血小板生长因子对缺氧缺血性脑损伤新生鼠脑细胞凋亡率和血清神经元特异性烯醇化酶的影响

目的 研究血小板源性生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)对缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)的新生鼠神经细胞凋亡率及血清神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)浓度的影响,进而探讨其对HIBD的神经保护作用. 方法 7日龄新生Wistar大鼠48只制备HIBD模型,并分为PDGF治疗组和生理盐水对照组,每组各24只.另取24只为假手术组.治疗组在缺氧缺血后即刻给PDGF-BB 50 ng/kg腹腔注射.对照组和假手术组腹腔注射等体积的生理盐水.每组于处置后12、24和72 h随机取8只处死,留血清标本,酶联免疫吸附法检测大鼠血清标本NSE浓度;取右侧大脑组织制备脑细胞悬液,双染法流式细胞仪检测脑细胞凋亡率.采用单因素方差分析及q检验进行统计学分析. 结果 (1)脑细胞凋亡率:治疗组[(6.09±0.70)％、(9.67±1.52)％和(14.15±1.52)％]和对照组[(8.00±1.10)％、(11.45±2.42)％和(22.90±2.03)％]3个时点的脑细胞凋亡率均较假手术组(2.11±0.54)％、(2.34±0.46)％和(2.21±0.49)％]显著增加(P均＜0.01或＜0.05),治疗组较对照组各时点脑细胞凋亡率均明显降低(P均＜0.01或＜0.05),3组大鼠在12、24、72 h时的组间比较差异均有统计学意义(F=39.01、66.60、194.20,P均＜0.01).(2)血清NSE浓度:各时点对照组[(10.04±0.19) μg/L、(9.33±0.15)μg/L和(8.36±0.16)μg/L]和治疗组[(8.43±0.17)μg/L、(6.73±0.16) μg/L和(6.12±0.13)μg/L]较假手术组[(4.22±0.53)μg/L、(3.96±0.60) μg/L和(3.59±0.55) μg/L]NSE浓度增加(P均＜0.01),治疗组较对照组各时点NSE浓度降低(P均＜0.01),3组大鼠在12、24、72h组间比较差异均有统计学意义(F=371.25、245.61、236.22,P均＜0.01). 结论 PDGF能抑制新生大鼠HIBD后神经细胞凋亡及降低血清NSE浓度,对HIBD新生大鼠有神经保护作用.     

p38丝裂原活化蛋白激酶信号分子在子痫前期患者血管内皮细胞损伤中的作用

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号分子在子痫前期患者血管内皮细胞损伤中的作用.方法选择2009年9月至2010年3月在重庆医科大学附属第一医院住院分娩的足月产妇54例为研究对象,其中36例为子痫前期患者,按病情分为子痫前期轻度组(20例)、子痫前期重度组(16例);同期足月择期剖宫产孕妇为对照组(18例).采用CD34标记血管内皮细胞,计数各组胎盘微血管密度(MVD);SP法检测磷酸化的p38 MAPK(p-p38 MAPK)在胎盘组织中的定位;蛋白印迹法检测各组胎盘p38 MAPK及p-p38 MAPK的蛋白表达差异;双抗体夹心ELISA法检测各组血清中可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlt-1)及可溶性内皮糖蛋白(soluble endoglin,sEng)的水平.结果 (1)MVD:对照组、子痫前期轻度组及子痫前期重度组患者胎盘MVD分别为103±3、81±5、63±4,各组间两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)p38 MAPK和p-p38 MAPK蛋白表达水平:对照组、子痫前期轻度组及子痫前期重度组患者胎盘组织p38 MAPK蛋白表达水平分别为0.84±0.05、0.90±0.14、0.86±0.18,各组间两两比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);p-p38 MAPK蛋白的表达水平分别为0.13±0.05、0.59±0.12和1.16±0.18,各组间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)p-p38 MAPK蛋白的表达部位:p-p38 MAPK蛋白主要表达于胎盘滋养层细胞的胞质及胞核、血管内皮细胞及少量间质细胞的胞核.(4)sFlt-1及sEng的水平:①对照组孕妇血清sFlt-1、sEng水平分别为(5.2±0.3)、(10.9-±0.4)μg/L;子痫前期轻度组分别为(12.5±1.2)、(20.4±5.3)μg/L;子痫前期重度组分别为(19.3±3.0)、(29.5±3.7)μg/L;各组sFlt-1、sEng水平两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);②p-p38 MAPK蛋白表达水平与血清sFlt-1、sEng水平的相关性:子痫前期重度组和子痫前期轻度组p-p38 MAPK蛋白表达水平与血清sFlt-1、sEng水平均呈明显正相关(r=0.68,P＜0.05;r=0.87,P＜0.05).结论 子痫前期患者胎盘组织中p38 MAPK信号分子的显著活化,使血清中sFlt-l、sEng水平升高,损伤胎盘血管内皮细胞,导致胎盘MVD降低;p38 MAPK信号分子可能是子痫前期患者血管内皮细胞损伤的关键信号传导通路之一.

Abstract：

Objective To study expression and activation of p38 mitogen activated protein kinase (MAPK) in vascular endothelial cells dysfunction in preeclampsia. Methods From Sept. 2009 to Mar.2010, 54 pregnant women underwent deliveries in the First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University were enrolled in this study, including 20 patients in mild preeclampsia group, 16 patients in severe preeclampsia group and 18 women with term cesarean section without perinatal complications as control group. Placental endothelial cells were labeled by CD34 to assay microvessel density (MVD) of each group. Immunohistochemical SP and western blot were used to detect localization and expression of p-p38 MAPK protein, respectively. The levels of sera soluble fms-like tyrosine kinase-1 (sFlt-1)and soluble endoglin(sEng) were measured by ELISA. Results ①The MVD of placenta were 103 ± 3 in control group, 81 ±5 in mild preeclampsia group and 63±4 in severe group, respectively, which showed statistical difference among each group (P＜0.05).②The expression of p38 MAPK protein were 0.84±0.05 in control group,0.90±0.14 in mild group and 0. 86 ±0.18 in severe group, which did not reach remarkable difference among each group (P＞0.05). The expression of p-p38 MAPK protein were 0.13±0.05 in control group,0.59±0.12 in mild group and 1.16±0.18 in severe group, which show statistical difference among each group(P＜0.05).(3) The localization of p-p38 was in trophoblast, endothelial cells and a few (5.2±0.3)and(10.9±0.4)μg/L in control group,(12.5±1.2) and (20.4±5.3)μg/L in mild group and (19.3±3.0) and (29. 5 ±3.7) μg/L in severe group. When drawing paired comparison in those p-p38 MAPK protein levels and the concentrations of serum sFlt-1, sEng in preeclampsia groups (r=0.68,P＜0.05;r=0.87,P＜0.05). Conclusions The remarkable activation of the p38 MAPK in the placenta of patients with preeclampsia induced the increased levels of sFlt-1 and sEng in maternal serum, which confer the injury of vascular endothelial cells that caused the significant decline of MVD in placentas. p38 MAPK signaling might be one of the key pathways in vascular endothelial cell dysfunction in preeclampsia.     

对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的几种保护作用的研究

目的　研究脑活素 (L ZCL )、胞二磷胆碱 (CDPC)及碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)的保护作用。　方法　应用新生 Wistar大鼠制备 HIBD模型 ,将 L ZCL、CDPC和 b FGF应用于这些模型中 ,观察它们对 HIBD模型鼠的体重增长、病死率、脑病变的影响 ,并用原位缺口末端标记法检测它们对缺氧缺血 (HI)后脑细胞凋亡的影响。　结果　 3种治疗均促进了 HIBD模型鼠体重的增长 ,明显减轻了脑水肿及脑病变 ,并减轻了 HI后脑细胞的凋亡。　结论　 L ZCL、CDPC及 b FGF对 HIBD的脑组织确有保护作用。     

血小板活化因子对卵巢癌细胞侵袭的影响及其相关机制

目的 探讨血小板活化因子(PAF)对卵巢癌细胞侵袭的影响及其相关机制,为卵巢癌的治疗提供新的靶点.方法 (1)以100 nmol/L的PAF分别处理卵巢浆液性癌细胞株OVCA429细胞及卵巢黏液性癌细胞株RMUG-L细胞,均以仅加入二甲基亚砜(DMSO)为对照,采用体外侵袭实验检测其穿膜细胞数.(2)以不同浓度(分别为0、0.1、1、10、100、1000 nmol/L)的PAF处理后检测OVCA429细胞中环腺苷酸应答元件结合蛋白(CREB)、磷酸化CREB(p-CREB)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白的表达水平;以100 nmol/L的PAF处理不同时间(分别为0、5min、10 min、30 min、1h及12 h)后检测OVCA429细胞中有丝分裂原活化蛋白激酶p38蛋白(p38 MAPK)、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、CREB及p-CREB蛋白的表达水平,上述各蛋白的表达水平均采用蛋白印迹法检测.(3) OVCA429细胞在加入PAF( 100 nmol/L)的基础上,分别加入各蛋白的抑制剂,即PAF受体(PAFR)抑制剂-WEB2076(50 μmol/L)、p-p38 MAPK抑制剂-SB203580(10 μmol/L)、CREB结合蛋白(CBP)-CREB相互作用抑制剂-217505(25 μmol/L).实验分为6组:PAF组、PAF+WEB2076组、PAF+ SB203580组、PAF+ 217505组、PAF+ SB203580 +217505组及空白对照组,采用蛋白印迹法检测各组细胞中p-p38 MAPK、p-CREB、MMP-2蛋白的表达强度.结果 (1)体外侵袭实验显示,予PAF处理后,OVCA429细胞的穿膜细胞数[(118±23)个]明显多于其对照细胞[(36±8)个,P＜0.01],而RMUG-L细胞的穿膜细胞数[(45±13)个]与其对照细胞[(53±9)个]比较无明显变化(P＞0.05).(2)不同浓度的PAF处理后,OVCA429细胞中p-CREB、MMP-2蛋白的表达水平呈明显的剂量依赖性(P＜0.01),0.1 nmol/L的PAF即可引起p-CREB、MMP-2蛋白表达水平明显升高,至100 nmol/L时达高峰;而CREB蛋白的表达无明显变化.100nmoL/L的PAF处理不同时间后,OVCA429细胞中p38 MAPK、CREB蛋白表达无明显变化;而p-p38 MAPK、p-CREB蛋白表达水平明显升高(P＜0.01),至处理10 min时达高峰,随后逐渐降低.(3)与空白对照组比较,PAF组细胞中p-p38 MAPK、p-CREB及MMP-2蛋白的表达强度明显增强.与PAF组比较,PAF+ WEB2076组、PAF+SB203580组、PAF+ SB203580+ 217505组细胞中p-p38 MAPK、p-CREB及MMP-2蛋白的表达强度明显减弱,但PAF+ SB203580+ 217505组与PAF+ WEB2076组及PAF+ SB203580组相比无明显差异;PAF +217505组细胞中p-p38 MAPK、p-CREB蛋白的表达强度无明显变化,但其MMP-2蛋白的表达强度明显减弱.结论 PAF可促进卵巢浆液性癌OVCA429细胞的侵袭,这一作用可能是通过p38MAPK激活转录因子CREB,进一步上调MMP-2蛋白的表达而实现的.     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时脑海马Bcl-2、Bax和p53蛋白表达的研究

缺氧缺血性脑损伤 ( HIBD)导致的继发性神经元死亡、丢失与凋亡有关。已知细胞凋亡是基因调节的主动过程 ,有许多癌基因及抑癌基因参与。本研究利用新生大鼠制成 HIBD模型 ,采用免疫组织化学—— SP法及原位缺口末端标记 ( TUNEL)来研究 Bcl-2、Bax和 p53蛋白在缺氧缺血 ( HI)后海马中表达情况以及与细胞凋亡的关系。一、材料和方法1 .材料 :新生 7日龄 Wistar大鼠 ,性别不限 ,体重 1 2～ 1 6g,共 1 0 0只 (本院动物实验室抽供 ) ;RSS-51 W型便携式数字测氧仪 (上海产 ) ;自制常压缺氧舱 ;程序性细胞死亡检测试剂盒 (华美生物工程…     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织细胞红蛋白的表达

目的 探讨细胞红蛋白(eytoglobin,CYGB)在7日龄新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-isehemie brain damage,HIBD)脑内的表达变化.方法 健康7日龄SD大鼠70只,按简单随机抽样法随机取50只制备HIBD模型作为HIBD组,再随机分为HIBD后0、4、12、24和48 h组,每组10只;假手术组10只,只分离左颈总动脉,不结扎,也不放入缺氧箱;另10只不做任何处理作为对照组.假手术组术后即断头取脑,对照组同时取脑,HIBD组在相应时间点取脑.采用免疫组织化学法和Western印迹法从蛋白水平分析CYGB在脑组织中的分布及表达特点. 结果 (1)免疫组织化学染色显示CYGB主要表达于大脑皮质、丘脑和海马神经元的胞浆,HIBD组CYGB表达数量及染色强度均高于对照组,其中缺氧24、48 h组表达最强.(2)Western印迹结果显示,HIBD后0、4、12、24和48 h CYGB平均吸光度分别为261.5土5.0,263.0土5.4,464.3±6.8,522.8±11.2,512.9±7.9,明显高于假手术组(117.6±7.0)及对照组(116.6±9.0),P<0.01.其中缺氧0和4 h组明显高于对照组(P<0.01);缺氧12 h组的表达明显高于缺氧0、4 h组(P<0.01);缺氧24、48 h组明显高于缺氧12 h组(P<0.01);缺氧0、4 h组间,缺氧24、48 h组间差异无统计学意义(P>0.05). 结论 7日龄新生大鼠HIBD后脑内CYGB表达明显增强,并且随着缺氧缺血发展呈现时相性变化,提示其可能在脑缺氧缺血的适应性调节过程中起重要作用.     

p38MAPK信号传导通路与卵巢癌关系研究进展

丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）是一类丝/苏氨酸蛋白激酶,这个级联反应几乎存在于所有生物细胞内,其亚族主要包括细胞外信号调节激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶/应激激活蛋白激酶（JNK）和p38MAPK。它们主要是作为细胞外信号转入细胞核内的重要信号通路,在细胞生长和细胞增殖过程有着重要的作用。近年研究发现,p38MAPK可介导应激、炎性细胞因子及细菌产物等多种刺激引起细胞反应,也可以通过转录因子磷酸化而改变基因的表达水平,对细胞的功能调节具有重要作用,参与卵巢癌细胞的凋亡、侵袭、转移和耐药等过程,故阐明p38MAPK通路的作用机制,将为卵巢癌的诊治提供新的思路和方法。综述p38MAPK信号通路在卵巢癌发展中的作用、卵巢癌相关p38MAPK耐药机制以及p38MAPK相关新药的研究进展。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人子宫颈癌细胞株HeLa增殖和凋亡的影响

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人宫颈癌细胞株HeLa的作用机制。方法:将对数生长期的HeLa细胞用不同剂量的EGCG(0,10,20,40μmol)处理。细胞培养72h后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞磷酸化-丝裂原活化蛋白激酶(p-p38)、丝裂原活化蛋白激酶(p38)、磷酸化核因子-κB(p-NF-κB)、核因子-κB(NF-κB)、B细胞淋巴因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化半胱胺酸蛋白酶蛋白3(Cleaved-Caspase-3)表达。ELISA和RT-PCR法分别检测细胞上清和细胞内肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-8(IL-8)表达。结果:EGCG可呈剂量依赖性诱导HeLa细胞增殖抑制与凋亡,并可增加Bax和cleavedCaspase3表达,下调p-p38、p-NF-κB、Bcl-2、TNF-α、IL-1β和IL-8表达,而对p38和NF-κB表达无明显影响。结论:EGCG可诱导HeLa细胞增殖抑制和凋亡,其作用机制与抑制p38/NF-κB信号通路介导的炎症相关。     

产妇子宫平滑肌组织中MAPK信号转导通路及CX43表达与产后出血关系的研究

目的:分析宫缩乏力性产后出血产妇离体子宫平滑肌自发性收缩功能和收缩潜能的变化,并探讨子宫平滑肌组织中丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号转导通路活化水平和连接蛋白( CX43)表达变化与宫缩乏力性产后出血的关系.方法:选择2009年11月至2010年12月在福建省妇幼保健院产科择期剖宫产分娩的宫缩乏力性产后出血产妇30例为病例组,另选同期无产后出血产妇30例为对照组.采用等长张力测定方法检测产妇离体子宫下段平滑肌收缩功能和缩宫素诱导的收缩潜能;采用蛋白免疫印迹技术检测产妇子宫下段平滑肌组织中MAPK信号转导通路中的细胞外信号调节激酶( ERK1/2)、c-Jun N端蛋白激酶(JNK1/2)、p38磷酸化蛋白和CX43蛋白水平;采用RT-PCR技术检测产妇子宫下段平滑肌组织中CX43 mRNA表达.结果:①病例组离体子宫平滑肌自发性收缩的收缩频率、收缩活动力均低于对照组(P＜0.05);缩宫素诱导后病例组的离体子宫平滑肌收缩频率、收缩幅度、收缩活动力和收缩潜能均低于对照组(P ＜0.05,P＜0.01).②以子宫平滑肌自发性收缩活动力72.66g·次/h作为诊断点,评估宫缩乏力性产后出血的ROC曲线下面积(AUC)为0.802.③病例组产妇子宫平滑肌组织中p-ERK1/2、p-JNK1/2、p-P38、CX43蛋白的表达量和CX43 mRNA的表达水平均分别低于对照组(P＜0.05).④两组产妇子宫平滑肌组织中p-ERK1/2、p-JNK1/2、p-P38、CX43蛋白表达量以及CX43 mRNA表达水平分别与其离体子宫的自发性收缩活动力呈正相关关系(P＜0.05).⑤两组产妇子宫平滑肌组织中p-ERK1/2、p-JNK1/2、p-P38、CX43蛋白和CX43 mRNA表达量相互两两之间均呈正相关关系(P＜0.05).结论:宫缩乏力性产后出血产妇离体子宫平滑肌收缩功能和收缩潜能明显降低,其子宫平滑肌组织中MAPK信号通路活化水平及CX43表达水平明显降低,且两者密切相关,提示MAPK信号通路活化受阻和CX43表达降低可能是宫缩乏力性产后出血发病的重要因素之一,两者相互调控共同参与该病的发生发展.     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后海马结构突触素的表达及治疗

突触素 (synaptophysine,SYP)作为突触囊泡的一种特异性标志蛋白 ,存在于神经终末的突触前成分内 ,与突触可塑性关系密切。为此 ,本实验以 SYP的免疫组织化学反应的强度为指标 ,对缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)后大鼠海马结构的 SYP分布情况进行了研究 ,以探讨 HIBD对海马突触可塑性的影响以及尼莫通干预治疗的效果。一、材料与方法1.建立 HIBD模型 :选择 7日龄 Wistar大鼠共 4 9只 ,雌雄不拘 ,随机分为三组 :正常对照组 ,缺氧缺血组 ,治疗组 ,分别为 15、2 1、13只。参照 Rice等 [1 ] 方法建立 HIBD模型。HIBD后随机选取动物立即给…     

上推膀胱直肠后再次宫颈环形电切术对保留生育功能的价值

目的:探讨上推膀胱直肠后再次宫颈环形电切术(LEEP)在宫颈疾病治疗中的可行性,评价其对年轻患者保留子宫及生育功能的价值。方法:回顾性分析2010年1月至2014年4月在复旦大学附属妇产科医院就诊,因宫颈LEEP术后切缘阳性或术后随访复发、无法在门诊行常规LEEP而行上推膀胱直肠后再次LEEP的38例患者的临床资料。结果:38例患者均顺利完成了上推膀胱直肠后再次LEEP,术中均未出现膀胱、直肠损伤等并发症。手术时间38±7分钟,术中出血量20±5 ml,住院天数2.7±0.6天;其中1例患者术前病理检查为宫颈高度鳞状上皮内瘤变,术后升级为原位鳞癌合并原位腺癌行全子宫切除术,37例患者(97.4%)成功保留子宫,随访至今1例术后12个月低度鳞状上皮内瘤变行宫颈激光治疗,余均未见宫颈病变复发。12例患者有生育意愿,7例患者已成功妊娠,6例已分娩。结论:上推膀胱直肠后再次LEEP安全可行,可实现未生育妇女及年轻妇女保留子宫及生育能力的意愿。     

Responsiveness of gynecologic tumors to chemotherapeutic agents in the 6-day subrenal capsule assay

Various gynecologic malignancies have been tested in the 6-day subrenal capsule assay, which is an in vivo test of human tumor responsiveness to drug therapy. Fresh surgical explants of ovarian, endometrial, and cervical tumors were implanted as 1-mm³ fragments under the renal capsule of normal mice and tested against a spectrum of clinically active agents. Regardless of the site of origin, human tumors showed variations in growth rate when implanted under the renal capsule that appeared to reflect both the growth potential characteristic of each tumor as well as the heterogeneity of the cell populations comprising each tumor. An average of 60% of tumors showed positive growth and 11% demonstrated no measurable change in size. The response rates of 18 ovarian, 28 endometrial, and 20 cervical carcinomas to clinically active chemotherapeutic agents were determined. A range of responses, in terms of drugs indicated to be active and of the degree of responsiveness to active agents, was obtained with each histologic type. Response rates varied from 6% to tamoxifen in cervical carcinomas to 80% to 5-fluorouracil in ovarian carcinomas. The results of this study support the variability in chemotherapy responsiveness observed clinically with gynecologic tumors and suggest the feasibility of using the subrenal capsule assay as a predictive test.