小鼠表皮角质形成细胞中Ca^2＋对组织型纤溶酶原激活剂表达的调节

目的：探讨小鼠表皮角质形成细胞（KC）中Ca^2 对组织型纤溶酶原激活剂（tPA)表达的调节作用及其与分化的关系。方法：采用免疫组化及原位杂交技术定性，定量检测低Ca^2 (0.05mmol/L)及高Ca^2 （1．5mmol/L)浓度对tPA,tPA mRNA的表达及表皮KC分化的影响。结果：与未经Ca^2＋处理的对照相比，低Ca^2 浓度下培养的表皮KC中，tPA mRNA3及tPA量均增加（P＜0．05），KC分化标记物K10抗原表达为弱阳性，KC胞体较小，细胞形态趋于圆形；而高Ca^2 浓度下的培养表皮KC中，tPA mRNA及tPA量显著增加（P＜0．001），K10抗原呈强阳性表达，KC胞体增大，形态为典型的多角形。结论：Ca^2 浓度的增高促进了tPA mRNA及tPA的表达，并与KC分化有关。     

组织型纤溶酶原激活剂在人胚胎表皮角质形成细胞分化中的作用

目的 探讨组织型纤溶酶原激活剂（tPA)参与人表皮角质形成细胞（KC）分化调控的作用。方法 采用免疫细胞化学（ICC）及原位杂交（ISH）技术定性、定量检测早、中、晚期人胚胎表皮KC中tPA蛋白及mRNA的表达。结果 （1）tPA在人胚胎期表皮KC中表达量明显高于出生后期。胚胎期的表达高峰在胚胎中期。胚胎晚期其蛋白水平开始降低。而tPAmRNA表达则维持在相对较高水平。（2）tPA在人胚胎期主要存在于分化程度高的表皮浅层KC内。（3）tPA聚集于KC胞膜下方。结论 tPA参与表皮KC分化的调控。     

小鼠表皮角质形成细胞中Ca2+对组织型纤溶酶原激活剂表达的调节

目的探讨小鼠表皮角质形成细胞(KC)中Ca2+对组织型纤溶酶原激活剂(tPA)表达的调节作用及其与分化的关系.方法采用免疫组化及原位杂交技术定性、定量检测低Ca2+(0.05mmol/L)及高Ca2+(1.5mmol/L)浓度对tPA、tPAmRNA的表达及表皮KC分化的影响.结果与未经Ca2+处理的对照相比,低Ca2+浓度下培养的表皮KC中,tPAmRNA及tPA量均增加(P＜0.05),KC分化标记物K10抗原表达为弱阳性,KC胞体较小,细胞形态趋于圆形;而高Ca2+浓度下的培养表皮KC中,tPAmRNA及tPA量显著增加(P＜0.001),K10抗原呈强阳性表达,KC胞体增大,形态为典型的多角形.结论Ca2+浓度的增高促进了tPAmRNA及tPA的表达,并与KC分化有关.     

组织型纤溶酶原激活剂研究新进展

组织型纤溶酶原激活剂,又称组织型纤溶酶原激活物(tissue-type plasminogen activator,tPA)或纤溶酶原激活因子(tissue plasminogen activator),是体内纤溶系统的生理性激动剂,在人体纤溶和凝血的平衡调节中发挥着关键性的作用。由于血栓性疾病的逐年上升,对溶栓药物的需求量逐     

组织型纤溶酶原激活剂的结构与功能

组织型纤溶酶原激活剂是重要的溶血栓药物,还能降低心脏病人的死亡率,因而日益受到人们的重视。近年来,研究者们利用重组DNA技术,构建t-PA突变体,探索它的结构与功能的关系,取得了新的进展。 t-PA是分子量为68000的单链多肽,由527个氨基酸组成。在纤溶酶及胰蛋白酶作用     

组织型纤溶酶原激活剂(tPA)研究新进展

摘 要 组织型纤溶酶原激活剂（tPA）是目前应用的一种较理想的溶栓药,也是目前为止被美国FDA批准的唯一种治疗缺血性脑卒中的溶栓药,但近年来发现tPA除了有溶栓功能外在其他的生理和病理过程中也发挥了重要的作用,这为寻找和改造溶栓效果更好、副作用更少的溶栓药提供了依据。本文主要对近两年来tPA的研究进展进行综述。     

重组组织型纤溶酶原激活剂静脉溶栓治疗急性心肌梗塞

重组组织型纤溶酶原激活剂静脉溶栓治疗急性心肌梗塞浙江医院（杭州：３１００１３）祝世法戴海文严静金宏义重组组织型纤溶酶原激活剂（ｒｔ－ＰＡ）是纤维蛋白特异性溶栓剂，该剂可降低急性心肌梗塞（ＡＭＩ）的病死率（１）。发病时间６小时内者，静脉溶栓血管再通率为...     

小鼠乳腺组织中组织型纤溶酶原激活剂乳腺特异性表达载体的瞬时表达

目的：验证所构建的组织型纤溶酶原激活剂(tPA)乳腺特异性表达载体pWTA能否在小鼠乳腺组织中瞬时表达。方法：采用直接注射法将pWTA DNA、pWTA DNA／脂质转染胺试剂Lipofectamine^TM2000复合物及PBS分别注射入妊娠末期小鼠乳腺组织。应用原位杂交技术,以地高辛标记的tPA cDNA为探针,观察pWTA在小鼠乳腺组织中的瞬时表达。结果：tPA表达阳性细胞散在分布于pWTA DNA及pWTA DNA／Lipofectamine^TM2000复合物注射小鼠部分乳腺腺泡,PBS注射组无阳性细胞。结论：载体pWTA能够在小鼠乳腺组织中特异性表达tPA。     

重组组织型纤溶酶原激活剂治疗急性心肌梗死

目的 观察重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)治疗急性心肌梗死(AMI)的临床疗效.方法 对所选病例在常规治疗的基础上早期使用rt-PA溶栓治疗.结果 rt-PA治疗急性心肌梗死疗效显著.结论 rt-PA治疗急性心肌梗死可降低患者的年并发症,减少病死率,临床上值得推广.     

重组织型纤溶酶原激活剂治疗急性心肌梗死31例

观察重组织型纤维溶酶激活剂治疗急性心肌梗死效果。方法急性心肌梗死３１例，２１例在发病６ｈ内入院，１０例在发病６－１２ｈ入院，均接受了ｒｔ－ＰＡ治疗。结果治疗后血管再通率为６７％，有轻度出血者占６％，结论急性心梗死用ｒｔ－ＰＡ治疗血管再通率较高，且较安全。     

组织型纤溶酶原激活剂真核表达载体的构建及其在乳癌细胞系MCF-7中的瞬时表达

目的:构建组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)真核表达载体,并检测其在乳癌细胞系MCF-7中的瞬时表达.方法:以含t-PA cDNA的质粒PETPFR为模板,PCR扩增目的片段t-PA,HindⅢ和Sal Ⅰ双酶切t-PA,HindⅢ和xhoⅠ双酶切pcDNA3真核表达载体.Sal Ⅰ和Xho Ⅰ的黏性末端互补,体外连接酶切产物,重组体转化感受态JM109细菌,筛选菌落和测序鉴定.以脂质转染胺试剂LipokctamineTM2000将pcDNA3-t-PA转染入乳癌细胞系MCF-7,G418筛选.应用原位杂交技术,以地高辛标记的t-PA cDNA为探针,显示t-PA在MCF-7中的瞬时表达.结果:电泳获得目的片段t-PA的条带2.1kb,初步鉴定为阳性重组体,测序证实为正确的t-PA序列.MCF-7细胞原位杂交显示大部分细胞表达阳性.结论:组织型纤溶酶原激活剂真核表达载体构建成功,可在乳癌细胞系MCF-7中表达.     

妊娠期高血压疾病患者血浆组织型纤溶酶原激活物及其抑制物的活性变化

目的探讨妊娠期高血压疾病患者血浆组织型纤溶酶原激活物(t-PA)及其抑制物(PAI)的活性变化。方法采用发色底物法和酶联免疫吸附法测定40例妊娠期高血压疾病患者(妊娠期高血压疾病组)、20例正常非孕妇女(正常非孕组)及20例正常晚孕妇女(正常晚孕组)血浆组织纤溶酶原激活物(t-PA)及其抑制物(PAI)活性,并进行比较。结果正常晚孕组和妊娠期高血压疾病组血浆t-PA水平显著高于正常非孕组(P<0.001),而妊娠期高血压疾病各组与正常晚孕组比较无统计学意义(P>0.05);正常晚孕组和妊娠期高血压疾病各组血浆PAI水平均显著高于正常非孕组(P<0.001),妊娠期高血压疾病各组血浆PAI水平显著高于正常晚孕组(P<0.01),子痫患者血浆PAI水平显著高于妊娠期高血压和子痫前期患者(P<0.05),子痫前期患者血浆PAI水平显著高于妊娠期高血压患者(P<0.05)。结论妊娠期高血压疾病患者血液纤溶抑制系统水平升高。     

组织因子、尿激酶型纤溶酶原激活剂受体在胆管癌表达的临床意义

目的探讨组织因子(Tissuefactor,TF)、尿激酶型纤溶酶原激活剂受体(UrokinasePlasminogenActivatorReceptor,u-PAR)在胆管癌表达的临床意义和诊断价值。方法用免疫组化方法(S-P法)检测39例胆管癌手术切除组织中TF和u-PAR的表达。结果TF、u-PAR以及TF和u-PAR的共表达阳性率在有淋巴结转移者中明显高于无淋巴转移者P<0.05。TF、u-PAR在低分化组织中表达率高于中高分化者。TF、u-PAR表达与否和病人年龄无相关性。结论TF、u-PAR表达与胆管癌淋巴结转移、病理分化密切正相关,是反映胆管癌发展和转移潜能的生物学指标,TF、u-PAR的共表达也为解释TF的促进肿瘤转移作用提供了依据。     

2型糖尿病小鼠肾脏纤溶酶原激活物抑制物-1表达

目的探讨2型糖尿病动物模型KKAy小鼠肾脏纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)和组织纤溶酶原激活物(tPA)mRNA表达与肾脏细胞外基质蓄积的关系.方法选取8周龄雄性KKAy小鼠和C57BL-J小鼠,分别于16、20和24周处死.采用发色底物法检测不同周龄的KKAy小鼠及参照组C57BL/J小鼠的血浆PAI-1活性,RT-PCR法检测小鼠肾皮质tPA mRNA表达,原位杂交法检测肾皮质PAI-1 mRNA水平,免疫组织化学和免疫印迹法检测肾皮质层粘连蛋白表达.结果不同周龄KKAy小鼠肾皮质层粘连蛋白表达均高于同龄对照组(P＜0.05).2型糖尿病KKAy小鼠与C57BL/J小鼠血浆PAI-1活性的差异没有显著性(P＞0.05);但肾皮质tPA mRNA水平却显著降低,以16周时最为显著,仅为C57BL/J小鼠的47%,随周龄的增加,其差异逐渐减小.原位杂交显示KKAy小鼠PAI-1mRNA可在肾脏多部位表达,并以近端小管上皮细胞内的表达为主,且明显高于同龄C57BL小鼠.结论2型糖尿病KKAy小鼠早期肾病时,细胞外基质蛋白的蓄积可能和tPA mRNA表达下调及PAI-1 mRNA表达上调所致的纤溶酶降解细胞外基质作用降低有关.     

MCF-7细胞中组织型纤溶酶原激活剂乳腺特异性表达载体的瞬时表达

目的：验证所构建的组织型纤溶酶原激活剂(tPA)乳腺特异性表达载体pWTA在乳癌细胞系MCF-7中的瞬时表达。方法：用脂质转染胺试剂Lipofectamine^TM2000将pWTA DNA转染人乳癌细胞系MCF-7和食管癌细胞系Eca-109。应用原位杂交技术,以地高辛标记的tPA cDNA为探针,观察PWTA的瞬时表达。结果：不同浓度Lipofectamine^TM2000 MCF-7细胞原位杂交均为阳性;Eca-109细胞及未加转染液者未见阳性信号。结论：载体pWTA为tPA乳腺特异性表达载体。     

增生性糖尿病视网膜病变眼内组织型纤溶酶原激活物及其抑制物的表达与血管内皮生长因子表达的相关性

目的 探讨增生性糖尿病视网膜病变(PDR)中组织型纤溶酶原激活物(t-PA)及纤溶酶原激活物抑制剂(PAI)的表达及其与血管内皮生长因子(VEGF)表达的相关性.方法 在玻璃体手术中采集PDR 35眼玻璃体,同时采集因黄斑裂孔行玻璃体手术20眼玻璃体作为对照组,采用酶联免疫吸附法检测t-PA和PAI的表达浓度,并与VEGF的表达进行相关性分析.结果 PDR眼玻璃体中VEGF、t-PA及PAI的表达浓度与对照眼玻璃体中的表达浓度比较差异有统计学意义(P＜0.01).t-PA及PAI的表达与VEGF的表达经统计学分析,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 在PDR眼内视网膜新生血管的发生过程中不但有VEGF,还可能同时有多种生物活性物质的参与. Abstract： Objective To evaluate the correlation between the expression of tissue plasminogen activator(t -PA)and plasminogen activator inhibitor(PAI)with vascular endothelial growth factor (VEGF)expression in proliferative diabetic retinopathy(PDR).Methods Vitreous samples were taken from 35 eyes with PDR and analyzed with enzyme linked immunosorbent assay(ELISA)for the expression of VEGF, t - PA and PAI.Control samples were from 20 eyes with idiopathic macular hole and analyzed in the same way.The correlation between VEGF expression and the expression of t - PA and PAI in proliferative diabetic retinopathy were studied.Results VEGF, t - PA and PAI were significantly expressed as compared with those in control subjects(P ＜0.01).The expression of t- PA and PAI were highly correlated with that of VEGF in proliferative diabetic retinopathy(P ＜ 0.01).Conclusions It is suggest that a number of bioactive substances may be involved in the pathogenesis of angiogenesis in PDR.The expression of t - PA may beupregulated by the activation of VEGF, which may further facilitate the process of angiogenesis in PDR.Meanwhile, the correlated expression of PAI may suggest the presence of an endogenous angiogenesis mechanism accompanying the activities of VEGF.     

组织型纤溶酶原激活物及其抑制物与静脉血栓栓塞症的关系

目的探讨组织型纤溶酶原激活物(t-PA)及其抑制物-1(PAI-1)血浆水平与静脉血栓栓塞症的关系。方法 87例肺动脉血栓栓塞(PTE)患者,根据是否合并深静脉血栓形成(DVT)分为2组:合并DVT患者52例,未合并DVT患者35例,同期入选性别、年龄匹配对照者80例。酶联免疫吸附试验测定血浆PAI-1和t-PA水平,聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法检测PAI-1基因型。结果未合并DVT组t-PA明显降低,PAI-1明显升高,与合并DVT组、对照组比较差别有统计学意义(P<0.05),而合并DVT组与对照组比较差别无统计学意义(P>0.05)。在3组中,无论何种基因型,未合并DVT组的PAI-1血浆水平均最高。在4G/4G基因型和4G/5G基因型中,未合并DVT组与对照组和合并DVT组比较差别均有统计学意义(P<0.05)。结论未合并DVT的PTE患者存在明显的低纤溶状态。     

Experimental study on mRNA and protein expression of urokinasetype plasminogen activator in human brain gliomas

Thediscoverythattumorcellscansynthesizeurokinasetypeplasminogenactivator(uPA)wasfirstmadebyAstedtetal[l:.TheuPAactivityiscloselyrelatedtothemalignantbiologicalbehavioroftumors.RecentstudieshaveshownthathumanuPAgeneislocatedatthechromosome1Oandcomprises1lexons.TheuPAmediatedfibrinolyt-icsystemplaysapivotalroleintheprocessofinva-sionandmetastasisingastriccarcinomas,lungcar-+clnomasandbreastcarcinomasetcL2j.ByusingNorthernblothybridizationandimmunohis-tochemicalmethods,theretrospectiveandcom…