干细胞移植治疗肢体缺血的进展

周围血管病变是导致肢体缺血的主要原因,近年来干细胞移植改善肢体缺血的基础与临床研究逐渐深入。本文从骨髓单核细胞移植、外周血干细胞移植和脐带血干细胞移植这三个方面,对目前干细胞移植治疗肢体缺血作一综述。     

二次外周血干细胞移植改善兔肢体缺血的实验研究

目的建立兔肢体缺血模型,观察二次外周血干细胞移植对肢体缺血的治疗效果。方法连续4 d皮下注射7.5μg/kgG-CSF进行干细胞动员,分离外周血单个核细胞制成干细胞悬液。制备兔肢体缺血模型,将干细胞悬液分10～12个点注射于手术切口两侧肌肉,实验组动物于移植后第18天重复进行干细胞动员并在第22天进行第二次干细胞移植。结果术后多普勒超声显示手术肢体的血液供应阻断,模型制备成功。1周后检测侧支循环开始建立,实验6周后,二次移植兔缺血部位肌肉毛细血管密度平均为26.1个,单次移植兔为20.9个,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论二次外周血干细胞移植能更好地改善肢体缺血。     

自体骨髓干细胞移植疗法治疗106例下肢严重缺血患者的临床疗效分析

目的:探讨自体骨髓干细胞移植治疗下肢严重缺血患者的临床疗效。方法:对我院2009年2月～2012年3月收治的106例下肢严重缺血患者,从髂骨处抽取自体骨髓血,分离出单个核细胞,再制成细胞悬液。通过股动脉插管,在球囊阻断动脉血流的情况下将干细胞悬液注射到缺血的下肢动脉。结果:治疗后患者的疼痛明显减轻,与治疗前相比差异具有统计学意义(MH=95,P<0.05);治疗后冷感评分明显低于治疗前(P<0.05);而跛行距离、踝肱指数、经皮氧分压均较治疗前明显增加(P<0.05)。所有患者术后随访8个月,未见明显不良反应发生。结论:自体骨髓干细胞移植是治疗下肢严重缺血的一种简单、安全、有效的手段,值得临床广泛推广和应用。     

骨髓基质干细胞联合 rhVEGF治疗肢体缺血的实验研究

目的：研究骨髓基质干细胞移植联合 rhVEGF 对兔肢体缺血的治疗效果。方法手术制作兔后肢缺血模型,之后将骨髓基质干细胞和/或 rhVEGF 注射到局部缺血组织中,对照组注射生理盐水。结果移植后2周、4周各组微血管计数比较,均为 P ﹤0.05,差别有统计学意义。移植后2周、4周缺血组织中 VEGF 蛋白的变化：各组间比较,P ﹤0.05,差别有统计学意义。结论骨髓基质干细胞移植联合 rhVEGF 治疗肢体缺血效果显著,骨髓基质干细胞移植促进 VEGF 分泌,而后者反过来促进干细胞向血管内皮细胞分化,形成新生微血管,加快侧枝循环网络的重建,增加缺血组织血流灌注。     

兔缺血心肌中移植自体骨髓基质干细胞的治疗作用

目的:验证骨髓基质干细胞(MSC)移植到缺血心肌中后是否在心肌的微环境中可以向心肌细胞分化,提高心功能.方法:采用自体MSC体外培养扩增移植.在通过结扎冠状动脉造成急性心肌缺血后,被5溴-2脱氧尿苷(BrdU)标记后的MSC移植到自体的缺血心肌中.结果:移植4wk后,MSC向肌细胞分化,表达出α-横纹肌肌动蛋白(sarcomericac-tin)和存在于闰盘中的connexin43,移植后心肌表达VEGF增加[(684±86)fg/Lvs(515±51)fg/L,P<0.05],缺血心肌局部血管密度增加[(22.9±6.6)/HPvs(19.0±5.9)/HP,P<0.05],左室收缩功能明显强于对照组[LVSP:(15.08±0.84)kPavs(13.26±0.68)kPa;LVEDP:(1.53±0.28)kPavs(19.03±0.41)kPa;+dp/dtmax:(+615.77±48.69)kPa/svs(+435.75±58.25)kPa/s;-dp/dtmax:(-401.17±46.23)kPa/svs(-338.25±50.72)kPa/s,P<0.05].结论:MSC移植可治疗心肌缺血,并且没有免疫排斥反应.     

骨髓干细胞移植与缺血性心脏病

缺血性心脏病是指由于冠脉血管狭窄或堵塞引起心脏氧供与氧需的失衡,并由此导致心肌细胞的缺失及心肌瘢痕形成,最终致心室功能衰竭的一类疾病。已有的治疗措施尚不能做到再生坏死的心肌细胞,也不能阻止左室的重构。学者们注意到干细胞具有的可塑性,打开了梗死心肌再生的窗口,心脏的细胞治疗(CCT)技术已经得到开展,该方法把细胞移植到梗死心肌部位,以增加或者维持一定数量的心肌细胞,从而改善血供以及增加损伤心肌的收缩功能。因此,CCT被建议做为治疗终末期心力衰竭的选择[1]。目前,用于移植的干细胞主要有胚胎干细胞、骨骼肌干细胞、骨髓…     

外周血干细胞移植的临床应用

外周血干细胞移植(PBSCT)在治疗血液系统肿瘤方面越来越受到重视,具有逐渐替代骨髓移植的趋向。PBSCT具有许多优点：对于供体,采集HSC不需麻醉,采集过程简单,不需输血,不需要多部位骨髓穿刺;对于受体,可加速粒细胞和血小板恢复。PBSCT不但可替代自体骨髓移植,且可替代异体骨髓移植。故外周血干细胞移植是一项有广泛前途的治疗措施。     

外周血干细胞移植对动物肢体局部化脓性感染的影响

目的:探讨自体外周血干细胞移植对动物下肢动脉缺血组织手术切口的局部抗化脓性感染效果。方法:对正常动物和糖尿病模型动物分别进行外周血干细胞动员,然后经手术形成下肢动脉缺血模型后分别进行干细胞移植的分组观察。2周内观察动物手术后切口出现的化脓性感染情况。结果:只进行外周血干细胞动员的动物,手术后右下肢局部发生化脓性感染率比较高;而外周血干细胞动员后再进行外周血干细胞移植的动物,感染率明显下降(P<0.05)。糖尿病模型实验动物的这种感染率更高,在不使用抗菌素的情况下,手术后右下肢大多出现了感染(P<0.05)。结论:外周血干细胞移植可明显提高动物缺血肢体的局部抗化脓性感染能力,而对于糖尿病动物,这种抗感染能力则会明显下降。     

自体骨髓干细胞移植合中药治疗下肢动脉缺血

目的:研究自体骨髓单个核细胞移植与中药合用对重症下肢缺血的治疗作用.方法:采用自体骨髓,并分离单个核细胞,总量达到1×109以上,采用缺血肢体多点注射法移植,移植后口服益气活血中药.观察患者手术前后肢体疼痛评分、冷感评分、踝肱比(ABI)以及溃疡创面情况,评价治疗效果.结果:治疗后1周患者肢体疼痛评分及冷感评分明显下降,两周时又有回升,术后1个月再下降.ABI在术后逐渐升高,术后1个月平均升高0.23.3例有溃疡患者创面明显缩小,2例有严重坏死者术后1个月行截肢,创面一期愈合.结论:自体骨髓单个核细胞移植合用中药可以改善下肢缺血患者的临床症状及体征.     

骨髓干细胞动员与移植治疗心肌梗死的比较

目的比较骨髓干细胞动员与骨髓单个核细胞移植对兔心肌梗塞的治疗作用,探讨更有效、更适用的干细胞治疗心肌梗塞的方法.方法将30支新西兰白兔采用结扎前降支的方法制作心肌梗塞模型,随机分为动员组、移植组和对照组,动员组(n=10)心梗后3h开始皮下注射粒细胞集落刺激因子(G-CSF)30μg/(kg·d),连续使用5 d,第5天抽取静脉血约10mL,分离单个核细胞(mononudear cells,MNCs)用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(bromodeoxyuridine,Brdu)标记后,经静脉注入动物体内.移植组(n=10)心梗后7～10 d,抽取骨髓3～5mL,分离MNCs用Brdu标记,然后开胸将细胞移植至梗死区,对照组(n=10)不采取任何治疗措施.心梗后1周及5周采用超声心动图(UCG)检查了解心脏功能变化,5周时作血液动力学测定,取心脏作免疫组织化学鉴定.结果心梗后5周,动员组左室射血分数(EF)与1周时相比明显增加,移植组无变化,对照组显著下降.5周时动员组及移植组左室舒张末压(LVEDP)、+dp/dtmax和-dp/dtmax与对照组相比均有显著变化.动员组及移植组在心肌梗死区均发现有Brdu标记的阳性细胞,两组梗死区血管密度明显高于对照组,但均未发现有新生的平滑肌细胞及心肌细胞.结论骨髓干细胞动员治疗心肌梗死,能通过促进梗死区血管新生,明显改善心脏功能,骨髓单个核细胞移植可避免心功能的恶化,但在改善心功能方面的作用有限,骨髓干细胞动员可能为心肌梗塞的治疗提供一种更适用的无创性的手段.     

Hematopoietic stem cell transplantation: bone marrow vs. mobilized peripheral blood

Peripheral blood stem cells have largely replaced bone marrow as the source of cells in autologous transplantation because of more rapid neutrophil and platelet recovery and faster immune reconstitution. Allogeneic peripheral blood stem cells similarly lead to faster hematologic recovery: however, their effects on graft-vs.-host disease, relapse, survival, and immune reconstitution have been less certain. Eight randomized trials have been published to date comparing the clinical outcomes of allogeneic-related donor bone marrow transplantation (BMT) vs. PBSCT and will be reviewed. In addition, comparisons between the two stem cell sources in unrelated donor transplantation and the increasingly utilized nonmyeloablative transplantation will be discussed.     

外周血干细胞移植患者骨髓基质细胞粘附功能的变化

目的 :探讨骨髓基质细胞在外周血干细胞移植 (PBSCT)预处理前后粘附功能的改变。　方法 :采用细胞粘附试验和细胞粘附阻断试验 ,观察 2 1例PBSCT患者经单用化疗 (单化 )或放疗、化疗 (放、化 )两种预处理方案后不同时相点骨髓基质细胞贴壁层对骨髓单个核细胞粘附能力的影响。　结果 :基质细胞贴壁层对骨髓单个核细胞的粘附能力 ,放、化预处理后第 30、90天显著低于移植前 (P <0 .0 1 ) ;单化预处理后第 30天显著低于移植前 (P <0 .0 5～ 0 .0 1 )。　结论 :PBSCT患者术前预处理后骨髓基质细胞粘附功能均有不同程度的降低 ,单化组的损伤较轻 ,放、化组损伤较重。预处理对骨髓微环境基质细胞粘附功能的损伤可能是影响移植后造血和免疫功能重建的重要因素之一。     

自体造血干细胞移植治疗难治性恶性淋巴瘤

目的　观察自体造血干细胞移植 (AHSCT)对难治性恶性淋巴瘤的疗效及不良反应。方法　 4例对CHOP方案为主化疗反应不良的恶性淋巴瘤 ,以HD -VCCA方案化疗加TLI预处理的自体外周血干细胞移植 (APBSCT)治疗。自体骨髓移植 (ABMT)两例 ,CTX加VP 16联合rhG CSF动员外周血干细胞的APBSCT者两例。干细胞 4℃保存 ,72h内回输。结果　 4例移植期间中性粒细胞计数恢复到≥ 0 .5× 10 9/L的时间 ,血小板达≥ 5 0× 10 9/L的时间和网织红细胞比例达≥ 0 .5 %的时间 ,APBSCT和ABMT分别平均为 9.5d和 11d ; 14d和 2 1.5d ; 9d和 16 .5d。不良反应主要为消化道反应 ,移植后血清卵泡刺激素 (FSH)和黄体生成素 (LH)水平升高 ,雌二醇 (E2 )水平降低的继发性闭经 2例。 4例已无病生存 8～ 5 7个月。结论　干细胞不冷冻的AHSCT治疗难治性恶性淋巴瘤安全、简便、有效。APBSCT较ABMT造血功能恢复快 ,不良反应小。预处理对性腺有损伤。     

Autologous bone marrow stem cell transplantation in critical limb ischemia: a meta-analysis of randomized controlled trials

Background  Amputation-free survival (AFS) has been recommended as the gold standard for evaluating No-Option Critical Limb Ischemia (NO-CLI) therapy. Early-phase clinical trials suggest that autologous bone-marrow derived cells (BMCs) transplantation may have a positive effect on patients with NO-CLI, especially decreasing the incidence of amputation. However, the BMCs therapeutic efficacy remains controversial and whether BMCs therapy is suitable for all CLI patients is unclear.

Methods  We conducted a meta-analysis using data from randomized controlled trials (RCTs) by comparing autologous BMCs therapy with controls in patients with critical limb ischemia, and the primary endpoint is the incidence of amputation. Pubmed, EBSCO and the Cochrane Central Register of Controlled Trials (to approximately July 25, 2012) were searched.

Results  Seven RCTs with 373 patients were enrolled in the meta-analysis. Because serious disease was the main reason leading to amputation in one trial, six studies with 333 patients were finally included in the meta-analysis. Pooling the data of the final six studies, we found that BMCs therapy significantly decreased the incidence of amputation in patients with CLI (odds ratio (OR), 0.37; 95% confidence interval (CI), 0.22 to 0.62; P=0.0002), and the efficacy had not significantly declined within 6 months after BMCs were transplanted; OR, 0.33; 95% CI, 0.16 to 0.70; P=0.004 within 6 months and OR, 0.30; 95% CI, 0.11 to 0.79; P=0.01 within 3 months. The rate of AFS after BMCs therapy was significantly increased in patients with Rutherford class 5 CLI (OR 3.28; 95% CI, 1.12 to 9.65; P=0.03), while there was no significant improvement in patients with Rutherford class 4 (OR 0.35; 95% CI, 0.05 to 2.33; P=0.28) compared with controls. The BMCs therapy also improved ulcer healing (OR, 5.83; 95% CI, 2.37 to 14.29; P=0.0001).

Conclusions  Our analysis suggests that autologous BMCs therapy has a beneficial effect in decreasing the incidence of amputation and the efficacy does not decrease significantly within 6 months after BMCs transplantation. Patients with Rutherford class 5 are suitable for BMCs therapy, while the efficiency in patients with Rutherford 4 needs further evaluation.

     

造血干细胞移植患者骨髓基质细胞集落形成能力的观察

目的　观察外周血干细胞移植预处理对患者骨髓基质细胞集落形成能力 (CFU - F)的影响。方法　采用Dexter型方法 ,检测 2 1例外周血干细胞移植患者经单化或化放结合两种预处理方案 ,观察前后不同时间骨髓基质细胞集落形成能力。结果　放化组骨髓基质细胞集落形成能力于预处理后各时相点均显著低于预处理前和单化组预处理后(P<0 .0 1) ;单化组于预处理后各时相点的 CFU- F显著低于预处理前 (P<0 .0 1) ,至预处理后第 90天仍未恢复。结论　外周血干细胞移植患者预处理后骨髓基质细胞均有不同程度的损伤 ,放化组基质细胞的损伤重于单化组 ,恢复较缓慢。     

自体骨髓干细胞移植治疗终末期肝病临床研究

目的 探讨自体骨髓干细胞(BMSC)移植对肝衰竭及肝硬化失代偿期患者的治疗作用.方法 24例肝硬化失代偿期及肝衰竭患者无菌抽取骨髓65～95ml,Kai W01 lert方法分离纯化BMSC,然后经肝动脉或脾动脉导管注入肝脏或脾脏.术后定期检测肝功能和凝血功能,并观察同期的症状体征和不良反应情况.结果 术后2周内所有血清学指标均无显著性改变;与术前比较,术后4周,清蛋白(g/L)为30.91±4.00 vs 27.75±5.40(P<0.05),至12周,升至32.00±6.18(P<0.01);前清蛋白(mg/d1)为18.28±3.78 vs 15.63±3.16(P<0.01);总胆红素(μmmol/L)为36.94±21.15 vs 125.01±150.05;总胆汁酸(μmmol/L)为41.63±33.91 vs 78.00±59.80,凝血酶时间(s)及纤维蛋白原(g/L)分别为14.81±1.69 vs 22.40±7.07和2.63±0.62 vs 1.76±0.95,P均<0.05;球蛋白及肝酶指标均无明显变化(P>0.05).术后1周食欲、体力改善分别为91.67%和87.5%;第2周62.5%肝病面容好转,有1例蜘蛛痣明显减少;术后12周的总生存率为62.5%,其中移植2周后死亡及失访者共9例,其原因为慢性肝衰竭合并白发性细菌性腹膜炎或DIC或肝肾综合征.BMSC肝内灌注术中有2例发现小肝癌,即改予脾内灌注BMSC并术后行经皮肝穿刺肝癌瘤内无水酒精注射,其中1例AFP由80 ng/ml降至9 ng/ml,恢复良好,另1例手术后11周死于肝肾综合征.所有患者均未发现细胞移植并发症.结论 自体BMSC移植治疗终末期肝病近期安全有效,患者肝功能、凝血功能改善明显,生存质量提高,但应严格掌握适应证.     

骨髓干细胞移植治疗股骨头坏死疗效分析

目的:观察经动脉自体骨髓干细胞移植治疗股骨头坏死的临床疗效。方法:40例股骨头坏死患者在干细胞动员后,从髂后上嵴处抽取自体骨髓血200～400 ml,经沉淀、离心、分离等处理后制备20～30 ml干细胞悬浊液。并用流式细胞仪检测CD34+,在数字减影血管造影术下(DSA)行股动脉穿刺,将导管超选插入闭孔动脉、旋股内外动脉,将细胞悬液缓慢灌注入动脉内。移植后随访观察患者髋关节疼痛程度、行走距离、髋关节活动度及影像学改变。结果:全部患者观察随访6～18个月(平均3.6个月),髋关节疼痛有不同程度的缓解37例(92.5%),行走间距延长23例(57.5%),关节功能改善13例(32.5%)。结论:骨髓干细胞移植治疗创伤性股骨头坏死是一种创伤小、疗效高、安全有效的治疗方法。     

Autologous peripheral blood stem cell transplantation in the patients with hematologic malignancies and solid tumors

Objective To evaluate the long-term therapeutic effects of autologous peripheral blood st em cell transplantation (auto-PBSCT) on the treatment of hematological and soli d tumors. Methods Fifty-one patients were recruited in this auto-PBSCT study, in which several p otentially important parameters were studied including the optimal time for stem cell co llection, the dose of stem cell reinfusion, the time of hematopoietic reconsti tution, the disease free survival (DFS) and overall survival (OS), complication s related to transplantation, and maintenance chemotherapy after auto-PBSCT. Results After APBSCT, 3-year and 5-year survival rates of NHL were 83.3%; those of AM L were 74.7%; those of MM were 37.9% and 19%; those of ALL were 40% and 0% res pectively. Hematopoietic reconstitution was greatly promoted by granulocyte col ony stimulating factor (G-CSF). The mean time for patients’ neutrophil to reco ver up to &gt;0.5×10(9) /L after APBSCT was 11.14 days in the group of the patien ts receiving G-CSF in contrast to 17.6 days in the group receiving no G-CSF. The most common complications of transplantation were fever, liver dysfunction and hypokalaemia, which were curable. No death was due to transplantation related complications.Conclusion Comparing with conventional chemotherapy, our study suggests that auto-PBSCT i s a very important therapeutic option that can significantly improve the prognos is in the patients with hematological and solid tumors, especially in the patien ts with AML and NHL.     

异基因外周血干细胞移植(S999方案)治疗白血病的临床观察

目的　采用S999方案中异基因外周血干细胞移植 (allo PBSCT)治疗白血病 ,评价其疗效并观察移植物抗宿主病 (GVHD)等并发症。方法　 1999年 9月～ 2 0 0 2年 9月间 ,共完成allo PBSCT治疗成人白血病 5 0例 ,其中慢性粒细胞白血病 (CML) 2 8例 ,急性髓细胞白血病 (AML) 13例 ,急性淋巴细胞白血病 (ALL) 9例。外周血干细胞动员方案 :格拉诺赛特 (G CSF) 5 μg·kg- 1 ·d- 1 × 5d ;移植预处理主要采用环磷酰胺 (CTX) +足叶乙甙 (VP16) +全身照射 (TBI)方案 :CTX 5 0～ 60mg·kg- 1 ·d- 1 × 2d ;VP162 0mg·kg- 1 ·d- 1 × 2d或 5 0mg·kg- 1 ·d- 1 × 1d ,TBI 6.5～ 8.0Gy单次照射或l2 .0Gy分 3次照射 ;GVHD预防采用常规环孢素A(CsA)+短程氨甲喋呤 (MTX)和霉酚酸脂 (MMF)联合CsA +MTX两种方案。结果　本组患者除 1例移植早期因并发真菌感染而导致败血症死亡外 ,余 49例均获得完全供体型造血功能重建。中性粒细胞恢复至 0 .5× 10 9/L及血小板恢复至 2 0× 10 9/L的中位时间分别为移植后 14d( 10～ 2 2d)及 19d( 10～ 68d)。 49例移植成功者发生急性GVHD 16例 ( 3 2 .7% ) ,其中Ⅲ～Ⅳ度 5例 ( 10 .2 % )。 3 6例生存 6个月以上者发生慢性GVHD 2 4例( 66.7% ) ,其中广泛性 5例 ( 13 .9% )。MMF +CsA +M