肿瘤抗原脉冲致敏的树突状细胞疫苗抗肿瘤作用的实验研究

目的：进一步研究体外肿瘤抗原脉冲致敏的骨髓树突状细胞瘤苗主动免疫诱导小鼠体内抗肿瘤免疫应答,并观察其抵抗野生性肿瘤攻击的免疫保护作用及对荷瘤小鼠模型的免疫应答。方法：采用本室建立的骨髓树突状细胞分离与细胞因子体外扩增培养方法,并在体外经灭活ＮＳ１骨髓瘤细胞及其裂解产物脉冲刺激后直接作为疫苗,然后进行免疫预防与治疗的在体动物实验。结果：可从１只小鼠股骨中获得（３～５）×１０５个树突状细胞（ＤＣ）,其纯度为９５％以上,对混合Ｔ淋巴细胞具有强刺激活性。主动免疫同系健康ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的试验显示,ＤＣ疫苗能诱导抗原特异的细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）活性,免疫１次的动物首次受到肿瘤攻击后诱发肿瘤形成率为０％,再次攻击的肿瘤形成率为２０％;而免疫３次的动物两次攻击的肿瘤形成率皆为０％。主动免疫治疗同种荷瘤动物的试验表明,ＤＣ疫苗也能抑制肿瘤生长,荷瘤动物存活率提高及生存期明显延长。结论：肿瘤抗原体外致敏的树突状细胞能诱导宿主体内的抗肿瘤免疫保护性反应,且对荷瘤模型动物具有明显的免疫治疗作用。     

RNA致敏树突状细胞治疗胶质瘤的实验研究

目的:肿瘤RNA致敏树突状细胞(DC)治疗颅内荷瘤小鼠,观察DC疫苗对脑胶质瘤的治疗作用,探讨免疫反应的机理,为DC疫苗的临床应用提供实验基础。方法:用G422胶质母细胞瘤RNA冲击致敏DC制成DC疫苗,检测DC疫苗的CTL活性,瘤内和皮下两种途径注射荷瘤小鼠以进行免疫治疗,观察小鼠生存期,并与PBS、单纯DC组进行比较,同时检测血清IFN-γ、IL-2、IL-10、IL-4等细胞因子,并行病理检查。结果:DC疫苗的CTL活性明显高于对照组(P<0.01)。两种途径注射DC疫苗,治疗组小鼠生存时间均明显延长(P<0.01),血清IFN-γ显著升高(P<0.01),IL-10明显下降(P<0.05),病理提示肿瘤出现坏死。两种注射途径间以上指标无明显差异。结论:肿瘤RNA冲击致敏DC注射荷瘤小鼠具有明显的免疫治疗作用,能显著延长动物生存期,并能诱导特异性抗肿瘤细胞免疫反应,其机理主要是Th1细胞介导的细胞免疫反应,且免疫反应的程度与注射途径无关。     

慢病毒介导的hGM—CSF修饰的肿瘤疫苗免疫活性研究

目的构建编码人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（humangranulocyte—macrophage colony stimulating factor，hGM—CSF）的慢病毒载体，研究编码hGM—CSF的慢病毒载体对树突状细胞（dendritic cell，DC）疫苗抗肿瘤活性的增强作用。方法以质粒pORFhGM—CSF为模板，采用PCR方法扩增出hGM—CSF基因片段；通过BamHI和XhoI限制性内切酶位点。将hGM—CSF基因定向克隆到慢病毒连接载体L166中构建重组载体L166-hGM—CSF。将重组载体L166-hGM—CSF和包装载体L205以及包膜载体L311共同转染慢病毒包装细胞293T，72h后收集病毒上清液获得编码hGM—CSF的慢病毒颗粒Lenti—hGM—CSF。从脐血中分离出单核细胞，rhGM—CSF、rhIL-4和α—TNF诱导获得DC，通过相差显微镜和流式细胞仪鉴定。应用反复冻融法制备可溶性肿瘤抗原，分别将负载肿瘤抗原的DC疫苗和慢病毒Lenti—hGM—CSF感染的负载肿瘤抗原的DC疫苗与T淋巴细胞共同培养，MTT方法检测并比较两者所诱导的CTL对反应细胞的体外杀伤活性。结果编码hGM—CSF的慢病毒载体L166-hGM—CSF成功构建，获得了编码hGM—CSF的慢病毒。该慢病毒的Hela细胞上清液中hGM—CSF的表达明显高于未感染者。从脐血中分离出的DC，显示其高表达CD80（87.2％）和CD86（92．8％），而单核细胞标志CD14的表达率较低（3．56％o慢病毒介导的分泌hGM—CSF的树突状细胞肿瘤疫苗刺激同种T淋巴细胞增殖的能力和抗肿瘤活性较普通DC疫苗明显增强（P〈0．01）。结论本实验制备的慢病毒Lenti—hGM—CSF感染反应细胞后能够显著增强DC肿瘤疫苗刺激同种T淋巴细胞增殖的能力及其诱导的CTL细胞对肿瘤细胞的杀伤能力，为hGM—CSF修饰的DC肿瘤疫苗的临床应用提供了一定的实验依据。     

DCIK细胞特异性抗肿瘤生物学活性研究

目的研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)分别与两种冻融抗原致敏DC细胞共培养后获得的DC细胞诱导的特异性肿瘤杀伤细胞(dendritic cell induced killer.DCIK)的增殖活性及其对K562、Namalwa细胞株的杀伤活性。方法采集健康供者的外周血单个核细胞(PMNC),先诱导培养CIK细胞及两组DC细胞(K562-DC和Namalwa-DC),然后将两组DC细胞分别和CIK细胞按1∶10的比例分别混合培养,并以CIK细胞单独培养组为对照。计数细胞扩增倍数,并于共培养6d MTT法测定各组细胞对K562、Namalwa细胞杀伤活性。结果两组DCIK细胞增殖速度明显快于单纯CIK细胞组(P0.05);共培养6d,相同的效靶比情况下,两组DCIK细胞对两种肿瘤细胞的杀伤活性都比单纯CIK细胞明显增强,而用相应肿瘤抗原致敏得到的DCIK细胞对该种肿瘤细胞的杀伤活性最强。结论 DCIK细胞的增殖能力、抗肿瘤活性均高于CIK细胞,致敏的DCIK细胞对相同肿瘤靶细胞有杀伤特异性。     

肿瘤抗原致敏树突状细胞诱导机体产生抗肿瘤作用的实验研究

目的：探讨肿瘤抗原冲击致敏的树突状细胞（Dc）诱导机体产生的特异性抗肿瘤作用。方法：体外培养的小鼠骨髓树突状细胞用小鼠结肠腺癌细胞株CT26细胞抗原冲击致敏；混合淋巴细胞反应检测肿瘤抗原致敏DC刺激同基因型T淋巴细胞增殖的能力；观察小鼠经皮下免疫肿瘤抗原致敏DC后诱导产生肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）和抵抗CT26细胞再攻击的能力。结果：肿瘤抗原致敏DC能有效刺激同基因型T淋巴细胞增殖反应；小鼠经肿瘤抗原致敏DC免疫后可诱导强烈的CT[，杀瘤活性，产生免疫保护作用，能有效抵抗CT26细胞再攻击，肿瘤生长明显减缓，与未经抗原致敏DC免疫的小鼠组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：肿瘤抗原致敏的DC能有效诱导机体产生特异性的抗肿瘤作用。     

SKOV3冻融抗原负载的DC-CIK细胞对SKOV3的杀伤作用

目的 探讨负载人卵巢癌细胞株SKOV3冻融抗原(Ag)的树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养后对SKOV3杀伤作用的影响.方法 取12例卵巢癌患者外周血,常规诱导出DE及CIK细胞,以SKOV3冻融Ag负载DC,经Ag负载与未经Ag负我的DC分别和CIK细胞共培养,流式细胞技术分析DC、Ag-DC、Ag-DC-CIK 3组DC细胞表型,CIK、DC-CIK、Ag-DC-CIK组CIK细胞表型;乳酸脱氢酶释放法测CIK组、DC-CIK组、Ag-DC-CIK组对SKOV3杀伤活性.结果 Ag-DC-CIK组中DC细胞成熟表型高于DC及Ag-DC组(P<0.01);Ag-DC-CIK组中CIK细胞成熟表型高于CIK及DC-CIK组(P<0.01);Ag-DC-CIK组对SKOV3杀伤率高于CIK及DC-CIK组(P<0.01).结论 负载SKOV3冻融Ag的DC与CIK共培养可促进DC、CIK的成熟,且可提高对SKOV3的杀伤作用.     

肺癌细胞裂解物刺激树突状细胞诱导产生免疫应答的实验研究

目的采用肺癌细胞裂解物致敏树突状细胞（DCs）的方法制备肺癌疫苗并进一步通过实验验证其疗效。方法利用外周血的单个核细胞经粒细胞-巨嗜细胞集落刺激因子（GM-CSF）和人白细胞介素4（IL-4）体外诱导产生树突状细胞,用A549（人肺腺癌细胞系）细胞冻融抗原对其进行冲击诱导自体细胞毒T淋巴细胞（CTLs）产生。通过细胞毒试验及ELISA测定细胞因子的分泌和CTLs杀伤活性。制备荷瘤裸鼠模型,不同分组裸鼠经过一次或多次皮下注射CTLs。结果 A549冻融抗原致敏的DCs增加CTLs增殖,诱导的CTLs对A549细胞产生特异性杀伤,经过一次及多次接种后荷瘤裸鼠肿瘤生长减缓,并且肿瘤变小及生存时间较对照组明显延长,起到抑制肿瘤生长和延长生存时间的作用。结论通过实验证实了肺癌细胞裂解物抗原来刺激树突状细胞治疗肺癌A549荷瘤裸鼠模型是安全有效、可行的。为临床应用以树突状细胞为基础的肺癌疫苗免疫治疗提供了实验依据。     

In vitro induction of specific anti-tumoral immunity against laryngeal carcinoma by using human interleukin-12 gene-transfected dendritic cells

Background  Objective evaluation of the antitumor effect of interleukin-12 (IL-12) gene-transfected dendritic cell (DC) vaccine on laryngeal carcinoma requires in vivo and in vitro tests. The aim of this study was to investigate the function of IL-12 gene transfected DC at initiating specific immune response to laryngeal carcinoma in vitro．

Methods  Recombinant adenovirus with IL-12 gene was constructed. DCs were isolated from the peripheral blood of patients with laryngeal carcinoma, pulsed with tumor lysate of laryngeal carcinoma cells (DC⁺Ag), and transfected with IL-12 (DC-IL-12⁺Ag). The cells pheotypes including CD83, CD86 and HLA-DR on surface of DCs were assayed by flow cytometry (FCM). The concentration of IL-12 in culture supernatant of DCs and interferon γ (IFN-γ) in culture supernatant of T cells cocultured with DCs were quantified by ELISA. Methyl thiazolys tetrazolium (MTT) was used to evaluate proliferation of autologous T lymphocytes and activation of cytotoxic T lymphocytes (CTL) stimulated by IL-12-transfected DCs pulsed with tumor lysate against laryngeal carcinoma cells.

Results  The recombinant adenovirus expressing IL-12 gene was constructed successfully. Gene-transfected DC plused with tumor lysate with IL-12 (DC-IL-12⁺Ag) expressed higher level of CD83, CD86 and produced higher level of IL-12 than untransfected DCs (DC⁺Ag) (CD83: (60.2±1.8)% vs. (50.7±1.2)%, P <0.05; CD86: (88.9±2.1)% vs. (78.2±3.9)%, P <0.05; IL-12: (262.5±3.0) ng/L vs. (103.8±5.1) ng/L, P <0.05). The proliferation of autologous T lymphocytes and production of IFN-γ stimulated by DC transfected with IL-12 were more obviously than untransfected DCs. Cytotoxicity of CTL stimulated by IL-12-transfected DC pulsed with tumor lysate against laryngeal carcinoma cells were significantly stronger than stimulated by untransfected DC.

Conclusion  It is a promising approach for IL-12-transfected DC pulsed with tumor lysate to increase the antitumoral effect.

     

热休克瘤细胞裂解物冲击的异基因树突状细胞促进抗肿瘤免疫

目的探讨热休克瘤细胞裂解物冲击的异基因树突状细胞（DC）抗肿瘤免疫效应。方法应用热休克（43℃,1h）小鼠Lewis肺癌细胞（LLC）裂解物（LhTCL）冲击的小鼠骨髓细胞衍生的树突状细胞（DC）作为瘤苗（DC／LhTCL）。应用Western印迹检测可诱导HSP70表达。用FITC-标记的LhTCL和CFSE-标记的异基因DC分别进行体外吞噬和体内示踪实验,藉酶联免疫吸附（ELISA）、流式细胞术（FCM）和共聚焦荧光显微镜观察分析不成熟异基因DC体外摄取LhTCL对其表型和IL-12产生的影响以及受鼠接种局部引流淋巴结DC（LD-DC）对异基因DC的摄取。然后,通过免疫接种的小鼠脾细胞体外诱生CTL的杀瘤活性（LDH法）和产生的Th-1相关细胞因子检测,LLC移植瘤的免疫预防和早期带瘤鼠的治疗实验以评价C57BL小鼠接种异基因或同系DC／LhTCL瘤苗的产生的抗肿瘤免疫效应。结果（1）热休克增加LLC胞浆内可诱导HSP70表达。（2）小鼠不成熟异基因DC能充分摄取LhTCL并促进其DC成熟（增加DC表面共刺激分子表达和IL-12分泌）。（3）皮下注射LhTCL冲击的异基因DC观察到有促进受鼠DC摄取异基因DC的效应。（4）LhTCL冲击的异基因DC免疫的C57BL小鼠脾细胞能特异性杀伤活LLC,分泌Th-1相关的细胞因子（高水平IFN-γ和低水平IL-4和IL-10）。（5）C57BL小鼠LLC移植瘤免疫保护实验和治疗实验均证实,免疫接种异基因DC／LhTCL瘤苗能够阻止或延缓LLC肿瘤的生长,其产生的免疫保护效应要比同系DC／LhTCL瘤苗强。结论接种热休克处理的肿瘤裂解物冲击的异基因树突状细胞瘤苗有促进抗肿瘤免疫的效应。     

白细胞介素-23基因修饰树突细胞获取凋亡癌细胞抗原诱导的抗胰腺癌免疫治疗

目的 探讨白细胞介素23（IL-23）基因转染的树突状细胞（DC）负载凋亡癌细胞抗原后诱导的免疫应答对小鼠胰腺癌的治疗作用。方法 克隆并构建IL-23基因真核双表达载体,转染DC后检测其表型及自分泌IL-23和IL-12的能力;观察各组脾脏T淋巴细胞γ干扰素（IFN-γ）和IL4的分泌量以及DC诱导的细胞毒T淋巴细胞（CTL）对胰腺癌细胞的杀伤作用。转染DC并负载肿瘤抗原后制备成疫苗对小鼠抗肿瘤的免疫保护作用和肿瘤抑制作用。结果基因测序证实IL-23基因克隆及双表达载体构建成功,转染后DC对共刺激分子MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ的表达增强;DC自分泌IL-23和IL-12的能力显著增强。DC介导的免疫应答促进了IFN-γ生成型Th1细胞的产生,IL-23转染组每24hIFN-γ的分泌（最高为535pg／ml／10^6）与其他各组比较（对照组每24h为60pg／ml／10^6）,P〈0．01;转染的DC疫苗在体内诱导出高水平的CTL活性（P〈0．05）。接种IL-23修饰DC疫苗后小鼠的免疫防御能力显著增强;对肿瘤的生长有明显抑制作用,治疗组荷瘤鼠生存期与其他各组比较差异有显著意义。结论IL-23使DC抗原递呈能力更强,IL-23修饰DC疫苗可强化宿主针对特异肿瘤的CTL免疫应答,使宿主不仅产生防御性免疫反应而且增强自动免疫能力。     

小鼠骨髓树突状细胞的诱导培养及抗CT-26肿瘤细胞的研究

目的：研究小鼠骨髓树突状细胞的诱导培养及其抗肿瘤特性。方法：用重组的鼠粒-巨噬细胞刺激因子(GM—CSF)及白细胞介素4(IL-4)从小鼠骨髓干细胞中诱导培养树突状细胞(DC),用流式细胞仪检测DC表型。肿瘤细胞CT-26冻融液负载DC后,治疗荷瘤BALB／c小鼠,测定DC抑瘤、消瘤作用及小鼠的生存期变化。结果：诱导的DC形态典型,表面高表达CD80、CD86、I—A^d等免疫分子。抗原负载的DC能明显抑制早期肿瘤的生长,治疗组与非治疗组生存期差异有统计学意义。结论：树突状细胞早期应用具有明显抗CT-26肿瘤细胞作用,可延长荷瘤小鼠的生存期。     

淋巴细胞趋化因子基因修饰增强肿瘤抗原多肽致敏的树突状细胞的 …

目的 通过选择性增强树突状细胞（ＤＣ）与Ｔ细胞的体内相互作用。优化其体内抗原提呈的微环境,为进一步增强ＤＣ介导的肿瘤免疫治疗效果。方法 体外培养的小鼠骨髓树突太细胞体外经Ｌｔｎ重组腺病毒感染后（Ｌｔｎ－ＤＣ）,用３ＬＬＬｅｉｗｓ肺癌细胞株的Ｍｕｔｌ抗原肽冲击致敏,按不同剂量免疫正常同系小鼠体内,观察其体内诱导的细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）活性保护性免疫反应。通过体内阻断试验探讨免疫细胞亚群及免疫分     

趋化因子CXCL10与肿瘤细胞RNA修饰树突状细胞抗前列腺癌研究

目的探讨肿瘤细胞RNA和趋化因子CXCL10基因共同修饰的树突状细胞(DC)瘤苗对小鼠抗肿瘤免疫反应的诱导作用。方法将小鼠RM 1前列腺癌细胞RNA加载小鼠骨髓来源的DC后,通过脂质体转染法将CXCL10基因导入DC,制备前列腺癌瘤苗;体内外实验检测该瘤苗诱导的抗前列腺癌免疫治疗作用。结果转染CXCL10基因的DC上清对淋巴细胞有较强的趋化作用;DC瘤苗所诱导的特异性效应细胞(CTL)对RM 1细胞具有特异性杀伤作用;经DC瘤苗治疗的荷瘤小鼠模型瘤体生长减慢,存活期延长;该瘤苗还具有明显的免疫保护作用。结论构建的前列腺癌DC瘤苗能够有效诱导抗肿瘤免疫反应和免疫保护功能。     

黄蘑多糖对H22荷瘤小鼠肿瘤生长及其VEGF表达的影响

目的：观察黄蘑多糖对H22（小鼠肝癌细胞系）荷瘤小鼠的抑制肿瘤效果,并探讨该机制是否与提高机体免疫力和抑制肿瘤血管生成有关。方法：采用腋下接种癌细胞悬液建立荷瘤小鼠模型,造模成功24 h后灌胃给药,连续给药12 d后,处死动物,剥离瘤块、胸腺、脾脏并分别称重,计算抑瘤率、胸腺指数、脾指数;眼球取血计数有核细胞数;以冰冻切片免疫组织化学法检测各组瘤组织血管内皮生长因子（VEGF）表达程度。结果：黄蘑多糖各组的肿瘤重量均低于模型组,其中,中、高剂量组的抑瘤效果显著（P〈0.05）,且各项免疫指标显著高于环磷酰胺组（CTX组）和模型组（P〈0.01或P〈0.05）;黄蘑多糖各组的VEGF表达率显著低于模型组（P〈0.01）,黄蘑多糖低、中剂量组VEGF的表达与CTX组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,高剂量组与CTX组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：黄蘑多糖对H22移植瘤的生长有一定抑制作用,可降低瘤组织中VEGF的表达,亦可作为生物反应调节剂,通过增强机体免疫功能等作用达到抗肿瘤的功效。     

肿瘤抗原多肽致敏白细胞介素18基因修饰的树突状细胞治疗小鼠转移性肺癌

目的探讨肿瘤多肽致敏的白细胞介素18(IL-18)基因修饰的树突状细胞(DC)对自发性肺转移癌的治疗作用。方法小鼠足垫注射3LLLewis肺癌细胞建立自发性肺转移癌模型,经骨髓来源的IL-18基因修饰、3LL特异抗原多肽Mut1体外致敏DC(DC-IL-18/Mut1)皮下免疫2次,观察荷瘤鼠肺脏重量、肺表面转移结节、存活期的变化及相应免疫指标等变化,实验分8组,组间差异行t检验,生存期行时序检验。结果与对照病毒组(DC-LacZ/Mut1)及未处理DC组相比,DC-IL-18/Mut1组肺脏重量最轻(215mg±20mg与398mg±23mg和987mg±45mg比较,t值分别为14.7及38.4,P均<0.01)、肺表面转移结节最少(0与7.8±2.7和49.4±4.3比较,t值分别为7.07及16.2,P均<0.01)、存活期最长(χ2分别为6.78、10.49,P均<0.01),其诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性(53.4±3.1与41.3±2.6和9.8±2.1比较,t值分别为7.3及28.5,P均<0.01)和天然杀伤细胞(NK)活性(35.8±2.4与15.6±2.8及13.6±2.5比较,t值分别为13.4及15.7,P均<0.01)最显著,且CD4+T、CD8+T及NK细胞比例增加。结论MHCⅠ类限制性肿瘤抗原多肽致敏的IL-18基因修饰的DC能通过诱导显著的抗肿瘤免疫反应而对自发性肺转移癌有明显的治疗作用。     

可用于IDO1抑制剂药效学研究的KPIC原位胰腺癌小鼠模型的构建

 目的 构建KPIC原位胰腺癌小鼠模型用于吲哚胺2,3-双加氧酶1（indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1）抑制剂药效学研究。方法 采用实时定量荧光PCR和Western blot等方法鉴定KPIC细胞中IDO1的表达情况;使用HPLC检测IDO1抑制剂1-甲基-L-色氨酸（1-methyl-L-tryptophan,1-L-MT）对KPIC细胞中IDO1活性的抑制作用及KPIC原位胰腺癌小鼠血清中IDO1活性;接种KPIC细胞到小鼠胰腺构建KPIC原位胰腺癌小鼠;免疫组化法检测KPIC原位胰腺癌小鼠肿瘤中IDO1、肿瘤增殖指数Ki67、胆系标志物Sox9的表达。结果 经mRNA及蛋白质水平鉴定,KPIC细胞内有IDO1及其同工酶的表达;1-L-MT能够下调KPIC细胞中IDO1活性;KPIC原位胰腺癌小鼠构建成功,在原位肿瘤中IDO1、Ki67和Sox9均有表达,小鼠血清中IDO1活性上调。结论 KPIC原位胰腺癌小鼠表达IDO1,可用于IDO1抑制剂的筛选及药效学评价。     

乳腺癌中吲哚胺2,3-双加氧酶和调节性T细胞的表达

[目的]通过研究在乳腺癌和引流淋巴结中吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine-2,3-dioxygenase,IDO)和调节性T细胞(Treg cells)的表达,探讨两者之间的关系.[方法]采用半定量RT-PCR法和免疫组织化学检测IDO mRNA和蛋白及Foxp3蛋白在乳腺癌、淋巴结和乳腺良性病变中表达情况.[结果]乳腺癌引流淋巴结中IDO的mRNA水平高于乳腺癌组织(P＜0.05),乳腺癌组织中IDO的mRNA水平高于乳腺良性病变组织(P＜0.05).免疫组化结果显示示乳腺癌引流淋巴结内IDO表达水平高于原发癌(P＜0.05),乳腺癌组织中IDO表达水平高于乳腺良性病变组织(P＜0.05).乳腺癌中IDO的表达与病理类型和临床分期相关(P＜0.05).乳腺癌中Treg细胞Foxp3+比例高于乳腺良性病变,乳腺癌引流淋巴结中Treg细胞Foxp3+比例高于乳腺原发癌(P＜0.05).乳腺癌组织中IDO与Treg细胞间呈正性相关(r2=0.409,P＜0.05),与引流淋巴结中Treg细胞正性相关(r2=0.528,P＜ 0.05).[结论]IDO和Treg细胞有可能在乳腺癌免疫逃逸机制中发挥重要作用.     

OVA基因修饰的树突状细胞疫苗抗裸鼠肺肿瘤效应研究

目的 探讨OVA基因修饰的树突状细胞疫苗(DC-OVA)在肿瘤模拟抗原OVA(ovabumin)的裸鼠肺癌模型体内抗肺肿瘤的效应。方法 裸鼠右肺原位接种携带OVA的Lewis肺癌细胞(Lewis lung cancer cell-OVA, LLC-OVA)悬液,建立裸鼠肺癌模型。获取DC,经基因转导制备DC-OVA疫苗。Western 印迹法检测OVA蛋白的表达。获取T细胞,进而制备DC疫苗系统(DC-OVA/T)。CCK8试剂检测DC-OVA刺激后T细胞的增殖。模型建立2周后,尾静脉注射DC-OVA/T。Micro-CT扫描荷瘤裸鼠的胸部,观察肺部影像。H-E染色观察肺部及肿瘤组织形态结构。IHC方法观察脾、淋巴结、肿瘤组织中CD8的表达;观察肿瘤组织中SOX2、BMI1的表达。ELISA法检测血清中IL-12水平。结果 Western印迹法在样本中检测出清晰的OVA条带。DC-OVA强有效地刺激了T细胞的增殖(P<0.05)。DC-OVA/T治疗4周,疫苗组裸鼠肺micro-CT未见明显肿瘤阴影;取材,裸眼可见疫苗组病灶减小,H-E染色显示疫苗组的肿瘤组织较少,肺组织形态较完整。疫苗组裸鼠的脾、淋巴结、肿瘤组织内CD8阳性表达均明显高于对照组(P<0.05,P<0.05,P<0.01),肿瘤组织中的SOX2、BMI1阳性表达明显低于对照组(P<0.05,P<0.05);血清中的IL-12含量较对照组明显升高(P<0.001)。结论 基因修饰的DC疫苗在裸鼠体内具有强大的抗肺癌效应,为临床治疗肺癌提供了新的实验依据。     

负载辐射凋亡MB49肿瘤细胞抗原的树突状细胞(DC)疫苗对小鼠膀胱癌的抑制作用

 目的 研究辐射凋亡MB49肿瘤细胞诱导的树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗的制备及对C57BL/6小鼠体内膀胱肿瘤的免疫学效应。方法 采用辐射法获取MB49细胞抗原并用其致敏骨髓来源的DC来制备DC疫苗。用MB49小鼠膀胱癌细胞建立荷瘤动物模型,随机分为实验组和对照组,于肿瘤细胞接种后第7、14天给予相应DC疫苗治疗或者PBS,每组分为2个亚组,分别用于测量瘤质量、体积及用于观察荷瘤小鼠存活情况。结果 负载辐射凋亡肿瘤细胞DC疫苗的实验组荷瘤小鼠,其肿瘤的平均体积和平均质量均显著低于对照组(P<0.01),生存期长于对照组。DC疫苗实验组中有2只小鼠30天内无肿瘤生长,再次皮下接种MB49细胞观察30天仍无肿瘤发生。结论 负载辐射凋亡肿瘤细胞的DC疫苗对膀胱肿瘤荷瘤小鼠具有抑瘤效应和延长生存期的作用。     

树突状细胞介导的肝癌免疫治疗实验研究

目的探讨以树突状细胞（DC）为介导的原发性肝癌免疫治疗新方法。方法采用肝癌细胞制备肿瘤细胞性抗原冲击致敏体外培养的DC,体外混合淋巴细胞反应检测抗原致敏DC;刺激同基因T淋巴细胞增殖的能力,观察负载肿瘤抗原的DC;体内外诱导产生肿瘤特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）及其抗肿瘤能力。结果经肝癌细胞抗原致敏的DC;能诱导较强的自体T细胞增殖,且诱导特异性CTL,该CTL对自体肝癌细胞具有很强的杀伤活性,杀伤率明显高于DC和未经肝癌细胞抗原致敏的DC;激活的CTL及T淋巴细胞的杀伤率,而对非同种肿瘤细胞无明显的杀伤作用,经BEL7402肿瘤细胞抗原致敏的DC;经皮下免疫小鼠可诱导有效的免疫保护作用,可抵抗野生型BEL7402细胞的再攻击,肿瘤生长受到明显抑制,瘤体出现延迟,生长减慢。结论DC具有强大的刺激T淋巴细胞增殖和诱导产生特异性CTL的能力,在体内外均能激发特异性抗肿瘤免疫应答。