ANK、ENPPl及TGF-β1基因在大鼠终板软骨细胞传代培养中的表达变化及意义

目的：通过大鼠终板软骨细胞体外自然传代的退变模型,探讨传代过程中钙化相关基因ANK、ENPPl及内源性生长因子TGF—βl表达的变化及其意义。方法：取大鼠腰椎终板软骨细胞,采用酶消化法及自然传代法分离培养,选取P1、P5及P7代,均在体外培养6d,分别用HE染色、甲苯胺蓝染色及Real—timeRT—PCR法检测软骨标志性基因Ⅱ型胶原、蛋白多糖、转录因子Sox9变化,对终板软骨细胞表型进行鉴定。用Real·timeRT—PCR及Westernblot检测钙化相关基因ANK、ENPPl的变化,Re．al—timeRT—PCR及ELISA检测生长因子TGF-βl的变化。结果：随着细胞传至P7代,细胞形态上有梭形变趋势。茜素红染色无明显变化。软骨标志性基因Ⅱ型胶原、蛋白多糖及转录因子Sox9表达均明显下调（P〈0．05）,钙化相关基因ANK、ENPPl表达均明显下调（P〈0．05）,内源性生长因子TGF-B1表达明显下调（P〈0．05）。结论：终板软骨细胞传至P7代,终板软骨细胞发生退变,终板软骨细胞内未见钙盐沉积,钙化相关基因ANK、ENPPl下调可能由内源性TGF-βl下调引起,提示调节内源性TGF-βl及钙化相关基因ANK、ENPPl在终板软骨中的表达有可能会阻止椎间盘的退变。     

AMP活化蛋白激酶在终板软骨细胞体外传代培养中的表达及意义

BACKGROUND: Endplate cartilage degeneration initiates intervertebral disc degeneration. AMP-activated protein kinase (AMPK) regulates the formation and degradation of cartilage. OBJECTIVE: To explore the role of AMPK in an in vitro natural degeneration model of chondrocytes derived from endplate of rat intervertebral discs. METHODS: Morphology of in vitro subcultured endplate chondrocytes of rat intervertebral discs at passages 0, 2, and 5 were observed under an inverted microscope following cytoskeleton staining. Chondrocyte phenotype, proliferation, and the cartilage marker genes (type II collagen, proteoglycan, SOX-9, matrix metalloproteinase-3 and -13), and AMPK phosphorylation were determined by toluidine blue staining, MTT assay, real-time PCR analysis, and western blot assay, respectively. RESULTS AND CONCLUSION: The altered morphology, decreased proliferation ability, and phenotype loss were observed in chondrocytes with increased passage number. Gene expression of type II collagen, proteoglycan, SOX-9 was significantly decreased; while gene expression of matrix metalloproteinase-3 and -13 was significantly increased in endplate chondrocytes at passage 5 compared with those at passages 0 and 2. AMPK phosphorylation in endplate chondrocytes at passage 5 was significantly decreased. These findings indicate that AMPK phosphorylation is involved in in vitro natural degeneration of chondrocytes derived from the endplate of rat intervertebral discs, and the degeneration of endplate chondrocytes and intervertebral discs can be inhibited through the regulation of AMPK activity. 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

AP-1和TGF-β1在低碘大鼠肾脏组织中的表达及意义

目的:研究低碘培养对大鼠甲状腺功能的影响及激活蛋白-1(activator protein-1, AP-1)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)在肾组织中的表达差异, 探讨低碘地区肾脏损伤的可能发病机制.方法:给予Wistar大鼠低碘饲料, 通过饮用不同碘浓度的饮水来分组, 测定甲状腺功能状态.利用RT-PCR方法分析肾脏组织中AP-1亚单位c-Jun的激活变化情况.以免疫组化方法检测TGF-β1在肾组织中的表达差异.结果:重度低碘组(DLIG)与轻度低碘组(GLIG)、正常对照组(CL)比较FT3、 FT4均明显下降(P＜0.01).GLIG与CL相比FT3明显下降(P＜0.05), FT4稍有降低, 但差异无统计学意义(P＞0.05).低碘大鼠肾脏组织中c-Jun mRNA及TGF-β1表达均增加, 与低碘程度有依赖关系.结论:低碘摄入可引起甲状腺激素分泌紊乱, 甚至导致甲状腺功能减退, 与低碘程度有剂量依赖关系.低碘通过某种机制激活了AP-1, 进而活化了TGF-β1等细胞因子, 产生一系列的连锁反应, 引起肾脏损伤.     

酸敏感离子通道1a在大鼠椎体终板软骨细胞的表达及其意义

目的 探讨大鼠椎体终板软骨细胞酸敏感离子通道 1a (ASIC1a)的表达及其意义。方法 选用成年SD大鼠10只。分离、培养椎体终板软骨细胞以及传代培养, 倒置显微镜下观察细胞形态, 甲苯胺蓝染色对终板软骨细胞进行鉴定。利用PT-PCR和Western blotting检测ASIC1a在大鼠椎体终板软骨细胞mRNA及其蛋白的表达,免疫荧光双标观察ASIC1a在终板软骨细胞的细胞定位。结果 形态学及甲苯胺蓝染色阳性显示,培养的细胞为软骨细胞,PT-PCR和Western blotting显示,大鼠椎体终板软骨细胞存在ASIC1a mRNA及其蛋白的表达,免疫荧光显示,ASIC1a在终板软骨细胞膜有阳性表达。结论 ASIC1a在大鼠椎体终板软骨细胞的表达,对认识ASIC1a功能及寻找新抗椎间盘退变靶点有重要意义。     

Smad4和TGF-β1在膀胱癌的表达及意义

目的观察Smad4和转化生长因子(TGF)-β1在膀胱癌组织内的表达情况,分析Smad4和TGF-β1的表达与膀胱癌进展及预后之间的关系。方法选取临床资料完整的膀胱癌病例48例,其中,淋巴结转移组20例,无淋巴结转移组28例。免疫组化法检测膀胱癌组织内Smad4和TGF-β1的表达。取膀胱癌术后组织16例,Western blot法检测Smad4和TGF-β1在膀胱癌组织内的表达情况。结果 Smad4表达于肿瘤细胞浆和胞核,在有淋巴结转移膀胱癌组织内的表达量明显低于其在无淋巴结转移组的表达量,Smad4表达与膀胱癌临床分期、分级、淋巴结转移以及膀胱癌复发密切相关(0.05)。TGF-β1表达于肿瘤细胞的胞浆内,在有淋巴结转移膀胱癌组织中的表达量高于其在无淋巴结转移膀胱癌组织内的表达量,TGF-β1的表达与膀胱癌临床分期、分级及淋巴结转移之间具有相关性(0.05)。Smad4和TGF-β1在膀胱癌组织内的表达呈显著负相关(r=-0.324,=0.025)。Kaplan-Meier分析表明Smad4阳性患者的五年总体生存率高于Smad4表达阴性患者的生存率,而TGF-β1的表达与膀胱癌患者的预后无关。结论 Smad4和TGF-β1在膀胱癌组织的表达呈负相关,与膀胱癌临床分期、分级及淋巴结转移相关。     

转化生长因子β1及血管内皮细胞因子在颈椎病椎体软骨终板中的表达变化

目的：研究TGF-β1、VEGF在终板软骨细胞中的表达，探讨椎间盘退变的发病机理。方法：应用免疫组化SP染色法检测TGF-β1、VEGF在15例颈椎病及13例正常椎体软骨终板中的表达，并对其阳性表达结果进行比较。结果：TGF-β1在正常终板软骨细胞表达的阳性细胞数为39．0％±1．96％，与颈椎病终板软骨细胞表达的阳性细胞数28．2％±2．18％相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。VEGF在正常的终板软骨细胞表达的阳性细胞数为22．2％±2．13％，与颈椎病终板软骨细胞表达阳性细胞数14．3％±1．68％相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：TGF-β1和VEGF共同参与了椎间盘退变的形成和发展，在椎间盘退变的发病中可能起重要的作用。调节细胞因子（TGF-β1、VEGF）在终板软骨细胞中的表达，可能为椎间盘退变的治疗提供一种新的途径。     

重组人TGF-β1对TGF-β1基因启动活性的影响

目的：探讨TGF-β1对人TGF-β1基因自身启动子活性的影响。方法：以人全血基因组DNA为模板，PER扩增获得TGF-β1基因转录起始位点上游5′端-1328～ 812bp和 227～ 812bp的片段，以此作为启动子与含氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因而不含启动子的pCAT-enhancer质粒构建成重组质粒，并将其转染至大鼠星状细胞株nFSC中，细胞在DMEM培养基中进行培养，用不同浓度的TGF-β1进行干涉，测定并比较细胞的CAT表达水平。结果：不同浓度的TGF-β1对大鼠的肝脏星状细胞的增殖具有抑制作用，而且这种抑制作用在实验用的浓度范围内具有剂量依赖关系；浓度为2．5ng/ml TGF-β1可以使转染phTGF0．585、phTGF1．120、phTGF1．423、phTGF1．680、phTGF2．140质粒的大鼠肝星状细胞的CAT活性分别增加2～5倍。结论：TGF-β1在大鼠nFSC细胞中对TGF-β1启动子活性具有自身促进作用，为进一步研究TGF-β1的调节机制提供了依据。     

β-连环素在人颈椎终板软骨中的表达及其意义

目的:观察β-连环素在人颈椎椎体终板软骨中的表达变化,探讨其与终板软骨退变的关系及意义.方法:选取2011年9月至2012年3月间住院接受颈前路椎体次全切手术的颈椎终板软骨标本,分为退变组(28例)和对照组(10例),运用RT-PCR和western-blot法检测终板软骨组织中β-连环素、蛋白多糖、Ⅱ型胶原及Sox9基因的表达.结果:退变组和对照组均可检测到β-连环素的表达,而退变组β-连环素表达量明显高于对照组(P＜0.01),蛋白多糖、Ⅱ型胶原及Sox9基因表达量明显低于对照组(P＜0.01).结论:人退变颈椎终板软骨组织内β-连环素表达明显升高,提示其与椎体终板软骨退变存在重要关系.     

TGF-β1、PDGF、CTGF在矽肺患者血清中的表达水平及意义

矽肺是长期工作在较高浓度游离二氧化硅粉尘的环境中,吸入二氧化硅达到一定量后而引起的以肺纤维化为主的疾病,对人体危害严重,而且尚无有效的治疗手段。已有研究表明,一些细胞因子及其形成的网络系统在肺纤维化的发生、发展过程中起着重要作用,其中转化生长因子β1（TGF-β1）、血小板源性生长因子（PDGF）和结缔组织生长因子（CTGF）等对调控肺成纤维细胞的分裂、增殖及胶原蛋白合成与降解起着十分重要的作用。但关于这三种因子的研究多是体外研究,虽然离体实验一定程度可证明这些细胞因子存在相互作用网络关系,但不一定符合体内情况,     

子宫内膜异位症TGF-β_1及其基因的表达及意义

目的研究子宫内膜异位症中转化生长因子β1（TGF-β1）及其基因表达,探讨TGF-β1在子宫内膜异位症中的作用机制。方法 54例子宫内膜异位症异位内膜、在位内膜,50例对照组正常子宫内膜中,采用免疫组化方法检测TGF-β1的表达,SYBR Green实时定量聚合酶链反应（RQ-PCR）检测TGF-β1 mRNA的表达量。结果 TGF-β1在子宫内膜异位症异位内膜组中的蛋白表达显著高于在位内膜组及对照组（P〈0.05、P〈0.05）;TGF-β1在子宫内膜异位症在位内膜组中的表达与对照组中的表达无显著性差异（P〉0.05）;TGF-β1mRNA在子宫内膜异位症异位内膜中的表达量显著高于在位内膜组和对照组（P〈0.05、P〈0.05）,TGF-β1mRNA在位内膜组的表达量与对照组中的表达量无显著性差异（P〉0.05）。结论 TGF-β1可能参与子宫内膜异位症的发病机制,影响其发生发展。     

TGF-β1、PDGFR-β在大鼠酒精性脂肪肝发病中的作用

细胞因子是肝脏众多细胞之间信息传递的介质,其在一些肝损伤乃至肝纤维化中可能发挥了重要作用。本研究检测转化生长因子-β1(transform growth factor-β1,TGF-β1)和血小板衍生性生长因子受体-β(p latelet-derived growth factor re-ceptor-,βPDGFR-β)在酒精性肝病及调节脂肪药物干预后的表达变化,以探讨细胞因子在大鼠酒精性肝病中的作用。1材料与方法1·1材料:健康雄性W istar大鼠100只,购自山东大学实验动物中心。实验分组及酒精性脂肪肝模型的建立参照阎明等[1]的造模方法。正常对照组大鼠20只,制备成功的酒精性脂肪肝大鼠60只…     

胃癌组织中TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3和CDC25蛋白的表达及其临床意义

目的 检测TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3及CDC25蛋白在胃癌组织中的表达并探讨它们在胃癌组织中的发生、发展的意义.方法 利用免疫组织化学SP法检测110例胃癌、21例高级别上皮内瘤变、17例低级别上皮内瘤变、54例肠上皮化生、28例慢性萎缩性胃炎和57例正常胃黏膜组织中TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3和CDC25蛋白的表达.结果 TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3和CDC25在胃癌组织中的表达均高于正常胃黏膜组织.TGF-β1在胃癌组织中的表达高于上皮内瘤变、肠上皮化生和慢性萎缩性胃炎组织;Smad2/3在胃癌组织中的表达高于慢性萎缩性胃炎组织;CDC25在胃癌组织中的表达高于低级别上皮内瘤变组织,且在胃癌淋巴结转移组中的表达高于未转移组.TGF-β1与TGF-βRⅡ、Smad2/3和CDC25呈正相关,Smad2/3与CDC25也呈正相关.结论 TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3和CDC25的表达是引起胃癌发生、发展的重要因素,可作为胃癌早期诊断的辅助指标.     

子痫前期患者胎盘及血浆uPA、TGF-β1含量变化及意义

目的探讨子痫前期患者胎盘及血浆uPA和TGF-β1含量的变化及其在子痫前期发病中的意义。方法采用ELISA法测定57例子痫前期患者（轻度24例,重度33例）和30例正常晚孕妇女（对照组）胎盘及血浆uPA和TGF-β1含量。结果 1.对照组胎盘uPA含量为（32.62±2.85）ng/g,子痫前期组为（11.42±4.67）ng/g,两组差异有极显著性（P〈0.001）;重度组明显低于轻度组,差异有极显著性（P〈0.001）;对照组胎盘TGF-β1含量为（0.83±0.21）ng/g,子痫前期组为（1.12±0.37）ng/g,两组差异有显著性（P〈0.05）;轻、重度组间差异无显著性（P〉0.05）。2.对照组血浆uPA含量为（649.47±41.12）pg/ml,子痫前期组为（466.61±34.68）pg/ml,两组差异有显著性（P〈0.01）;轻、重度组间差异无显著性（P〉0.05）。对照组血浆TGF-β1含量为（9.617±4.19）ng/ml,子痫前期组为（13.30±4.57）ng/ml,两组差异有显著性（P〈0.05）;轻、重度组间差异无显著性（P〉0.05）。3.子痫前期患者胎盘及血浆中二者含量呈负相关（r=-0.652,P〈0.001,r=-0.491,P〈0.01）。结论子痫前期患者胎盘及血浆uPA含量异常下降、TGF-β1含量异常升高与其发病及严重程度有关。     

TGF-β1在卵巢癌患者血浆和肿瘤组织中的表达及临床意义

探讨TGF-β1在卵巢癌患者血浆和肿瘤组织中的表达及临床意义。采用ELISA方法定量检测79例卵巢癌、31例卵巢良性肿瘤和24例健康对照者的血浆TGF-β1浓度,79例卵巢癌患者中有31例收集到术后血浆,ELISA法检测TGF-β1在卵巢癌患者术前术后表达水平的差异;免疫组化法定性检测41例卵巢癌组织、20例卵巢交界性肿瘤组织和20例卵巢良性肿瘤组织中TGF-β1的表达情况,分析TGF-β1表达水平与临床病理指标间的关系。结果显示,与卵巢良性肿瘤及健康对照组相比,卵巢癌患者血浆中TGF-β1表达水平明显增高(P0.01);III/IV期卵巢癌患者血浆TGF-β1的表达水平明显高于I/II期患者(P0.05);与术前相比,术后卵巢癌患者血浆TGF-β1表达水平下降(P0.01);卵巢癌患者肿瘤组织中TGF-β1表达水平明显高于卵巢交界肿瘤组织及卵巢良性肿瘤组织,差异有统计学意义(P0.001),且肿瘤组织TGF-β1的表达水平与肿瘤临床分期及淋巴结转移有关(P0.05);而TGF-β1在卵巢交界肿瘤组织及卵巢良性肿瘤组织表达水平无差异(P0.05)。综上所述,TGF-β1在卵巢癌患者血浆及肿瘤组织中均呈高表达,且与肿瘤临床分期及淋巴结转移密切相关,提示卵巢癌患者机体及癌灶局部呈现免疫抑制状态。TGF-β1可为卵巢癌的临床诊断、病情监测提供重要的参考价值。     

TGF-β1在宫颈癌中的研究进展

转化生长因子β1在宫颈癌发生及发展中表现出双重作用。TGF-β1既可抑制宫颈癌生长又能通过多种机制促进其侵袭和转移。本文将对其在宫颈癌中的可能致病机制及相关研究进行综述。     

妊高征胎盘滋养细胞中TGF-β1mRNA的表达及意义

目的检测滋养细胞中TGF-β1mRNA表达水平,评估TGF-β1 在妊高征中的作用.方法用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测正常妊娠胎盘滋养细胞7例、重度妊高征胎盘滋养细胞7例中TGF-β1mRNA表达水平,并通过紫外凝胶图像分析进行定量检测.结果与正常滋养细胞比较,妊高征滋养细胞TGF-β1mRNA的表达强度显著增强(t＝-4.663,P＜0.05).结论妊高征胎盘滋养细胞表达TGF-β1增多可能抑制其侵润能力.     

靶向大鼠TGF-β1基因shRN A真核表达载体的构建及鉴定

构建并鉴定靶向大鼠TGF-β1基因的短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）真核表达载体,为探索肝纤维化的基因治疗提供有力工具。根据大鼠TGF-β1基因的mRNA序列设计并合成2条编码shR-NA的特异性寡核苷酸片段,另选通用阴性对照序列HK,将上述片段退火后分别克隆入线性化质粒载体PGenesil-1．1中,构建出含靶基因片段的shRNA真核表达载体PGenesil-TGF-β1-A、PGenesil-TGF-β1-B及PGenesil-HK,行酶切鉴定及测序分析,并采用脂质体介导法体外转染Hela细胞,荧光显微镜观察转染结果。经酶切和测序鉴定证实,构建的shRNA成功插入到载体,重组质粒的插入序列与设计的靶基因片段完全一致,3种重组质粒均能转染入Hela细胞表达绿色荧光。成功构建出靶向大鼠TGF-β1基因的shRNA真核表达载体,为后续研究抗肝纤维化的基因药物奠定了实验基础。     

宁夏回、汉族群体TGF-β1第1外显子区基因多态性分析

目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)基因第1外显子区SNP+ 869 (T/C)和SNP+ 915 (G/C)多态性在宁夏回族、汉族人群中的分布特征.方法 用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对210例回族和308例汉族人群转化生长因子β1第1外显子区(+ 869位点、+915位点)两个多态性位点进行检测.结果 宁夏回族群体TGF-β1基因第1外显子区两个多态性位点各基因型频率及等位基因频率分别为:+869(TT:25.24％;CT:52.38％; CC:22.38％;T:51.43％;C:48.57％);+915(GG:98.10％; GC:1.90％; CC:0％;G:99.04％;C:0.96％);宁夏汉族群体TGF-β1基因第1外显子区两个多态性位点各基因型频率及等位基因频率分别为:+869(TT:30.52％;CT:48.05％;CC:21.43％;T:54.55％;C:45.45％);+915(GG:99.03％;GC:0.97％;CC:0％;G:99.51％;C:0.49％),两组间无差异.按性别分组,亦无差异.结论 TGF-β1基因第1外显子区+869、+915两个多态性位点在宁夏回、汉族人群及不同性别间无差异.     

膀胱尿路上皮癌中LRG1和TGF-β1的表达及临床病理意义

目的 探讨富亮氨酸α2糖蛋白1（leucine-rich alpha-2-glycoprotein 1, LRG1）及转化生长因子beta 1（transforming growth factor-beta 1, TGF-β1）在膀胱尿路上皮癌（bladder urothelial carcinoma, BUC）组织中的表达及意义。方法 采用免疫组化SP法检测LRG1、TGF-β1及Ki-67在64例BUC组织及25例癌旁组织中的表达,分析LRG1、TGF-β1在各组间表达的差异及相关性。结果 LRG1在BUC组织中强阳性27例（42.19%）,癌旁组织中强阳性仅2例（8.00%）,两组相比差异有统计学意义（P<0.05）;TGF-β1在BUC组织中阳性49例（76.56%）,在癌旁组织中阳性10例（40.00%）,差异有统计学意义（P<0.05）;相关性分析显示,LRG1与TGF-β1表达呈正相关（r²=0.658 2,P<0.05）;LRG1、TGF-β1表达均与BUC病理学分级、浸润深度及Ki-67增殖指数相关（P<0.05）。结论 ...     

整合素β3（Integrinβ3）和转化生长因子-β1（TGF-β1）在妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中的表达及意义

目的研究转化生长因子-β1（TGF-β1）和整合素β3（Integrinβ3）在妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中的表达，并探讨其与妊娠期高血压疾病发病的关系。方法采用免疫组织化学染色（SP法）分别检测Integrinβ3、TGF-β1在12例妊娠期高血压疾病患者及13例正常妊娠者胎盘纽织中的表达。结果妊娠期高血压疾病纽胎盘Integrinβ3表达明显高于正常妊娠组（P〈0．01）。妊娠期高血压疾病组胎盘TGF-β1表达亦明显高于正常妊娠组（P〈0．01）。结论与正常妊娠组比较妊娠期期高血压疾病患者胎盘组织integrinβ3、TGF-β1的表达明均显增高。表明integrinβ3、TGF-β1可能参与妊娠期高血压疾病的发生和发展。