三氧化二砷对肝癌细胞系BEL—7402的影响

目的 观察不同浓度的三氧化二砷作用不同时间对肝癌细胞BEL－7402的影响及其作用机理。方法 应用不同浓度的三氧化二砷作用于肝癌细胞后，观察肝癌细胞的存活、形态学改变，并通过流式细胞仪和DNA梯状电泳观察细胞凋亡的情况。结果 不同浓度的三氧化二砷作用于肝癌细胞有明显的时间和剂量依赖性，发生作用后细胞生长明显受抑制；有明显的凋亡特征性改变：细胞膜完整、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成；流式细胞仪分析显示，肝癌细胞存在G2／M期阻滞，在G1峰前出现明显的凋亡峰；琼脂糖凝胶电泳出现明显的凋亡特征性梯状条带。结论 三氧化二砷可明显抑制肝癌细胞的生长，其机理主要是诱导肝癌细胞凋亡。     

三氧化二砷对原发性肝癌的作用及其机理研究

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞系BEL-7402的影响及其作用机理,并观察不同应用途径对原发性肝癌患者的治疗效果。方法 观察As2O3作用后肝癌细胞的形态学改变、并通过流式细胞仪和DNA梯状电泳观察细胞凋亡的情况,应用逆转录聚合酶链式反应和荧光分光光度计检测半胱氨酸蛋白酶-3的变化情况。观察其对裸鼠移植瘤生长抑制的效果。并分别通过静脉滴注和动脉持续灌注观察其对原发性肝癌患者的治疗效果。结果 不同浓度的As2O3作用于肝癌细胞有明显的时间和剂量依赖性,发生作用后细胞生长明显受抑制,有明显的凋亡特征性改变;流式细胞仪分析存在G2／M期阻滞,在G1峰前出现明显的凋亡峰;琼脂糖凝胶电泳出现明显的凋亡特征性梯状条带。随着As2O3作用时间的延长,半胱氨酸蛋白酶-3的mRNA无明显变化,而半胱氨酸蛋白酶-3蛋白质的活性逐渐增高。不同浓度的As2O3对于裸鼠肝癌移植模型有明显的抑制生长作用。对28例患者的静脉输注治疗可明显改善患者的生存质量,并且具有毒副作用小的特点。43例动脉灌注治疗患者中,30例肿瘤体积缩小或不变,有效率为69．8％,19例甲胎蛋白下降或降至正常。结论 As2O3可明显抑制肝癌细胞的生长,其机理主要是诱导肝癌细胞凋亡;凋亡的可能机理是通过半胱氨酸蛋白酶-3起作用,作用位点是在酶的前体水平;应用As2O3连续区域化疗对原发性肝癌有很好的治疗效果。     

三氧化二砷诱导肝癌细胞株凋亡的实验研究

目的明确三氧化二砷对人肝癌细胞体外生长的影响，并探讨其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝法、^3H-TdR掺入法、TUNEL法、透射电镜观察及流式细胞术，观察不同浓度的三氧化二砷对体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721的生长活力、细胞凋亡、DNA合成能力的影响。结果三氧化二砷能显著地抑制人肝癌细胞SMMC-7721的生长，并且具有时间和剂量依赖性；发生作用后，细胞生长有明显的凋亡特征性改变；细胞DNA合成能力下降。结论三氧化二砷能有效地抑制体外肝癌细胞生长，其机制可能与抑制肝癌细胞DNA合成及诱导肝癌细胞凋亡有关。     

槐耳清膏体外诱导人肝癌细胞凋亡的实验研究

目的 观察槐耳清膏在体外对人肝癌细胞株HepG-2凋亡的影响,为槐耳清膏在临床上治疗肝肿瘤提供理论依据.方法 采用MTT法、TUNEL法及流式细胞术,观察不同浓度的槐耳清膏对体外培养的人肝癌细胞株HepG-2的生长活力、细胞凋亡、DNA合成能力的影响;琼脂糖凝胶电泳检测DNA-LADDER的形成.结果:槐耳清膏在体外能抑制人肝癌细胞HepG2的生长,并具有时间及剂量依赖性;发生作用后,细胞生长有明显的凋亡特征性改变;细胞DNA的合成能力下降.结论:槐耳清膏能有效地抑制体外肝癌细胞生长,其机制可能与抑制肝癌细胞DNA合成及诱导肝癌细胞凋亡有关.     

氧化砷诱导胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的: 观察不同浓度As2O3对胰腺癌细胞生长的影响. 方法: 0.1~2μmol/LAs2O3与胰腺癌细胞株SW-1990、SW-8902共同孵育,观察不同浓度As2O3作用、不同时间对胰腺癌细胞的生长抑制情况. 结果: 经1~2μmol/LAs2O3处理的胰腺癌细胞呈典型的凋亡特征性改变:用HE染色光镜观察可见凋亡小体形成,流式细胞仪检测在G1期前出现亚二倍体凋亡峰,细胞DNA抽提电泳后发现凋亡特征性Ladder. 结论: As2O3可诱导胰腺癌细胞凋亡.     

表阿霉素诱导肝癌细胞凋亡的研究

目的 研究表阿霉素对肝癌细胞凋亡的影响.方法 在体外培养的肝癌细胞中加入不同浓度的表阿霉素,应用光镜、电镜、DNA凝胶电泳及流式细胞术检测肝癌细胞凋亡的形态学特征、生化学特征.细胞凋亡百分率及细胞周期的变化.结果 在表阿霉素作用下,凋亡的肝癌细胞出现膜小泡、凋亡小体等特征性改变;DNA电泳呈现典型的“梯状”条带;流式细胞术测定,出现典型的凋亡峰,其凋亡百分率随着药物浓度的提高和作用时间的延长而明显升高;同时,G_(1/0)期和S期细胞含量下降,而G_2/M期细胞含量上升.非凋亡细胞则无此表现.结论 表阿霉素可诱导肝癌细胞发生凋亡,并可使肝癌细胞生长受阻于G_2/M期,这可能是其杀伤肿瘤的一种重要机制.     

L-精氨酸诱导人肝癌细胞凋亡的作用

目的 探讨L-精氨酸诱导人肝癌细胞凋亡的作用及机制。方法 采用倒置显微镜、透射电镜和流式细胞仪，观察和分析不同浓度L-精氨酸作用下体外培养人肝癌细胞株QGY-7703的增殖和凋亡情况。结果（1）低浓度L-精氨酸对肝癌细胞生长和细胞大体形态无明显影响。高浓度的L-精氨酸引起肝癌细胞形态变圆、体积变小，细胞皱缩，细胞核固缩，核碎裂，染色质边聚，凋亡小体形成。（2）低浓度L-精氨酸对肝癌细胞生长周期和增殖指数无影响；而高浓度的L-精氨酸引起G0／G1期较对照组显著升高，S期显著降低，细胞增殖指数显著下降（P〈0．05），而G2／M无明显变化。（3）低浓度L-精氨酸（1mmol／L）和对照组细胞未见凋亡峰（亚G1峰），凋亡率分别为2．1％和2．5％；而16mmol／L和64mmol／L浓度组则出现典型的凋亡峰，凋亡率分别为12．4％和30．8％，较对照组显著增高（P〈0．05）。结论 高浓度的L-精氨酸通过合成NO，诱导肝癌细胞凋亡。     

阿霉素诱导人胆囊癌细胞凋亡的研究

目的　观察阿霉素 (ADM )对胆囊癌细胞凋亡的影响。方法　在体外培养的胆囊癌细胞中加入不同浓度的阿霉素 ,应用光镜、电镜、DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测胆囊癌细胞凋亡的形态学特征、生化学特征、细胞凋亡百分率及细胞周期的变化。结果　在阿霉素作用下 ,凋亡的胆囊癌细胞出现膜小泡、凋亡小体等特征性改变 ;DNA电泳呈现典型的“梯状”条带 ;流式细胞仪测定 ,出现典型的凋亡峰 ,其凋亡百分率随着药物浓度的提高而明显升高 ,分别与对照组比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;同时 ,S期细胞含量下降 ,而G2 /M期细胞含量上升。非凋亡细胞则无此表现。结论　ADM可诱导胆囊癌细胞发生凋亡 ,并可使胆囊癌细胞生长受阻于G2 /M期 ,这可能是其杀伤肿瘤的一种重要机制     

阿司匹林对肝癌细胞生长的抑制作用及其机制

目的 观察阿司匹林(AS)对肝癌细胞SMMC-7721生长的作用,并探讨其作用机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度阿司匹林对肝癌细胞细胞生长的抑制作用以及流式细胞仪检测不同浓度阿司匹林对肝癌细胞细胞周期的影响;免疫组织化学方法检测阿司匹林对肝癌细胞细胞增殖核抗原(PCNA)、环氧合酶-2(COX-2)表达的影响;并用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定COX-2基因的表达.结果 肝癌细胞经不同浓度的阿司匹林作用后,其生长抑制率明显升高(P<0.05),且与阿司匹林浓度有关和作用时间相关.细胞周期检测结果显示,经不同浓度阿司匹林作用后的SMMC-7721细胞,细胞周期发生明显变改.表现为随着阿司匹林浓度的增加,S期细胞比例下降明显,G0/G1期及G2/M期细胞比例则上升(10-2、10-3moL/L AS组与对照组比较P<0.05).免疫细胞化学染色显示,阿司匹林能下调肝癌细胞COX-2、PCNA的表达.RT-PCR检测表明,COX-2基因表达电泳条带与对照组比较辉度明显降低,其中10 mmol/L阿司匹林组最低,说明随着阿司匹林浓度增加,COX-2表达逐渐减少,阿司匹林能下调SMMC-7721细胞表达COX-2基因.结论 阿司匹林能有效抑制肝癌细胞SMMC-7721的生长,这种作用可能是其通过抑制细胞增殖,与抑制COX-2、PCNA的表达有关.     

Roscovitine对增生期肝癌细胞周期的影响

目的 探讨细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂Roscovitine对增生期肝癌细胞SMMC-7721细胞周期的影响.方法 采用体外培养的肝癌细胞SMMC-7721,经过Roscovitine作用后,对SMMC-7721细胞的形态、生长情况、细胞周期时相的分布、凋亡以及CDK2、Caspase-3、bcl-2 mRNA的表达情况进行观察.结果 MTT提示:Roscovitine对SMMC-7721细胞的增生有抑制作用,作用效果呈时间、剂量依赖性,并促进细胞的凋亡;流式细胞仪发现G0期、G1期的比例增加,细胞出现凋亡;R-T PCR显示CDK2 mRNA表达水平降低,凋亡相关基因bel-2表达降低,Caspase-3 mRNA水平表达升高.结论 Roscovitine可以抑制增生期肝癌细胞的生长、增生,阻滞细胞周期于G0/G1期,诱导细胞的凋亡,凋亡机制与bcl-2、Caspase-3的表达改变有关.     

奥曲肽对人肝癌细胞的抑制及其机制的研究

目的 探讨生长抑素类似物奥曲肽对人肝癌细胞产生抑制作用及其抑制机制。方法 以奥曲肽作用于人肝癌细胞株SMMC-7721细胞，以人成纤维细胞株HF为正常细胞对照，以5-Fu为阳性药物对照。通过噻唑蓝比色实验（MTT实验），细胞增殖生长反应及传代实验和流式细胞术分析，得出结论。结果 在体外，奥曲肽对SMMC-7721细胞产生抑制作用。该抑制作用具有量效关系和饱和性，奥曲肽与5-Fu对SMMC-7721的抑制程度无明显差异。且对HF细胞无影响。结论 奥曲肽对SMMC-7721细胞具有抑制作用。诱导肿瘤细胞凋亡是其作用机制之一。     

γ—干扰素对肝癌细胞株Hep—G2 Fas,Bcl—2表达的影响

目的：观察γ－干扰素（γ－IFN）对肝癌细胞株Hep-G2细胞（Hep-G2)表达Fas,Bcl-2的影响。方法：应用γ-IFN预处理Hep-G2,用阿霉素诱导凋亡,MTT法分析细胞死亡率,电镜观察凋亡,免疫组织化学法研究γ-IFN作用于Hepp-G2细胞过程中Fas,Bcl-2的表达情况,结果： γ－IFN预处理的Hep-G2表达Fas增强,表达Bcl-2减弱（P＜0．05）,γ-IFN预处理后Hep-G2细胞对阿霉素的敏感性提高（P＜0．05）,结论：γ-IFN对肝癌细胞株Hep-G2Fas,Bcl-2表达有影响,并可提高肝癌细胞对阿霉素的敏感性。     

通过抑制ERK1/2通路诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡的研究

目的应用细胞外信号调节激酶(ERK)1/2抑制剂U0126研究ERK1/2在肝癌细胞增殖、凋亡中的作用。方法以肝癌SMMC-7721细胞株为材料,分为空白对照组及不同浓度的U0126处理组。以MTT检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡情况。结果不同浓度的U0126处理后均可明显抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖(P<0.05,P<0.01),使处于G0/G1期的细胞明显增多(P<0.05)且呈剂量依赖性,并诱发细胞凋亡发生(P<0.05)。结论阻断ERK1/2通路有可能成为肝癌治疗的重要手段。     

p53基因、 Fas/FasL在提高肝癌细胞化疗药物敏感性中的作用

目的：探讨野生型p53(wtp53)、Fas/FasL在提高肝癌细胞化疗药物敏感性中的作用及其机制。方法：用化疗药物争光霉素600mg/L分别处理人肝癌细胞株HepG2、Hep3B和PLC／PRF／5，观察争光霉素对肝癌细胞Fas/FasL表达的影响；预先将携带wtp53基因的重组腺病毒分别感染人肝癌细胞株24h，再用争光霉素进行诱导，观察感染前后肝癌细胞Fas/FasL的表达变化，并对经上述处理前后的肝癌细胞进行凋亡检测。结果：单纯争光霉素600mg/L诱导虽可提高肝癌细胞FasL的表达，但对其Fas的表达并无明显作用；感染wtp53基因后再应用争光霉素（600mg/L），则肝癌细胞Fas/FasL的表达水平不仅显著高于单纯争光霉素组，同时自身也发生了明显凋亡。结论：wtp53基因可能是通过上调肝癌细胞Fas/FasL的表达来降低其自身的凋亡阈值，进而提高肝癌细胞对化疗药物的敏感性，Fas/FasL在wtp53基因逆转肝癌细胞耐药性中具有一定的作用。     

生长激素对肝癌切除后患者免疫功能及预后的影响

目的 观察围手术期应用重组人生长激素(rhGH)对肝癌患者免疫功能及预后的影响。方法 将行根治性切除的肝癌患者50例，随机分成对照组和及rhGH治疗组(GH组)。两组术后均给予完全胃肠外营养(TPN)支持5d，GH组术后每晚皮下注射rhGH 8U，共7d。结果 对照组的IgG，IgM，CD3，CD4和GH组的CD8在术后第10天显著下降；GH组IgG在术后第l5天显著升高?两组患者的1，3年生存率以及1，2，3年复发率差异无显著性。结论 根治性切除的肝癌患者于围手术期应用rhGH能改善机体免疫功能，促进患者康复，但对远期生存率和复发率无明显影响。     

多西紫杉醇诱导人肝癌细胞凋亡及其机制的研究

目的 探讨多西紫杉醇(docetaxel,DTX)对人肝癌细胞诱导凋亡的作用及其机制.方法 人肝癌细胞株HepG2和Huh7用于实验.通过WST-1细胞增殖实验观察DTX对细胞生长的抑制作用,采用Hoechst 33342荧光染色和DNA凝胶电泳检测细胞的凋亡情况,采用Western印迹法检测DTX对Caspase-3和Caspase-9酶原的激活作用.结果 DTX对HepGZ和Huh7的生长有明显的抑制作用;经Hoeehst 33342荧光染色和DNA凝胶电泳检测发现DTX可诱导HepG2和Huh7细胞凋亡;在DTX诱导肝癌细胞凋亡的过程中.凋亡效应分子Caspase-3和Caspase-9酶原被剪切激活;Caspase3抑制剂Z-VAD-FMK抑制DTX诱导的肝癌细胞凋亡.结论 DTX对肝癌细胞具有较强的增殖抑制作用,凋亡是其抑瘤的机制之一.DTX导致肝癌细胞凋亡程序依赖于激活Caspase-3酶原途径.     

维生素E琥珀酸酯对乳腺癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用

目的 检测维生素E琥珀酸酯（VES）对裸鼠荷乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用。方法 裸鼠皮下接种MCF-7乳腺癌细胞建立荷瘤裸鼠模型。以150mg／kg（体重）剂量的VES治疗模型鼠共5周。处死动物后测量肿瘤大小。以流式细胞仪检测细胞周期变化和细胞表面Fas和FasL的表达；以免疫组化法检测肿瘤组织Fas和FasL的表达，并以TUNEL法检测细胞凋亡指数。结果 VES对荷乳腺癌裸鼠具有显著的增殖抑制作用。细胞周期分析显示，VES冶疗后肿瘤细胞表现为G0／G1期阻滞，肿瘤组织和细胞表面的Fas和FasL均出现上调，同时细胞的凋亡指数升高。结论 VES对于MCF-7乳腺癌荷瘤裸鼠具有强效的抑制作用，其机制与上调肿瘤细胞Fas／FasL表达，促进细胞凋亡有关。     

梗阻性黄疸大鼠肝细胞凋亡分析及硒的保护作用

目的 研究梗阻性黄疸（梗黄）大鼠肝脏细胞凋亡的发生发展规律及其机制，以及硒的抗凋亡作用。方法 使用生化和末端脱氧核甘酸介导生物素标记（TUNEL）技术测量不同组别，不同梗黄时间大鼠肝脏的谷胱甘肽过氧化物酶（GPx)活性，活性氧（ROS）水平及凋亡指数（AI），并进行多元分析，结果 胆总管结扎3d后，凋亡细胞开始出现，7d时显著增多，均11d达高峰，14d时有所减少。单纯梗黄组（OJ）ROS水平随时间延长而持续升高，GPx活性则进行性下降，AI与ROS水平变化呈正相关（r=0.95)，于11d时达高峰。硒治疗组呈现相似变化，但各时相点上GPx活性均高于OJ组（P＜0．05）。ROS水平和AI则相反（P＜0．05）。结果表明，ROS促进凋亡的作用最为明显，胆红素和胆汁酸次之。GPx 则表现出显著的凋亡拮抗作用。结论 ROS是梗黄大鼠肝脏细胞凋恨的重要因素。硒对肝细胞凋亡有明显保护作用。     

羟基磷灰石纳米粒子对人肝癌和结肠癌细胞生长的抑制作用

目的研究羟基磷灰石纳米粒子（nano-HAP）对人肝癌BEL-7402细胞和结肠癌SW-480细胞生长及凋亡的影响。方法用羟基磷灰石纳米粒子以不同终浓度作用于这二株细胞。用噻唑蓝（MTT）比色法观察其对两株细胞的生长抑制，荧光显微镜、透射电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术（FCM）等方法从细胞凋亡的角度探讨其作用机制。结果羟基磷灰石纳米粒子对BEL07402和SW-480细胞的半数有效抑制浓度（IC50）值分别为29．28mg／L和36．66mg／L。50～100mg／L的纳米粒子处理48h后，癌细胞即可表现出细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂以及凋亡小体形成等凋亡特征性形态改变。作用48h后，琼脂糖凝胶电泳观察到DNA“梯带”。流式细胞仪定量分析显示人肝癌、结肠癌细胞经0、50、100、200mg／L作用48h后的细胞凋亡率分别为2．23％、20．35％、29．34％、53．64％和3．57％、21．45％、37．10％、49．45％。结论羟基磷灰石纳米粒子对人肝癌BEL07402和结肠癌SW-480细胞有明显的生长抑制作用，诱导癌细胞凋亡可能是其主要作用机制．