c-jun氨基末端激酶通路在一氧化氮诱导的软骨细胞凋亡中的作用

目的 利用一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)和c-jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125,研究JNK通路对NO诱导的兔关节软骨细胞凋亡的影响.方法 采用机械-酶消化法分离3周龄新西兰兔关节软骨细胞,甲苯胺蓝染色鉴定细胞后,SNP和JNK抑制剂SP600125作用于细胞24h,采用AnnexinV-FITC/PI流式细胞术和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)检测软骨细胞凋亡,免疫印迹(Western blot)法测定核因子(NF-κB)p65和p53蛋白的表达水平.结果 SNP作用于软骨细胞后,随着其浓度的增大,细胞早期凋亡率与对照组比较呈浓度依赖性增加,差异有统计学意义(P＜0.05),NF-κB p65和p53的表达分别出现上调,差异有统计学意义(P＜0.05);加入JNK抑制剂SP600125能抑制这种增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 JNK信号转导通路在NO诱导的软骨细胞凋亡起着非常重要的作用,JNK的特异性抑制剂SP600125能以浓度依赖方式减少兔关节软骨细胞中NO诱导的凋亡和NF-κBp65及p53蛋白的表达活性.     

c-Jun N-末端激酶在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡中的作用

c-Jun N-末端激酶(c-Jun N-terminal kinase，JNK)属于丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPK)家族成员，多种细胞外应激信号可使其磷酸化而活化，在细胞应激反应中起重要作用。我们通过研究维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate，VES)对人胃癌SGC-7901细胞中JNKMAPK表达的影响，探讨该途径在VES诱导SGC-7901细胞凋亡中的作用。     

维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞分化的作用

目的研究维生素E琥珀酸酯(VES)对胃癌细胞的诱导分化作用。方法5，10μg／ml维生素E琥珀酸酯处理人胃癌SGE-7901细胞，分别采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的生长；^3H-TdR掺入法测定DNA合成速率；流式细胞术检测细胞周期的分布；分光光度法检测分化标志酶的活性。结果VES可使细胞形态学改变；抑制SGC-7901细胞的生长。降低DNA的合成速率；使细胞出现G0／G1期停滞；分化标志酶碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)活性降低。结论VES可诱导SGC-7901细胞分化并抑制其恶性生长。     

维生素E琥珀酸酯诱导胃癌细胞凋亡

目的 探讨维生素E琥珀酸酯(VES)诱导人胃癌SGC-790l细胞凋亡执行阶段的机制。方法 分别将对照组0．1％无水乙醇和5，10，20μg／m1 VES加入培养液中，24h后通过荧光染色观察细胞核形态和线粒体跨膜电位(△ψm)改变，并用Westem蛋白印记检测凋亡诱导因子在线粒体和细胞质中的重新分布。结果 VES可明显诱导人胃癌SGC-790l细胞凋亡，20vg／m1 VES可使细胞凋亡率达到49．7％，伴有△ψm的明显降低，并有凋亡诱导因子自线粒体中的释放。结论 VES可能是通过使线粒体通透性改变，降低△ψm并释放线粒体中的凋亡诱导因子，诱导SGC-790l细胞凋亡。     

c-Jun氨基末端激酶在镉致小鼠脑原代星形胶质细胞凋亡中的作用

目的利用原代培养的小鼠脑星形胶质细胞(astrocytes,AS),探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号转导通路是否参与镉致小鼠脑星形胶质细胞凋亡的过程。方法原代培养的小鼠脑星形胶质细胞给予0~20μmol/L镉染毒0~24 h,倒置相差显微镜观察细胞形态变化;给予0~20μmol/L镉染毒9、12 h,采用MTT法检测细胞存活率;给予0~20μmol/L镉染毒12 h,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;给予0~20μmol/L镉染毒0~12 h,采用蛋白印迹(Western blotting)法检测JNK磷酸化蛋白的表达水平。结果镉浓度为5~20μmol/L时,随染毒剂量的升高及作用时间的延长,细胞形态发生明显改变:细胞间网络连接松散,突起消失,胞体收缩成球形,贴壁能力下降,最终脱落,漂浮于培养液中。与对照组比较,各浓度镉染毒9、12 h后小鼠脑星形胶质细胞的存活率均下降,差异有统计学意义(P0.01);且随着镉染毒浓度的升高和染毒时间的延长,小鼠脑星形胶质细胞的存活率均呈下降趋势。与对照组比较,各浓度镉染毒12 h后小鼠脑星形胶质细胞的凋亡率均升高,差异有统计学意义(P0.01);且随着镉染毒浓度的升高,小鼠脑星形胶质细胞的凋亡率均呈上升趋势。与对照组比较,5~20μmol/L镉染毒3 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量均升高,20μmol/L镉染毒6 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量升高,10~20μmol/L镉染毒9、12 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量均升高,差异有统计学意义(P0.05);与0 h比较,0~20μmol/L镉染毒3~12 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量均升高,差异有统计学意义(P0.05);且随着镉浓度的升高和染毒时间的延长,小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK的表达量均呈上升趋势。结论镉可能通过上调JNK磷酸化蛋白的表达水平来诱导小鼠脑星形胶质细胞的凋亡。     

FADD在VES诱导人胃腺癌细胞凋亡中的作用

目的 了解带有死亡结构构成的Fas相关蛋白（FADD）在维生素E琥珀酸酯（VES）诱导胃腺癌细胞凋亡过程中的作用。方法 以人胃腺癌SGC－7901细胞作为靶细胞，采用WesternBlot法、Lipofect转染、DAPI染色法探讨FADD在VES诱导SGC－790细胞凋亡过程中的作用。结果 经不同剂量VES处理后，SGC－7901细胞中FADD蛋白表达增加，呈剂量－效应关系；该细胞经FADD反义寡核苷酸转染与正我寡核苷酸杂上比，VES处理的细胞中FADD蛋白表达下降；用FADD反义寡核苷酸转染SGC－7901细胞后，降低了VES诱导的细胞凋亡率。结论 FADD在VES诱导SGC－7901细胞凋亡过程中起着重要的作用。     

c-Jun氨基末端激酶和细胞外调节蛋白激酶信号通路对苯并(a)芘诱导人胚肺成纤维细胞c-Jun活化的调控

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）信号通路在调控苯并（a）芘[B（a）P]诱导人胚肺成纤维细胞（HELF）c—Jun活化中的作用。方法2．0μmol/LB（a）P处理HELF0、3、6、12、24h后或加入不同浓度B（a）P（0．0、0．5、1．0、2．0μmol/L）处理12h后，通过免疫印迹法检测B（a）P对细胞c-Jun活性的影响；利用p38、c—Jun氨基末端激酶（JNK）以及细胞外调节蛋白激酶（ERK）的显性失活突变体分别阻断p38、JNK和ERK活性后，观察3种MAPKs信号分子与B（a）P诱导c-Jun活化之间的关系。结果在所观察的B（a）P作用时间和浓度范围内，c—Jun蛋白表达量无明显变化；B（a）P可诱导细胞内磷酸化c—Jun（Ser63／Ser73）水平增高，并随着作用时间的延长，细胞内c—Jun的磷酸化水平也逐渐增强，至12h达到峰值（1．61±0．12，1．82±0．18），c-Jun磷酸化Ser63、Ser73与actin灰度比值分别是对照组的20．1倍、15．2倍，作用24h时细胞内c-Jun磷酸化水平呈现下降趋势，而且随着B（a）P浓度的增加，细胞内c-Jun的磷酸化水平也逐渐升高，呈现剂量-反应关系；使用显性失活突变体分别阻断JNK和ERK活性均可明显抑制B（a）P诱导细胞c—Jun磷酸化水平增加，但是阻断p38活性对B（a）P诱导细胞c—Jun磷酸化水平升高无明显影响。结论JNK和ERK信号通路调控B（a）P诱导的HELF细胞c—Jun活化，B（a）P促进c-Jun磷酸化的过程与p38信号通路无关。     

细胞外信号调节激酶/c-Jun氨基末端激酶在炭黑诱导的人胚肺成纤维细胞毒性中对激活蛋白-1信号通路的作用

目的 探讨细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK)/c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinases,JNK)在炭黑诱导的人胚肺成纤维细胞(human embryonic lung fibroblasts,HELF)毒性中对激活蛋...     

c-jun氨基末端激酶在UVA诱导人角质形成细胞IL-10表达中的作用

目的探讨c-jun氨基末端激酶(JNK)是否介导UVA诱导的人角质形成细胞IL-10的表达。方法以2.4J/cm2UVA照射体外培养的2×104个/ml人角质形成细胞系(HaCaT)细胞,于照射后不同时点(0～48h)收集细胞并应用免疫荧光法检测磷酸化、非磷酸化JNK的水平。以JNK抑制剂SP600125(终浓度为10μmol/L)预处理人角质形成细胞,收集UVA照射后各时点(0～48h)的细胞及培养上清液,采用RT-PCR和双抗夹心ELISA方法检测IL-10mRNA及其蛋白表达。结果照射组角质形成细胞磷酸化JNK水平在各采样时点均明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);照射组角质形成细胞非磷酸化JNK水平于0、2、12、24、48h均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。SP600125预处理的细胞于照射后的各时点均未检测到IL-10mRNA及其蛋白的表达。结论 JNK可能介导UVA诱导的人角质形成细胞IL-10的表达。     

HSF1/HSP70通路抑制c-Jun氨基末端激酶的活化保护UVA诱导的HaCaT细胞凋亡

目的观察热休克转录因子1(HSF1)与热休克蛋白70(HSP70)对紫外线A(UVA)诱导HaCaT细胞凋亡的保护作用及其机制。方法建立8mJ/cm2UVA辐射损伤HaCaT细胞的病理模型。将细胞随机分为对照组、8mJ/cm2UVA照射组、HSP70转录抑制剂组(50μmol/L槲皮素)。Honechst 33258荧光染色观察细胞凋亡;蛋白质印迹法检测UVA辐射HaCaT细胞后p-HSF1和HSP70蛋白的经时变化及UVA辐射后孵育6h JNK(c-Jun氨基末端激酶)、p-JNK的蛋白表达;Real-Time PCR检测HSP70 mRNA的表达。结果 UVA辐射后HaCaT细胞内p-HSF1、HSP70蛋白表达量均出现先增加后减少的时间依赖性趋势,其中p-HSF1于1h开始增加,3h达高峰,HSP70于6h达高峰,24h基本恢复原始水平;UVA辐射前预先加入HSP70转录抑制剂槲皮素能显著抑制HSP70 mRNA的表达,增加p-JNK的表达量,同时Honechst 33258荧光染色观察其与UVA辐射组比较凋亡率明显升高。结论 8mJ/cm2UVA辐射HaCaT细胞在一定时间内可使HSF1活化致HSP70表达增加。HSF1/HSP70通路对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡具有保护作用,其机制与HSP70大量表达后抑制JNK的活化有关。     

c-jun末端激酶在亚砷酸钠致人胚胎肝细胞损伤中的表达

目的探讨亚砷酸钠染毒对人胚胎肝(L-02)细胞中c-jun末端激酶(JNK)的变化。方法将处于对数生长期的L-02细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、50、100、150μmol/L的亚砷酸钠溶液中培养24 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞生长情况,采用流式细胞术检测染毒24 h时的细胞周期及细胞凋亡率;采用蛋白杂交(Western-blot)法检测JNK及p-JNK的蛋白表达水平。结果与对照组相比,各浓度亚砷酸钠染毒组L-02细胞的存活率及G0-G1期构成比均较低,JNK、p-JNK的蛋白表达水平和S期构成比及凋亡率均较高;而G2-M期构成比在50μmol/L亚砷酸钠染毒组较低,在100、150μmol/L亚砷酸钠染毒组均较高,差异均有统计学意义(P0.05)。且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,L-02细胞凋亡率及JNK和p-JNK蛋白的表达水平均呈上升趋势,细胞存活率呈下降趋势。结论亚砷酸钠诱导L-02细胞凋亡可能与JNK及p-JNK表达的增加有关。     

Ionizing radiation affects the expression of Toll-like receptors 2 and 4 in human monocytic cells through c-Jun N-terminal kinase activation

Pattern recognition receptors recognize pathogen-associated molecular patterns. Among these, Toll-like receptors (TLRs) have well-characterized roles in antibacterial and antiviral immunity. In the present study, the effects of ionizing radiation on the expression of TLRs and cellular responses to ligands were investigated in THP1 monocytes (human monocytic leukemia cells) and THP1-derived macrophage cells (macrophage-like cells), which are induced by culturing in the presence of phorbol 12-myristate 13-acetate. TLR2 and TLR4 expression was detected in THP1 and macrophage-like cells. X-irradiation caused increased expression of these TLRs in THP1 and decreased expression in macrophage-like cells. Responses to FSL-1 (TLR2 ligand) and lipopolysaccharide (LPS, TLR4 ligand) were estimated by determining the induction of tumor necrosis factor-α (TNF-α). After FSL-1 or LPS stimulation, TNF-α induction was greater in X-irradiated THP1 monocytes than in non-irradiated cells. However, although TNF-α expression was not affected by X-irradiation in macrophage-like cells, the expression of LPS-inducible interferon-β was lower following X-irradiation of macrophage-like cells. To clarify the mechanisms of TLR2 and TLR4 regulation by X-irradiation, expression of mitogen-activated protein kinase was investigated. These experiments showed that c-Jun N-terminal kinase (JNK) mediated increases in TLR expression in X-irradiated THP1 monocytes and decreases in TLR expression in X-irradiated macrophage-like cells. This study demonstrates that ionizing radiation modulates ligand-responsive TLR expression through the JNK pathway, depending on differentiation state.     

维生素E琥珀酸酯诱导人胃腺癌细胞凋亡途径

目的　探讨维生素E琥珀酸酯 (VES)诱导人胃腺癌SGC -790 1细胞凋亡的死亡受体 (Fas)信号转导途径。方法　人胃腺癌SGC -790 1细胞经不同剂量VES(5,10 ,2 0 μg/ml)处理 ,同时做琥珀酸、维生素E和空白对照 ,采用DAPI(4,6-贰脒基 -2 -苯基吲哚 )荧光染色法观察细胞凋亡情况 ,用WesternBlot法检测Fas、带有死亡结构域的Fas相关蛋白 (FADD)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 (caspase -8)蛋白表达情况 ,Fas和FADD反义寡聚核苷分别转染SGC -790 1细胞后 ,用荧光法检测caspase -8活性。 结果　经VES处理后的细胞DAPI染色可见凋亡的形态学改变 ,2 0 μg/mlVES处理 48h后的细胞凋亡率为 89.6% ;VES处理 48h后Fas、FADD和caspase -8蛋白表达明显增加 ,且呈剂量 -效应关系 ;阻断Fas可明显抑制FADD蛋白表达 ,Fas和FADD反义寡聚核苷转染细胞后caspase -8活性明显降低 (P <0 .0 1) ,其中阻断Fas的效果高于阻断FADD。结论　维生素E琥珀酸酯诱导人胃腺癌SGC -790 1细胞凋亡过程中启动了Fas信号转导途径 ,VES启动Fas后 ,FADD将Fas和caspase -8联接起来 ,活化caspases级联反应 ,从而构成Fas/FADD/caspase -8的凋亡信号途径     

维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡的研究

采用体外细胞培养的方法,观察了维生素Ｅ琥珀酸酯（ＶＥＳ）对人胃癌细胞（ＳＧＣ－７９０１）生长的影响,并通过荧光染色和流式细胞仪技术研究其对ＳＧＣ－７９０１细胞凋亡的影响。结果表明ＶＥＳ（５、１０和２０μｇ／ｍｌ）对ＳＧＣ０７９０１细胞生长有明显抑制作用;同时可诱导ＳＧＣ－７９０１细胞调亡。提示ＶＥＳ可通过诱导细胞凋亡来抑制胃癌细胞生长。     

重型肝炎的中西医结合治疗

重型肝炎（重肝）是由嗜肝病毒引发的低发病率、高死亡率的凶险肝炎，其发病率约占黄疸型肝炎的3％。我国每年死于重型肝炎的人数以数十万计，随着预防的普及，治疗观念和方法的改进，重型肝炎发生和病死率将逐步下降。     

c-Jun氨基末端激酶1反义真核表达载体及其蛋白缺陷细胞株的构建与鉴定

目的 构建反义JNK1荧光真核细胞表达载体,建立JNK1蛋白缺陷人胚肺成纤维细胞(HELF)株.方法 用Trizol试剂抽提HELF细胞中总RNA,以反转录PCR扩增JNK1目的 片断,双酶切,纯化PCR产物后,反向插入pEGFP-C1绿色荧光质粒,构建反义pEGFP-C1-asJNK1真核表达载体;大量抽提质粒并转染至HELF细胞中.24 h后使用G418筛选,挑选单克隆细胞扩大培养,经荧光显微成像和蛋白免疫印迹鉴定.结果 pEGFP-C1-asJNK1表达载体DNA测序结果与预期目的 片断序列一致,且JNK1蛋白表达水平明显抑制.结论 反义pEGFP-C1-asJNK1真核表达载体构建成功,JNK1蛋白质缺陷HELF细胞株成功建立.     

Curcumin attenuates rat thoracic aortic aneurysm formation by inhibition of the c-Jun N-terminal kinase pathway and apoptosis

ObjectiveRecent studies have suggested that c-Jun N-terminal kinase (JNK) plays an important role in the formation of abdominal aortic aneurysms, and that direct blockade of JNK by specific inhibitors can effectively prevent the progression of aortic aneurysms. A study has demonstrated that curcumin can suppress the development of experimental abdominal aortic aneurysms by inhibiting inflammation. We sought to investigate whether curcumin could inhibit JNK pathways and apoptosis in thoracic aortic aneurysms.MethodsWe used a rat model of a CaCl₂-induced thoracic aortic aneurysm followed by daily oral gavage with curcumin 100 mg/kg or vehicle alone. After treatment for 4 wk, tissue specimens were obtained for histologic assessments, and tissue composition was evaluated using immunohistochemistry, western blotting, and terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling.ResultsCurcumin significantly suppressed the CaCl₂-induced expansion of the thoracic aortic diameter and the structural preservation of medial elastin fibers. Most importantly, curcumin treatment significantly inhibited the phosphorylation of JNK and c-Jun, accompanied by less cell apoptosis in thoracic aortic aneurysm tissues. Furthermore, the expression levels of caspase-3 and the Bax/Bcl-2 ratio were significantly decreased in the aortic walls of curcumin-treated rats.ConclusionThe present study indicates that the beneficial effect of curcumin on degenerative aortic aneurysms is related to the inhibition of JNK and apoptosis in the walls of thoracic aortic aneurysms.