Rab25 siRNA对人卵巢上皮性癌细胞生长和增殖的作用

目的：通过RNA干涉抑制Rab25在人卵巢上皮性癌的过表达,观察Rab25基因的siRNA对肿瘤细胞的生长和增殖作用.方法：构建针对Rab25基因的siRNA重组质粒,稳定转染A2780细胞,通过RT-PCR检测Rab25的表达;MTT法观察细胞增殖,绘制细胞生长曲线;克隆形成实验检测肿瘤细胞的集落形成能力.结果：成功构建Rab25基因的siRNA,稳定转染靶细胞后可显著降低Rab25的表达,细胞生长速度减慢、增殖能力下降.结论：Rab25基因的siRNA对肿瘤细胞的抑制作用,为卵巢癌基因治疗开辟新途径.     

JWA基因对肿瘤细胞P-糖蛋白的表达及其功能的影响

目的：研究JWA基因（又称ARL6IP5基因,ADPribosylationlike factor 6 interacting protein 5）对肿瘤细胞P糖蛋白表达及其功能的影响。方法：利用脂质体转染技术将JWAshRNA重组质粒及其空载质粒转入人绒毛膜癌细胞JAR和人乳腺癌细胞MCF7,将FlagJWA重组质粒及其空载质粒转入人绒毛膜癌耐依托泊苷(etoposide,VP16)JAR/VP16细胞;Western blotting检测JWA和P糖蛋白的表达,流式细胞术分析细胞内罗丹明123 (Rhodamine 123, Rh123)的潴留情况。结果：JWAshRNA重组质粒转入JAR细胞和MCF7细胞后,JWA表达水平降低,P糖蛋白表达水平上调,罗丹明潴留减少;FlagJWA重组质粒转入JAR/VP16细胞后,JWA表达水平上调,P糖蛋白表达水平下降,罗丹明潴留增加。结论：JWA基因可以调控肿瘤细胞P糖蛋白的表达,并影响其转运功能。     

DUSP10对人卵巢癌A2780细胞迁移及侵袭的影响

目的：探讨DUSP10在浆液性卵巢癌组织中的表达情况及其与卵巢癌细胞迁移及侵袭能力的关系。方法：实时荧光定量PCR方法检测浆液性卵巢腺癌和正常输卵管伞端组织中 DUSP10的表达情况;转染DUSP10过表达和干扰质粒至人卵巢癌A2780细胞,划痕实验和Transwell实验观察癌细胞迁移及侵袭能力的变化。结果：DUSP10在浆液性卵巢癌组织的表达低于正常输卵管伞端组织（ P﹤0.05）。与对照组相比,转染DUSP10过表达质粒后A2780细胞迁移及侵袭能力受到抑制,转染DUSP10干扰质粒后A2780细胞迁移及侵袭能力增强。结论：DUSP10在浆液性卵巢癌组织中低表达;DUSP10可抑制人卵巢癌A2780细胞的迁移及侵袭能力。     

靶向cortactin基因的shRNA重组质粒的构建和筛选

目的 构建靶向cortactin基因的shRNA重组质粒,并筛选出沉默cortactin基因效果最明显的shRNA重组质粒。方法 设计并合成3对针对cortactin基因不同位点的shRNA片段,构建相应的重组质粒（命名为pBSilence1.1-cortactin-shRNA1-3）,并进行酶切鉴定和测序分析。通过脂质体转染方法将各重组质粒及阴性对照质粒分别转染至人肝癌HepG2细胞中,转染24 h后荧光显微镜下观察各组细胞的转染情况,并采用RT-PCR检测各组细胞mRNA的表达情况。结果 构建的重组质粒经酶切鉴定与测序分析证实完全符合设计要求, 转染成功的细胞在荧光显微镜下显示绿色荧光,3组重组质粒组HepG2细胞的cortactin基因mRNA表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组（P<0.05）。与pBSilence1.1-cortactin-shRNA1和pBSilence1.1-cortactin-shRNA2两组相比,pBSilence1.1-cortactinshRNA3组的cortactin基因mRNA表达降低更加显著（P<0.05）。结论 成功构建并筛选的重组质粒能有效抑制HepG2细胞中cortactin基因mRNA表达,为下一步研究沉默cortactin基因对肝癌细胞生物学行为的影响提供了实验基础。     

Hoxa10真核表达载体增强K562细胞对柔红霉素敏感度的研究

目的构建高效干扰Hoxa10基因表达的shRNA真核载体,探讨其对人慢性髓系白血病细胞株K562对化疗药物柔红霉素（daunorubicin,DNR）敏感度的影响。方法设计合成针对Hoxa10的特异性shRNA寡核苷酸链,构建真核表达载体pGPHI/GFP/Neo-Hoxa10并测序,应用阳离子脂质体转染K562细胞。实验分三组：正常对照组、阴性对照组、实验组（分别为正常K562细胞、阴性对照质粒转染K562细胞、pGPHI/GFP/Neo-Hoxa10转染K562细胞）,三组细胞均加入不同浓度的DNR。RT-PCR检测Hoxa10 mRNA的表达,应用MTT检测各组细胞对DNR的敏感度,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果成功构建pGPHI/GFP/Neo-Hoxa10载体并转染K562细胞,该载体能有效降低Hoxa10mRNA表达水平ODR=（38.864±4.488）%;MTT结果显示Hoxa10重组载体可显著降低K562细胞对DNR的IC50（P<0.05),对DNR的敏感度能提高约3.58倍。流式细胞术结果显示,该载体下调Hoxa10的表达后,细胞的凋亡率显著增加,可达（16.207±4.891）%（P<0.05),且联合DNR后细胞凋亡率明显提高,凋亡率达（76.887±0.967）%（P<0.05)。结论本实验构建的靶向Hoxa10的真核表达载体对K562细胞中Hoxa10的表达有明显抑制作用,并能明显增强其对DNR的化疗敏感度。     

携带靶向沉默LSD1基因表达shRNA慢病毒载体的构建与鉴定

目的:构建慢病毒干扰LSD1表达的载体并鉴定。方法:设计并合成3对针对LSD1基因的shRNA链,退火形成双链,与酶切的质粒连接,转化DH5a菌株,提取质粒,进行酶切鉴定和测序分析。脂质体法转染人胃癌MKN-28细胞,通过荧光倒置显微镜判定转染效率,并通过real time-PCR法检测细胞中LSD1基因的表达水平。结果:经酶切鉴定筛选出的重组质粒测序结果与目的序列相同,重组质粒构建成功;转染胃癌MKN-28细胞后,LSD1基因在mRNA水平的表达降低。结论:成功构建了靶向LSD1基因的shRNA慢病毒载体,并筛选出1种对LSD1基因有显著抑制作用的shRNA。     

shRNA表达载体介导的细胞周期蛋白E1基因沉默对肾癌ACHN细胞生长的抑制作用

背景与目的: 肾细胞癌中细胞周期蛋白E1(eyclinE1)的过表达与预后密切相关.为进一步验证其作为肿瘤基因治疗新靶点的可行性,本研究探讨shRNA表达载体介导的cycl inE1基因沉默对肾癌ACHN细胞生长的抑制作用.方法:针对cyclinE1基因设计并合成特定的RNA干扰模板片段,连接到pGenesil-1-U6载体上构建shRNA真核表达载体;将上述重组载体经脂质体转入ACHN肾癌细胞株.RT-PCR、Western印迹分析cyclinE1基因mRNA及蛋白表达抑制率;MTT比色法绘制细胞生长曲线;流式细胞术测细胞周期和凋亡细胞比率;Transwell小室体外侵袭实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力.结果: shRNA重组载体介导肾癌ACHNcyclihE1抑制效果显著(0.09±0.05),显著低于空载体对照组(0.884±0,04)及未转染组(0.904±0.03)(P<0.05).经流式细胞术测得转染重组质粒组细胞生长停滞于G1期且凋亡比率显著升高(11.154±4.00)%(P<0.05).生长曲线结果显示重组载体转染组细胞生长明显缓慢(P<0.05).Transwell及迁移实验结果提示,转染重组质粒组细胞侵袭和迁移能力显著下降(P<0.05). 结论: 肾癌cycl inE1的表达可被载体介导诱发的RNA干扰所成功抑制,进而导致细胞生长、增殖以及侵袭能力受抑并诱导凋亡;本研究为探讨肾癌的RNAi治疗提供了初步实验依据.     

IL-24对B16细胞生长抑制作用的体内外实验研究

目的:构建白细胞介素24(Interleukin24,IL24)真核表达质粒,研究其体内外表达对肿瘤细胞的生长抑制作用。方法:采用重组DNA技术构建IL24真核表达质粒pEGFPIL24。用脂质体法将重组质粒及空载体体外转染B16细胞,再经激光扫描共聚焦显微镜(LSM)观察其表达,用MTT法检测B16细胞的体外增殖能力,用流式细胞仪检测细胞周期。小鼠实体瘤模型研究基因转染对肿瘤的体内生长抑制作用。结果:pEGFPIL24转染B16细胞后,LSM可观察到IL24在细胞中的表达。转染IL24基因的B16细胞体外增殖能力明显受到抑制,细胞被阻滞在G2/M期。与对照组相比,IL24基因治疗组肿瘤在体内的生长受到明显抑制,P<0.05。结论:IL24基因转染的肿瘤细胞体外生长受抑。于荷瘤小鼠的瘤内注射pEGFPIL24可抑制肿瘤生长,提示IL24具有明显的体内外抗肿瘤作用。     

Apoptin对肝癌细胞的体内、外抑制效应

目的: 探讨Apoptin对人肝癌细胞株HepG2及C57BL/6小鼠H22移植瘤的抑制作用。方法：应用脂质体转染法将重组质粒pVAX1Apoptin转染HepG2细胞,应用Western blotting检测Apoptin蛋白在转染后HepG2细胞中的表达,应用MTT检测Apoptin对HepG2细胞生长的抑制作用,通过AO/EB染色法检测pVAX1Apoptin致肿瘤细胞凋亡作用。建立C57BL/6小鼠H22荷瘤模型,瘤内注射pVAX1Apoptin,观察pVAX1Apoptin对体内肿瘤的抑制作用。结果： Apoptin基因可在HepG2细胞中有效表达,pVAX1Apoptin能够诱导HepG2细胞凋亡,并显著地抑制其生长,48 h抑制率为69.28%。pVAX1Apoptin瘤内注射能够有效抑制移植肿瘤的生长,抑制率为46.71%;治疗后39 d小鼠生存率为40%,显著高于对照组(P<005)。结论： Apoptin转染可抑制HepG2细胞的生长,重组质粒pVAX1Apoptin瘤内注射对移植肿瘤有显著的抑制作用。     

沉默与过表达AEG-1重组载体的构建及其对细胞迁移的影响

目的:设计靶向AEG-l序列的人鼠通用的siRNA,并构建沉默AEG-1表达的shRNA和过表达AEG-1的重组表达载体,以改变肿瘤细胞中AEG-1的表达,探讨AEG-1对肿瘤细胞迁移的影响.方法:首先设计靶向AEG-1的siRNA并转染细胞后检测其转染效率和沉默活性;然后将筛选出的siRNA序列插入pScilence4.1载体中构建靶向沉默AEG-1的重组载体AEG-1-shRNA.利用巢式PCR克隆AEG-1序列,将其与pEGFPC3载体进行酶切、纯化、连接,并对转化子进行筛选和鉴定,构建过表达AEG-1重组质粒pEGFPC3-AEG-1.最后将重组载体AEG-1-shRNA与pEGFPC3-AEG-1转染肺癌A549细胞,利用细胞平板划痕实验和Transwel小室实验评价AEG-1表达变化对肿瘤细胞迁移能力的影响.结果:成功设计具有较高沉默活性的靶向AEG-1的siRNA,并成功构建了AEG-1-shRNA和pEGFPC3-AEG-1重组质粒,细胞划痕实验和Transwel小室实验结果表明AEG-1具有促进肿瘤细胞迁移能力的作用.结论:AEG-1具有促进肿瘤细胞迁移能力的作用,为后续进一步研究AEG-1与肿瘤发生发展的相关性及其分子机制奠定实验基础.     

Human B Cell Interleukin 10

Interleukin 10 (IL-10) is a novel lymphokine which exhibits strong DNA and amino acid sequence homology to BCRF1, an open reading frame in the Epstein-Barr virus genome. Using a wide panel of EBV positive and EBV negative cell lines, it has been shown that EBV positive B cell lines derived from patients with AIDS and Burkitt's lymphoma (AABCL) secrete large quantities of B cell IL-10, compared with EBV-positive B cell lines obtained from patients with undifferentiated lymphomas of Burkitt's and non-Burkitt's types. In contrast, EBV-negative B cell lines do not express IL-10 by Northern blot analysis, ELISA or even PCR. B cell IL-10 is confined to a narrow window in the B cell differentiation pathway, and whereas IL-10 expression is detected in mature and preplasmacytic stages, none of the pro-B, pre-B, or myeloma cell lines produce IL-10. EBV exerts direct effect on the production of B cell IL-10, and purified tonsillar B cells infected with EBV were triggered to secrete IL-10. The large amount of IL-10 secreted by B cells derived from AIDS-related lymphomas suggests that HIV-1 also exerts direct effect on IL-10 secretion. B cell IL-10 may function as autocrine growth factor for B cell lymphomas, and both IL-10 and BCRF1 seem to be involved in the pathophysiology of non-Hodgkin's lymphomas.     

无症状肾癌：附10例报告

自１９９１年９月至１９９４年５月，由Ｂ超检查发现了１０例无症状肾癌患者。所有患者均行根治性肾癌切除术，术后随访２～３４个月，平均随访１９个月。１例术后３个月发现腰椎转移，局部放疗后带瘤存活至今，其余患者均无瘤健在。在临床中广泛应用Ｂ超检查能发现无任何临床症状的肾癌患者，今后如进一步扩大普查范围，则可发现更多此类患者。     

无功能性恶性胰岛细胞瘤10例报道并文献复习

目的 :探讨恶性胰岛细胞瘤的临床特点和治疗方法。方法 :本组 10例全部经手术治疗。术后化疗 4例 ,所用药物包括表阿霉素 (E ADM)、丝裂霉素 (MMC)、5 -氟尿嘧啶 (5 FU)、顺铂 (DDP)。其中3例因肝转移行肝动脉插管化疗及碘化油栓塞 ;2例行局部放疗 ,1例瘤床照射 5 0Gy ,另 1例胰头部复发照射 4 5Gy。结果 :目前仍生存 5例 ,最长已生存 2 6年 ;死亡 5例 ,存活时间分别为 2年、2年、2年 3个月、3年、13年。结论 :手术是治疗恶性胰岛细胞瘤的首选治疗方法 ,化疗具有一定疗效。肝转移病例经导管肝动脉栓塞或栓塞加化疗是一种有效的治疗方法。放射治疗的价值有待进一步明确     

基于公共数据库分析CLDN10与MYH10在肾透明细胞癌中表达及预后的意义

目的 探讨CLDN10与MYH10在肾透明细胞癌中表达及预后的意义.方法 通过GEO数据库分析获取肾透明细胞差异基因,并使用DAVID数据库对差异基因进行富集分析和功能注释,通过HPA数据库获取CLDN10与MYH10在正常肾脏组织蛋白表达图谱,再通过GEPIA数据库获取CLDN10与MYH10表达差异及肾透明细胞癌患...     

人CC10基因在肺腺癌A549细胞中的表达

目的构建及鉴定人CC10基因真核细胞表达载体。方法采用RT-PCR法,从人肺组织的总RNA中扩增出273bp的人CC10cDNA片段,利用DNA重组技术将其克隆到真核细胞表达载体pcD-NA3.1中,脂质体法转染pcDNA3.1-hCC10到肺腺癌A549细胞,荧光免疫细胞化学法及Westernblot法检测CC10蛋白的表达。结果用酶切重组质粒并行序列鉴定,人CC10基因已经正确克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,体外染pcDNA3.1-hCC10的肺腺癌A549细胞中CC10蛋白表达明显增高。结论成功构建了CC10基因的真核细胞表达载体pcDNA3.1-hCC10,并获得表达     

羟基喜树碱治疗非小细胞肺癌的临床研究

目的:观察拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ抑制剂按时间顺序给药的临床疗效及不良反应。方法:观察组化疗方案为HP-EP-HP-EP,对照组为CAP-EP-CAP-EP。HCPT10～12mg/m2静推d1～5,DDP80mg/m2ivgtt分3天使用,VP-16100mg/m2ivgttd1,3,5,ADM40mg/m2静推d1,CTX400mg/m2静推d1,d8。上述方案每3周为1周期,交替使用,4个周期为一观察疗程。结果:观察组60例患者完成一个疗程具有可评价者54例,有效率51.85%;对照组60例患者完成一个疗程具有可评价者58例,有效率32.76%,两组间有显著性差异(P<0.05)。不良反应:两组均出现血象下降、消化道反应、脱发等,两组间无显著性差异(P>0.05)。结论:观察组疗效确切,不良反应可以耐受,说明拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ抑制剂按时间顺序给药有较好疗效,具有一定的临床应用价值。     

Characterization of Apoptosis in a Breast Cancer Cell Line after IL-10 Silencing

Background: Breast cancer is affected by the immune system in that different cytokines play roles in its initiationand progression. Interleukin-10 (IL-10), an anti-inflammatory cytokine, is an immunosuppressive factor involved intumorigenesis. The present study was conducted to investigate the gene silencing effect of a small interference RNA(siRNA) targeting IL-10 on the apoptotic pathway in breast cancer cell line. Methods: The siRNA targeting IL-10 anda glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) clone were introduced into MDA-MB-231 cells. Real-timePCR assays were used to determine IL-10 and GAPDH gene expression levels, in addition to those for protein kinaseB (AKT), phosphoinositide 3-kinase (PI3K), B-cell lymphoma 2 (Bcl2), caspase-3 and caspase-9 genes related toapoptosis. Results: Inhibition of IL-10 by the siRNA accelerated apoptosis and was accompanied by significantincrease in caspase-3 and caspase-9 and a significant decrease in PI3K, AKT and Bcl2 expression levels compared tothe non-transfected case. Conclusions: In conclusion, the production of IL-10 may represent a new escape mechanismby breast cancer cells to evade destruction by the immune system. IL-10 gene silencing causes down regulation of bothPI3K/AKT and Bcl2 gene expression and also increases the Bbc3, BAX caspase3, and caspase 3 cleavage expressionlevels. IL–10 might represent a promising new target for therapeutic strategies.     

Cytostatic Effects of Dolastatin 10 and Dolastatin 15 on Human Leukemia Cell Lines

We studied in vitro the cytostatic/cytotoxic effects of the peptides dolastatin 10 and dolastatin 15 on various human leukemia cell lines, peripheral blood mononuclear cells (PBMNC), and tonsillar mononuclear cells (tonsillar MNC). On leukemia cell lines both drugs proved to be highly potent cvtostatic agents; however, the cells were not killed even at concentrations of maximum growth-inhibition. Growth-suppression was not paralleled by induced differentiation as exposure to dolastatins did not significantly alter the immunophenotype, cytochemistry or morphology of HL-60 cells. Growth-inhibitory effects of dolastatins were reversed following the removal of the agents from the culture medium. The dolastatins inhibited proliferation of leukemia cell lines at lower concentrations than those which inhibited the growth of stimulated tonsillar MNC. The growth-inhibiting properties of the dolastatins regarding leukemia cell lines and their low toxicity towards normal MNC indicate that these agents might be promising new drugs for future experiments examining their effects on primary leukemic cells.