甲苯胺红不加热血清试验和胶体金法联合检测梅毒螺旋体的临床应用

目的：探讨甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）和胶体金法（SYP）联合检测在梅毒筛查和诊断方面的应用价值。方法：用TRUST法检测梅毒非特异性抗体，胶体金法、梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）检测梅毒特异性抗体。结果：TRUST对2期梅毒的阳性率较高，为100％，而对1、3期梅毒的阳性率较低，平均为83．96％，胶体金法对各期梅毒的检出率均较高，平均为99．06％，与TPPA差异无统计学意义。结论：胶体金法其特异性和灵敏度与TPPA相比差异无统计学意义，但比TPPA更方便快捷。根据胶体金和TRUST的实验结果，结合症状和病史可初步对梅毒进行诊断分期。     

梅毒血清学检测的适宜方法探讨

目的探讨梅毒甲苯胺红不加热血清反应素试验（TRUST）和梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）在梅毒检测中的应用价值，建立实验室梅毒检测和报告系统。方法用TRUST作为被检测标本的梅毒筛查试验，对筛查阳性标本进一步作TPPA确认试验。对TRUST阴性的高危人群，作TPPA复检。结果8637份被检血清，TRUST阳性者428例，阳性率为4．96％（428／8637）。对TRUST检出的428例阳性标本，TPPA确证阳性325例，阳性符合率为75．93％（325／428）。共有22例TRUST阴性的高危人群，进行了TPPA复检，结果均为阴性。结论TRUST筛查存在一定的假阳性，可用TRUST进行梅毒筛查，对筛查阳性标本进一步作TPPA确认试验。对TRUST阴性的高危人群，应进一步作TPPA复检，两试验均阴性者，告知其可四周后复查，以减少梅毒的误诊和漏诊。     

基于重组优势多表位抗原的梅毒间接酶联免疫吸附试验与梅毒螺旋体血凝试验和甲苯胺红不加热血清试验检测梅毒螺旋体抗体的比较研究

目的：建立操作简便、特异性好、敏感性高的血清梅毒抗体的间接酶联免疫吸附试验（ELISA）。方法：通过计算机分析选择梅毒螺旋体优势抗原表位，构建了梅毒螺旋体多表位优势嵌合抗原(rTpN15-TpN17-TpN42-TpN47)表达载体，转化宿主菌HB101进行表达，纯化获得高纯度融合抗原。在此基础上，以纯化抗原包被酶联板，建立检测血清中梅毒抗体的间接ELISA法。利用该方法与梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）和甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）同时检测了126例梅毒可疑血清样本，对检测结果进行了比较研究。结果：梅毒螺旋体多表位优势嵌合抗原（rTpN15-TpN17-TpN42-TpN47)在大肠杆菌中获得了高效表达，并成功建立了检测血清中梅毒抗体的间接ELISA法及试剂。对126例梅毒可疑血清样本的检测结果，ELISA、TRUST、TPHA的检出阳性率分别为75．40％（95／126）、72．22％（91／126）、70．63％（89／126）， 其中TRUST有29例，TPHA有6例为可疑阳性。TPHA检测的6例可疑阳性中，有5例ELISA、TURST均为阳性；而TRUST测出的29例可疑样品中，仅7例ELISA、TPHA阳性。结论：多表位嵌合抗原ELISA试剂在特异性、敏感性与TPHA法相近，但明显优于TRUST法。     

两种梅毒血清学检测方法的联合运用分析

目的进一步提高酶联免疫吸附试验(ELISA)对梅毒的筛查率,确保梅毒血清学的检测效果。方法采用ELISA联合甲苯胺红不加热血清试验(TRUST),对2011年上海浦东新区2 686例监测人群的血清样本进行梅毒血清学筛查,联合检测的血清学阳性样本用梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)甄别其生物学假阳性;再从2 397份两种方法均为阴性的样本中,随机抽取1 000份进行TPPA检测,甄别其生物学假阴性。结果 ELISA法相对于TPPA法的敏感性为98.9%,特异性为98.4%,两法间差异无统计学意义(P>0.05);ELISA与TRUST法联合应用后的敏感性接近100%,特异性为98.3%。结论 ELISA与TRUST方法的联合应用,其敏感性接近100%,表明其可用于梅毒筛查;另一方面,两者联合运用的特异性为98.3%,具有一定的假阳性率,表明其阳性样本(两法均为阳性的样本除外)还需应用TPPA方法进行最终确认。     

ELISA和TRUST检测梅毒螺旋体方法比较分析

目的 比较ELISA(酶联免疫吸附试验)、TRUST(甲苯胺红不加热血清试验)法诊断梅毒螺旋体感染的方法学差异.方法 用目前国内最常用的诊断梅毒螺旋体感染的TRUST试剂及ELISA试剂检测722例标本,同时与TPPA(梅毒螺旋体明胶凝集试验)的检测结果进行比较,从而得到各试验的假阴性率和假阳性率.结果 对722份样本的检测中,ELISA和TPPA的阳性符合率为98.26％,假阴性率和假阳性率分别为0.46％和1.91％,2种方法差异无统计学意义(P ＞0.05); TRUST和TPPA的阳性符合率为84.39％,假阴性率和假阳性率分别为21.08％和5.10％;ELISA和TURST检出率差异有统计学意义(P＜0.01).结论 ELISA测定梅毒螺旋体的方法在日常大量标本检验时优于TRUST.     

113例献血者梅毒抗体ELISA法阳性与TPPA确证结果比对分析

目的:了解梅毒ELISA法检测阳性献血者采用明胶颗粒凝集试验(TPPA)确证结果情况。方法:每一样本均先经2种不同厂家ELISA法试剂进行检测,对单试剂或双试剂阳性的标本采用TPPA进行确证试验。结果:ELISA法检测阳性结果与TPPA确证结果符合率为80.53%,其中ELISA法双试剂阳性结果 TPPA确证阳性率为77.88%,ELISA法单试剂阳性TPPA确证阳性率分别为0和2.65%,2种ELISA法试剂检测为强阳性(s/co≥5)结果的标本确证阳性率分别为98.67%和100%,反应强度(s/co值)越大,确证阳性率越高。结论:采供血机构对于梅毒ELISA法双试剂阳性献血者可采取永久屏蔽策略,对于ELISA法单试剂阳性献血者,应进行TPPA确证试验后根据确证试验结果再进行献血者回访和处理。对梅毒ELISA法单试剂阳性、TPPA确证阳性结果的献血者可进行屏蔽处理;对于TPPA确证阴性献血者可纳入献血者保留、归队人群进行管理。     

大批量人群体检梅毒不同血清学检测方法的比较

目的：比较常用4种梅毒血清学方法,观察各种方法诊断符合率,选择一种适合大批量人群梅毒健康筛查方法。方法：采用目前临床实验室检查梅毒最主要的快速血浆反应素实验（RPR）、甲苯胺红快速反应素实验（TRUST）、梅毒螺旋体试验（ELISA）、梅毒螺旋体颗粒凝聚试验（TPPA）,4种方法对健康体检者进行梅毒筛查。结果：RPR与TRUST检出率的差异无统计学意义（P〉0.05）,RPR与ELISA检出率的差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：ELISA是大批量人群梅毒筛查的理想的方法。     

35424例患者术前梅毒筛查的方法比较

目的:分析医院现行梅毒术前筛查方法可能存在的假阳性及漏检。方法:应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和快速血浆反应素试验(RPR)对武汉协和医院35 424例术前筛查人群的血清进行检测。对结果无法确定的样本以梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)为确证实验。结果:3 5424例血清中有4例RPR假阳性,有2例ELISA检测梅毒螺旋体抗体(TPAb)漏检,但是这2例血清RPR都呈现阳性反应。结论:RPR和ELISA检测TPAb具有相辅的意义,同时做这两项实验会有效减少梅毒的漏检率。     

四种梅毒螺旋体检测方法的应用分析

应用酶联免疫吸附试验(ELISA)、梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)分别检测血清中的梅毒螺旋体抗体,荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测局部分泌物或渗出物中梅毒DNA.结果 :TRUST、TP-ELISA、TPHA、FQ-PCR法灵敏度分别为84.3%、96.1%、94.1%、97.1%,特异性分别为93.5%、98%、100%、100%.TRUST在一、三期梅毒的阳性率最低(66.7%和50%);FQ-PCR在一期梅毒阳性率最高.提示TP-ELISA可作为输血和手术前检测的一种理想筛查方法;TPHA可作为梅毒确诊方法;TRUST可应用于梅毒治疗疗效监测;早期梅毒的诊断首选FQ-PCR.     

梅毒抗原血清学试验筛查在实验室诊断中的应用

目的探讨梅毒逆向筛查程序方案,分析其在实验室诊断及梅毒筛查防治中的应用价值。方法应用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)、梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)、甲苯胺红不加热血清学试验(TRUST),同时对2015年1至6月杭州师范大学附属医院各门诊及病房梅毒筛查者23 389份标本进行检测。以TPPA为标准,方法间一致性比较采用Kappa检验,通过各方法的灵敏度、特异性、总符合率的比较,分析TP-ELISA作为初筛方法的梅毒逆向筛查程序的可行性,并进一步统计TP-ELISA的S/CO值与TPPA阳性结果的相关性,简化逆向筛查程序。结果 23 389份标本中,TPPA筛查阳性率为3.38%(790份),TP-ELISA、TRUST筛查阳性率分别为3.63%(849份)、1.89%(443份)。TP-ELISA与TPPA在梅毒筛查时具有非常好的一致性(K=0.954),TRUST与TPPA一致性一般(K=0.693),TP-ELISA的灵敏度为99.1%,大于TRUST的灵敏度54.7%,差异有统计学意义(P0.01)。统计发现,当TP-ELISA的S/CO值≥5.0时,其结果与TPPA结果完全一致;当TP-ELISA的S/CO值分布在1.0~4.99之间时,有66例假阳性;当TP-ELISA的S/CO值≤1.0时,所有样本中存在7例假阴性(6例样本TRUST阳性)。结论 TRUST敏感度较低,单独作为梅毒筛查不利于大量隐性梅毒患者的发现;TP-ELISA灵敏度和特异性较高,与TPPA一致,其操作简单,可以自动化批量检测,成本低,适用于临床大样本筛查。     

血站HBsAg筛查反应性结果的确证情况分析

目的:分析无偿献血者乙型肝炎表面抗原(HBsAg)筛查反应性标本的确证试验结果,以探索血站实施HBsAg筛查的实际效果。方法:随机收集无偿献血者HBsAg筛查反应性标本365例,采用中和试验法对配套HBsAg诊断试剂盒(酶联免疫法)检测结果呈重复阳性的标本进行确证试验。结果:365例HBsAg筛查反应性血液标本进行中和试验,其中ELISA方法检测HBsAg确证阳性率为51.23%;双试剂ELISA反应性与单试剂反应性标本确证试验阳性率的差异有统计学意义(P0.05);初次献血者与重复献血者确证试验阳性率的差异、男女确证阳性率的差异和不同年龄组确证阳性率的差异均有统计学意义(P0.05)。结论:对于筛查结果为单试剂反应性和S/CO阳性预期值的献血者、重复献血者、低龄献血者更加适宜建立归队机制。     

结缔组织病患者快速血浆反应素环状卡片试验阳性的临床价值

目的 探讨快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）阳性对结缔组织病（CTD）患者的临床诊断和治疗的指导价值。方法 回顾性分析2004年12月-2007年2月在北京协和医院诊断明确、资料完整的15例RPR阳性CTD住院病例，所有患者均进行了梅毒确证试验；从流行病学资料、临床表现、实验室检查和治疗方案上进行分析。结果（1）15例CTD患者，梅毒确证试验阳性7例（阳性率46．7％），RPR假阳性8例（假阳性率53．3％）。（2）RPR假阳性患者中6例为系统性红斑狼疮（SLE），其中3例合并抗磷脂综合征（APS）。（3）7例CTD并发梅毒的患者中，有典型临床表现者4例，有典型流行病学史者2例，5例予以抗梅毒螺旋体治疗。结论 C139患者存在RPR假阳性并不少见，但仍有相当大比例的患者合并梅毒螺旋体感染。对所有RPR阳性患者，应行梅毒确证试验，对疑似梅毒临床表现和有流行病学史的患者．应予抗梅毒治疗。     

五种艾滋病病毒抗体诊断试剂临床质量比较

目的：为掌握中国市售艾滋病病毒（HIV）抗体诊断试剂的实际应用状况，方法：对4种国产HIV抗体酶了免疫吸附试验（ELISA）诊断试剂（其中3种为国产双抗原夹法试剂）和美国AbbottHIV快速法诊断试剂用200份血清盘样品进行了统一测试。200份血清盘标本包括100份经过确认的HIV抗体阳性、弱阳性、阴性标本和100份高危人群的血清标本。初筛阳性和可疑样品再用蛋白印迹法（WB）做确认对比分析。结果：5种试剂的敏感性为90．7％－98．9％，特异性为93．0％－99．1％，假阳性率为0．9％－7．0％，假阴性率为1．2％－9．3％，总符合率为94．5％－97．5％，约登指数为89．5％－95．4％，阳性预示值（PPV）为91．2％－98．7％，阴性预法值（NPV）为93．4％－99．1％，结论：随着中国双抗原ELISA试剂的研制和市场投放使用，HIV抗体诊断试剂内 在质量指标虽有所提高，但其漏检率仍需进一步改进。     

EXPERIMENTAL STUDY ON APPLICATION OF PCR IN DIAGNOSIS OF KALA-AZAR

用ＰＣＲ方法对２５名确诊的黑热病病人和６０例对照进行黑热病诊断的实验研究。结果显示：其灵敏度９６％（２４／２５），特异度１００％（６０／６０），假阳性率０％，假阴性率４％，符合率９９％，约登指数为０．９６。ＰＣＲ方法能在外周血清仅为１μ１情况下测出其中原虫的ＤＮＡ。     

血吸虫病快速诊断试剂盒的优化及其应用

目的 对血吸虫病胶体染料试纸条诊断试剂盒（DDIA Kit）的检测方法作进一步优化并对其应用价值进行评价。方法 采用专用仪器定量轩DDIA试纸条，以定量的抗原和染料进行标记。分别对20，10，5μl的血清样本进行检测，将各组的敏感性，特异性和交叉反应性进行比较。再以确定的最适血清样本量对一血吸虫病低度流行区的自然人群进行筛查并与粪检结果比较，评价其应用价值。结果 用20μl血清样本检测时，急性和慢性血吸虫病人的检出率均达到100％（24／24和48／48），健康人的假阳性率为8．0％（8／100），与肝吸虫病人和肺吸虫病人的交叉反应率分别为20．0％（4／2）和65．0％（13／20）；用10μl样本血清检测时，急性血吸虫病人检出率为100％（24／24），慢性血吸虫病人的检出率为97．9％（47／48），健康人的假阳性率为2．0％（2／100），与肝吸虫病人和肺吸虫病人的交叉反应率分别为10．0％（2／20）和50．0％（10／20），对低流行区的筛查结果表明，DDIA与18例粪检阳性者的阳性符合率为94．4％（17／18，与445例粪检阴性者的阴性符合率为87．4％（389／445）。结论 定量制备的DDIA试剂盒在检测血清量为10μl时有较高的敏感性和特异性，适用于低度流行区化疗对象的筛查。     

基于重组优势多表位抗原的梅毒间接酶联免疫吸附试验与梅毒螺旋体血凝试验和甲苯胺红不加热血清试验检测梅毒螺旋体抗体的比较研究

目的 建立操作简便、特异性好、敏感性高的血清梅毒抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)。方法 通过计算机分析选择梅毒螺旋体优势抗原表位,构建了梅毒螺旋体多表位优势嵌合抗原(rTpN15-TpN17-TpN42-TpN47)表达载体,转化宿主菌HB101进行表达,纯化获得高纯度融合抗原。在此基础上,以纯化抗原包被酶联板,建立检测血清中梅毒抗体的间接ELISA法。利用该方法与梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)和甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)同时检测了126例梅毒可疑血清样本,对检测结果进行了比较研究。结果 梅毒螺旋体多表位优势嵌合抗原(rTpN15-TpN17-TpN42-TpN47)在大肠杆菌中获得了高效表达,并成功建立了检测血清中梅毒抗体的间接ELISA法及试剂。对126例梅毒可疑血清样本的检测结果,ELISA、TRUST、TPHA的检出阳性率分别为75.40％(95/126)、72.22％(91/126)、70.63％(89/126),其中TRUST有29例,TPHA有6例为可疑阳性。TPHA检测的6例可疑阳性中,有5例ELISA、TRUST均为阳性;而TRUST测出的29例可疑样品中,仅7例ELISA、TPHA阳性。结论 多表位嵌合抗原ELISA试剂在特异性、敏感性与TPHA法相近,但明显优于TRUST法。     

聚合酶链反应用于黑热病诊断的实验研究

用ＰＣＲ方法对２５名确诊的黑热病病人和６０例对照进行黑热病诊断的实验研究，结果显示：其灵敏度９６％（２４／２５）特异度１００％（６０／６０），假阳性率０％，假阴性率４％，符合率９９％，约登指数为０．９６，ＰＣＲ方法能在外周血清仅为１μｌ情况下测出其中原虫的ＤＮＡ。     

免疫印迹法和TPPA在献血者梅毒确认方法中比较

目的:比较梅毒螺旋体免疫印迹试验(TP-WB)和梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)对酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)阳性标本的确认效果,探讨TP-WB在献血员梅毒抗体检测确认中价值。方法:1使用TP-ELISA和TPPA同时检测梅毒标准血清盘,WB结果采用NCCL提供的检测数据;2对无偿献血中TPELISA筛查可疑或阳性献血者标本,分别使用TPPA和WB法进行检测分析。结果:1血清盘40份标本,TPPA符合率92.5%,XCTP-ELISA符合率97.5%,WTTP-ELISA符合率95.0%。2227份TP-ELISA筛查阳性或可疑标本,TP-WB确证试验阳性率为0.64%(178/27 909),TPPA确证试验阳性率为0.44%(123/27 909),TPWB检出率明显高于TPPA(P0.01)。结论:TP-WB在灵敏度和特异性上均明显优于TPPA,联合TP-ELISA更适用于对无偿献血者梅毒的筛查和确认。     

TPPA和TRUST两种检查方法在梅毒血清学检查中的应用

目的探讨分别采用明胶颗粒凝集试验(TPPA)和甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)两种检查方法在梅毒血清学检查中的应用。方法选择我院2005年1月—2009年12月26例梅毒血清标本作为研究对象,根据梅毒的诊断标准[2]:其中Ⅰ期梅毒10例,Ⅱ期梅毒9例,Ⅲ期梅毒4例,潜伏梅毒3例;另选10例经临床确定为类风湿性关节炎、乙型肝炎、SLE、肺结核的作为对照组;以及10例健康体检者作为研究对象。46例标本采用明胶颗粒凝集试验(TPPA)和甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)两种检查方法同时进行检测,操作严格按照各厂家要求进行。观察比较两种检查方法的检测阳性率及敏感性和特异性。结果 TRUST法对梅毒的检测阳性率为80.77%(21/26),TPPA法对梅毒的检测阳性率为96.15%(25/26),TPPA检测法对梅毒检测的阳性率明显高于TRUST检测法(P0.05)。TPPA检测梅毒的敏感性和特异性明显高于TRUST检查法(P0.05)。且检测Ⅲ期梅毒及潜伏梅毒的阳性率分别均高TRUST检测的阳性率,两组比较差异具有显著性。结论 TPPA的敏感性和特异性优于TRUST检测法是临床常用的梅毒确诊试验,但其不适合大量标本的筛查,更适合用于TRUST测定阳性后的确诊试验,建议临床检验医师应予以注意。     

1242例受血患者输血前相关病原标志物检测结果分析

目的：对受血患者进行输血前相关病原学标志物的检测，了解患者输血前状况，预防临床输血引起的医疗纠纷。方法：用酶联免疫吸附试验技术（ELISA）对1242例受血患者进行乙肝病毒标志物以及艾滋病（HIV）抗体、丙型肝炎（HCV）抗体检测；用甲苯胺红不加热血清反应素试验对梅毒进行检测。结果：1242例受血患者HBsAg阳性率为10．15％；HBcAb（IgG）阳性率为10．15％；HBeAg阳性率为2．90％；HBeAb阳性率为6．28％；HCV抗体阳性率为0．97％；HIV抗体阳性率为0％；梅毒阳性率为0．32％。结论：HIV、病毒性肝炎及梅毒等感染途径多种多样，判断是否由输血所致，必须对受血患者进行输血前相关病原学标志物的检测，及时发现阳性患者，否则感染来源难以界定，极易造成医疗纠纷。