吗啡对PC12细胞嘌呤核苷酸代谢相关酶基因表达的影响

目的：研究吗啡对神经细胞模型PC12嘌呤核苷酸补救合成酶与分解代谢关键酶基因表达的影响。方法：采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测暴露于吗啡不同时间的PC12细胞次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）、腺苷激酶（AK）和腺苷脱氨酶（AD A）mRNA的表达水平。结果：与相应时段对照组相比，PC12细胞暴露于吗啡12及24 h时，HGPRT mRNA水平均明显增高(P<0.05)，作用48 h时HGPRT mRNA水平显著降低(P<0.05)，72 h后HGPRT mRNA水平再次升高(P<0.05)；吗啡处理的PC12细胞于12和24 h时，AK mRNA水平均明显降低(P<0.05)，作用48 h时AK mRNA水平升高(P<0.05)，72 h后AK mRNA水平恢复正常；ADA mRNA水平均表现为轻度降低，12 h差异有显著性(P<0.05)。结论：吗啡影响神经细胞嘌呤核 苷酸代谢，使细胞内腺苷酸及腺苷水平增高，这可能是吗啡依赖和耐受形成的机理之一 。     

嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠嘌呤核苷酸分解代谢的影响

目的：探讨外源性补偿嘌呤核苷酸对海洛因依赖大鼠嘌呤核苷酸分解代谢的影响,阐明嘌呤核苷酸补偿治疗海洛因依赖效应机制。方法：将50只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、海洛因组、海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组。检测各组血尿酸(UA)、尿素氮(BUN)和肌酐(Cre)含量,以及血浆和大脑皮质腺苷脱氨酶(ADA)和黄嘌呤氧化酶（XO）活性。结果：海洛因组血浆中UA含量及ADA、XO的活性均比对照组明显升高(P<0.05),而海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组血浆UA含量及ADA、XO的活性与海洛因组相比明显降低(P<0.05)。各组间BUN和Cre含量差异无显著性(P>0.05)。海洛因组大脑皮质中ADA、XO的活性均比对照组明显升高(P<0.05),而海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组大脑皮质ADA、XO的活性与海洛因组相比明显降低(P<0.05)。结论：海洛因可促进大鼠整体水平上嘌呤核苷酸的分解代谢,而补偿嘌呤核苷酸可以抑制或拮抗海洛因的上述作用。     

酒精依赖对大鼠机体组织嘌呤核苷酸含量和血尿酸的影响

目的：探讨酒精依赖对大鼠机体组织嘌呤核苷酸含量和血尿酸的影响。方法将40只大鼠随机分为两组：对照组10只、酒精依赖组30只,对照组饮用自来水,酒精依赖组饮用含6％乙醇的水溶液,分别于30、60、90 d处死,每时间点处死10只,分别为30、60、90 d组。应用全自动生化分析仪测定各组大鼠血浆中尿酸含量,应用HPLC测定脑、脾、肝脏、小肠组织标本中GMP、AMP、GTP、ATP含量。结果各酒精依赖组大鼠血浆尿酸水平均升高,其中30 d组与对照组差异无统计学意义（ P＞0.05）,60 d和90 d组尿酸水平升高明显（ P＜0.05）。对于脑中GMP、AMP、GTP,酒精依赖组（30、60 d组）与对照组无明显差别,90 d组明显低于对照组（P＜0.05）, ATP在各组中变化不大。对于脾中核苷酸,酒精依赖组（30、60、90 d）与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）,但GMP、AMP、GTP均有降低趋势。对于肝脏、小肠中GMP、AMP、GTP、ATP,酒精依赖组（30、60、90 d）均低于对照组（ P＜0.05）。结论酒精依赖可以导致机体组织内嘌呤核苷酸水平降低,其中对肝脏和小肠的影响较大,酒精长时间作用会导致脑组织内嘌呤核苷酸降低。     

吗啡对肠道嘌呤核苷酸分解代谢的影响

目的：研究吗啡依赖及戒断状态下嘌呤核苷酸分解代谢的变化及作用机制。方法：剂量递增腹腔注射盐酸吗啡,建立吗啡依赖及戒断大鼠模型。试剂盒检测血浆尿酸含量、血浆及小肠组织黄嘌呤氧化酶（XO）的活性。提取小肠组织总RNA,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测小肠组织XO mRNA的水平,以β-actin mRNA为内标。结果：血浆尿酸水平显示,7 d吗啡用药组明显高于对照组（P<0.05）;血浆XO酶学结果显示,7 d吗啡用药组XO明显高于对照组（P<0.05）,自然戒断组与纳洛酮对照组也明显高于对照组（P<0.01）;小肠组织XO酶学结果可见, 7 d吗啡用药组与纳洛酮戒断组XO明显高于对照组（P<0.05）;小肠组织XO的mRNA水平可见,7 d吗啡用药组、自然戒断组和纳洛酮戒断组XO mRNA水平明显高于对照组。结论 ：吗啡促进嘌呤核苷酸分解代谢;吗啡促进大鼠小肠嘌呤核苷酸分解代谢关键酶XO的活性,纳洛酮不能阻断该作用。提示吗啡对小肠XO的作用是通过非μ受体途径。     

吗啡对C6胶质瘤细胞嘌吟核苷酸代谢相关酶基因表达的影响

目的：研究吗啡对C6胶质瘤细胞嘌呤核苷酸合成代谢与分解代谢的影响。方法：吗啡（10μg/ml培养基）作用于C6胶质瘤细胞6h、12h、24h、48h、72h;纳络酮（1μmol/L）作用于C6胶质瘤细胞1h后,加吗啡（10μg/ml）作用24h。提取细胞总RNA,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）及腺苷激酶（AK）的基因转录产物;采用反转录-聚合酶链反应及Southern(RT-PCR-Southern)杂交方法检测黄嘌呤脱氧酶（XD）/黄嘌呤氧化酶（XO）基因转录产物。结果：C6胶质瘤细胞暴露于吗啡μ,12,24,48,HGPRT基因表达均明显降低;而C6胶质细胞AK基因表达在暴露于吗啡24h明显降低;HGPRT与AK基因表达又分别于吗啡作用胶质瘤细胞72h和48h回升;纳络酮不能阻断吗啡对HGPRT与AK基因表达降低的作用。吗啡作用于C6胶质瘤细胞与相应时段对照组相比,XD/XO基因转录产物均明显增多;纳络酮能够阻断吗啡对XD/XO基因表达增强的作用。结论：吗啡通过其他非μ受体途径介导对C6胶质瘤细胞嘌呤核苷酸补救合成关键酶HGPRT与AK基因表达降低的作用;吗啡通过μ受体途径介导对C6胶质瘤细胞嘌呤核苷酸分解代谢关键酶XD/XO基因表达增强的作用。     

嘌呤核苷酸对海洛因依赖及戒断大鼠睾丸和附睾组织中腺苷脱氨酶活性及基因表达的影响

目的：研究嘌呤核苷酸对海洛因依赖及戒断大鼠睾丸、附睾腺苷脱氨酶(ADA)活性及基因表达的影响,阐明海洛因对男性生殖系统嘌呤核苷酸代谢的损害及嘌呤核苷酸补偿的对抗作用。方法：建立海洛因依赖及戒断大鼠模型,80只建模成功的雄性Wistar大鼠随机分为对照组（生理盐水）、海洛因组、海洛因戒断3 d组、海洛因戒断9 d组、核苷酸组（不给海洛因）、海洛因+核苷酸组（同时给药）、核苷酸3 d组及核苷酸9 d组（每组10只）,检测睾丸和附睾组织内ADA活性及基因表达的情况。结果：睾丸和附睾组织中ADA活性,海洛因组和海洛因戒断3 d组均明显高于对照组（P<0.05）,其他各组与对照组比较,差异均无显著性（P>0.05）;睾丸组织中ADA mRNA水平,海洛因组明显高于对照组（P<0.05）,附睾组织中ADA mRNA水平,海洛因组、海洛因戒断3 d组和海洛因戒断9 d组均明显高于对照组（P<0.05）,其他各组与对照组比较,差异均无显著性（P>0.05）。结论：海洛因对大鼠睾丸和附睾组织中ADA活性和基因表达有持续增强作用,补偿嘌呤核苷酸可以对抗海洛因的作用。     

嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠脑组织中 5-HT及5-HIAA 含量的影响及其机制

目的：研究嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠的戒断症状及脑组织中 5-羟色胺（5-HT）及 5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）含量的影响及其作用机制。方法：剂量递增腹腔注射海洛因,建立海洛因依赖大鼠模型,110 只正常雄性 Wistar 大鼠随机分为对照组（C）、海洛因组（H）、海洛因补偿 AMP + GMP 组（HAG）、海洛因补偿 AMP 组（HA）、海洛因补偿 GMP 组（HG）,每组 22只。应用荧光分光光度法测定大鼠脑组织中5-HT和 5-HIAA 的含量,ELISA 法测定大鼠脑组织中色氨酸羟化酶（TPH）的含量,免疫组化法检测脑组织中 TPH 蛋白的表达,每组中有 8 只鼠于第 10 天第 1 次给药后 4 h 观察戒断症状,每组中有4只鼠用于免疫组化。结果：与 H 组比较,HAG、HA 及 HG 组大鼠的咀嚼、齿颤及睑下垂次数均明显减少 (P<0.05)。与 C 组比较, H 组大鼠脑组织中 5-HT 和 5-HIAA 含量显著下降 (P<0.05);与 H 组比较, HAG、HA 和 HG 组大鼠脑组织中 5-HT 和 5-HIAA 含量均有所升高 (P<0.05)。与 C 组比较,H 组大鼠脑组织中 TPH 含量显著下降 (P<0.05);与 H 组比较,HAG、HA 和 HG 组大鼠脑组织中 TPH 含量均有所升高 (P<0.05)。与 C 组比较,H 组大鼠脑组织中 THP 表达的阳性细胞计数明显减少(P<0.05);与 H 组比较,HAG、HA 及 HG 组大鼠脑组织中 THP 表达的阳性细胞计数有所升高(P<0.05)。结论：嘌呤核苷酸补偿能够减轻海洛因依赖大鼠的戒断症状,并能增加大鼠脑组织中 5-HT 和 TPH 的含量。     

嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠脑组织中DA和NE水平的影响及其机制

目的:探讨外源性嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠脑组织中多巴胺（DA）和去甲肾上腺素（NE）水平以及代谢关键酶的影响,探索嘌呤核苷酸治疗药物依赖的可能性。方法:65只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(C)、海洛因组(H)、海洛因＋嘌呤核苷酸组(HAG)、海洛因＋腺嘌呤核苷酸组(HA)、海洛因＋鸟嘌呤核苷酸组(HG),每组13只。荧光分光光度计法检测各组大鼠中脑组织中DA和NE水平,ELISA试剂盒检测酪氨酸羟化酶（TH）水平,实时定量PCR法检测TH的表达。电镜下观察大鼠VTA区神经结构的形态变化。结果:与C组比较, H组DA、NE、TH水平和TH表达水平降低（P<0.05）。与H组比较,HAG组DA、NE、TH水平升高（P<0.05）,HA组TH水平升高（P<0.05）,HG组TH、NE水平升高（P<0.05）。与C组比较,H组TH基因表达降低;与H组比较,HAG、HA及HG组中TH基因表达水平升高(P<0.05)。电镜下H组出现神经毡水肿及髓鞘脱落现象,HAG、HA和HG组常染色体稍有增多,超微结构损伤都较H组减轻。 结论:嘌呤核苷酸补偿能提高大鼠脑组织中DA和NE的水平,能够减轻海洛因对大鼠造成的损伤,提示嘌呤核苷酸治疗药物依赖具有可行性。     

嘌呤核苷酸对海洛因依赖及戒断大鼠心肌酶学的影响

目的：通过心肌酶学测定研究海洛因依赖及戒断对大鼠心肌酶的影响及嘌呤核苷酸的干预效果。方法：建立海洛因依赖及戒断大鼠模型,80只建模成功的Wistar大鼠随机分成对照组（生理盐水）、海洛因组、戒断3 d组、戒断9 d组、核苷酸组（不给海洛因）、海洛因加核苷酸组（同时给药）、核苷酸3 d组及核苷酸9 d组（每组10只）,检测各组大鼠血浆中肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、羟丁酸脱氢酶(HBDH)及天门冬酸氨基转移酶(m-AST)的活性。结果：与对照组比较,海洛因组各种心肌酶活性无明显变化(P>0.05);戒断3 d组和戒断9 d组心肌酶CK、CK-MB、LDH、HBDH 和 m-AST活性均明显降低（P<0.01或P<0.05);核苷酸组、海洛因加核苷酸组各种酶活性变化差异无显著性（P>0.05）;核苷酸3 d和9 d组CK、CK-MB、LDH 和 m-AST活性无明显变化（P>0.05）,而核苷酸3 d组HBDH活性明显升高（P<0.05),核苷酸9 d组HBDH活性仍然升高明显（P<0.01)。结论：短期给予海洛因后即可对心肌产生损伤,并有一定的延迟性和持续性,且不能在停止给药后立即消除;补充嘌呤核苷酸后能够改善心肌细胞的功能状态,使心肌酶含量恢复或接近正常。     

嘌呤对慢性吗啡处理大鼠热痛阈与急性戒断的影响

目的：研究嘌呤碱基与嘌呤核苷对吗啡依赖大鼠的热痛阈与急性戒断的影响。 方法：28只大鼠随机分成对照组、吗啡依赖组、吗啡依赖+嘌呤碱基组、吗啡依赖+嘌呤核苷组,每组7只。通过热敏感甩尾实验,记录大鼠热敏感甩尾潜伏期;通过纳洛酮催促,对大鼠急性戒断症状进行观察与评定。 结果：与对照组相比,吗啡依赖组、吗啡依赖+嘌呤碱基组、吗啡依赖+嘌呤核苷组均产生明显的药物抗痛觉效应（P<0.05）;吗啡与嘌呤碱基或与嘌呤腺苷同时作用大鼠的甩尾潜伏期与吗啡依赖组相比有延长的趋势（P>0.05）;吗啡与嘌呤碱基或与嘌呤核苷同 时作用的大鼠戒断后,湿狗样抖动及腹泻/排便的发生次数比吗啡单独作用组明显增加（P<0.05）。 结论：本实验观察到系统应用腺嘌呤/鸟嘌呤、腺苷/鸟苷对吗啡依赖大鼠既可提高其基础热痛阈,又可加重其部分急性戒断症状。     

米非司酮对子宫肌瘤组织中表皮生长因子及Cx43表达的影响

目的 探讨米非司酮对子宫肌瘤组织中表皮生长因子(EGF)及上调间隙连接蛋白Cx43表达的影响.方法 从海口市中医院妇产科2015年1~12月收治的子宫肌瘤患者中选取符合入组条件的子宫肌瘤患者92例,按随机数表法分为对照组和观察组,每组46例.另选取同期在我院因卵巢肿瘤行手术治疗的40例正常子宫肌组织作为正常组.观察组于术前5 d开始予以米非司酮25 mg,2次/d,口服,连续服用5 d,停药后立即行手术治疗.正常组与对照组在确诊后立即行全子宫切除术.治疗结束后,比较三组受检者子宫肌瘤组织及正常子宫肌组织中EGF及Cx43的表达情况.结果 ①对照组在增生期子宫肌瘤组织的EGF mRNA为(0.31±0.27),与正常组增生期的(0.27±0.14)比较差异无统计学意义(P>0.05);②对照组在分泌期子宫肌瘤组织的EGF mRNA为(1.45±0.43),与正常组分泌期的(0.53±0.25)比较差异有统计学意义(P<0.05);③观察组在增生期子宫肌瘤组织的EGF mRNA为(0.26±0.11),与对照组增生期的(0.31±0.27)、正常组增生期的(0.27±0.14)比较差异无统计学意义(P>0.05);而观察组在分泌期子宫肌瘤组织中EGF mRNA为(0.54±0.23),与对照组分泌期的(1.45±0.43)比较,差异有统计学意义(P<0.05);④对照组增生期子宫肌瘤内Cx43蛋白表达与分泌期比较,差异具有统计学意义(P<0.05);正常组患者增生期子宫肌内Cx43蛋白表达与分泌期比较,差异无统计学意义(P>0.05);⑤观察组增生期子宫肌瘤Cx43蛋白表达与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);而分泌期观察组子宫肌瘤内Cx43蛋白表达与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 米非司酮能够明显抑制子宫肌瘤的生长,对临床诊治具有指导意义.     

SHIP和Caspase-3 mRNA在骨髓增生异常综合征患者骨髓组织中的表达及其临床意义

［摘 要］ 目的：检测骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓组织中SHIP、Caspase-3 mRNA的表达,探讨其表达与MDS发病及向白血病转化过程的关系。方法：根据国际预后评分系统（IPSS）选择62例MDS患者,其中低危（low-risk）组20例、中危1（Int-1）组12例、中危2（Int-2）组13例和高危（high-risk）组17例,采用RT-PCR法检测62例MDS患者及30例健康正常者(对照组)骨髓单个核细胞(BMNC)中SHIP mRNA及Caspase-3 mRNA的表达水平,并分析两者之间的关系。 结果：MDS低危组和中危1组BMNC中SHIP mRNA表达率（100%,100%）及表达水平(4.467±2.899,4.529±1.975)分别与对照组（100%,4.623±2.979）比较差异均无统计学意义（P>0.05）;在中危2组和高危组中,BMNC中SHIP表达率（92%,88%）下降,表达水平(2.124±1.880,2.574±1.807)低于对照组（P<0.05）。Pearson相关分析,MDS患者BMNC中SHIP mRNA与Caspase-3 mRNA表达水平呈正相关关系（r=0.714,P<0.05）。随骨髓原始细胞比例升高,SHIP mRNA表达水平降低(F=3.7,P<0.05) ,不同性别（t=0.940,P>0.05）、不同年龄（t=1.419,P>0.05）患者SHIP mRNA表达水平差异无统计学意义。 结论：SHIP在高危MDS患者BMNC中呈低表达或不表达,其表达水平可以作为判定MDS预后的一个指标。     

氨基胍对乳酸盐腹膜透析液致人腹膜间皮细胞损伤及血管内皮生长因子表达的影响

目的 研究氨基胍(AG)对乳酸盐腹膜透析液(L-PDS)致人腹膜间皮细胞(HMrSV5)损伤及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 采用人腹膜间皮细胞株HMrSV5为体外实验模型,分为无血清DMEM培养液对照组、L-PDS组(2.5%L-PDS)、L-PDS+AG组(2.5%L-PDS+10 mmol/L AG)、单纯AG组(终浓度10 mmol/L).各组以上不同干预因素与HMrSV5细胞共孵育.MTT法检测各组细胞增殖、评估细胞活力,Western blot和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测VEGF蛋白及mRNA的表达.结果 MTT试验表明,L-PDS组OD值为(0.120±0.019),明显低于对照组的(0.298±0.031),差异有统计学意义(P<0.05);L-PDS+AG组OD值为(0.289±0.022),明显高于L-PDS组,差异有统计学意义(P<0.05).Western blot和RT-PCR结果均表明,与对照组比较,L-PDS组细胞中VEGF蛋白和mRNA表达明显增加,与L-PDS组比较,PDS+AG组VEGF蛋白和mRNA的表达明显减低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 AG可拮抗乳酸盐腹膜透析液致人腹膜间皮细胞损伤并下调VEGF的表达.