慢性乙型肝炎患者肝细胞HBV cccDNA、tDNA及HBV表面标志物的相关性研究

目的 回顾性分析慢性HBV感染者肝细胞内HBV ccc DNA含量与肝细胞tDNA、HBsAg、HBcAg的关系以及临床意义.方法 应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测未经抗病毒治疗的患者58例(未抗病毒组)、经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者4例(抗病毒组)的肝细胞HBV ccc DNA和tDNA含量,应用免疫组化法定性检测肝组织内HBsAg和HBcAg表达,用SPSS 13.0软件统计分析肝细胞HBV ccc DNA含量、tDNA、HBsAg、HBcAg间的关系.结果 肝细胞HBV ccc DNA、HBV tDNA含量与HBsAg、HBcAg在肝细胞中的表达模式间差异无统计学意义(P> 0.05).肝细胞内HBV cccDNA含量与HBV tDNA含量呈高度正相关(P<0.01).慢性乙型肝炎抗病毒治疗患者中,疗程> 2年并达到<病毒性肝炎防治方案>停药标准,肝细胞内ccc DNA、tDNA含量较未抗病毒组显著降低,但肝细胞内仍然可以检出HBV ccc DNA、tDNA.结论 肝细胞HBV ccc DNA含量与HBsAg、HBcAg在肝细胞的表达模式间无一定规律性.核苷(酸)类似物抗病毒治疗 2~3年并不能完全清除肝细胞内HBV ccc DNA.     

HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者相同肝实质细胞体积分摊的血清HBV DNA载量与肝组织炎性分级的关系

目的研究乙型肝炎e抗原（HBeAg）阴性慢性乙型肝炎（CHB）患者由相同肝实质细胞体积分摊的血清HBV DNA载量与肝组织炎性分级（G）的关系。方法采用荧光多聚酶链反应检测118例HBeAg阴性CHB患者的血清HBV DNA载量,通过推算肝实质细胞体积获得不同炎性分级患者相同肝实质细胞体积分摊的HBV DNA载量。多组间资料的比较采用ANOVA检验,不同肝组织炎性分级与患者年龄、血清HBV DNA定量及相同肝实质细胞体积分摊的HBV DNA载量的相关性分析采用Pearson’s分析。结果118例HBeAg阴性CFIB患者中,肝组织炎性分级为1、2、3和4级的患者血清HBV DNA载量分别为2．75×10^5±5．73×10、3．12×10^5±2．50×10、6．03×10^5±3．02×10、7．40×10^5±2．81×10,各级之间比较差异无统计学意义（G1与G2、G3、G4比较,t值分别为0．41、0．39和0．49,G2与G3、G4比较,t值分别为0．36和0．46,G3与G4比较,t值为0．45,P值均〉0．05）;而各炎性分级患者由相同肝脏实质细胞体积分摊后的血清HBV DNA载量分别为2．18×10^8±5．78×10^2、7．45×10^8±1．58×10^2、8．87×10^9±6．25×10^2、7．33×10^10±5．68×10^2,其中G3与G1,Gg与G1以及G4与G2之间比较差异有统计学意义（t值分别为0．67、0．82和0．77,P值均〈0．05）。相关性分析显示,肝组织炎性分级与相同肝实质细胞体积分摊的HBV DNA载量呈正相关（r=0．308,P〈0．05）,而与年龄和血清HBV DNA载量无相关性（r值分别为0．121和0．111,P值均〉0．05）。结论HBeAg阴性CHB患者肝组织炎性程度与相同肝实质细胞体积分摊的血清HBV DNA载量水平呈正相关。     

慢性乙型肝炎患者肝细胞HBV ccc DNA与血清HBV DNA及肝纤维化程度的相关性

目的探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者肝细胞HBV ccc DNA含量与血清HBV DNA、肝组织纤维化程度的相关性及在抗病毒治疗中的临床意义。方法对48例未接受抗病毒治疗CHB患者（A组）和6例经聚乙二醇化干扰素α-2a规律抗病毒治疗48周CHB患者（B组）进行肝组织活检以检测肝纤维化分期,并应用real time-PCR检测肝细胞HBV ccc DNA含量。分析A组患者肝细胞HBV ccc DNA与肝纤维化程度以及两组患者肝细胞HBV ccc DNA与血清HBV DNA相关性,分析B组患者HBV ccc DNA变化。结果肝细胞cccDNA及血清DNA水平均与肝组织纤维化程度呈负相关,但HBV ccc DNA相关性更强（r=-0.465,P=0.008）。肝细胞HBV ccc DNA与血清HBV DNA不存在相关性（r =0.057, P =0.418）。B组患者肝细胞HBV ccc DNA较对照组（自A组中选取性别、年龄及HBV DNA无差异患者共12例）显著下降,其中3例患者血清HBV DNA载量低于检测下限,但肝细胞仍可检出HBV ccc DNA。结论肝细胞HBV ccc DNA与肝纤维程度呈负相关,而血清HBV DNA水平不能反映肝内病毒复制的程度。CHB患者抗病毒治疗需要长期进行才可能完全清除肝细胞内HBV ccc DNA。     

慢性乙型肝炎T淋巴细胞HLA-DR抗原表达与HBV DNA和HBeAg含量关系的初步分析

目的 探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者HBV DNA、HBeAg含量不同时外周血T淋巴细胞人白细胞抗原DR（HLA-DR）的表达情况.方法 收集2008年9月-2009年10月杭州市第六人民医院134例CHB患者,另外选取36名健康体检者作为对照.用流式细胞仪检测所有研究对象外周血CD3＋HLA-DR＋、CD4＋HLA-DR＋和CD8＋HLA-DR＋T淋巴细胞HLA-DR抗原的表达;实时荧光定量PCR法检测血清HBV DNA含量,化学发光法定量检测血清HBeAg含量.所有患者根据血清HBV DNA载量分为HBV DNA阴性组（≤103拷贝/mL）、低载量组（＞103～105拷贝/mL）、中载量组（＞105～107拷贝/mL）和高载量组（＞107～109拷贝/mL）;根据血清HBeAg含量分为HBeAg阴性组（≤1 PEIU/mL）、低含量组（＞1～100 PEIU/mL）、中含量组（＞100～1 000 PEIU/mL）和高含量组（＞1 000～10 000 PEIU/mL）.组间比较采用t检验和单因素方差分析.结果随着HBV DNA、HBeAg含量的升高,CD3＋HLA-DR＋、CD4＋HLA-DR＋和CD8＋HLA-DR＋细胞百分比降低,其中CD8＋HLA-DR＋细胞百分比降低尤为明显.与HBV DNA阴性组比较,高载量组CD3＋HLA-DR＋、CD4＋HLA-DR＋和CD8＋HLA-DR＋细胞百分比均明显减少,差异具有统计学意义（t=3.686、4.592和3.216,P值均＜0.01）;中载量组CD4＋HLA-DR＋和CD8＋HLA-DR＋细胞百分比均明显减少,差异具有统计学意义（t=3.761和2.862,P值均＜0.01）;低载量组CD8＋HLA-DR＋细胞百分比明显减少,差异有统计学意义（t=2.215,P值＜0.05）.与HBeAg阴性组比,HBeAg高含量组、中含量组CD3＋HLA-DR＋、CD4＋HLA-DR＋和CD8＋HLA-DR＋细胞百分比均明显减少,差异具有统计学意义（t高含量=3.144、2.222和4.035;t中含量=3.311、2.362和3.374,P值均＜0.05）;HBeAg低含量组CD8＋HLA-DR＋细胞百分比明显减少,差异具有统计学意义（t=2.029,P值＜0.05）.结论 联合检测患者血清HBV DNA、HBeAg含量以及T淋巴细胞HLA-DR抗原表达不仅有助于评价CHB患者的免疫状况,对疾病进展和临床疗效评价也具有一定的指导意义.     

慢性hbv感染者肝组织中smad蛋白的表达及其与肝纤维化的相关性

目的 观察smad2/3、smad4、磷酸化smad3( p-smad3)蛋白在人肝纤维化组织中的表达,探讨smad蛋白及其介导的生物学信号在肝纤维化发生中的作用机制.方法 以肝组织活检病理诊断区分131例慢性hbv感染者纤维化程度,免疫组化法检测肝组织中smad2/3、smad4和p-smad3蛋白的表达并进行定量分析.结果smad2/3、smad4、p-smad3蛋白主要见于纤维间隔、汇管区和中央静脉周围成纤维细胞、肝窦及部分肝细胞质内均可见表达.肝组织smad2/3、smad4、p-smad3蛋白与肝纤维化程度有非常显著性正相关(r分别是0.81、0.58和0.68,p=0.000).三种蛋白间也具有非常显著性正相关(r分别是0.75、0.87和0.84,p=0.000).结论 肝组织smad2/3、smad4、p-smad3蛋白表达与慢性hbv感染肝纤维化程度相关,smad2/3、p-smad3、smad4信号的增强可能促讲了肝纤维化的讲展. abstract： objective to evaluate the association of smad2/3,smad4 and p-smad3 protein expressions in tissue with liver fibrosis in patients with chronic hbv infections.methods liver biopsy was performed to determine the liver fibrosis grades in 131 cases of chronic hbv infections.immunohistochemistry and semiquantitative analysis were applied to detect the expression of smad2/3,smad4 and p-smad3 proteins in liver tissues.results smad2/3,smad4 and p-smad3 were detected mainly in fibrous septum,portal areas,myofibroblasts,sinus and cytoplasm in the liver tissue.the expression of smad2/3,smad4 and p-smad3 was increased with the development of fibrosis ( r =0.81,0.58and 0.68,p =0.000),and a strong positive correlation was observed among three proteins (r =0.75,0.87and 0.84,p =0.000).conclusion the expression of smad2/3,smad4 and p-smad3 is correlated with liver fibrosis in chronic hbv infection,which suggests that the up-regulation of smad proteins may be involved in the progression of liver fibrosis.     

慢性乙型肝炎免疫清除期甲胎蛋白与HBV DNA清除的相关性研究

目的：探讨乙型肝炎免疫清除期,甲胎蛋白（AFP）与HBV DNA清除之间的相关性。方法收集处于免疫清除期发病2周内AFP升高5倍以上患者共58例,分为非抗病毒治疗组（下称观察组）31例和核苷（酸）类似物抗病毒治疗组（下称阳性对照组）27例,另取同期住院AFP阴性首次发病的慢性乙型肝炎核苷（酸）类似物抗病毒患者30例作为阴性对照组。分析影响HBV DNA清除率的相关因素。结果阳性对照组及阴性对照组患者均行抗病毒治疗,HBV DNA定量与各临床数据之间均无相关性,观察组HBV DNA定量与各指标之间的关系结果显示,AFP与HBV DNA清除具有显著相关性（r=0.8420,P=0.018）,以下依次为ALT（r=0.7888,P=0.027）和总胆红素（TBil）（r=0.7816,P=0.032）。HBsAg（r=0.0480,P=0.413）和HBeAg（r=0.3356,P=0.191）与HBV DNA清除无显著相关性。结论对乙型肝炎免疫清除期AFP升高5倍以上患者,可先进行密切病情观察,根据病情需要进行抗病毒治疗。     

血清HBsAg、HBcrAg和HBV DNA预测慢性乙型肝炎肝脏病理状态的评价

目的评价血清乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒核心相关抗原（HBcrAg）和乙型肝炎病毒DNA（HBV DNA）预测慢性乙型肝炎（CHB）患者肝脏不同病理学分级和分期的有效性。 方法共选取CHB患者211例,其中HBeAg阳性和阴性分别为125例和86例。血清HBsAg、HBeAg和HBcrAg分别采用化学发光微粒子免疫法和化学发光酶免疫法检测,血清HBV DNA采用实时荧光定量PCR检测。 结果HBeAg阳性患者,血清HBsAg、HBcrAg和HBV DNA与肝脏病理学分级和分期均呈显著负相关（P均< 0.05）;HBeAg阴性患者,血清HBcrAg和HBV DNA与肝脏病理学分级和分期均呈显著正相关（P均< 0.01）。Bayes逐步判别分析显示,HBeAg阳性患者,仅血清HBsAg符合判别肝脏不同病理学分级和分期的方程纳入自变量的标准（F > 3.84）,Fisher判别函数预测肝脏病理学分级G1、G3和分期S1、S4的正确率分别为62.7%、58.8%和63.8%、69.6%;HBeAg阴性患者,血清HBV DNA和HBcrAg分别符合判别肝脏不同病理学分级和分期的方程纳入自变量的标准（F > 3.84）,Fisher判别函数预测肝脏病理学分级G1、G3和分期S1、S4的正确率分别为79.3%、66.7%和71.7%、75.0%。 结论血清HBsAg对HBeAg阳性患者以及血清HBV DNA和HBcrAg分别对HBeAg阴性患者的肝脏病理学分级G1、G3和分期S1、S4有显著的预测意义。     

52例HBeAg阴性HBV相关性肝细胞癌患者的临床分析

目的通过对HBeAg阴性慢性乙型肝炎进展为肝癌（HCC）患者的临床资料进行回顾性分析,探讨该病的发生规律和临床特征。方法对本院收治的52例HBeAg阴性HCC患者的性别、年龄、生化学指标、HBV DNA载量、免疫学状态以及服药情况等进行综合分析并进行统计学处理。结果52例HBeAg阴性HCC患者的血清HBV DNA分布：＜103拷贝/ml者18例（34.63%）,103～105拷贝/ml者22例（42.30%）,＞105拷贝/ml者12例（23.07%）。血清HBV DNA载量愈高的患者肝损伤愈重。抗-HBe （-）/抗-HBe（＋）和抗-HBs（-）/抗-HBs（＋）不同血清HBV DNA的分布无相关性,HCC的发生与抗-HBe和抗-HBs是否出现无关。经抗病毒药物治疗的HCC发生例数显著低于未使用过药物者,提示抗病毒药物能降低或延缓HCC的发生。结论对于HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者,尤其是有重症化和肝硬化病理基础、年龄偏大的患者,其HBeAg转阴可能是在药物作用下实现的自然血清学转换伴HBV DNA水平下降至正常,甚至有患者出现HBSAg阴转;也可能是病毒发生变异所致;此两类患者均应警惕HCC的发生。     

轻度慢性乙型肝炎患者肝脏细胞外基质和超微结构改变与临床相关性分析

目的 探讨轻度慢性乙型肝炎(chb)患者细胞外基质和肝脏超微结构改变与临床的相关性.方法 选择慢性hbv感染者为研究对象,将其分为轻度chb组(66例)和慢性hbv携带组(10例).对所有患者采集血清,并行肝穿刺活检,光镜和电镜下观察样本,将结果与血清生化学等指标进行对比分析.计量资料比较采用t检验,计数资料比较采用χ2检验,等级资料相关性使用非参数spearman 分析.结果 轻度chb组和慢性hbv携带组在alt和ast两项指标上比较差异有统计学意义(t=12.42和7.06,p＜0.05),但hbv dna水平差异无统计学意义(t=0.24,p＞0.05).两组患者血清肝纤维化指标(透明质酸、Ⅲ型胶原、Ⅳ型胶原和层黏连蛋白)差异均无统计学意义(t=0.45、0.95、0.76和1.21,p值均＞0.05).光镜组织学结果显示,轻度chb组中,g2、s2以上的患者为33例,慢性hbv携带组为2例,两组差异有统计学意义(χ2=4.17,p＜0.05).轻度chb组s3～4的患者(17例)明显多于慢性hbv携带组(0例,χ2=4.75,p＜0.05).电镜超微结构表现,狄氏间隙胶原纤维增生、汇管区扩大、贮脂细胞增生等反映肝脏纤维化相关的指标与光镜下纤维化分级相关系数分别为0.351、0.675和0.301(p值分别为0.004、0.000和0.014).结论 电镜下肝脏超微结构改变敏感性较光镜高,对轻度chb患者的病情评估具有重要价值. abstract： objective to investigate the correlations of extracellular matrix and hepatic ultramicrostructural changes with clinical manifestations in patients with mild chronic hepatitis b (chb).methods patients with chronic hbv infections were enrolled and were divided into mild chb group (n=66) and hbv carrier group (n=10).serum samples were collected from patients, and serum hbv markers, hbv dna load and liver fibrosis indexes were measured.all subjects received liver biopsy, and the tissue samples were observed by light microscope and electron microscope.t test and χ2 test were performed for measurement data and enumeration data, respectively.spearman test was used for ranked data.results the differences on alt and ast levels between mild chb group and hbv carrier group were significant (t=12.42, 7.06, p＜0.05), but there was no significant difference on hbv dna load between two groups (t=0.24, p ＞ 0.05).serum liver fibrosis indexes (hyaluronic acid, type Ⅲ collagen,type Ⅳ collagen and laminin protein) in mild chb group were not significantly higher than those in hbv carrier group (t=0.45, 0.95, 0.76 and 1.21, p ＞0.05).in mild chb group, there were 33 patients with ≥g2 and ≥s2, but in hbv carrier group were only 2 patients (χ2=4.17, p ＜ 0.05).seventeen patients in mild chb group were with s3-4, while that was not observed in hbv carrier group (χ2=4.75, p ＜0.05).in mild chb group, hepatic ultramicrostrutural changes on fat storing cell, collagen protein and portal area were correlated with fibrosis grades, and the correlation coefficients were 0.351, 0.675 and 0.301, respectively (p=0.004, 0.000 and 0.014).conclusion electron microscope is of higher sensitivity than light microscope in observing hepatic ultramicrostructural changes, which is effective in evaluating the severity of mild chb.     

慢性乙型肝炎患者肝细胞内HBcAg分布与血清病毒学指标的相关性研究

目的探讨慢性乙型肝炎患者肝细胞内HBcAg分布规律与血清病毒学指标的相关性。方法对958例慢性乙型肝炎患者的血清学、病毒学、免疫组织化学等资料进行对比分析。结果在肝细胞内HBcAg不同分布类型之间,血清HBeAg阳性率及HBV DNA载量均存在显著性差异（χ2值分别为364.01和417.41,P〈0.001）。其中,此两项指标以HBcAg核型和混合型分布组最高,HBcAg阴性组最低,而HBcAg浆型分布组的HBeAg阳性率及HBV DNA载量则介于上述两组之间。结论 HBcAg在受染肝细胞内的分布与血清病毒学指标之间具有明显的相关性,随着HBcAg分布态势由受染肝细胞核向细胞浆漂移到最终不能检测到,HBeAg阳性率及HBV DNA载量呈逐渐降低的趋势。     

外周血单个核细胞中HBV DNA与HBV cccDNA对慢性乙型肝炎患者免疫功能的影响

目的 比较外周血单个核细胞(PBMCs)有或无HBV感染证据组中免疫功能的差异.方法 常规分离78例CHB患者和10例健康对照组全血中的PBMCs,提取DNA,应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测PBMCs中的HBV DNA和HBV cccDNA;进行PBMCs的培养,孵育72 h后,收集PBMCs上清液,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-10(IL-10),并用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测PBMCs的增殖活性.结果 PBMCs中HBV cccDNA阳性的患者组,其PBMCs产生IFNγ水平显著下降,IL-10水平显著升高,同时伴PBMCs的增殖能力显著下降.结论 HBV感染PBMCs可能是HBV感染后机体Th1/Th2细胞因子比例失衡,特异性免疫功能低下,形成慢性HBV感染的主要原因之一.     

慢性乙型病毒性肝炎肝纤维化无创性血清诊断指标研究进展

我国乙型肝炎病毒（HBV）感染相关的肝硬化和肝细胞肝癌是引起肝病患者死亡的主要原因。有效的抗病毒治疗能够延缓患者肝纤维化的进展,肝纤维化分期对治疗方案的制定至关重要。肝组织活检仍是诊断肝纤维化的金标准,但其为有创性操作,应用受限。用可靠的无创性血清标志物来评估肝纤维化程度能降低肝组织活检的需求,本文就无创性血清标志物作一综述。     

PBMCs HBV逆转录酶mRNA表达与乙型肝炎的临床关系

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）逆转录酶mRNA存外周血单个核细胞（PBMCs）中的表达与乙型肝炎的临床关系。方法选择70例乙型肝炎患者（包括急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝硬化）及10例HBsAg阴性的健康体检者。分别提取其PBMCs中的总RNA,经无RNA酶的DNA酶I消化去除残存的基因组DNA后,逆转录合成cDNA。以HBVP基因区设计合成逆转录酶引物进行PCR扩增,检测HBV逆转录酶的表达情况。对1例阳性标本进行了克隆和测序,将所得序列与Gen．Bank数据库中已知核苷酸序列进行同源性分析。结果所得基因序列为379个核苷酸,与实验设计相符。与HBVadw2亚型标准一级结构比较,同源性为93．7％。对照组无1例HBV逆转录酶mRNA阳性表达;急性乙型肝炎组阳性表达率较低,为5．3％（1／15）;慢性乙型肝炎组阳性表达率为33．3％（12／36）,两组阳性率差异有显著统计学意义（P〈0．05）;肝硬化组阳性表达率为26．7％（4／15）,与慢性乙型肝炎组比较,阳性率差异无统计学意义（P〉0．05）。PBMCs中HBV逆转录酶mRNA表达阳性组与阴性组肝功能比较,大部分指标差异有显著统计学意义（P〈0．05）。PBMCs中HBV逆转录酶表达阳性率与血清HBeAg、HBVDNA阳性率之间无相关性（r=0．164、,=0．07）,其差异均无显著统计学意义（P〉0．05）。另外,乙型肝炎患者中,有家族史者的PBMCs逆转录酶mRNA阳性表达率占37．0％（10／27）,而无家族史者的仅占16．3％（7／43）,乙型肝炎患者的家族史与PBMCsHBV逆转录酶阳性表达有相关性（r=0．229）,差异有显著统计学意义（P〈0．05）。结论HBV逆转录酶在PBMCs中可独立复制,其表达与乙型肝炎的慢性化、重度化及家族聚集性有密切相关性,可为早期诊断指标之一。     

非酒精性脂肪性肝病患者血清肝纤维化指标与肝内脂肪含量的相关性研究

目的探讨非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者肝纤维化指标与T1WI同/反相位测定肝内脂肪含量的关系。 方法选取2017年6～8月非酒精性脂肪性肝病者120例,根据肝纤维化评分(NFS)将患者分为NFS<－1.455亚组(n＝35, A组),－1.455≤NFS≤0.676亚组(n＝41, B组)及NFS>0.676亚组(n＝44, C组)。选择同期体检的年龄、性别、地域相匹配的健康人群50例为对照组,使用SPSS 19.0软件包对数据进行统计分析,肝纤维化指标和肝脏脂肪相对含量用( ±s)表示,两两比较采用t检验,多组间比较采用方差分析及Spearman相关分析。P<0.05表示差异有统计学意义。 结果C组随着血清肝纤维化指标CK18、YKL40、APRI、GPRI的升高,肝内脂肪含量减低,呈负相关关系(r＝－0.850、－0.584、－0.784、－0.684, P< 0.05),A组及B组未发现相关关系(P>0.05)。 结论非酒精性脂肪性肝炎有肝纤维化趋势,肝内脂肪含量与肝纤维化的进展密切相关。