人心肌肌凝蛋白轻链的分离提纯与鉴定研究

参考采用Schoβler方法并加以改进,分别应用等电点沉淀法、快速蛋白质液相层析(FPLC)及SDS聚丙烯酰胺凝胶制备电泳三种方法分离提纯肌凝蛋白轻链(CMLC),其各具有不同的优缺点,并对CMLC做了鉴定。同时证明在-20℃条件下,冻存时间较长或蛋白浓度较低的CMLC容易降解。     

抗人心肌肌凝蛋白单克隆抗体亲梗死心肌显像的临床应用

抗人心肌肌凝蛋白单克隆抗体亲梗死心肌显像的临床应用武强综述李小鹰审校关键词心肌肌凝蛋白；单克隆抗体；心脏疾病；综述中国图书资料分类法分类号Ｒ５４１随着溶栓治疗和经皮腔内血管成形术（ＰＴＣＡ）在急性心肌梗死治疗中的广泛应用，判断不可逆损伤心肌的方法越来...     

人心肌肌凝蛋白轻链的提纯及其抗体的制备

从人心肌中提纯的肌凝蛋白轻链(myosin-light chain,M-LC),SDS聚丙烯酰胺凝胶电脉呈三条蛋白带。经DEAE-纤维素柱层析出现三个峰。免疫白兔产生的抗血清,琼脂双扩散鉴定有一条沉淀线;亲和层析,用盐酸胍解离下一个抗体蛋白峰。     

梗塞心肌摄取锝标抗心肌肌凝蛋白轻链mAb 99Tcm-AMLCA的影响因素

目的: 探讨注射锝标抗心肌肌凝蛋白轻链单克隆抗体(99Tcm-AMLCA)后不同时间,梗死时间和梗死区域对大鼠梗死心肌摄取99Tcm-AMLCA的影响. 方法: 大鼠静脉注射99Tcm-AMLCA 7.4 MBq,观察不同注射时间(2, 4, 8, 24 h),不同梗死时间(心梗后6, 12 h, 1～14 d)和不同梗死区域(梗死中央、周边的内层心肌和外层心肌)对梗死心肌/正常心肌发射性比的影响. 结果: 注射后2 h梗死心肌开始摄取99Tcm-AMLCA,梗死心肌/正常心肌发射性比是1.67±0.96, 4～8 h摄取逐渐增加,24 h达到高峰,梗死心肌/正常心肌发射性比是4.38±0.80. 心肌梗死后6 h～14 d,梗死心肌均有很强的99Tcm-AMLCA摄取,心梗后5 d摄取最强,梗死心肌/正常心肌发射性比是3.82±0.67;梗死中央区内层心肌的放射性摄取比值是4.52±0.60,外层心肌是3.32±0.58两者具有统计学显著意义(P<0.01). 结论: 急性心肌梗死大鼠梗死心肌特异性地摄取99Tcm-AMLCA迅速持久,不受心梗时间影响,梗死中央区内层心肌摄取最强,为99Tcm-AMLCA亲梗死心肌显像临床应用提供了实验依据.     

心肌肌凝蛋白轻链—1的免疫组化研究

为了研究心肌肌凝蛋白轻链－１（ＣＭＬＣ－１）组织特异性的特点，并对其构型在心肌发育过程中的表达规律以及不同哺乳动物ＣＭＬＣ－１构型的生化规律进行探讨，应用抗人心室肌ＣＭＬＣ－１，单克隆抗体（ＭｃＡＢ）对成人和不同胎龄胎儿的心肌和其它组织，不同种属哺乳动物的心肌进行了免疫组织化学研究。结果发现：成人心室肌，慢性骨骼肌均发生强烈反应，成人心房，胎儿心室肌发生交叉反应，而其它组织加快骨骼肌，平滑肌以及肌     

心肌肌凝蛋白轻链—1与其血清浓度检测的临床意义

心肌肌凝蛋白轻链－１与其血清浓度检测的临床意义武强综述李小鹰审校关键词心肌梗塞；心肌肌凝蛋白；综述中国图书资料分类法分类号Ｒ５４２．２心血管疾病如心肌梗死（ＡＭＩ）等严重威胁人类的健康和生命。人们一直探寻判断心肌细胞损伤灵敏特异的诊断指标。近年来，心...     

心肌肌凝蛋白轻链－1与心功能调节

心肌肌凝蛋白轻链─１与心功能调节武强综述李小鹰审校关键词心脏疾病；心肌肌凝蛋白；心功能；综述中国图书资料分类法分类号Ｒ３６３．２１心功能调节的分子生物学是通过改变基因表达的调节机制，引起心肌蛋白质量和数量的改变，这是心肌细胞对心脏构型的不均一性和心肌...     

心肌肌凝蛋白重链和心力衰竭关系的研究进展

对心肌肌凝蛋白的理化特性以及与心力衰竭发生有关的几种心血管疾病的关系进行综述并阐明心肌肌凝蛋白参与心力衰竭的发生,可作为预测早期心力衰竭发生的指标。     

分泌抗心脏肌凝蛋白及其轻链单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及初步鉴定

心脏肌凝蛋白(Cardiac myosin,CM)及其轻链(CM—LC)是心肌特有的收缩蛋白质,其化学结构和免疫学性质均与其它组织来源者不同。当急性心肌梗塞(AMI)造成心肌细胞缺血坏死时,血清CM—LC水平升高。故可用于临床诊断AMI。这一诊断指标的特异性、敏感性、与梗塞灶大小     

抗人IgG单克隆抗体制备和鉴定

以人ＩｇＧ为抗原，采用杂交瘤技术获得６株不同性质的抗人ＩｇＧ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）（ＡＩ２、ＡＩ３、ＡＩ４、ＡＩ５、ＡＩ６、和ＡＩ）。ＡＩ２ＭｃＡｂ具有抗ＩｇＧ１亚类的特异性，可识别ＩｇＧγ链和Ｆ（ａｂ＇）２片段，作用位点可能在人ＩｇＧ１铰链区。ＡＩ３ＡＩ、ＭｃＡｂ分别为ＩｇＧ３、ＩｇＧ４亚类限制性ＭｃＡｂ，可能作用于ＩｇＧＣＨ１区。ＡＩ４ＭｃＡｂ可识别χ和λ型ＩｇＧ四个亚类以及Ｆ（ａｂ＇）２片段，不识别游离χ、λ链。ＡＩ５ＭｃＡｂ特异地抗ＩｇＧ１结合型χ，作用于ＩｇＧ独特型位点。ＡＩ６ＭｃＡｂ只抗λ型ＩｇＧ，可能作用于ＩｇＧＣＬ区。６种抗人ＩｇＧＭｃＡｂ除了ＡＩ５外，均能用于人血清中ＩｇＧ的检测。     

PREPARATION AND CHARACTERIZATION OF MONOCLONAL ANTIBODY AGAINST HUMAN TELOME RASE REVERSE TRANSCRIPTASE

INTRODUCTIONTelomerasemaycontributetocellreplicationbymaintainingthelengthofcellulartelomeres.Normaltelomeraseactivityisrequiredtomaintainprolifera-tionofgermlineandstemcells,lackingofwhichisimportanttothesenescenceandagingofmostsomat-iccells.Reactivationoftelomeraseisessentialforcelltransformation.Telomeraseactivityhasbeende-tectedinmosthumancancers,whileinhibitionoftelomeraseactivityincancercellsleadstocancersuppression(1,2).Consequentlytelomerasemaybeanewdiagnosticmarkeroftumorsandtarg…     

猪心肌球蛋白及其轻,重链亚基的纯化和鉴定

采用一种改进的方法，从１００ｇ猪心室肌中提取心肌肌球蛋白３７０ｍｇ，并进一步分离和纯化其亚基成分，分别得到肌球蛋白轻链２４ｍｇ和重链２１０ｍｇ，核酸含量＜１％，不含有肌动蛋白、原肌球蛋白、肌钙蛋白及其它杂蛋白；ＳＤＳＰＡＧＥ显示，猪心肌球蛋白重链为２００～２２０ＫＤ一条带，肌球蛋白轻链则为２７ｋｄ、２１．４ｋｄ、１９ｋｄ三条带；纯化猪心肌球蛋白的Ｃａ２＋激活ＡＴＰ酶活性为０．２４μｍｏｌＰｉ／（ｍｇ·ｍｉｎ），但其分离后的亚基则无此活性。     

抗人Hb单克隆抗体的制备与鉴定

用超声波快速乳化人Ｈｂ，作为抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞经离心ＰＥＧ法融合，微波ＥＬＩＳＡ筛选阳性克隆，获得三株分泌针对人Ｈｂ不同抗原位点的单克隆抗体杂交瘤细胞系。分别命名为Ｈｂ２６４、Ｈｂ２１０和Ｈｂ２３８。其中Ｈｂ２６４能特异识别人Ｈｂ的β链而不与动物Ｈｂ交叉反应；解离常数Ｋｂ为１．６×１０￣（－８）ｍｏｌ／Ｌ，ＩｇＧ＿（２ａ）。Ｈｂ２１０能结合人Ｈｂ的α链，可被猪Ｈｂ抑制，但亲合力低１００倍；Ｋｄ（人Ｈｂ）为２．８×１０￣（－８）ｍｏｌ／Ｌ；Ｋｄ（猪Ｈｂ）为３．０×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ；ＩｇＧ＿（２ｂ）。Ｈｂ２３８是两个脾细胞与一个Ｓｐ２／０细胞融合而成的三体瘤（ｔｒｉｏｍａ）；染色体１３２条；Ｈｂ２３８单克隆抗体可同人Ｈｂ的α和β链结合，Ｋｄ（人Ｈｂ）为８．９×１０￣（－５）ｍｏｌ／Ｌ；ＩｇＧ＿（２ａ）；经分析鉴定，Ｈｂ２３８是针对人Ｈｂα和β链的双特异性抗体。本方法对免疫学隐血检测、法医学鉴定和双特异抗体的研制有一定意义。     

GENERATION AND PARTIAL CHARACTERIZATION OF MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST SOLUBILIZED MEMBRANE FRACTION OF HUMAN SPERMATOZOA

Human sperm membrane antigens extracted by deoxycholate (DOC) were used to immunizeBALB/c mice.Hybrid cell lines secreting sperm-specific monoclonal antibodies were generatedby cell fusion in a semi-solid medium and screened by indirect immunofluorescent assay usinglive and methanol-fixed sperm.Out of 850 hybrid clones from cell fusion,28 were shownto secrete sperm-specific antibodies which reacted with the acrosome,equatorial segment,whole surface plasma membrane or tail of spermatozoa.Finally,seven hybrid cell lineswere established and shown to secrete monoclonal antibodies which had no cross-reactivitywith arty human tissues other than testis and sperm.The majority were also shown toinhibit fertilization of mouse oocytes in vitro and human sperm penetration of zona-freehamster ova.Western blot analysis revealed that some of these antibodies reacted withsperm membrane antigens of distinct molecular size.     

人血小板肌球蛋白轻链激酶的研究

报道了人血小板匀浆上清液肌球蛋白轻链酶微量快速测定方法，对该酶的性质进行了初步研究，并建立了较为合适的测定酶活性的体系。该酶活性依赖于Ｃａ＾２＋和ＣａＭ，其半激活浓度分别为０．３５ｍｍｏｌ／Ｌ和１０μｍｏｌ／Ｌ，ＴＦＰ能抑制该酶活性，其半抑制浓度为１５０μｍｏｌ／Ｌ。     

抗黑色素瘤单克隆抗体的制备

本文用鼠骨髓细胞系NS_1与用黑色素瘤细胞系Cal_1,Cal_(32),Cal_(52),免疫的鼠脾细胞融合制备抗黑色素瘤单克隆抗体。通过使用淋巴细胞分离液MSL和在脾被膜上扎孔,用注射器注入GKN溶液使脾细胞冲出的方法制取脾细胞,使杂交瘤细胞融合率明显提高,并获两株分泌抗黑色素瘤单克隆抗体IgG_1的SM_(167)和SM_(230)细胞株。     

抗肺癌单克隆抗体的研制

采用新鲜肺癌组织制成的细胞悬液及肺腺癌细胞株做为免疫原,免疫Balb/c小鼠。取脾细胞与经活体增殖的无支原体污染的高活力SP2/O骨髓瘤细胞融合,联合应用酶联免疫吸附和多组织切片免疫组化染色法进行筛选,得到两株分泌对肺癌具高特异性的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。抗体与被检测的大多数人体正常组织无交叉反应,可初步用于肺癌病理鉴别诊断。