MAGE-10基因在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的　探讨MAGE - 10基因与肝细胞肝癌 (HCC)患者临床指标及转移复发的关系。　方法　用RT -PCR的方法测定 31例HCC癌组织及相应癌旁组织和 10例肝硬化组织MAGE - 10基因表达 ,对全部RT -PCR扩增产物中目的基因片段进行DNA测序以证实其为MAGE - 10基因 ,31例HCC测定AFP、岩藻糖苷酶 (AFU)、抗HCV、HBsAg、AFPmRNA、肿瘤直径等临床指标。　结果　 31例HCC组织中MAGE - 10基因表达的阳性率为 5 1 6 % (16 / 31) ,明显高于癌旁组织 0 % (0 / 31) ,(χ2 =18 95 ,P <0 0 1)。HCC组织中MAGE - 10基因表达的阳性率与血清AFP、AFU、抗HCV、HBsAg、AFPmRNA水平及肿瘤大小无关 (P >0 0 5 )。 10例肝硬化组织中未见MAGE - 10基因的表达。　结论　MAGE - 10基因在HCC组织中特异高表达 ,其阳性率与HCC患者肿瘤标志物无关。     

巢式RT-PCR定量检测肝癌、癌旁组织及正常肝组织内AFPmRNA

目的:探讨肝癌、癌旁组织及正常肝组织内AFPmRNA的表达含量 。方法:应用巢式RT-PCR定量检测肝癌、癌旁组织及正常肝组织内AFPmRNA 。结果:17例AFP（+）癌旁组织内AFPmRNA表达强阳性（+++）,其癌旁组织内AFPmRNA表达呈中度阳性（++）。15例AFP（-）肝癌、癌旁组织及正常肝组织内AFPmRNA表达弱阳性（+） 。结论:AFP（+）肝癌组织过量表达AFPmRNA基因,正常肝组织仅微弱表达AFPmRNA。     

以SSX-1 mRNA为特异性标记检测外周血中的肝癌细胞

目的探讨以SSX-1基因mRNA为特异性标记物检测肝细胞肝癌（HCC）患者外周血中肿瘤细胞的可行性及其临床意义。方法用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法对25例HCC患者及20例非肝癌患者的外周血进行SSX-1 mRNA检测。用同样方法检测HCC组织、癌旁组织、硬变肝组织及正常肝组织中SSX1 mRNA的表达。为验证结果的可靠性,对RT-PCR产物进行DNA测序。结果SSX-1 mRNA在HCC组织及其外周血中的表达阳性率分别为60％（15／25）和40％（10／25）。癌旁组织、硬变肝组织及正常肝组织中均未发现该基因的表达。测序结果表明所得到的cDNA确为SSX-1基因。SSX-1基因的表达与HCC患者的年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期、分化程度、血清AFP水平、肝炎病毒感染及短期（半年）复发临床指标无相关性（P〉0．05）。33％（3／9）AFP正常（〈20μg／L）的HCC患者外周血中有SSX-1基因表达。结论SSX-1 mRNA在HCC外周血中高特异性表达,可作为肿瘤特异性标记物用于检测HCC患者外周血中的肝癌细胞,具有辅助定性诊断价值;部分AFP正常（〈20μg／L）HCC患者的外周血中有SSX-1 mRNA的表达,提示两者联合应用有助于提高HCC的检出率。     

4种肿瘤-睾丸抗原在肝细胞癌中的表达

目的 观察肿瘤睾丸(CT)抗原MAGE1、SSX-1、CTp11及HCA587基因mRNA在肝细胞癌(HCC)中的表达并探讨其对HCC免疫治疗的意义。方法 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法对HCC患者癌组织和对照组织中的目的基因mRNA进行检测。结果在检测的105例HCC组织中,MAGE-1、SSX-1、CTp11、HCA 587基因mRNA阳性率分别是75.2％、72.4％、62.9％和56.2％:至少表达1种CT抗原者达93.3％;对照组仅有3例癌旁组织SSX-1基因mRNA表达为弱阳性。结论MAGE-1、SSX-1、CTp11及HCA 587基因mRNA在HCC中呈高比例、高特异表达,是HCC免疫治疗的理想靶位;多个CT抗原同时在HCC中表达;为HCC多价瘤苗的研制提供了实验依据。     

外周血甲胎蛋白mRNA和黑色素瘤抗原-1 mRNA联合表达与肝细胞癌术后复发转移的关系

目的 探讨外周血甲胎蛋白（AFP）mRNA和黑色素瘤抗原-1（MAGE-1）mRNA联合表达在早期发现肝细胞癌患者术后复发或转移的意义。方法 应用巢式逆转录聚合酶链反应技术分别在术前、术后1周和2个月检测142例行根治性切除的肝细胞癌患者外周血中AFPmRNA和MAGE-1mRNA的表达，随访时间从术后至22个月，中位随访时间为15．5个月。结果 外周血中MAGE-1mRNA和／或AFPmRNA的阳性率和肿瘤的病理分期呈正相关：肿瘤病期越晚，外周血中肝癌细胞的检出率越高（χ^2=17．873，P〈0．01）。AFPmRNA和Mage-1mRNA阳性率均与癌结节数目、门静脉癌栓、肝内、外转移等临床参数显著相关（χ^2=11．510，χ^2=15、149，χ^2=11．653，χ^2=6．805，均P〈0.01），而与肝癌分化程度、肿瘤直径等无相关性（χ^2=1．513，χ^2=1．343，均P〉0．05）。术后55例患者出现复发或转移，其中38例患者外周血MAGE-1mRNA和／或AFPmRNA持续阳性，14例由术前阴性转为阳性。而62例由术前阳性转为术后阴性者，随访中未见复发或转移。术后外周血AFPmRNA和／或MAGE-1mRNA阳性组中，有88．1％（52／59）的患者出现复发或转移，而阴性组中复发或转移者仅占3．6％（3／83），两组比较，差异有统计学意义（χ^22=103．817，P=0．000）。结论 联合检测外周血MAGE-1和AFPmRNA的表达可能早期发现肝细胞癌术后复发或转移，可以作为评估预后的指标。     

Apaf-1基因在肝细胞肝癌中的表达和意义

目的 探讨凋亡蛋白活化因子1(apoptoic protease-activating factor 1,Apaf-1)基因mRNA及其蛋白在肝细胞肝癌(HCC)中的表达和意义.方法 采用逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)和免疫组化(SP)的方法 检测手术切除53例肝癌组织,53例癌旁组织和14例肝血管瘤组织中的Apaf-1基因mRNA及其蛋白的表达情况,同时结合临床病理资料分析其在肝细胞癌中发生、发展的意义.结果 在癌组织中Apaf-1基因mRNA及蛋白的表达率明显降低(分别为45.28%,32.07%),低于癌旁组织(90.56%,79.24%)和肝血管瘤组织(100%,92.85%),差异有统计学意义(P＜0.05);而癌旁组织和肝血管瘤组织之间的差异无统计学意义.且Apaf-1基因蛋白的表达缺失与患者的HBsAg、Edmondsor分级和有无门静脉癌栓有关,而与患者性别、肿瘤直径和AFP水平无关.结论 Apaf-1基因的表达异常可能对人HCC的发生和发展起着重要作用,可能对临床诊治和判断患者的预后有一定的参考意义.     

抑癌基因FN及PTEN在肝细胞肝癌中的表达及临床意义探讨

目的探讨纤黏连蛋白(fibronectin,FN)和张力蛋白同源基因蛋白(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)在原发性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinomas,HCC)组织中的表达及与其临床病理特征间的关系。方法采用Western blot及免疫组化方法检测83例HCC组织及其癌旁组织、47例肝硬变组织和11例正常肝组织中FN及PTEN的表达情况,并分析FN及PTEN的表达与HCC临床病理特征间的关系。结果 HCC癌组织中FN蛋白表达阳性率明显高于癌旁组织、正常肝组织及肝硬变组织(P0.05),而PTEN蛋白的表达结果与之相反(P0.05);癌旁组织中FN蛋白表达阳性率亦高于肝硬变组织及正常肝组织(P0.05),PTEN蛋白的表达结果与之相反(P0.05)。在合并癌栓、伴淋巴结转移、AFP阳性及肿瘤病灶多发的HCC癌组织中FN蛋白表达阳性率较高(P0.05),而FN蛋白在HCC癌组织中的表达与患者性别、年龄、HBs Ag状态、肿瘤分化程度及大小均无关(P0.05)。在高-中分化HCC、合并癌栓、AFP阳性、伴淋巴结转移和肿瘤直径≥2 cm的HCC癌组织中PTEN蛋白表达阳性率较低(P0.05),而PTEN蛋白在HCC癌组织中的表达与患者性别、年龄、Hbs Ag状态及肿瘤数目无关(P0.05)。结论 FN和PTEN在HCC癌组织中异常表达,其在HCC的发生、发展和侵袭转移中可能起一定的促进或抑制作用。两者异常表达可作为HCC恶性程度和侵袭转移的分子生物学标志物。     

肝细胞癌抗原基因在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的　探讨肝细胞癌抗原 (HCA)基因mRNA在肝细胞癌 (HCC)组织中的表达。方法　用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法对HCC患者的癌组织和相应癌旁组织及肝硬化和正常肝组织中的 4种HCAmRNA的表达进行检测 ;结合临床病理资料进行分析。　结果　 46例HCC患者中 ,HCA90、HCA51 9、HCA52 0、HCA587基因mRNA阳性率分别是 65 2 %、76 1 %、45 7%和 32 6 % ;至少表达一种HCA者达 82 6 % ;而癌旁组织中仅HCA51 9基因有 6 5 %mRNA表达为阳性。 1 0例肝硬化和正常肝组织中 4种HCA基因均不表达。 4种HCA的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、血清AFP水平、HBV和HCV感染无显著相关性 (P >0 0 5)。在部分AFP正常的患者中存在HCA基因的表达。　结论　HCA基因在HCC中呈高比例、高特异性表达 ,为HCC免疫治疗提供了新的潜在靶位     

荧光定量检测肝癌、癌旁组织及外周血AFP mRNA

目的　探讨肝癌、癌旁组织及外周血AFPmRNA的表达意义。方法　应用荧光定量聚合酶链反应 (FQ -PCR)定量检测 30例原发性肝癌术前外周血、肝癌组织、癌旁组织AFPmRNA。结果　肝癌组织AFPmRNA的基因拷贝数与组织的分化程度、有无肝内浸润和 (或 )转移及血清AFP明显相关 ;而与外周血的AFPmRNA的表达相关无显著性 ;肝癌组织与癌旁组织AFPmRNA的表达量差异有显著性。结论　定量检测AFPmRNA表达情况可能判断肝癌组织的分化程度及早期诊断微小肝癌、肝癌的复发和转移 ,并指导治疗 ,判断预后。     

应用巢式RT-PCR联合检测原发性肝癌病人外周血AFPmRNA和MAGE-1mRNA的表达

目的 寻找一种敏感的方法以早期发现原发性肝癌的复发与转移。方法 应用逆转录聚合酶链反应分别在术前、术后1周和术后2个月检测37例行根治性切除的原发性肝癌病人外周血中MAGE-1 mRNA和AFPmRNA的表达，并随访所有病人1年。结果 外周血中MAGE-1 mRNA和AFPmRNA的阳性率和肿瘤的病理分期相关；肿瘤病期越晚，外周血中微转移灶的检出率越高。1年的随访中，有9例病人出现复发，MAGE-1和(或)AFPmRNA的阳性率为77．8％(7／9)，其中6例外周血中MAGE-1mRNA和(或)AFPmRNA持续阳性，2例由阴性转为阳性。另有10例病人MAGE-1mRNA和(或)AFPmRNA由术前阳性术后转为阴性，随访1年中无复发。结论 联合检测外周血MAGE-1和AFPmRNA的表达是早期发现肝癌术后复发、评估预后一项敏感可信的指标。     

黑色素瘤抗原-3基因在肝细胞癌中的研究

目的 检测黑色素瘤抗原－３（ｍｅｌａｎｏｍａ ａｎｔｉｎｅｇ－３,ＭＡＧＥ－３）ｍＲＮＡ在肝细胞癌（ＨＣＣ）中的表达,探计用ＭＡＧＥ－３基因编码蛋白作为疫苗对ＨＣＣ患者进行免疫治疗在理论上的可行性。方法 用ＲＴ－ＰＣＲ方法对４５例ＨＣＣ患者癌组织和相应癌旁肝组织以及１６例肝硬化组织和１２例正常肝组织的ＭＡＧＥ－３ ｍＲＮＡ表达情况进行研究,对３例ＲＴ－ＰＣＲ扩增产物中目的基因片段进行ＤＮＡ序列测定     

原发性肝癌组织VEGF与外周血AFP mRNA检测的临床意义

目的：探讨肝癌组织中血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达与外周血液中甲胎蛋白（AFP） mRNA表达在原发性肝细胞癌转移中的意义。方法 ： 用巢式逆转录PCR法检测20例肝癌患者术前外周血液中的AFP mRNA，对其手术切除标本采用免疫组化方法检测VEGF蛋白表达，结合临床病理资料进行配对分析。结果：（1）20例原发性肝细胞癌中10例VEGF为阳性表达，其表达情况与临床病理参数无明显相关;（2）20例肝癌中13例AFP≥200μg/L ,15例外周血液中AFP mRNA阳性；（3） VEGF阳性的10例病例中有9例在外周血中可检测到AFP mRNA。结论：（1）肝癌组织VEGF和外周血中AFP mRNA检测都可作为判断原发性肝癌有无血行转移倾向的指标，前者较为简单，而后者较为客观准确。(2) 对肝癌高危人群的普查和肝癌术后随访，应用外周血中AFP mRNA的检测方法较血清AFP水平更加敏感。     

联合检测血清甲胎蛋白、γ-谷氨酰转肽酶和 a-L-岩藻糖苷酶对肝细胞癌根治术后转移复发的预测价值

目的 探讨血清甲胎蛋白(AFP)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)和a-L-岩藻糖苷酶(AFU)对肝细胞癌(HCC)根治术后转移复发的预测价值.方法 收集我院2005年12月至2007年12月80例 HCC根治术后患者的术前术后血清AFP、GGT、AFU检测结果及随访资料,对比分析AFP、GGT、AFU与转移复发及1年无瘤生存率(DES)的关系.结果 80例肝癌患者术后AFP、GGT、AFU阳性率分别为25.0%、51.2%和28.6%,术后发生复发转移者在AFP、GGT和AFU阳性组分别为75.0%、73.2%和87.0%,1年DFS分别为45.0%、36.6%和13.0%.而阴性组分别为38.3%、20.5%和31.6%,1年DFS分别为75.0%、94.9%和89.5%.术后AFP、GGT和AFU三者均为阳性组患者均有复发转移,其1年DFS为0.而三者均为阴性组患者复发转移率为17.6%,其1年DFS为97.1%.结论 联合检测AFP、GGT、AFU可明显提高对转移复发预测的阳性率,且对于术后转移复发的预测价值优于单项检测.     

荧光定量PCR法扩增MAGE-1、MAGE-3及AFP基因联合检测肝癌病人外周血微小转移

目的探讨MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA联合检测肝癌病人外周血中微小转移的临床意义。方法应用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测86例原发性肝癌病人肝癌组织和外周血中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的表达。结果86例原发性肝癌病人肝癌组织中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的阳性率分别为34．9％（30／86）、60．5％（52／86）和69．8％（60／86）；所有病人肝癌组织至少表达其中一种mRNA。外周血中阳性率分别为14．0％（12／86）、20．1％（18／86）和33．7％（29／86）。52．3％（45／86）的病人外周血至少检测到一种mRNA，较单一AFP mRNA检测阳性率明显提高（P〈0．05）。25例肝炎肝硬化病人及28例健康志愿者中未见阳性。阳性率与肿瘤TNM分期、门脉瘤栓、远处转移有关（P〈0．05）。与肿瘤大小、数目、分化程度、血清AFP水平无关（P〉0．05）。结论MAGE-1、MAGE-3结合AFP mRNA联合检测肝癌血行微小转移较单一AFP mRNA检测灵敏度高。     

肝癌细胞血行播散与术后复发或转移的关系

目的探讨血液甲胎球蛋白信使核糖核酸（ａｌｐｈａｆｅｔａｌｐｒｏｔｅｉｎｍｅｓｅｎｇｅｒＲＮＡ,ＡＦＰｍＲＮＡ）阳性肝癌患者与术后复发或转移的联系。方法应用巢式逆转录多聚酶链反应（ｎｅｓｔｅｄｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ,ＲＴＰＣＲ）检测术后２４小时,４８小时及１周肝癌患者周围静脉血液中ＡＦＰｍＲＮＡ,并随访１～２年。结果术前及术后１周内血液ＡＦＰｍＲＮＡ持续阳性的肝癌患者１２例中,术后１年内出现复发或转移性癌灶６例,术后２年内复发或转移９例;而随访的血液ＡＦＰｍＲＮＡ阴性的肝癌患者１９例中仅有５例在术后１年内复发,在２年内复发８例,无肝外远处器官转移（１年时,二者差异无显著意义,Ｐ＞００５;２年时,二者差异有显著意义,Ｐ＜００５）。结论术后血液ＡＦＰｍＲＮＡ持续阳性的肝癌患者更容易复发或产生远处转移。     

CT9和CT10基因在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的检测肿瘤睾丸抗原CT9和CT10基因mRNA在肝细胞癌（HCC）中的表达情况。方法用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法对HCC病人的癌组织和相应癌旁组织及对照（肝硬化和正常肝组织）中CT9和CT10mRNA的表达进行了检测,随机选取每一种抗原RT-PCR呈阳性的产物4例进行DNA序列测定,结合AFP、抗HCV、HgsAg、肿瘤直径、分化程度等临床指标进行分析。结果56例HCC病人中,CY9、CT10基因mRNA阳性率分别是51．8％（29／56）和44．6％（25／56）,至少表达一种CTA者达66．1％（37／56）,表达两种者为30．4％（17／56）;电泳显示PCR产物与阳性对照大小一致;而癌旁组织中仅有CT9基因nRNA表达为阳性,阳性率为7．1％（4／56）,但表达强度明显弱于在癌组织中的表达,进一步的病理检查未发现CY9表达呈阳性的癌旁组织中有癌细胞。所测10例肝硬化和10例正常肝组织均未检测到CT9和CT10的表达。DNA测序结果表明RT-PCR产物确为CT9和CT10cDNA。CT9和CT10的表达与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、AFP水平、HBV和HCV感染无显著相关性（P〉O．05）。而在部分AFP正常（〈25ng／L）HCC病人中存在CT9和CT10基因的表达。结论CT9和CT10基因在HCC中呈高比例、高特异表达,为HCC免疫治疗提供了新的理想靶位;CT9和CT10同时在HCC中表达,为应用以这些肿瘤抗原为基础的多价瘤苗治疗HCC提供了实验依据。     

肾细胞癌及尿路移行细胞癌组织中黑色素瘤抗原基因mRNA的表达

目的　评价肿瘤特异性黑色素瘤抗原 (MAGE) 1、 3基因作为肾细胞癌及尿路移行细胞癌组织中的免疫学检测和免疫治疗、基因治疗分子标志物的可行性。　方法　肾细胞癌组织标本 18例 ,尿路移行细胞癌组织标本 2 6例 ,相应的癌旁组织 10例 ,采用RT PCR方法对MAGE 1、MAGE 3基因进行测定。　结果　 18例肾癌组织中MAGE 1mRNA阳性表达 10例 (5 6 % ) ,MAGE 3mRNA阳性表达11例 (6 1% ) ,MAGE 1及MAGE 3同时表达 8例 (44 % ) ;2 6例尿路移行细胞癌组织中MAGE 1mRNA阳性表达 16例 (6 2 % ) ,MAGE 3mRNA阳性表达 15例 (5 8% ) ,MAGE 1及MAGE 3同时表达 12例 (46 % )。癌旁组织 10例均不表达MAGE 1及MAGE 3。　结论　MAGE 1、MAGE 3基因有可能作为肾癌及尿路移行细胞癌组织免疫学检测的分子标志物 ,并且具有作为免疫治疗、基因治疗特异性靶位的潜在价值。