卵巢上皮性癌组织中SFRP5基因启动子区甲基化与β-catenin蛋白表达检测

目的:检测卵巢上皮性癌组织中SFRP5基因启动子区甲基化与β-catenin蛋白的表达。方法:应用甲基化特异性PCR法和免疫组织化学SP法分别检测20例正常卵巢上皮组织、20例卵巢交界性上皮性肿瘤组织以及40例卵巢上皮性癌组织中SFRP5基因启动子区甲基化状态以及β-catenin蛋白的表达。结果:在正常卵巢上皮、卵巢交界性上皮性肿瘤以及卵巢上皮性癌组织中,SFRP5基因启动子区甲基化率分别为0.0%、10.0%、67.5%,差异有统计学意义(P<0.001);β-catenin蛋白的异常表达率分别为5.0%、40.0%、72.5%,差异有统计学意义(χ2=24.962,P<0.001)。卵巢上皮性癌组织中β-catenin蛋白的异常表达与SFRP5基因启动子区甲基化有关联(rP=0.468,P<0.001)。结论:SFRP5基因启动子区甲基化可能导致β-catenin蛋白异常表达,并可能通过激活Wnt/β-catenin信号传导通路促进卵巢上皮性癌的发生发展。     

卵巢上皮性癌组织中PITX2和β-catenin蛋白的表达

目的:探讨卵巢上皮性癌组织中PITX2和β-catenin蛋白的表达及意义。方法:采用免疫组化法检测80例卵巢上皮性癌组织、40例卵巢上皮性良性肿瘤组织和40例正常卵巢组织中PITX2与β-catenin蛋白的表达。采用ELISA检测40例卵巢上皮性癌患者术前和术后(7 d)血清中PITX2蛋白的含量。结果:不同类型卵巢组织中PITX2、β-catenin蛋白的表达差异有统计学意义(χ2=85.380和80.200,P<0.001),卵巢上皮性癌组织中PITX2蛋白的阳性表达率与β-catenin蛋白的异位阳性表达率高于卵巢上皮性良性肿瘤组织和正常卵巢组织,而两者在卵巢上皮性良性肿瘤组织和正常卵巢组织中低表达或不表达。PITX2蛋白的阳性表达率及β-catenin蛋白的异位阳性表达率与卵巢上皮性癌的组织分化程度、FIGO分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。卵巢上皮性癌组织中PITX2表达与β-catenin的异位表达呈正关联(rP=0.411,P<0.001)。卵巢上皮性癌患者术前血清中PITX2的含量高于术后血清中的含量(t配对=16.582,P<0.001)。结论:卵巢上皮性癌组织中β-catenin的激活可能引起细胞中PITX2的上调,从而进一步引起细胞异常增殖、分化及肿瘤的发生发展。     

卵巢上皮性癌组织中人组织激肽释放酶基因14的表达

目的:检测卵巢上皮性癌组织中人组织激肽释放酶基因 14(KLK14)mRNA和蛋白的表达.方法:应用RT-PCR和免疫组化SP法检测正常卵巢、良性卵巢肿瘤、交界性卵巢肿瘤和卵巢上皮性癌组织中KLK14 mRNA和蛋白的表达,分析其表达与卵巢上皮性癌患者临床病理特征的关系.结果:卵巢上皮性癌组织中KLK 14 mRNA的相对表达量(1.36±0.24)高于正常卵巢组织(0.63±0.19)(t=8.432,P＜0.001);卵巢上皮性癌组织中KLK14蛋白的阳性表达率为61.4%,与正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤和交界性卵巢肿瘤相比,差异有统计学意义(χ2=21.648,P＜0.001).KLK14蛋白的表达与卵巢上皮性癌的FIGO分期(χ2=5.759,P=0.016)、组织学分级(χ2=4.671,P=0.031)和淋巴结转移(χ2=8.254,P=0.004)相关.结论:KLK14可能参与了卵巢上皮性癌的侵袭和转移.     

卵巢上皮性癌组织中细胞周期素B1和CDK1的表达

目的:探讨卵巢上皮性癌组织中细胞周期素B1(CyclinB1)和细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)的表达及其意义。方法:应用免疫组化SP法检测20例正常卵巢组织、20例卵巢良性上皮性肿瘤组织、40例卵巢上皮性癌组织中CyclinB1和CDK1蛋白的表达。结果:①卵巢上皮性癌组织中CyclinB1和CDK1蛋白的阳性表达率分别为77.5%和90.0%,良性卵巢上皮肿瘤组织分别为25.0%和35.0%,正常卵巢组织分别为5.0%和10.0%,3者相比差异有统计学意义(χ2=33.036,39.568;P<0.001)。②CyclinB1蛋白的表达与卵巢上皮性癌FIGO分期、组织分化和淋巴结转移有关(P<0.05),CDK1蛋白的表达与卵巢上皮性癌临床病理特征无关。结论:CyclinB1和CDK1蛋白在卵巢上皮性癌组织中存在异常高表达,可能在卵巢上皮性癌的早期恶变过程中发挥重要作用。     

卵巢上皮性癌OPCML基因的表达缺失和启动子甲基化

目的探讨OPCML基因在卵巢上皮性癌中的失表达及其与基因启动子CpG岛甲基化的关系。方法用逆转录—聚合酶链反应、限制性内切酶-聚合酶链反应检测卵巢正常组织、良性上皮性肿瘤、上皮性癌组织和SKOV-3、3AO、CAOV3卵巢癌细胞株OPCML基因的失表达及CpG岛甲基化。结果在卵巢癌中OPCMLmRNA的表达率显著低于正常卵巢组织(χ2=30·108,P=0·0000)和卵巢良性肿瘤组织(χ2=21·162,P=0·000)。SKOV-3和CAOV3细胞未见OPCMLmRNA表达,而3AO细胞可见OPCMLmRNA表达。在卵巢癌中,启动子CpG岛尤其是HapⅡ酶切位点甲基化率显著高于正常卵巢组织(χ2=13·630,P=0·0000)和良性肿瘤组织(χ2=11·797,P=0·000)。卵巢癌OPCML启动子CpG岛甲基化和mRNA失表达呈显著相关(r=11·589,P=0·002)。SKOV-3和CAOV3细胞有内切酶位点甲基化,而3AO细胞无酶切位点甲基化。结论卵巢上皮性癌细胞存在OPCML基因失表达;基因启动子CpG岛,尤其是HapⅡ酶切位点的甲基化是导致OPCML基因失表达的途径,但不是唯一途径。     

胰腺癌组织中XAF1基因启动子区甲基化状态及XAF1蛋白的表达

目的:探讨胰腺癌组织中X染色体连锁凋亡抑制因子相关因子1(XAF1)基因启动子区甲基化状态及蛋白的表达。方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)及免疫组化SP法检测胰腺癌组织(48例)、胰腺良性疾病组织(26例)和正常胰腺组织(15例)中XAF1基因启动子区甲基化状态及蛋白的表达。结果:胰腺癌、胰腺良性疾病及正常胰腺组织中,XAF1基因启动子区甲基化率分别为31.3%、7.7%和0%,XAF1蛋白的阳性表达率分别为52.1%、84.6%及88.9%,3组比较差异均有统计学意义(P=0.005;χ2=11.169,P=0.004)。XAF1基因启动子区甲基化状态及蛋白的表达均与胰腺癌的TNM分期、分化程度及淋巴结转移关系密切(P<0.05)。胰腺癌组织中XAF1基因启动子区甲基化状态与蛋白表达呈负关联(rP=-0.463,P<0.001)。结论:XAF1基因启动子区甲基化是该基因失活的重要机制之一,XAF1甲基化修饰水平在胰腺癌的发生、发展中起重要作用。     

卵巢上皮性癌组织中WWOX与Bcl-xl基因的表达及其意义

目的 研究卵巢上皮性癌中WWOX与Bcl-xl基因的蛋白表达及其相关性.方法 应用免疫组化SP法检测39例卵巢上皮性癌、7例交界性卵巢肿瘤、10例良性卵巢上皮性肿瘤、15例正常卵巢组织中WWOX与Bcl-xl蛋白的表达情况.结果 卵巢上皮性癌组织中WWOX蛋白阳性表达率为64.10%(25/39),显著低于交界性卵巢肿瘤(6/7,85.71%)、良性卵巢上皮性肿瘤(10/10,100%)及正常卵巢组织(15/15,100%)中的阳性表达率(均P＜0.01);卵巢上皮性癌组织中Bcl-xl蛋白阳性表达率为53.85%(21/39),显著高于交界性卵巢肿瘤(2/7,28.57%)、良性卵巢上皮性肿瘤(1/10,10.00%)及正常卵巢组织(0/15,0)中的阳性表达率(均 P＜0.01).WWOX蛋白表达与卵巢上皮性癌的临床分期及病理学类型有关(P＜0.05),与病理学分级无相关性(P＞0.05).Bcl-xl蛋白表达与卵巢上皮性癌的病理学类型和病理学分级无关(P＞0.05),但与临床分期相关(P＜0.05).WWOX蛋白表达与Bcl-xl蛋白的表达呈明显负相关(r=-0.478,P＜0.01).结论 WWOX基因在卵巢上皮性癌组织中低表达,Bcl-xl基因在卵巢上皮性癌组织中高表达,可能在卵巢上皮性癌的发生和发展中起重要作用.     

Survivin蛋白在卵巢上皮癌中的过度表达

目的:探讨Survivin蛋白在卵巢上皮性癌中的表达及意义。方法:应用免疫组化的方法检测Survivin蛋白在正常卵巢组织、卵巢上皮性癌以及相应的转移标本中的表达,评估其与临床指标及预后的相关性。结果:Survivin蛋白在正常卵巢组织均不表达;卵巢上皮细胞癌组织中阳性表达率为64.3%(63/98),二者比较差异有统计学意义(P<0.001);在卵巢上皮性癌转移标本中Survivin蛋白阳性表达率达85.1%(57/67),与原位肿瘤相比其差异有统计学意义(P=0.004);Survivin蛋白表达与卵巢上皮性癌的预后相关(P=0.019),Survivin蛋白高表达患者预后较差。结论:Survivin基因在卵巢上皮性癌的发生发展中起一定作用。     

卵巢上皮性癌组织中 WAF1基因的表达

【目的】探讨卵巢上皮性癌组织中WAF1表达情况及其与肿瘤临床病理参数的关系。【方法】用RT-PCR和免疫组化分别检测30例正常卵巢、32例良性卵巢上皮性肿瘤和55例卵巢上皮性癌组织中WAF1mRNA和WAF1蛋白表达情况,并结合临床病理进行探讨。【结果】正常卵巢、良性卵巢上皮性肿瘤、卵巢上皮性癌组织中WAF1mRNA阳性表达率分别为73%、56%、40%(P=0.012),WAF1蛋白阳性表达率分别为80%、56%、36%(P=0.001),卵巢上皮性癌WAF1mRNA及其蛋白表达均低于其它两组。卵巢上皮性癌中WAF1mRNA表达与其蛋白表达呈正相关。WAF1蛋白低表达与卵巢癌FIGO分期晚有关(P=0.032),与年龄、组织学类型、病理分级、残余肿瘤大小无关(P>0.05),而WAF1mRNA与上述各项临床病理参数均无关(P>0.05)。【结论】与正常卵巢和良性卵巢肿瘤相比较,卵巢上皮性癌存在WAF1基因转录抑制及蛋白表达低下,WAF1下调可能与上皮性卵巢癌发生有关;晚期卵巢上皮性癌较早期者WAF1蛋白表达低,提示WAF1蛋白低表达与卵巢上皮性癌的恶性生物学行为有关。     

基质金属蛋白酶-2、血管内皮生长因子与卵巢上皮性肿瘤血管生成的关系

目的:探讨基质金属蛋白酶2(MMP2)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达与卵巢上皮性肿瘤血管生成的关系及其临床意义。方法:应用免疫组化SABC法检测20例卵巢良性上皮性肿瘤组织、20例卵巢交界性上皮性肿瘤组织、50例卵巢上皮性癌组织中MMP2、VEGF的表达及微血管密度(MVD)。结果:MMP2表达与卵巢癌的临床分期有关(P<0.05);MMP2表达阳性组的MVD值明显高于阴性组的MVD值(P<0.05),卵巢癌组织中MMP2与VEGF的表达呈显著性正相关(rs=0.600,P<0.05)。结论:MMP2与卵巢肿瘤的血管生成有关,检测MMP2的表达可作为反映卵巢癌侵袭和转移潜能的生物学指标。     

卵巢上皮性肿瘤组织中VEGF与P53的表达

目的:探讨卵巢上皮性肿瘤组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)及P53蛋白的表达。方法:应用免疫组织化学SP法和形态定量学方法,检测卵巢上皮性肿瘤组织(良性囊腺瘤17例,交界性肿瘤15例,恶性肿瘤29例)中VEGF和P53蛋白的表达,并测定其积分光密度(IOD)和平均光密度(MOD)。结果:良性、交界性及恶性肿瘤组织中VEGF的IOD和MOD值分别为213.6±94.8和0.19±0.07、419.4±71.6和0.26±0.08、667.2±32.9和0.41±0.03,P53蛋白表达的IOD和MOD值分别为164.2±44.8和0.17±0.04、521.3±57.1和0.24±0.07、872.2±37.4和0.41±0.04,良性肿瘤分别与交界性肿瘤和恶性肿瘤相比,IOD和MOD值差异均有统计学意义(P<0.01或0.05)。且VEGF与P53表达呈正相关(rs=6.24,P<0.05)。结论:卵巢上皮性肿瘤的发展中VEGF起重要作用,P53蛋白可能参与卵巢肿瘤的血管生成调节。     

BRCA1基因在散发性乳腺癌中的表达及异常甲基化

目的：通过检测乳腺癌易感基因1（BRCA1）基因在散发性乳腺癌中的表达情况及其启动子甲基化状态,探讨BRCA1基因与散发性乳腺癌的关系。方法应用实时荧光定量PCR的方法和免疫组织化学方法分别检测BRCA1 mRNA和蛋白在60例散发性乳腺癌组织、癌旁正常乳腺组织及30例乳腺良性病变组织中的表达情况;应用重亚硫酸盐测序PCR（BPS）联合TA克隆测序方法检测上述组织中BRCA1启动子CpG岛的甲基化状态,分析BRCA1基因表达和启动子甲基化相关性。结果BRCA1 mRNA和蛋白在散发性乳腺癌组织中的相对表达水平分别低于癌旁正常组织及乳腺良性病变组织,差异有统计学意义（P＜0．001）。乳腺癌组织中BRCA1蛋白的表达率为51．7％（31／60）,明显低于癌旁正常乳腺组织的71．7％（43／60）及乳腺良性病变组织的66．7％（20／30）,差异有统计学意义（P＜0．001）;散发性乳腺癌组织中BRCA1启动子甲基化率为31．7％（19／60）,癌旁正常乳腺组织及乳腺良性病变组织均未检测出甲基化,差异有统计学意义（P＝0．000）;BRCA1蛋白表达与其启动子甲基化呈负相关（r＝－0．345,P＝0．007）。结论乳腺癌易感基因BRCA1启动子区CpG岛甲基化导致BRCA1基因表达显著下调,可能参与散发性乳腺癌的发生、发展。     

RASSF 1A基因在卵巢癌组织及腹腔冲洗液中甲基化的研究

目的:探讨卵巢癌组织和腹腔冲洗液中Ras相关区域家族1A (Ras association domain family 1A,RASSF 1A)基因启动子异常甲基化状况及其在卵巢癌诊断中的价值。方法:采用甲基化特异性PCR方法检测42例卵巢癌组织、腹腔冲洗液或腹腔积液、11例正常卵巢组织和19例良性病变卵巢组织中RASSF 1A基因启动子区甲基化状态。结果:42例卵巢癌组织中RASSF 1A基因启动子区甲基化发生率为38.1%,11例正常卵巢组织和19例良性卵巢组织中RASSF 1A基因启动子区无甲基化,差异有统计学意义(P<0.01)。临床分期Ⅲ期和Ⅳ期的卵巢癌组织中RASSF 1A基因启动子区甲基化发生率为54.2%,高于临床Ⅰ期和Ⅱ期者16.6%(P<0.05)。淋巴结阳性者癌组织中RASSF 1A基因启动子区甲基化发生率56.5%,高于淋巴结阴性者15.8%。腹腔冲洗液或腹腔积液细胞学阳性者癌组织中RASSF 1A基因启动子区甲基化发生率为74.1%,高于腹腔冲洗液或腹腔积液细胞学阴性者33.3%(P<0.01)。结论:RASSF 1A基因甲基化在卵巢癌患者中具有较高的发生率,检测卵巢癌组织和腹腔冲洗液或腹腔积液中RASSF 1A基因的甲基化状态对卵巢癌的诊断和判断预后具有一定的价值。     

卵巢原发癌和转移癌中Survivin的表达与VEGF的相关性研究

目的：探讨凋亡抑制蛋白Survivin mRNA在卵巢原发癌和转移癌中的表达及其与血管内皮生长因子（VEGF）表达的相关性.方法：应用原位杂交技术检测Survivin mRNA;免疫组化S-P法检测VEGF蛋白在卵巢正常组织、良恶性肿瘤和卵巢转移癌中的表达.结果：Survivin、VEGF在卵巢原发癌和转移癌与卵巢良性肿瘤、卵巢正常组织中阳性表达率比较均有统计学意义（P＜0.01）.Survivin与VEGF在卵巢原发癌和转移癌中的表达呈正相关关系（r=0.317）.VEGF在卵巢原发癌中表达与临床分期、淋巴结转移有统计学意义（P＜0.01）.结论：Survivin、VEGF在卵巢原发癌和转移癌中的高表达,可能参与卵巢恶性肿瘤的发生发展和转移.     

PITX2启动子甲基化及其与膀胱癌临床病理的关系

目的:由于近些年表观遗传学的发展,基因启动子甲基化检测在预测癌症诊断预后方面拥有巨大的潜力。PITX2启动子的高CpG岛增加其甲基化程度,其能够成为新的膀胱癌预测因子。方法: QRT-PCR检测永生化膀胱上皮细胞系（SV-HUC）和3种膀胱癌细胞系（EJ、5637、T24）以及癌组织和癌旁组织的差异性表达。通过DNA甲基化测定实验对33例全膀胱切除术切除癌组织进行甲基化程度测定,分为大于50%甲基化,小于50%甲基化建立甲基化程度与肿瘤分期分级的联系。结果:使用实时定量RT-PCR（Q-PCR）证明PITX2在膀胱癌细胞中高表达。癌组织中甲基化程度明显高于癌旁组织。PITX2启动子甲基化与肿瘤大小（P =0.026 7）、高级别（P =0.027 7）和TNM分期（0.016 0）显着相关。在预测肿瘤侵袭（T2-T4肿瘤）中,PITX2启动子甲基化的ROC曲线下面积（AUC）为0.867。 Kaplan-Meier生存分析表明,与低PITX2甲基化表达的肿瘤相比,高PITX2启动子甲基化表达的肿瘤与较短的总体存活相关。结论:PITX2在膀胱癌组织中异常高表达,并且PITX2启动子区域在癌组织中存在高甲基化是患者不良预后的独立危险因素,因此,PITX2启动子甲基化可能成为膀胱癌肿瘤发生进展有效的预测因子。     

VEGF和p53蛋白在上皮性卵巢肿瘤中的表达及意义

目的 :探讨上皮性卵巢肿瘤组织中血管内皮生长因子 (VEGF)及p5 3蛋白的表达及临床病理意义。方法 :用SP免疫组织化学方法检测VEGF和p5 3蛋白在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达。结果 :恶性、交界性及良性卵巢肿瘤组织中VEGF阳性表达率分别为 35 .3%、6 0 .4 % 0、72 .4 % ,VEGF表达率在恶性肿瘤和交界性肿瘤较良性肿瘤明显增高 ,且与卵巢癌淋巴结转移有关 (P <0 .0 5 ) ,而与病理学分级、临床分期无关 ;p5 3蛋白表达与VEGF表达呈明显正相关 (P <0 .0 5 )。结论 :VEGF在卵巢上皮性肿瘤的发展中起着重要作用 ,突变型p5 3蛋白可能参与卵巢肿瘤的血管生成调节。     

卵巢癌组织中VEGF的表达及其与MVD的关系

目的探讨卵巢癌组织中血管内皮生长因子（VEGF）的表达及其与微血管密度（MVD）的关系。方法应用免疫组织化学技术检测130例卵巢癌组织和36例正常卵巢组织中VEGF的表达,并以抗CD34抗体标记微血管内皮细胞,测定MVD。结果卵巢癌组织VEGF呈高表达,阳性的比例为70.8%（92/130）,而正常卵巢组织VEGF表达阳性的比例为27.8%（10/36）,两者之间差异有显著性（P〈0.05）。结论 VEGF可能通过促肿瘤血管生成来影响卵巢癌的浸润和转移。     

YKL-40和VEGF在上皮性卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨YKL-40和VEGF在上皮性卵巢癌组织中的表达及其临床意义。方法选择青岛大学医学院附属医院2012年1月-12月收治的30例卵巢癌患者,另选择同期正常卵巢标本20例和卵巢良性肿瘤患者20例,利用免疫组化方法检测YKL-40和VEGF蛋白在卵巢组织的表达。结果卵巢癌组YKL-40和VEGF的表达阳性率分别为80%（24/30）和73.3%（22/30）,明显高于正常卵巢组和卵巢良性肿瘤组,结果具有统计学意义（P〈0.01）;YKL-40和VEGF的表达与卵巢癌的临床分期有关（P〈0.05）,与年龄、组织分级、组织分型都无关。结论 YKL-40和VEGF在上皮性卵巢癌的发生和转移中起重要作用,可以作为判断卵巢癌患者预后的一种新分子标志物。     

散发性三阴乳腺癌中BRCA1启动子甲基化与蛋白表达

目的：通过检测散发性三阴乳腺癌（TNBC）中乳腺癌易感基因（breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1）启动子甲基化和蛋白表达,探讨BRCA1与散发性TNBC的关系.方法：应用重亚硫酸盐测序PCR（bisulfite sequencing PCR,BSP）法检测50例散发性TNBC组织及配对癌旁组织中BRCA1启动子甲基化状态,用免疫组织化学方法检测上述组织中BRCA1蛋白的表达情况,分析BRCA1启动子甲基化与蛋白表达的相关性.结果：散发性TNBC组织中BRCA1启动子甲基化率为42.0％（21/50）,癌旁组织未检测出甲基化,两者比较差异有统计学意义（P=0.000）.BRCA1蛋白在散发性TNBC癌组织中的表达率为32.0％（16/50）,明显低于癌旁组织68.0％ （34/50）（P＜0.05）.散发性TNBC癌组织中BRCA1蛋白表达与启动子甲基化呈负相关（r=-0.323,P=0.022）.结论：BRCA1启动子的高甲基化引起BRCA1蛋白表达下降或缺失,可能是散发性TNBC重要的发病机制之一.