蟾蜍灵诱导NB4细胞凋亡及其分子机制的初步探讨

目的：了解蟾蜍灵（bufalin）诱导对急性旱幼粒细胞白血病（APL）细胞株NB4的增殖抑制和诱导凋亡作用及其分子机制。方法：以急性旱幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞为研究对象，应用细胞计数、形态学分析、电镜以及RT—PCR手段．观察蟾蜍灵对NB4细胞的作用。结果：蟾蜍灵以时间、剂量依赖的方式抑制NB4细胞的增殖，并诱导NB4细胞凋亡，同时有效降低NB4细胞中Survivin基因的表达。结论：蟾蜍灵诱导NB4细胞凋亡过程中其可能的分子机制是与Survivin基因表达下调有关。     

蟾蜍灵对人非小细胞肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

背景与目的蟾蜍灵是从中药蟾酥中提取出来的有效成分,其抗肿瘤作用已经在许多体外肿瘤细胞中得到证实,本研究旨在探讨蟾蜍灵对人非小细胞肺癌细胞的增殖抑制、诱导凋亡作用及其机制.方法采用MTT法测定细胞活力,绘制细胞增殖抑制曲线;瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞形态学的变化;流式细胞仪通过PI染色进行细胞周期分析及凋亡判定;Western blot法检测Livin及Caspase-3蛋白的表达.结果蟾蜍灵以时间、剂量依赖方式抑制A549细胞增殖,48 h、72 h及96 h抑制细胞增殖50%的药物浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)分别为(56.14±6.72)nmol/L、(15.57±4.28)nmol/L及(7.39±4.16)nmol/L;蟾蜍灵能诱导肺癌细胞凋亡,形态学表现为出现凋亡小体及流式细胞仪榆测到的亚二倍体凋亡峰,凋亡率与对照组比较差异有统计学意义(均P<0.01);蟾蜍灵诱导细胞凋亡过程中,下调Livin蛋白表达(P<0.01),同时活化Caspase-3蛋白.结论蟾蜍灵能够抑制肺癌细胞A549的增殖,并诱导其凋亡;抑制凋亡抑制蛋白Livin的活性及活化Caspase-3可能在其抑癌机制中发挥重要作用.     

Ad-Gax转染诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及其机制

背景与目的细胞凋亡与肺癌的发生发展密切相关,诱导肺癌细胞凋亡是肺癌治疗的一大策略。本研究探讨生长终止特异性同源盒Gax(growth arrest-specific homeobox)基因转染对人肺腺癌A549细胞凋亡及凋亡相关基因蛋白表达的影响。方法腺病毒介导Gax基因(adenovirus expressing Gax cDNA,Ad-Gax)转染A549细胞。以透射电镜观察细胞凋亡形态;原位细胞凋亡检测法(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL)观察转染前后A549细胞凋亡变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫细胞化学法测定细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达。结果透射电镜观察到Ad-Gax转染后A549细胞凋亡现象明显增强。无Ad-Gax转染时,无或仅见极少量的TUNEL染色阳性细胞;Ad-Gax转染后,TUNEL染色阳性细胞显著增多,尤其在转染后24小时更明显。Ad-Gax转染后12h、24h和48h细胞凋亡率分别为12.57%、17.29%和15.03%,与未转染组(0.25%)比较有显著性差异(χ2值分别为7.357、11.126、9.943,P值均小于0.01)。未转染组、转染12h、24h和48h组Bcl-2蛋白平均积分光密度值(AOD)分别是2.02±0.07、1.79±0.02、1.25±0.51和1.21±0.24,转染组Bcl-2蛋白AOD随转染时间的延长逐渐降低,与未转染组相比呈显著性差异(t值分别为6.651、7.089、7.438,P值均小于0.01)。未转染组、转染12h、24h和48h组Bax蛋白AOD分别是3.12±0.42、4.49±0.61、4.24±0.37和3.95±0.43,转染组Bax蛋白AOD升高,与未转染组相比差异显著(t值分别为7.469、7.287、6.473,P值均小于0.01)。转染组A549细胞凋亡率与Bcl-2/Bax比值呈负相关关系(r=-0.49,P<0.01)。结论Ad-Gax转染可诱导A549细胞凋亡,其机制可能是通过下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白的表达,尤其是通过降低Bcl-2/Bax比值实现的。     

抑制NF-κB通路增强蟾蜍灵诱导的HL-60细胞凋亡

目的:观察蟾蜍灵对HL-60细胞活力和凋亡的影响,对NF-κB通路的作用,探讨NF-κB通路在蟾蜍灵诱导HL-60细胞凋亡过程中的作用.方法:锥虫蓝染色检测细胞活力;流式细胞仪技术检测细胞凋亡和周期分布;采用Western Blot技术检测IKK的磷酸化.结果:蟾蜍灵以时间和剂量依赖性方式诱导HL-60细胞凋亡.24,48和72h抑制细胞活力的IC50浓度分别为26.3,7.8和2.0nmol/L.对照组HL-60细胞有pIKK表达,蟾蜍灵可诱导IKK的快速活化.NF-κB通路的特异性抑制剂Bay 11-7082增强蟾蜍灵的凋亡诱导作用.结论:蟾蜍灵可诱导HL-60细胞凋亡,促进IKK活化与NF-κB通路调节相关,而且与NF-κB通路抑制剂有协同作用.     

泰素帝诱导人肺腺癌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨泰素帝诱导人肺腺癌细胞凋亡的作用机制。方法 应用形态学方法、流式细胞术（ＦＡＣＳ）、ＤＮＡ凝胶电泳、ＡｎｎｅｘｉｎＶ标记等方法检测细胞凋亡的发生,应用ＲＴ－ＰＣＲ检测凋亡相关基因Ｆａｓ、ｂｃｌ－２、ｃ－ｍｙｃ表达的变化。结果 泰素帝对人肺腺癌细胞系Ａ５４９细胞的生长有明显的抑制作用,使细胞分裂阻滞于Ｇ２Ｍ期,并诱导肿瘤细胞发生凋亡。凋亡细胞表现为细胞固缩,核染色质聚集或断裂,ＤＮＡ凝胶电     

放射线诱导肺腺癌细胞增殖凋亡

 目的 观察人肺腺癌细胞和肺纤维母细胞照射后死亡的特征。方法 HE染色观察照射后死亡细胞的形态学改变,Comet检测凋亡细胞内DNA双链断裂,流式细胞仪检测照射后细胞周期的改变及凋亡发生时机。结果 肺腺癌细胞照射后出现凋亡,凋亡发生于细胞渡过照射诱导的C2停滞后的G1停滞期;肺纤维母细胞照射后仅见到坏死改变。结论 凋亡是肺腺癌细胞照射后增殖死亡的表现形式之一,增殖凋亡的发生具有剂量和时间依赖关系。而增殖坏死可能是肺纤维母细胞照射死亡的主要形式,揭示了不同种类细胞增殖死亡的复杂性和多样性。     

蟾蜍灵抗癌作用机制研究进展

 蟾蜍灵是传统中药蟾酥的有效成分之一,国内外许多研究证实它对多种白血病细胞和一些实体恶性肿瘤细胞有显著抑制增殖作用,其机制可能是通过抑制内皮细胞增生和血管生成、诱导细胞分化和凋亡等实现的。随着研究的不断深入,显示蟾蜍灵具有广泛的抗肿瘤作用,其发挥效用的浓度低,具有潜在的临床应用价值。     

抑制NF—κB通路增强蟾蜍灵诱导的HL-60细胞凋亡

目的：观察蟾蜍灵对HL-60细胞活力和凋亡的影响,对NF—κB通路的作用,探讨NF—KB通路在蟾蜍灵诱导HL-60细胞凋亡过程中的作用。方法：锥虫蓝染色检测细胞活力;流式细胞仪技术检测细胞凋亡和周期分布;采用WesternBlot技术检测IKK的磷酸化。结果：蟾蜍灵以时间和剂量依赖性方式诱导HL-60细胞凋亡。24,48和72h抑制细胞活力的Ic50浓度分别为26．3,7．8和2．0nmol／L。对照组HL-60细胞有pIKK表达,蟾蜍灵可诱导IKK的快速活化。NF—κB通路的特异性抑制剂Bay11—7082增强蟾蜍灵的凋亡诱导作用。结论：蟾蜍灵可诱导HL-60细胞凋亡,促进IKK活化与NF—κB通路调节相关,而且与NF—κB通路抑制剂有协同作用。     

蟾蜍灵诱导人胃癌SGC7901细胞自噬与凋亡的研究

目的：探讨自噬在蟾蜍灵（bufalin）诱导人胃癌SGC7901细胞死亡中的作用.方法：不同浓度的bu-falin处理人胃癌SGC7901细胞,采用MTT法检测bufalin对SGC7901细胞增殖的抑制作用.透射电镜观察给药后SGC7901细胞的自噬现象;流式细胞术检测细胞凋亡.Western blot检测自噬标志LC3蛋白表达.结果：Bufalin对胃癌SGC7901细胞生长有显著的抑制作用,且此作用呈明显的时间-剂量依赖性.Bufalin给药后可诱导SGC7901细胞发生自噬;并且在bufalin给药前用氯喹阻断自噬明显提高了bufalin对SGC7901的细胞毒性（P＜0.05）.结论：Bufalin能明显抑制SGC7901细胞的生长,并且诱导其发生保护性自噬.Bufalin和自噬抑制剂的联合应用可能为胃癌治疗提供新的策略.     

雷公藤甲素诱导人肺腺癌A549细胞凋亡机制的研究

目的:探讨雷公藤甲素(TP)诱导肺腺癌A549细胞凋亡的机制。方法:体外细胞培养,待细胞处于对数生长期时加入4.0μg/mLTP处理24和48h;Western blot检测Sur-vivin、Bcl-2和Fas蛋白质表达;Caspase检测试剂检测Caspase-3和Caspase-9活性。结果:4.0μg/mLTP呈时间依赖性降低Survivin和Bcl-2的表达(与对照组比较P<0.05),升高Fas的表达(与对照组比较P<0.05),TP作用后Caspase-3和Caspase-9活性增强,作用24、48h后Caspase-3活性分别为1.32±0.07和1.46±0.03,Caspase-9活性分别为2.36±0.06和2.41±0.03,与对照组比较,P<0.01。结论:降低Survivin和Bcl-2表达,促进Fas表达可能是TP诱导A549细胞凋亡的机制之一。     

Bufalin Induces Mitochondrial Pathway-Mediated Apoptosis in Lung Adenocarcinoma Cells

Background: To evaluate the effects of bufalin in A549 human lung adenocarcinoma epithelial cells invitro and assess the underlying mechanisms. Materials and Methods: Human A549 non-small cell lung cancer(NSCLC) cells were treated with various concentrations of bufalin. Cell proliferation was measured by CCK-8assay, apoptotic cell percentage was calculated by flow cytometry and morphological change was observed byinverted phase contrast microscopy/transmission electron microscopy. In addition, the membrane potentialof mitochondria was detected by JC-1 fluorescence microscopy assay, and the related protein expression ofcytochrome C and caspase-3 was analyzed by Western blotting. Results: Bufalin could inhibit the proliferationof A549 cells via induction of apoptosis, with the evidence of characteristic morphological changes in the nucleusand mitochondria. Furthermore, bufalin decreased the mitochondrial membrane potential with up-regulationof cytochrome C in the cytosol, and activation of caspase-3. Conclusions: Bufalin inhibits the proliferation ofA549 cells and triggers mitochondria-dependent apoptosis, pointing to therapeutic application for NSCLC.     

西咪替丁对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

摘要：目的研究西咪替丁对其增殖及凋亡的影响并探讨其可能的机制。方法分别以不同浓度的西咪替丁处理A549细胞48 h后,采用MTT法测细胞存活率,流式细胞术测细胞凋亡率,Western blot测Bcl-2和Bax蛋白表达水平情况,观察西咪替丁对A549细胞增殖和凋亡的影响。结果经西咪替丁干预48 h后,A549细胞的增殖受到明显抑制,凋亡增加,且该抑制呈药物浓度依赖性增加。Western blot检测显示随着西咪替丁浓度增加,Bcl-2蛋白的表达减少,而Bax蛋白的表达增加。结论西咪替丁预处理能抑制A549细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与其下调细胞Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达有关。     

白英诱导人肺癌细胞凋亡及对Bcl-2的影响

目的:研究白英水提取物对人肺腺癌SPC-A-1细胞株的凋亡诱导作用及对其Bcl-2表达的影响;探讨白英提取物诱导SPC-A-1细胞凋亡的可能机制。方法:选用人肺腺癌SPC-A-1细胞株为研究对象,在体外与白英提取物4种不同浓度共同培养24、48、72、96h,采用MTT法检测白英提取物对SPC-A-1细胞增殖活性的影响;琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪检测白英水提取物处理的SPC-A-1细胞株细胞凋亡;比较白英提取物处理前后SPC-A-1细胞凋亡相关基因Bcl-2表达的变化。结果:白英提取物抑制SPC-A-1细胞增殖活性;琼脂糖凝胶电泳可见凋亡梯带;SPC-A-1细胞有很低的自然凋亡率(1.37±0.52)%,50.0mg/ml白英提取物作用SPC-A-1细胞48h后,凋亡率为(33.25±4.39)%(P<0.05);50.0mg/ml白英提取物处理48h后的细胞凋亡相关基因Bcl-2表达率(24.41±2.96)%比未经处理的细胞(53.53±4.80)%表达率低(P<0.001)。结论:白英水提取物对人肺腺癌SPC-A-1细胞株有抑制增殖、诱导其凋亡作用,细胞凋亡的机制可能与细胞凋亡相关基因Bcl-2表达下调有关。     

阿霉素诱导人肺癌A549细胞凋亡及其免疫原性研究

[目的]研究阿霉素诱导的人肺癌A549细胞凋亡及免疫原性。[方法]体外培养人肺癌A549细胞,将阿霉素加入A549细胞培养液中,使其终浓度分别为1mg/L、3mg/L、5mg/L,12h后以吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双染色凋亡方法检测其诱导的细胞凋亡情况;以凋亡的A549细胞为抗原,体外致敏分离的正常人外周血单个核细胞,72h后以MTT法检测其对培养的A549细胞的杀伤效果。[结果]阿霉素按1mg/L、3mg/L、5mg/L终浓度作用A549细胞12h后,凋亡率分别为17.60%±1.77%,62.93%±1.70%,16.80%±0.65%。在外周血单个核细胞杀伤实验中,阿霉素诱导的A549凋亡细胞抗原组(A组)光密度(OD)值为0.66508±0.036859,正常细胞对照组(N组)OD值为0.94132±0.018455,凋亡抑制组(Z-A组)为0.71810±0.026841。A组与N组、Z-A组相比,OD值均显著降低(P<0.05)。[结论]阿霉素可诱导A549细胞凋亡,而由凋亡细胞致敏的体外单个核细胞可产生对A549细胞的杀伤效应。     

扁柏醇联合氯喹对人肺腺癌细胞凋亡的影响

目的 探讨扁柏醇（Hinokitiol）联合氯喹对人肺腺癌（H1975）细胞凋亡的影响。方法 选用人肺腺癌H1975细胞系,应用MTT法检测扁柏醇和（或）氯喹对H1975细胞活性的影响,Westernblot法检测扁柏醇和（或）氯喹对H1975细胞凋亡通路相关蛋白（Cleaved PARP、Cleaved Caspase-3、Bax）表达水平的影响。结果 0、2.5、5、10 μmol/L扁柏醇作用H1975细胞24 h后,呈剂量依赖性地抑制H1975细胞增殖,H1975细胞凋亡相关蛋白（Cleaved PARP、Cleaved Caspase-3、Bax）表达水平升高。当氯喹和扁柏醇联合应用时,与单用扁柏醇相比,显著降低H1975细胞存活率,并提高H1975细胞凋亡率,凋亡相关蛋白Cleaved PARP、Cleaved Caspase-3表达水平显著增加。结论 氯喹增加扁柏醇诱导人肺腺癌H1975细胞凋亡。     

沉默Toll样受体4表达对肺腺癌A549细胞凋亡及细胞周期的影响

目的 探讨Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）对肺腺癌A549细胞凋亡及细胞周期的影响。方法 体外化学合成针对TLR4的小干扰RNA（TLR4-siRNA）,通过脂质体介导转染人肺腺癌A549细胞。采用Real-time PCR和流式细胞仪检测分析干扰后A549细胞中TLR4 mRNA及蛋白的表达情况。另外,采用流式细胞仪检测分析干扰72 h后细胞凋亡率和细胞周期的变化。结果 与对照组比较,转染TLR4-siRNA后,A549细胞中TLR4 mRNA及蛋白的表达显著下降（P<0.05）,细胞的凋亡率明显增加[（1.73 ± 0.32）% vs.（7.40 ± 0.75）%（P<0.01）],细胞周期出现G0/G1期停滞[（48.21 ± 1.15）%vs.（66.26 ± 2.45）%（P<0.05）],同时S期细胞比例明显减少[（34.25 ± 1.46）% vs.（22.63 ± 3.39）%（P<0.05）]。结论 TLR4-siRNA能有效沉默A549细胞中TLR4的表达,在促进细胞凋亡的同时能够影响细胞周期分布从而抑制肿瘤细胞的生长,特异性干预TLR4基因的表达有望成为治疗肺癌的一种新手段。     

NDV-HN致人肺腺癌A549细胞凋亡的实验研究

摘 要：［目的］ 探讨NDV-HN诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的相关机制。［方法］ （1）构建包含绿色荧光素蛋白（GFP）及NDV-HN的慢病毒sfGFP-HN载体,用293V细胞包装慢病毒Lv-sfGFP-HN,用293V细胞进行空载质粒转染组（空载组）慢病毒包装,命名为Lv-sfGFP;（2）以空载组A549-sfGFP细胞和空白组A549为对照,用慢病毒转染方法建立稳定表达NDV-HN蛋白的A549细胞株,即A549-sfGFP-HN细胞株,RT-PCR、Western blot检测A549细胞NDV-HN蛋白的表达;（3）分别在A549-sfGFP-HN和A549两组细胞中加入顺铂,流式细胞术检测细胞凋亡;（4）在基因水平和蛋白水平上分别用RT-PCR和Western blot检测各组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2的表达。［结果］ （1）Lv-sfGFP-HN和Lv-sfGFP慢病毒分别转染A549细胞后,只在转染组A549-sfGFP-HN细胞检测到NDV-HN蛋白。（2）转染组A549-sfGFP-HN细胞凋亡率明显高于空白组A549细胞 (P＜0.01),转染组A549-sfGFP-HN细胞加入顺铂后,其细胞凋亡率明显增加。（3）转染组A549-sfGFP-HN细胞与空载质粒转染组A549细胞和空白组A549细胞相比,凋亡相关蛋白Bcl-2表达量明显下调(P＜0.01)。［结论］ 慢病毒转染NDV-HN到A549细胞后导致A549-sfGFP-HN细胞出现凋亡,且与Bcl-2下调有关。转染NDV-HN的肺癌细胞联合使用抗癌药物顺铂,增加了肺癌细胞凋亡率。     

PKC抑制剂对人肺腺癌细胞的放射增敏作用

 目的　探讨PKC抑制剂对肺癌放射敏感性的影响; 方法　采用MTT法检测了人肺腺癌细胞株A549在PKC抑制剂白屈莱红碱(CH)处 理前后,2Gy照射的细胞存活分数(SF2),并采用流式细胞术,对其凋亡率以及p53、Bcl -2蛋白表达进行了检测;结果　CH处理后A549凋亡 率增高,SF2下降。p53在X线照射后表达增强,而CH处理组p53表达 呈相对抑制状态。Bcl-2在处理前后变化温和。结论　PKC抑制剂对A 549细胞株的放射敏感性有增强作用,这种作用可能与凋亡率升高有关,而p53可能与 PKC抑制剂诱导的凋亡无关。     

Bcl2 在溴氰菊酯诱导神经细胞凋亡机制中的作用

背景与目的:研究溴氰菊酯 (deltamethrin, DM)对大鼠脑细胞的促凋亡作用及对 Bcl-2基因表达的影响.材料与方法:成年雄性 Wistar大鼠 30只随机分为对照组和 4个染毒组 (5 h、 24 h、 48 h和 5 d组 ),染毒组腹腔注射 12.5 mg/kg DM, 以 FACS420流式细胞仪法测定皮层和海马神经细胞凋亡率与 Bcl-2蛋白表达,免疫印迹法检测皮层和海马神经细胞 Bcl-2蛋白的表达. 结果:DM染毒 24 h、 48 h、5 d组大鼠海马、皮层神经细胞凋亡率 (海马:8.45±1.02、9.44± 1.14、7.58±0.75;皮层:7.90±0.49、8.01±0.87、7.97±0.41)均高于对照组(海马:2.97±0.36;皮层: 3.50±0.48),而 5 h组未见变化;5 h、 24 h、48 h组海马 Bcl-2表达 (5.27±0.33、 4.72±0.13、5.80±0.86)降低 (对照:7.16± 0.61),皮层仅 24 h组表达降低 (对照: 6.99±0.66,皮层:4.27±0.48); 5 h、24 h、48 h组皮层与海马 Bcl-2表达阳性细胞数 (海马:33.1±5.26、 25.4±4.39、5.6±4.71;皮层:20.7±2.58、 25.1±3.12、21.7±2.14)均低于对照组(海马:38.9±7.45;皮层:29.9±5.41),而 5 d染毒组海马与皮层 Bcl-2蛋白表达阳性细胞率未见变化;免疫印迹结果与 FCM结果基本一致.结论:DM可影响大鼠脑海马、皮层神经细胞凋亡率和 Bcl-2蛋白表达.