自体CIK细胞免疫疗法治疗中晚期非小细胞肺癌的临床研究

目的观察自体CIK细胞过继性免疫疗法对中晚期非小细胞肺癌患者的临床疗效。方法体外利用抗CD3单抗、IL-2、IFN-γ等细胞因子从患者外周血单个核细胞（PBMC）中诱导扩增CIK细胞,培养11-14d后,分3个疗程回输患者体内,观察患者临床症状改善及生活质量改善状况,并用流式细胞仪检测回输前后患者T细胞亚群和NK细胞变化。结果86例接受自体CIK细胞治疗患者中,PR＋MR为72例,总缓解率为83．72％。治疗前、后肿瘤患者临床症状有明显改善,有显著性差异（P〈0．01）。CIK细胞经培养后细胞总数和CD3、CD56T效应细胞均获得大量增殖,自体回输免疫治疗后,CD3、CD4T细胞和NK细胞比例均显著提高（P〈0．01）。结论从中晚期非小细胞肺癌患者外周血PBMC中可高效扩增CIK细胞,自体回输能显著提高患者免疫功能,改善临床症状,提高生存质量,延长患者生存期。     

自体LAK细胞回输及复肝口服液治疗慢性乙型肝炎临床观察

本文观察了30例慢性乙型肝炎患者以自体LAK细胞回输及复肝口服液治疗的临床疗效。结果表明，治疗后6周HBeAg阴转率为50．0％，抗─HBe阳转率为36．6％。ALT复常率为63．3％。对照组分别为12．3％、10．0％及33．3％。两组相比有显著性差异。对15例HBeAg末阴转病例随访3─6个月、HBeAg阴转3例、HBeAg阴转率达60．0％。对19例抗HBe末阳转病例随访3—6个，抗HBe继续阳转1例，抗─HBe阳转率达40．0％。临床观察结果证明自体LAK细胞回输及复肝口服液联合治疗慢性乙型肝炎有促进HBeAg阴转、抗─HBe阳转、ALT复常的作用，且随时间推移HBV复制指标阴转病例有增加趋势。     

慢性乙型肝炎患者、乙型肝炎肝硬化患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞的水平及意义

目的测定慢性乙型肝炎患者、乙型肝炎肝硬化患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg）的水平并探讨其意义。方法流式细胞术检测12例慢性乙型病毒性肝炎患者,15例乙型病毒性肝炎后肝硬化患者和6例缝康对照者外周血巾CD4＋CD25＋Treg的频率。结果12例慢性乙型病毒性肝炎患者外周血中CD4＋CD25＋Treg占CD4＋淋巴细胞的比例为（12．21±1．46）％,15例慢性乙型病毒性肝炎后肝硬化患者外周血中CD4＋CD25＋Treg占CD4＋淋巴细胞的比例为（11．36±1．06）％,与6例健康对照组（9．86±1．00）％相比差异有显著性（P〈0．05）,慢性乙型病毒性肝炎与慢性乙型病毒性肝炎后肝硬化组间比较差异无显著性（P〉0．05）。结论Treg与CHB患者持续HBV感染密切相关,而是否参与乙肝后肝硬化的发病机制有待进一步研究。     

自体LAK细胞回输疗法对慢性乙型肝炎患者NK及LAK细胞活性的影响

目的探讨自体ＬＡＫ细胞回输疗法的作用机制。方法用ＭＴＴ比色法检测２９例慢性活动型乙型肝炎（ＣＡＨ）患者及１４例正常人外周血ＮＫ及ＬＡＫ细胞活性；检测２１例自体ＬＡＫ细胞回输治疗前、后ＣＡＨ患者外周血ＮＫ及ＬＡＫ细胞活性。结果ＣＡＨ患者ＮＫ及ＬＡＫ细胞活性较正常人低，差异有显著性（Ｐ＜０．０１）；治疗后较治疗前ＮＫ及ＬＡＫ细胞活性增高，差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。结论自体ＬＡＫ细胞回输疗法治疗ＣＡＨ有效，其作用机制之一是提高了ＣＡＨ患者的ＮＫ及ＬＡＫ细胞活性。     

慢性乙型肝炎肝纤维化患者外周血CD4＋CD25＋CD127^low/-T细胞与人肝星状细胞共培养的实验研究

目的探讨CD4＋CD25＋CD127^low/-T细胞在慢性乙型病毒性肝炎肝纤维化发病机制中的作用。方法按肝纤维化S分期将慢性乙型肝炎肝纤维化患者分为s1-s2期6例和s3-s4期7例;采用磁激活细胞分选法（MACS）提取13例患者和6例健康对照者外周血CD4＋CD25＋CD127^low/-T细胞;分别将CD4＋CD25＋CD127^low/-T细胞以不同比例与人肝星状细胞株（hepatic stellate cell,HSC）共培养5天,检测各组HSC的增殖及TGF—β1的分泌。结果CD4＋CD25＋CD127^low/-T细胞与HSC之比,当健康对照组和S1-S2期组为1．5：1,S3-S4期组为2：1时,HSC的增殖速度和TGF—β1分泌量均在同组不同比例中达最高值。各组同比例之间,当比例为1．5：1时,健康对照组HSC的增殖速度显著高于s3～s4期组（P〈0．05）;在比例为1：1—2：1范围内,s1-s2期组和s3～s4期组HSC的TGF—β1分泌量远高于同比例健康对照组（P〈0．05）。结论CD4＋CD25＋CD127^low/-T细胞可能通过自身细胞数量和功能的双重调节,影响肝星状细胞的增殖和分泌,参与了慢乙肝肝纤维化的进展。     

妇科恶性肿瘤患者CD_3AK细胞和LAK细胞表型特征动态比较

CD3AK细胞和LAK细胞均为异质细胞群，为了比较妇科恶性肿瘤患者LAK细胞和CD3AK细胞在体外培养过程中的表型特征，采用间接免疫荧光法动态观察CD3AK细胞和LAK细胞的CD_3~＋，CD_4~＋，CD_8~＋细胞率。结果表明：①培养第1周，CD3AK细胞的CD_3~＋，CD_4~＋，CD_8~＋细胞率分别为61．36％，54．23％和52．96％，显著高于LAK细胞组（P＜0．01）；③培养第2，3周，CD3AK细胞的CD_3~＋，CD_4~＋和CD_8~＋细胞率高于LAK细胞，但无统计学差异（P＞0．05）；③随着培养时间延长，CD3AK细胞CD_3~＋，CD_4~＋，CD_8~＋细胞率均不同程度下降，尤以CD_3~＋细胞率下降最快，而LAK细胞在培养第2周，CD_3~＋，CD_4~＋，CD_8~＋细胞率均有所升高，但第3周时又开始下降；④CD3AK细胞的CD_3~＋，CD_4~＋和CD_8~＋细胞率在培养第1周最高，而LAK细胞在培养第2周最高。提示：CD3MAb和IL－2激活CD3AK细胞和LAK细胞的途径不同，致使CD3AK细胞和LAK细胞向不同的表型特征分化。     

CD_3AK细胞加IL-2治疗恶性肿瘤体外与临床应用研究

CD3AK细胞在体外对体外癌细胞系细胞杀伤活性最强，对自体癌细胞杀伤活性与TIL细胞接近，且均显著大于LAK细胞．CD3AK细胞IL－2治疗癌症患者30例中，CR＋PR14例，有效率为46％．Kernofsky的生活质量标准评分治疗后有显著提高（P＜0．01）．血浆IL－2活性治疗后有明显提高（P＜0．05）．T4／T6治疗后有所提高．     

自体CIK细胞治疗慢性乙型肝炎的护理体会

细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）是一种新型的免疫活性细胞,它是将人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子共同培养一段时间后,产生的一类细胞群,它具有显著的抗病毒、抗肿瘤的活性。2009年6月～2010年3月采用自体细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）治疗慢性乙型病毒性肝炎患者19例,通过对19例患者抽取自身外周血进行CIK细胞经肝动脉回输,     

自体树突状细胞疫苗对雌、孕激素受体双阴性乳腺癌患者免疫功能的影响

目的评价回输自体肿瘤冻融抗原致敏的自体树突状细胞（ADC）疫苗免疫治疗的处于Ⅱ/ⅢA期雌、孕激素受体双阴性表达的乳腺癌患者的免疫反应和不良反应。方法利用自体肿瘤制备ADC疫苗。选取符合实验要求的患者63例,分为实验组和对照组,实验组患者共接受4次皮下ADC疫苗回输。比较两组患者体内淋巴细胞亚群和细胞因子变化;测定实验组疫苗接种前后IFN-γ＋/CD8＋T细胞数量。结果实验组Th1辅助细胞分泌细胞因子升高,NK细胞数量增多,而CD3＋细胞水平下降,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）,疫苗接种后提高了IFN-γ＋/CD8＋T细胞数量,与疫苗接种前比较有统计学意义（P〈0.05）。结论 ADC疫苗可以触发乳腺癌患者的免疫应答。     

负载自体肿瘤抗原的树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞在乳腺癌的临床研究

目的：探讨负载自身肿瘤裂解物的树突状细胞（DC）与细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）共培养后，对CIK体外肿瘤细胞杀伤活性的影响，进一步观察负载自身肿瘤裂解物的DC联合CIK治疗乳腺癌患者的临床免疫学疗效、毒副反应。方法：选择20例乳腺癌患者，分离外周血单个核细胞，其中贴壁细胞经GM—CSF和IL-4诱导产生DC，并负载自体肿瘤细胞裂解物；悬浮细胞经IFN-γ、IL-2、抗CD3单抗、IL-1α体外诱导产生CIK细胞。将负载抗原的DC与CIK共培养，观察CIK在体外对自身肿瘤细胞和乳腺癌细胞株SKBR-3的杀伤活性。此外，20例患者在切除原发病灶后，接受Ag—DC＋CIK细胞的过继免疫治疗，观察临床免疫疗效。结果：①CIK细胞培养后可见CD3^＋、CD8^＋和CD3^＋CD56^＋细胞较培养前显著增加；②将负载自身肿瘤抗原的DC与CIK共培养后，CIK的体外特异性和非特异性杀瘤活性明显提高；③细胞治疗后患者外周淋巴细胞Ag—NORs的IS值明显增高；CD3^＋、CD8^＋、CD56^＋升高；PBMC对自身肿瘤细胞的杀伤活性增强（P〈0．05）；④除一过性发热、畏寒外未见其它不良反应。结论：负载自体肿瘤细胞裂解物的DC疫苗联合CIK细胞在体外能明显增强对乳腺癌细胞的杀伤作用，亦能增强乳腺癌患者的细胞免疫功能，取得较理想的临床免疫疗效。     

CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋Treg细胞在HBV感染所致慢加急性肝衰竭中作用

目的：探讨CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋Treg细胞在HBV感染所致慢加急性肝衰竭发病过程中的表达。方法：采用流式细胞仪检测36例慢加急性肝衰竭患者、38例慢性乙型肝炎患者、40例无症状乙肝病毒携带者及40例健康对照者外周血CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋Treg细胞水平,并追踪慢加急性肝衰竭组患者转归,评价好转组与未恢复组CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋Treg细胞百分率差异。结果：慢加急性肝衰竭组、慢性乙型肝炎组、无症状乙肝病毒携带组及健康对照组外周血CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋Treg细胞分别为（5．14±1．03）％、（9．86±1．72）％、（7．93±1．67）％及（7．06±1．61）％,慢加急肝衰竭组外周血Treg细胞百分率显著低于慢性乙型肝炎组、无症状乙肝病毒携带组和健康对照组（P〈0．01）。慢性乙型肝炎组外周血Treg百分率明显高于慢加急肝衰竭组及健康对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）,而无症状乙肝病毒携带组与健康对照组外周血Treg百分率比较差异无统计学意义（P〉0．05）。各组CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋Treg细胞的百分率与患者血清HBVDNA呈正相关。慢加急性肝衰竭好转组与未恢复组CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋Treg细胞水平比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：慢加急性肝衰竭患者发病可能与CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋Treg细胞表达过低有关,Treg细胞表达水平不能预示慢加急性肝衰竭患者预后。     

细胞因子诱导的杀伤细胞治疗妇科恶性肿瘤的近期疗效观察

目的 观察回输体外培养的自体细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer cells, CIK）治疗妇科恶性肿瘤的近期临床疗效。方法 取8例妇科恶性肿瘤患者外周血,体外培养诱导出CIK细胞,将CIK细胞回输给患者,对比其回输前及回输后2个月的免疫功能、血清CA-125值、卡氏评分及临床症状变化,评价其近期临床疗效。 结果 回输后,外周血CD4+/CD8+比值增加(P<0.05), CD3-CD16+CD56+ 细胞所占百分比增加(P<0.05), CD4+CD25+细胞所占百分比降低(P<0.05);5例患者血清CA-125值下降;1例患者卡氏评分上升;5例患者自觉有临床症状缓解;无一例出现回输不良反应。结论 回输自体CIK细胞对治疗妇科恶性肿瘤有一定的近期疗效。     

自体CIK细胞治疗中晚期消化道恶性肿瘤临床疗效评估

目的评估自体细胞因子诱导杀伤细胞（CIK）回输治疗中晚期消化道恶性肿瘤效果。方法选择2012年6月～2013年1月合肥凤凰肿瘤医院生物免疫治疗中心治疗的中晚期消化道恶性肿瘤患者118例,采用自体单个核细胞制备CIK细胞,培养2～3周后给予静脉输注治疗。通过荧光活化细胞分选法（FACS）测定患者治疗前后的免疫状态、生存质量（Karnofsky评分）、疾病控制率（DCR）,观察毒副作用。结果经培养后,CIK细胞扩增较好,达到预期质量标准。患者治疗后CD4＋、CD8＋细胞比率较治疗前增加,差异有统计学意义（P〈0.05）;治疗后CD3＋、CD4/CD8＋,CIK细胞（CD3＋/CD56＋）高于治疗前,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。Kamofsky评分升高〉20分者27例,10～〈20分者29例,〈10分者36例;下降〈10分者26例。食管癌、胃癌、结肠癌DCR分别为55.26%（21/38）、64.91%（327/57）、65.22%（15/23）。无心、肝、肺、肾脏中毒反应。结论 CIK治疗恶性消化道肿瘤安全可靠,副作用小,疗效确切,并能有效改善患者细胞免疫状态,提高患者的生存质量,抑制肿瘤增长,提高治疗效果。     

自体LAK细胞回输治疗慢活肝患者T细胞亚群,mIL—2R等的动态观察

目的 通过Ｔ细胞亚群、ｍＩＬ－２Ｒ等数项免疫检测，以判断自体ＬＡＫ细胞回输治疗慢性活动型肝炎患者的疗效及机理。方法 采用ＳＡＣ花环法检测上述指标。 结果 在应用ＬＡＫ细胞治疗的４０例慢性活动型肝炎（ＣＡＨ）患者中，观察了２４例治疗前后免疫状态的变化。ＣＤ４＾＋、ＣＤ８＾＋细胞、ＣＤ４＾＋／ＣＤ８＾＋及ｍＩＬ－２Ｒ细胞的百分率治疗前后比较有显著性差异（Ｐ〈０．０１）；治疗前的上述各项结果较正常对照有     

自体LAK细胞回输疗法在慢性乙型肝炎的临床应用

慢性乙型肝炎是一种常见难治疾病，因其发病机理复杂，涉及HBVR宿主免疫系统的效应等因素．1987年，在苏盛的倡导下，国家“七五”肝炎攻关组开展自体淋巴因子活化杀伤细胞（LAK）回输疗法治疗慢性乙型肝炎的临床试验，并获得较好的疗效．1990年以来，我院进行前瞻性临床随机试验，结果报告如下。资料和方法一、病例全部病例根据lop年全国病毒性肝炎会议诊断标准确诊的慢性活动型肝炎（CAH）或慢性迁延型肝炎（CPH），且乙肝病毒复制指标HBeAg、HBV－DNA单或双项阳性，ALT异常，随机分成两组：（－）、治疗组：共有刀例，男性44例…     

妇科恶性肿瘤患者CD_3AK细胞与LAK细胞体外增殖能力动态观察

采用CD3MAb＋IL－2联合刺激法制备了妇科恶性肿瘤患者CD3AK细胞，体外动态观察CD3AK细胞的形态特征及增殖能力，井与LAK细胞进行比较。结果显示：①CD3AK细胞与LAK细胞在体外分别经CD3MAb（0．5mg／L）＋IL－2（105U／L）和IL－2（106U／L）刺激后，细胞体积增大，继之变为不规则形；②CD3AK细胞培养第1周增殖倍数为2．89，至第4周增殖倍数达109．37倍，均显著高于同期培养的LAK细胞的增殖倍数；③CD3AK细胞体外存活时间为4～5周，而LAK细胞仅为2～3周。结果提示：CD3AK细胞制备简便，体外存活时间长，增殖能力强，可以为临床提供充足的过继免疫效应细胞。     

妇科良、恶性肿瘤患者CD_3AK细胞和LAK细胞体外扩增能力比较

为探讨妇科良、恶性肿瘤患者CD3AK细胞的体外增殖能力，对其外周血淋巴细胞用CD3MAb＋IL－2诱导CD3AK细胞，体外动态观察CD3AK细胞增殖倍数，并与同期培养的LAK细胞进行对比。结果：①良性肿瘤组CD3AK细胞在培养第1周，增殖倍数高于恶性肿瘤组，但无显著性差异（P＞0．05），第2、3、4周，良、恶性肿瘤组CD3AK的增殖倍数较接近；②LAK细胞增殖倍数，在良性肿瘤组培养第1周时显著高于恶性肿瘤组（P＜0．05），培养第2、3周也高于恶性肿瘤组，但无统计学意义（P＞0．05）。结果提示：CD3AK细胞和LAK细胞短期培养时，不宜取材于恶性肿瘤患者。     

妇科肿瘤患者CD_3AK细胞和LAK细胞杀瘤活性比较

为比较CD3AK细胞和LAK细胞的杀瘤特性，观察了妇科肿瘤患者CD3AK细胞和LAK细胞对卵巢癌细胞系（3AO）的杀伤活性。结果表明：良性肿瘤组LAK细胞杀瘤活性高峰在培养第1、2周，显著高于同期培养的CD3AK细胞（P＜0．05，P＜0．01），第3周则较低，而CD3AK细胞的杀瘤活性高峰在培养第3、4周，显著高于LAK细胞（P＜0．05）；恶性肿瘤组，LAK细胞杀瘤高峰在培养第1周，显著高于同期培养的CD3AK细胞（P＜0．05），而CD3AK细胞杀瘤高峰在培养第2、3周，显著高于同期培养的LAK细胞（P＜0．05）。提示：妇科恶性肿瘤组LAK细胞和CD3AK细胞杀瘤活性高峰均较妇科良性肿瘤早1周左右；CD3AK细胞杀瘤活性高峰较LAK细胞延迟1～2周。说明CD3AK和LAK细胞的杀瘤活性在不同培养阶段表现不同，LAK细胞宜短期培养，CD3AK细胞宜长期培养。     

恶性肿瘤患者DC＋CIK细胞治疗的护理

目的：探讨树突状细胞（Dc）联合多种细胞因子诱导杀伤细胞（CIK）回输治疗恶性肿瘤的护理方法。方法：收集本院肿瘤科2007年5月-2008年2月收治的150例患者，分别抽取自身外周静脉血80mL，体外分离和培养DC＋CIK细胞后，用带有滤过网的输血器行静脉回输。观察回输时、回输后的不良反应并加强心理、注射部位和输液中的护理。结果：150例恶性肿瘤患者治疗中有23例（15.3％，23／150）患者出现局部红肿、发热、心慌胸闷、恶心呕吐等不良反应，及时对症治疗与护理后好转，未出现严重不良反应。结论：DC＋CIK细胞回榆有助于延长患者生存期，改善患者的生存质量，在整个治疗过程中加强患者心理护理，及时处理不良反应对提高疗效十分重要。     

原发性卵巢癌患者CD_3AK细胞和LAK细胞杀瘤活性比较

为探讨CD3AK细胞和LAK细胞杀瘤作用的特异性及靶细胞选择性，对比观察了3例原发性卵巢癌患者CD3AK细胞和LAK细胞对卵巢癌细胞系（3AO）和人早幼粒细胞白血病细胞系（HL60）的杀伤活性。结果表明：LAK细胞在培养第1～3周，各效靶比（10：1，20：1，40：1）对HL60的杀伤活性略高于对3AO的杀伤活性，但差异无显著性（P＞0．05）；CD3AK细胞在培养第1周，各效靶比（10：1，20：1，40：1）对HL60的杀伤活性均显著高于对3AO的杀伤活性（P＜0．05），而培养第2、3、4周时，对HL60和3AO的杀伤活性无显著区别（P＞0．05）。提示：LAK细胞和CD3AK细胞均缺乏杀瘤特异性，而CD3AK细胞具有一定的靶细胞选择性。