鼠脾细胞移植重建雌鼠造血功能研究

目的探讨雄性C57BL绿色荧光蛋白（GFP）鼠诱导的脾细胞移植对造血衰竭小鼠造血重建的作用。方法建立小鼠造血衰竭模型,移植鱼卵提取物诱导的雄性C57BL荧光鼠脾细胞,检测诱导后细胞的干细胞标志抗原表达;观察受体存活时间,检测外周血白细胞计数、外周血GFP阳性细胞,进行荧光原位杂交检测Y染色体;各组受体脾和肺切片观察GFP细胞分布。结果鱼卵提取物诱导的雄性C57BL荧光鼠脾细胞比未诱导的脾细胞表达更多的干细胞标志抗原。1×106个脾细胞经尾静脉回输经致死剂量照射的雌性小鼠,明显延长小鼠存活时问,提高小鼠外周血白细胞计数。诱导组受体外周血中检测到GFP阳性细胞,骨髓中检测出60％的细胞含Y染色体。诱导组受体脾和肺切片观察到GFP阳性细胞分布。结论鱼卵提取物诱导的小鼠脾细胞中含较多的多能干细胞,回输给造血衰竭小鼠能重建其造血功能。     

成骨细胞参与骨髓造血微环境的构建及发挥调控作用

目的对成骨细胞参与骨髓造血微环境的构建并在其中发挥调控作用的研究进展进行综述。方法广泛查阅近年国内外相关文献,对成骨细胞作为骨髓造血微环境的主要成分、对破骨细胞、造血干细胞细胞周期和相关黏附因子,以及细胞因子的调控研究进展进行回顾性总结与分析。结果成骨细胞是成熟个体中骨髓造血微环境的关键构成成分。成骨细胞通过细胞受体-配体的信号传导、细胞因子、细胞黏附及对其他参与构建骨髓造血微环境中的细胞的调控作用,将原始造血干细胞维持在静止状态,保持了其自我更新,多向分化的干细胞特性。结论对成骨细胞与骨髓造血微环境相互作用的进一步研究,为造血干细胞的临床移植应用提供了更好的理论基础。     

联合内皮祖细胞移植对小鼠骨髓移植预处理中肝脏内皮损伤的修复作用

目的 研究联合内皮祖细胞(EPC)移植对小鼠骨髓移植预处理中肝脏内皮损伤的修复作用.方法 将C57BL/6小鼠分为4组,每组10只.(1)正常对照组:小鼠不做任何处理,仅作为正常对照;(2)单纯照射组:单次给予全身照射(TBI)预处理,不进行骨髓移植;(3)单纯移植组:给予单纯照射组相同的TBI预处理,TBI后4 h内经小鼠尾静脉输注C57BL/6小鼠骨髓单个核细胞5×106/只;(4)联合移植组,小鼠的处理方式与单纯移植组相同,仅在骨髓移植的同时经尾静脉输注C57BL/6小鼠EPC 5×105/只.TBI后第2、4、7、14、21天,检测各组小鼠肝脏重量的变化情况,并于TBI后第4、7、14、21天对各组小鼠肝脏进行组织病理学检查.结果 单纯照射组、单纯移植组和联合移植组小鼠肝脏重量均于TBI后第2天开始明显增加,于第14天达到高峰,峰值分别为正常对照组的(1.65±0.15)倍(P＜0.05)、(1.61±0.06)倍(P＜0.05)和(1.11±0.4(0)倍(P＜0.05);以后均呈下降趋势,第21天时单纯照射组和单纯移植组肝脏重量仍明显高于正常对照组(P＜0.05),但联合移植组小鼠肝脏重量已完全恢复正常.组织病理学检查显示,单纯照射组小鼠肝窦内皮损伤明显,肝细胞水肿及严重的炎症细胞浸润,第7天时肝细胞水肿、坏死较前明显加重,几乎无存活的肝血窦内皮细胞;第14天时单纯移植组小鼠肝窦内皮损伤较前有所减轻,但到第21天时仍未恢复正常;联合移植组小鼠第7天时肝窦内皮及肝细胞水肿、坏死程度均较轻,到第14天时已基本恢复正常.结论 造血干细胞移植前的预处理会造成受者肝脏内皮损伤,且此损伤持续存在;移植时联合输注EPC能修复肝窦内皮的损伤.

Abstract：

Objective To study the repair function of united endothelial progenitor cells (EPC)transplantation on injured liver endothelium by bone marrow transplantation (BMT) conditioning.Methods C57BL/6 mice were divided into four groups randomly: normal control group, without any treatment; irradiation alone group, administered a total body irradiation(TBI) pretreatment, without BMT; (3) BMT alone group: C57BL/6 mice were infused with bone marrow mononuclearcells (MNC) 5 × 106/only through caudal vein not more than 4 h after the same TBI pretreatment as the irradiation alone group; united transplantation group: receiving the same way as the BMT alone group, but C57BL/6 mice were infused with EPC 5 × 105/only at the same time. Two, 4, 7, 14, and 21 days after the TBI, the changes of the liver weight were observed regularly. The histopathological examination of liver was done at the 4th, 7th, 14th, and 21st day after the TBI. Results In irradiation alone group, BMT alone group and united transplantation group the liver weight began to increase significantly on the day 2 and peaked at 14th day after the TBI, and the peaks were respectively (1.65±0. 15) times (P＜0. 05), (1.61 ±0.06) times (P＜0.05), and (1.11 ±0.40)times (P＜0. 05) of those in normal control group. At the day 14, the liver weight in irradiation alone group, BMT alone group and united transplantation group began to decrease, and on the day 21 the liver weight in united transplantation group had been completely restored to normal level, however the liver weight in irradiation alone group and BMT alone group were still significantly heavier than that in normal control group (P＜0. 05). Liver histopathological examination revealed that there were obvious sinusoidal endothelial cells (SEC) injury, hepatocyte edema and severe inflammatory cell infiltration in irradiation alone group, and on the day 7 the hepatocyte edema and necrosis were significantly worse than before, and almost no alive SEC were found. On the day 14 the injury of SEC in BMT alone group was lighter than before, but on the day 21 the injury had not returned to normal. On the day 7 the injury of SEC, hepatocyte edema and necrosis were alleviated in united transplantation group as compared with irradiation alone group and BMT alone group, and on the day 14 the injury had returned to normal basically. Conclusion The transplantation conditioning could damage recipient liver endothelium and the injury would persist, and united EPC infusion could repair the injured SEC following BMT.