LncRNA SNHG14 调控 miR–656–3p/SIRT5 通路加重肝癌侵袭和迁移

〔摘 要〕 目的：探讨长链非编码 RNA（lncRNA）小核仁 RNA 宿主基因 14（SNHG14）对肝细胞癌（HCC）细胞侵袭 和迁移的影响及机制。方法：采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT–PCR）检测肝癌细胞 SNHG14 和 miR–656–3p 的表 达。与 sh–SNHG14,miR–656–3p 抑制剂,miR–656–3p 模拟物,pcDNA3.1–SIRT5 共转染后,检测 HepG2 和 MHCC97H 细 胞增殖、侵袭和迁移。然后用 qRT–PCR 测定 SNHG14、miR–656–3p 和 SIRT5 的表达水平,荧光素酶报告基因检测和 RNA 下调 SNHG14 与 miR–656–3p 之间的关系,以及 miR–656–3p 与 SIRT5 之间的关系。结果：HCC 细胞中 SNHG14 表达上 调,miR–656–3p 表达下调。抑制 SNHG14 和 miR–656–3p 过表达,可抑制 HepG2 和 MHCC97H 细胞增殖,侵袭和迁移。 SNHG14 直接作用于 miR–656–3p,SIRT5 是 miR–656–3p 的靶基因。miR–656–3p 抑制剂或 pcDNA3.1–SIRT5 可逆转 sh–SN HG14 对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用。结论：SNHG14 通过调节 miR–656–3p/SIRT5 轴促进肝癌细胞的侵袭和迁移。     

灰树花多糖对宫颈癌细胞增殖和转移的影响及机制

目的探讨灰树花多糖对宫颈癌Caski细胞增殖、凋亡、侵袭迁移及PI3K/AKT(磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B)信号通路的影响。方法 50、100、200μg/mL灰树花多糖处理Caski细胞48 h,通过MTT比色法、Transwell小室及Annexin V-FITC/PI双染法分别检测细胞增殖、侵袭迁移及凋亡率,Western blot检测AKT、p-AKT、PCNA(增殖细胞核抗原)、Cleaved caspase-3(裂解的半胱天冬酶3)和E-cadherin蛋白(上皮钙黏蛋白)表达。使用PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002(10μmol/L)单独或联合灰树花多糖(10μmol/L LY294002和200μg/mL灰树花多糖)处理Caski细胞48 h,检测各组细胞增殖、侵袭迁移、凋亡及AKT、p-AKT、PCNA、Cleaved caspase-3和E-cadherin蛋白表达。结果随着灰树花多糖质量浓度增加细胞增殖、侵袭和迁移能力降低,凋亡率升高,p-AKT和PCNA表达降低,Cleaved caspase-3和E-cadherin表达升高(P0.05)。LY294002可增强灰树花多糖对Caski细胞增殖、侵袭迁移、凋亡及p-AKT、PCNA、Cleaved caspase-3和E-cadherin表达的影响。结论灰树花多糖可通过阻断PI3K/AKT信号通路抑制宫颈癌Caski细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡。     

南蛇藤提取物联合miR-302通过PI3K/Akt信号通路调控食管癌细胞增殖、侵袭和迁移的研究

目的探讨南蛇藤提取物(COE)联合miR-302对人食管癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及对PI3K/Akt信号通路的调控作用。方法实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测人正常食管上皮细胞Het-1A及不同食管癌细胞株中miR-302表达情况。将miR-302mimic和阴性对照mimiccontrol转染至人食管癌TE-1细胞中,q RT-PCR检测质粒转染后TE-1细胞中miR-302的表达情况。单独或联合使用COE作用TE-1细胞,CCK-8实验检测TE-1细胞增殖情况,Transwell实验检测TE-1细胞侵袭和迁移能力,Westernblotting分析PI3K/Akt信号通路中相关蛋白表达情况。结果食管癌细胞株中miR-302的表达明显低于正常食管上皮细胞(P0.05)。转染miR-302mimic能够有效提高TE-1细胞中miR-302的表达(P0.05)。单独使用COE或过表达miR-302可抑制食管癌TE-1细胞增殖、侵袭和迁移(P0.05),下调PI3K和p-Akt蛋白表达;二者联合使用对TE-1细胞增殖、侵袭和迁移抑制及对PI3K和p-Akt蛋白表达下调作用更显著(P0.05)。结论 COE联合miR-302可协同抑制食管癌TE-1细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的激活有关。     

miR–612 抑制 CD151 基因过表达对 胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响

〔摘 要〕 目的：探讨微小核糖核酸（miR）–612 抑制白细胞分化抗原 151（CD151）基因过表达对胃癌细胞侵袭和迁移 能力的影响。 方法：培养人胃癌细胞株 SGC–7901,对其转染 miR–612 模拟物（miR–612 组）或 pcDNA3.1–CD151 过表达 载体（CD151 组）后,实时荧光定量逆转录 – 聚合酶链反应（RT–qPCR）检测 SGC–7901 细胞中 miR–612 和 CD151 信使 核糖核酸（mRNA）表达,用噻唑蓝（MTT）法、流式细胞仪和 Transwell 小室分别检测 SGC–7901 细胞增殖凋亡、侵袭迁移。 结果：与 miR–NC 组比较,miR–612 组细胞中 miR–612 表达水平明显升高,而 CD151 mRNA 表达水平明显降低（P ＜ 0.05）。 与 CD151 组比较,在转染 72 h 后 miR–612 ＋ CD151 组细胞增殖活力明显降低（P ＜ 0.05）,miR–612 ＋ CD151 组细胞凋 亡率明显高于 CD151 组（P ＜ 0.05）。Transwell 小室检测结果显示,与对照组比较,miR–612 组中侵袭细胞数和迁移细胞 数均明显减少,而 CD151 组中侵袭细胞数和迁移细胞数均明显增多,差异均具有统计学意义（P ＜ 0.05）;与 CD151 组比 较,miR–612 ＋ CD151 组中侵袭细胞数和迁移细胞数均明显减少,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。 结论：miR–612 可 通过靶向调控 CD151 表达抑制胃癌细胞增殖、侵袭迁移并促进细胞凋亡。     

基于TGF-β/smad信号通路探讨七方胃痛颗粒对人胃腺癌AGS细胞上皮间质转化过程的影响＊

目的 探究七方胃痛颗粒对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导人胃腺癌细胞AGS上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition， EMT）过程的影响及其潜在分子机制。方法 为了探究七方胃痛颗粒对TGF-β1处理的AGS细胞增殖、迁移和侵袭的影响，实验分为四组：AGS细胞对照组，EMT空白模型组，中药血清组，TGF-β/smad通路抑制剂组，分别利用CCK8、细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。此外，通过免疫荧光检测EMT过程中相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin、14-3-3ζ、Smad2和p-Smad2/3）的表达水平。结果 与AGS细胞对照组相比，TGF-β1诱导EMT过程，显著促进AGS细胞增殖、迁移和侵袭，下调了E-cadherin的表达，上调了N-cadherin、14-3-3ζ、Smad2和p-Smad2/3的表达；与EMT空白模型组相比，中药血清组、TGF-β/smad通路抑制剂组显著抑制了细胞增殖、迁移和侵袭，上调了E-cadherin的表达，降低了N-cadherin、14-3-3ζ、Smad2和p-Smad2/3的表达。结论 七方胃痛颗粒通过调控TGF-β/smad信号通路从而抑制人胃腺癌AGS细胞的EMT过程。     

双硫仑靶向 Wnt 和 AKT 信号通路降低卵巢癌 细胞的恶性程度及对顺铂的耐受性

〔摘 要〕 目的：探究双硫仑（DSF）对人卵巢癌细胞恶性程度及其对化疗药物敏感性的影响及相关机制。方法： 使用不同浓度 DSF（0.1 μmol·L-1 、1 μmol·L-1 、5 μmol·L-1）处理卵巢癌细胞 SK–OV–3 和 A278,四甲基偶氮唑盐 微量酶反应比色法（MTT）测定细胞活性。选取 DSF 有效浓度（5 μmol·L-1）处理细胞,通过软琼脂糖克隆形成实验、 微球形成实验检测干细胞特性,Transwell 实验检测细胞迁移,实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测 Wnt 靶基 因的信使核糖核酸（mRNA）表达,双荧光素酶法检测 Wnt 通路的转录活性,免疫印迹实验检测 PI3K/AKT/mTOR 和 RAF/MEK/ERK 的激活情况。采用 DSF（5 μmol·L-1）和顺铂联合处理 SK–OV–3 和 A2780 细胞,并使用 MTT 实 验、软琼脂糖克隆形成实验和微球形成实验检测 DSF 对顺铂药物敏感性的影响。结果：与对照组相比,DSF 处理能 够显著降低卵巢癌细胞的增殖能力（P ＜ 0.01）,降低软琼脂糖中癌细胞克隆形成能力（P ＜ 0.01）,抑制卵巢癌细 胞在悬浮培养下的微球形成（P ＜ 0.01）以及细胞的迁移能力（P ＜ 0.01）,从而降低卵巢癌细胞的恶性程度。在与 顺铂药物联合使用情况下,DSF 联合用药显著增强卵巢癌细胞对顺铂药物的敏感性（P ＜ 0.01）。机制方面的研究 表明 DSF 处理显著降低卵巢癌细胞中 Wnt 信号通路活性,同时显著抑制卵巢癌细胞中 RAF/MEK/ERK 和 PI3K/AKT/ mTOR 通路的激活。结论：DSF 处理可显著降低卵巢癌细胞的恶性程度,同时增强其对传统化疗药物顺铂的敏感性。 DSF 抑癌作用可能是通过抑制 Wnt、RAF/MEK/ERK 和 PI3K/AKT/mTOR 等癌症促进信号通路的活性来实现的。     

肉豆蔻醚抑制结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用及机制研究＊

目的 探讨肉豆蔻醚（myristicin）对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用及机制。方法 MTT法检测肉豆蔻醚在体外对结肠癌细胞HCT116和LOVO增殖的影响；Annexin V/PI双染法检测肉豆蔻醚对HCT116和LOVO细胞凋亡的影响；划痕试验和Transwell实验分别检测肉豆蔻醚对HCT116和LOVO细胞迁移和侵袭的影响；western blot实验检测肉豆蔻醚对p-MEK1/2、p-ERK1/2、CyclinD1、E-cadherin、MMP-2以及MMP-9表达的影响。结果 肉豆蔻醚作用后，HCT116和LOVO细胞增殖、迁移和侵袭受到显著抑制，细胞出现显著凋亡；肉豆蔻醚作用后，HCT116和LOVO细胞内MEK1/2、ERK1/2、CyclinD1、MMP-2以及MMP-9蛋白表达水平显著降低，而E-cadherin蛋白表达水平显著增高。结论 本研究发现肉豆蔻醚在体外具有抑制结肠癌细胞生长的作用，为临床用药提供一定的实验依据，为肿瘤治疗提供新的靶点和策略。     

葛根素对PI3K/AKT通路介导PASMCS凋亡的影响

探讨葛根素(puerarin,Pue)对缺氧抑制的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)凋亡的影响,并研究细胞外信号PI3K/AKT通路是否参与了Pue诱导PASMCs凋亡的过程。以血清饥饿组(SD组)为对照组,通过噻唑蓝比色法(MTT)、Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒和蛋白免疫印迹法检测Pue对大鼠PASMCs凋亡情况的影响。采用蛋白免疫印记法检测PI3K/AKT通路是否参与了Pue诱导缺氧抑制的PASMCs凋亡的进程中。结果显示,①常氧条件下Pue对PASMCs细胞凋亡无影响,缺氧可抑制PASMCs凋亡,常氧及缺氧条件下Pue对TNF-α表达无影响。Pue可以逆转缺氧诱导的Bcl-2(P<0.01)表达上调以及Bax(P<0.01)表达下调。②常氧情况下Pue对P-AKT的表达没有影响,LY294002与Pue均可抑制缺氧诱导的Bcl-2,P-AKT表达上调以及Bax表达下调,与缺氧单独加Pue或缺氧单独加入LY294002对比,缺氧+Pue+LY294002组Bcl-2,Bax,P-AKT表达变化更显著。结果表明,Pue可诱导缺氧抑制的PASMCs凋亡,并且可能是通过PI3K/AKT通路调控的。     

褐藻素通过PI3K/AKT信号通路抑制食管鳞癌细胞迁移和侵袭

目的 研究褐藻素对人食管鳞癌EC109和EC9706细胞迁移和侵袭的影响,并初步探究其作用机制。方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度的褐藻素对食管鳞癌细胞活性的影响;采用划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验分别考察褐藻素对食管鳞癌细胞迁移和侵袭能力的影响;使用Western blotting实验检测褐藻素对细胞中PI3K、p-PI3K (Tyr607)、AKT、p-AKT (Ser473)、MMP-2、MMP-9、N-Cadherin和E-Cadherin蛋白表达的影响。结果 褐藻素对食管鳞癌细胞EC109和EC9706的生长活性具有抑制作用,其IC₅₀分别为(51.49±4.15)和(52.44±3.38)μmol·L^-1;此外,褐藻素能够明显地抑制食管鳞癌细胞的迁移和侵袭,并降低MMP-2、MMP-9和N-Cadherin的蛋白水平,同时促进E-Cadherin的蛋白表达。进一步研究发现,褐藻素对p-PI3K (Tyr607)和p-AKT(Ser473)具有明显地抑制作用,但不改变PI3K和AKT总蛋白的表达。结论 褐藻素能够显著地抑制食管鳞癌细胞的迁移和侵袭,其分子机制可能是通过下调PI3K/AKT信号通路实现。     

龙葵碱体外诱导人结肠癌SW480细胞凋亡及其对相关因子的影响

  目的：观察龙葵碱对人结肠癌SW480细胞凋亡及ERK/MEK、PI3K/AKT信号通路中相关因子的影响。  方法：SW480结肠癌细胞培养后共设5组,分别为空白对照组、培养液对照组及龙葵碱不同剂量(4、8、16 mmol/L)组,各组进行相应干预。采用MTT法检测龙葵碱对结肠癌细胞株的增殖作用,流式细胞法检测龙葵碱对结肠癌细胞凋亡的影响,RT-PCR及Western blotting法检测龙葵碱处理的SW480细胞中ERK/MEK和PI3K/AKT的表达水平。  结果：MTT生长曲线显示,龙葵碱能抑制结肠癌SW480细胞株增殖。流式细胞仪检测显示,龙葵碱能够促进SW480的凋亡。RT-PCR结果显示,龙葵碱可以抑制ERK1/2 mRNA的表达。Western blotting结果表明,龙葵碱可以降低MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路中相关蛋白的表达。  结论：龙葵碱可以抑制结肠癌细胞增殖,其对肿瘤的诱导凋亡作用可能是通过MEK/ERK和PI3K/AKT信号途径实现的。     

《老老恒言》论老年养生

简要论述了《老老恒言》中有关老年养生的思想和方法 ,认为饮食以调理脾胃为要 ,应注意饮食有节、五味调和、清淡为补 ;起居以养静为要 ,应注意调顺四时、起居有常、静养与导引相结合 ;养性以安命为要 ,应注意清心寡欲、修心养性     

耳鸣(肾精亏损型)临床资料研究

[目的]对2007年11月至2008年11月就诊的主观性耳鸣患者246例,排除其他中医证型,主要研究肾精亏损型耳鸣患者耳鸣的临床特征,变化规律及耳鸣产生的影响等.[方法]选择肾精亏损型耳鸣患者,记录临床症状及体征,采用电测听及耳鸣匹配、听觉脑干诱发电位(ABR)等方法检查,并将资料进行统计分析.[结果]患者年龄以51～60岁最多见,其次为61～70岁.耳鸣响度的自我评分与响度匹配值之间无关联.大多数病例的耳鸣病程在一年之内.大部分患者受耳鸣困扰的程度在中度以下.ABR测试结果听力正常者占25%,右侧和左侧听神经传导至脑干功能障碍患者分别占13%和19%,双侧听神经传导功能障碍占16%.[结论]临床耳鸣患者多数为肾精亏损型,年龄以51～60岁最多见,男女比例相当,大部分患者听神经传导障碍和脑干功能障碍,高音调耳鸣患者居多.     

珍珠母超微粉蛋白及寡肽对小鼠镇静安眠作用比较

目的比较珍珠母超微粉蛋白、寡肽对小鼠镇静安眠作用。方法利用PCPA制造小鼠失眠模型,观察小鼠的自主活动情况,ELISA法测小鼠血中ATCH含量并计算脑及脑系数。结果阳性对照组、寡肽组小鼠的自主活动次数显著降低,小鼠血中ACTH的含量增加,但脑干系数无影响。结论超微粉寡肽类成分(MCP)镇静安眠活性最强,为镇静安眠主要活性部位,调节ACTH可能是其镇静安眠机制。     

针灸治疗椎动脉型颈椎病的取穴规律分析

目的:探寻椎动脉型颈椎病针灸取穴规律。方法:检索CNKI、VIP,建立椎动脉型颈椎病针灸取穴数据库,采用SPSS17.0统计软件统计描述。结果:治疗椎动脉型颈椎病的针灸穴位共计72个,使用频次为1005次;所用腧穴归属为督脉、足少阳胆经、经外奇穴、足太阳膀胱经及足阳明胃经频次最多,其累积频率达82.29%;其中风池穴的频率为19.11%;夹脊穴的频率为17.13%;百会穴的频率为12.3%,三穴累积频率达64.28%。结论:针灸治疗本病,以疏通局部经络,调节阴阳气血,临床选取督脉、足少阳胆经、奇穴以及风池、夹脊、百会三穴治疗最多。     

股骨头坏死病因的相关因素分析

目的:基于中国股骨头坏死数据库(China osteonecrosis of the femoral head database,CONFHD)资料分析股骨头坏死(Osteonecrosis of the femoral head,ONFH)病因的相关因素。方法:纳入CONFHD中2016年7月至2018年12月收录的病例资料,由数据库工程师从数据库中导出资料,包括患者的性别、年龄、病因、受伤类型、饮酒史(饮酒年限、饮酒频率、饮酒量)、激素应用史(激素应用时间、原发病类型、激素应用途径、激素种类)。结果:本研究共纳入病因资料完整的ONFH患者1290例。创伤性239例(18.53%),酒精性692例(53.64%),激素性359例(27.83%)。男1011例(78.37%),女279例(21.63%)。男性患者中创伤性138例(13.65%)、酒精性653例(64.59%)、激素性220例(21.79%),女性患者中创伤性101例(36.20%)、酒精性39例(13.98%)、激素性139例(49.82%);男性中酒精性比例最高,女性中激素性比例最高。1290例中,年龄≤30岁169例,激素性71例(42.01%);年龄31~40岁254例,酒精性146例(57.48%);年龄41~50岁324例,酒精性202例(62.35%);年龄51~60岁319例,酒精性185例(58.00%);年龄61~70岁158例,酒精性67例(42.41%);年龄≥71岁66例,创伤性和酒精性均为25例(各占37.88%)。受伤类型资料完整的创伤性ONFH患者144例,股骨颈骨折126例(87.50%)。饮酒史资料完整的酒精性ONFH患者544例,男性537例(98.71%),年龄41~50岁者172例(31.62%),饮酒年限6~10年149例(27.39%),饮酒次数5次≤每周饮酒<6次与每周饮酒≥7次均为127例(各占23.35%),每周饮酒量3001~3500 mL 222例(40.81%)。激素应用史资料完整的激素性ONFH患者210例,男112例(53.33%)、女98例(46.67%);激素应用时间14~10950 d,中位数365 d;原发病中免疫系统疾病50例(23.81%),比例最高,其余依次为皮肤、泌尿及血液系统等疾病;激素应用途径,口服125例(59.50%);激素应用种类,强的松68例(32.38%),比例最高,其余依次为地塞米松、甲强龙、泼尼松龙等。结论:酒精、激素、创伤仍是排在前3位的ONFH发病诱因;酒精性ONFH患者,多数饮酒时间>5年,每周饮酒次数>5次;激素性ONFH患者,激素应用时间中位数为365 d,应用途径主要是口服,排在前3位的药物为强的松、地塞米松、甲强龙,原发病主要为免疫、皮肤、泌尿、血液系统疾病;创伤性ONFH患者受伤类型以股骨颈骨折为主。     

老年股骨颈骨折术后的护理

股骨颈骨折是发生于老年人的常见骨科病，以女性多见。因老年人骨质疏松，有机质少，应变力差，所以只需较小扭转暴力就能引起骨折。骨折后，由于骨折部位血供差，骨折不愈合的可能性大，加之患者年老体弱、长期卧床，易发生危及生命的并发症，因此恰当的护理非常重要，现将护理体会介绍如下。     

《中华人民共和国药典》(一部)中石斛药材的演变

目的:探讨《中华人民共和国药典》(一部)中石斛药材的演变。结果:1963年版《中华人民共和国药典》中石斛来源为兰科石斛属Dendrobium植物的新鲜或干燥茎;1977—2000年版《中华人民共和国药典》石斛来源为金钗石斛、环草石斛、马鞭石斛、黄草石斛或铁皮石斛;2005年版《中华人民共和国药典》石斛来源为金钗石斛、铁皮石斛或马鞭石斛;2010年版《中华人民共和国药典》石斛的来源为金钗石斛、鼓槌石斛或流苏石斛,铁皮石斛也从石斛项下都单列出来。讨论:石斛药材基源的变化、铁皮石斛的单列体现出石斛用药的科学性。但铁皮石斛与石斛的性味、功效一致,值得商榷;DNA条形码、分子标记技术等新方法可以应用到石斛药材的鉴别中。     

病性变化和转化的哲理数学原理

病性的变化和转化以及疾病的传变是中医病理学的2个核心问题。它们可分别从阴阳五行数学的公理1和公理2、3得到圆满的解释。病性变化,其症结在于主导属性明晰度的大小发生变化;病性转化,其症结则在于主导属性明晰度的正负号发生变化。     

姜黄根茎不同部位的理化指标分析

目的：研究姜黄根茎不同部位外在物理性状和内在化学成分的差异,为姜黄药材的等级划分提供数据基础。方法：在姜黄道地产区收集样品,每份样品按母姜、子姜一级、子姜二级进行分类,分别测定根茎的长度、宽度、厚度、质量、颜色值［明亮度（L*）、红绿度（a*）和黄蓝度（b*）］及双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素、挥发油含量。结果：不同部位姜黄根茎的长度、宽度、厚度、质量、折干率差异较大,其中宽度、厚度、质量在鲜品和干品间差异均有统计学意义;子姜二级的折干率显著低于母姜与子姜一级。姜黄不同部位颜色值表现出相同的变化趋势,姜黄鲜品断面颜色值a*的变异系数最大,颜色值b*次之,颜色值L*最小,姜黄干品粉末颜色值b*的变异系数最大,颜色值L*、a*变异系数较小。姜黄不同部位的姜黄素类成分含量存在差异,子姜一级的双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素含量均高于母姜和子姜二级。结论：综合以上指标,姜黄子姜一级的理化品质最佳。     

辨证与辨病相结合辨治乳腺增生病

探讨乳腺增生病中医辨证分型的客观依据,泌免疫变化与中医辨证分型的相关性进行了总结和研究,医药辨治乳腺增生病的新思路。对乳腺增生病的红外光扫描诊断、病理分类、内分以期能够使微观医学与宏观辨证相结合,以开拓中医药辨治乳腺增生病的新思路。