Smac基因过表达增强肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体诱导神经母细胞瘤细胞凋亡

目的研究Smac基因在肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）诱导的神经母细胞瘤（NB）SK-N-SH细胞凋亡中的增强作用。方法1.利用反转录（RT）-PCR从人胚肾293细胞中扩增人Smac基因全长cDNA,通过TA克隆构建重组T载体pGEM-T/Smac。2.将目的片段从重组T载体上酶切下来,构建真核细胞表达载体pcDNA3.1/Smac,并转染人NB SK-N-SH细胞。用新霉素G418筛选稳定细胞株SK-N-SH/Smac,并用Western blot鉴定Smac基因的过表达。3.用1 000μg/L的TRAIL作用于过表达Smac基因的SK-N-SH/Smac和普通的SK-N-SH细胞24 h。采用流式细胞分析检测细胞凋亡百分率。另设无TRAIL干预的SK-N-SH/Smac及正常SK-N-SH对照组。4.比色法测定各组细胞中caspase-8酶活性。结果1.成功建立稳定过表达Smac基因的NB克隆株SK-N-SH/Smac。2.流式细胞分析显示1 000μg/L的TRAIL作用24 h后,过表达Smac基因的SK-N-SH细胞凋亡百分率显著高于正常对照的SK-N-SH细胞[（44.8±4.71）%vs（23.6±3.05）%P〈0.05]。3.比色法测定显示,同样在1000μg/L的TRAIL作用24 h后,过表达Smac基因的SK-N-SH/Smac细胞中,caspase-8的酶活性显著高于未转染的普通SK-N-SH细胞[（0.743±0.029）vs（0.476±0.031）P〈0.05]。结论转染并过表达Smac基因可增强TRAIL对神经母细胞瘤SK-N-SH细胞的促凋亡作用。     

IFNγ联合TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的研究

目的探讨IENγ（γ干扰素）对TRAIL（肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体）诱导神经母细胞瘤细胞株SMS-KCNR（KCNR）细胞凋亡的影响及其发生机制。方法应用RT-PCR方法检测IFNγ作用前后KCNR细胞Caspase8的表达；应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法及流式细胞仪（FCM）检测IFNγ、TRAIL、IFNγ＋TRAIL及IFNγ＋Caspase8抑制剂（zIETD-FMK）＋TRAIL对KCNR细胞生长及凋亡的影响；应用比色法测定Caspase8相对活性。结果KCNR细胞不表达Caspase8，IFNγ作用48h后的KCNR细胞Caspase8表达明显增加；KCNR细胞对TRAIL不敏感，IFNγ诱导表达Caspase8的KCNR细胞对TRAIL敏感；IFNγ＋TRAIL组Caspase8相对活性明显高于TRAIL组及抑制剂组；zIETD-FMK能阻断Caspase8的活化而抑制TRAIL对KCNR细胞的诱导凋亡作用。结论IFNγ通过诱导Caspase8表达而逆转KCNR细胞对TRAIL诱导凋亡的耐受。     

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目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对人神经母细胞瘤的作用及干扰素-γ(IFN-γ)对新型凋亡分子TRAIL抗瘤活性的影响,并探讨其影响机制。方法应用MTT分析和流式细胞仪研究TRAIL对人神经母细胞瘤细胞的抑制作用及IFN-γ对TRAIL抗瘤活性的影响。用RT-PCR方法检测IFN-γ作用48h后,Caspase-8-mRNA的表达。结果TRAIL(10,50,100μg/L)单独作用、IFN-γ(1000U/mL)单独作用后,对SY5Y细胞的增殖抑制率分别为(4·38±0·89)%、(3·54±1·66)%、(5·03±1·26)%、(5·33±2·06)%;凋亡率分別为(5·18±3·33)%、(5·26±3·64)%、(5·00±2·88)%、(8·14±7·35)%。IFN-γ(1000U/mL)与TRAIL(100μg/L)联合作用后,对SY5Y细胞的增殖抑制率为(41·22±7·09)%;凋亡率为(21·29±6·20)%。RT-PCR方法发现IFN-γ作用48h后Caspase-8-mRNA的表达明显上调。结论神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y对TRAIL不敏感,IFN-γ可以明显提高TRAIL对神经母细胞瘤细胞的敏感性,其发生机制可能是通过IFN-γ上调Caspase-8-mRNA的表达而实现的。     

吉西他滨对白血病细胞系HL-60细胞的抑制作用

目的观察吉西他滨对HL-60细胞增殖、凋亡及C-myc蛋白表达的影响,探讨吉西他滨对白血病细胞的作用及其与c-myc间的关系,为其作为新的抗白血病药物提供实验依据。方法体外培养HL-60细胞,吉西他滨及阿糖胞苷处理细胞0、24、48、72 h后倒置显微镜下观察细胞生长状态及形态学改变;锥虫蓝拒染法计数活细胞,计算细胞存活率,观察吉西他滨对细胞生长的影响;应用流式细胞仪进行细胞周期分析、检测凋亡率;免疫组织化学染色法检测C-myc蛋白表达改变。结果24 h时不同质量浓度吉西他滨组均显著抑制细胞存活,随药物质量浓度增加存活率减小,各组间比较有显著性差异（P〈0.01）;各组随作用时间延长存活率降低,在48、72 h抑制作用显著强于24 h;G0/G1期细胞比例升高而S期细胞比例降低,细胞阻滞在G0/G1期;凋亡率为（17.4 f1±4.88）%,较空白组（4.29±3.07）%和阿糖胞苷对照组（8.16±3.43）%显著升高（Pa〈0.01）;免疫组织化学染色示吉西他滨组C-myc蛋白在细胞中表达阳性平均积分为42.00±8.54,较空白组（248.33±20.74）和阿糖胞苷组（102.67±12.06）显著降低（Pa〈0.01）。结论吉西他滨对HL-60细胞生长及C-myc蛋白表达有明显抑制作用;能使细胞周期发生重新分布,将细胞阻滞在G0/G1期,从而抑制细胞增殖,并可诱导白血病细胞凋亡;在抑制HL-60细胞增殖、诱导其凋亡及抑制C-myc表达方面,吉西他滨的作用显著强于相同剂量的阿糖胞苷,有望成为新药物用于白血病的治疗。     

孕酮对缺氧缺血性脑病新生大鼠皮层和海马神经元凋亡及一氧化氮水平的影响

目的探讨孕酮对HIE新生大鼠皮层和海马组织神经元凋亡率及一氧化氮（NO）水平的影响。方法7日龄新生Wistar大鼠30只随机分为3组：假手术组、缺氧缺血（HI）组和药物预防组。HI组和药物预防组动物先行左侧颈总动脉结扎术,置37℃恒温的密闭容器中,以1.5L/min的速度吸入80mL/L氧气和920mL/L氮气混合气体2.5h,建立HIE动物模型。假手术组仅分离左侧颈总动脉,不结扎,亦不做缺氧处理。药物预防组大鼠于建立模型前30min按8mg/kg腹腔注射0.5g/L孕酮溶液,假手术组和HI组注射同等量的9g/L盐水,24h后处死动物,采用流式细胞仪检测其皮层和海马神经元凋亡情况,硝酸还原酶法检测其NO水平的变化。结果HI组大鼠皮层和海马组织神经元凋亡率分别为（10.09±0.36）%、（12.32±0.28）%,明显高于假手术组[（2.49±0.23）%、（2.58±0.26）%]（Pa〈0.01）,药物预防组大鼠皮层和海马组织神经元凋亡率为（3.47±0.32）%、（4.56±0.30）%,明显低于HI组（Pa〈0.05）。HI组大鼠皮层和海马组织NO水平分别为（51.36±9.71）μmol/L、（52.34±4.26）μmol/L,明显高于假手术组水平[（18.16±6.24）μmol/L、（19.28±3.58）μmol/L）]（Pa〈0.01）,药物预防组大鼠皮层和海马组织NO水平为（33.47±8.02）μmol/L、（32.57±4.27）μmol/L,明显低于HI组（Pa〈0.05）。结论孕酮通过降低新生大鼠HI时皮层和海马组织神经元凋亡率和NO水平,拮抗神经元凋亡发挥对缺氧缺血性脑损伤的保护作用。     

FMS样酪氨酸激酶3靶向RNA干扰对急性单核细胞白血病细胞株THP-1增殖和凋亡的影响

目的探讨短发夹状干扰RNA（shRNA）诱导FMS样酪氨酸激酶3（FLT3）的靶向抑制对急性单核细胞白血病（AMOL）细胞株THP-1增殖、凋亡的影响。方法设计并体外转录合成FLT3靶向shRNA（FLT3-shRNA）,转染THP-1细胞。以半定量逆转录PCR（RT-PCR）、流式细胞法（FCM）检测细胞FLT3在mRNA、蛋白水平表达,细胞计数试剂8（CCK-8）检测细胞增殖活力,FCM法检测细胞周期,DNA梯度条带（DNA Ladder）和Annexin V—FITC染色法分析细胞凋亡。结果合成的FLT3-shRNA 15nmol／L转染48h对FLT3 mRNA和蛋白的抑制率分别达（72．95±2．07）％、（65．39±5．57）％。shRNA干扰后细胞增殖活力受到抑制,48h抑制率达（36．66±3．67）％,72h达（35．56±0．73）％。转染48h细胞周期出现G0／G1期到S期的阻滞,FLT3-shRNA组G0／G1期的细胞百分比（65．71±4．47）％明显高于对照组,S期（25．11±2．70）％低于对照组。FLT3-shRNA作用48h有明显的凋亡条带出现,Annexin V-FITC检测细胞的早期凋亡率（18．59±2．07）％明显高于对照组。结论由shRNA诱导的FLT3靶向干扰可有效的抑制THP-1细胞增殖、诱导凋亡,显示其在儿童AMOL治疗中具有潜在的价值。     

产前皮质激素及产后肺泡表面活性物质防治新生儿呼吸窘迫综合征的疗效

目的探讨产前应用皮质激素（ACS）联合产后应用外源性肺表面活性物质（PS）与单一应用防治新生儿呼吸窘迫综合征（RDS）的疗效。方法选取2003年1月-2007年1月本院NICU收治的143例RDS新生儿。随机分为4组：第1组为产前应用ACS联合产后应用PS （n=36）;第2组为单一产前应用ACS （n=33）;第3组为单一产后应用PS （n=39）;第4组为2种治疗措施均未采用（n=35）。对4组患儿的一般资料如性别、胎龄、出生体质量、分娩方式、Apgar评分、产时复苏情况、围生期并发症进行分析,并对不同组间应用鼻导管吸氧、头罩吸氧、持续呼吸道正压（CPAP）、机械通气（MV）等不同氧疗模式的时间,治愈的平均治疗时间及疗效进行比较。结果 4组患儿的一般资料和临床特征相似（Pa〉0.05）。第1、2、3、4组采用鼻导管吸氧时间分别为（75.81±15.63）、（130.09±27.32）、（150.67±28.59）、（174.32±25.92） h （P=0.041）;头罩吸氧时间分别为（37.16±5.51）、（55.29±11.71）、（62.69±12.39）、（100.75±28.10） h （P=0.047）;CPAP时间分别为（24.33±4.41）、（27.44±4.47）、（26.53±3.13）、（56.50±5.50） h （P=0.005）;MV时间分别为（56.12±15.65）、（110.19±21.59）、（127.79±26.36）、（156.61±12.92） h （P=0.009）;第1组采用MV的几率最低。4组患儿住院天数分别为（15.89±1.29）、（21.61±2.30）、（28.31±3.40）、（32.73±4.57） d（P=0）;治愈率分别为63.89%、51.52%、35.90%、20.0%（P=0.005）。结论产前应用ACS联合产后外源性补充PS是治疗RDS的最佳措施,单一产前应用ACS对RDS的疗效优于单一产后应用PS。     

左旋精氨酸对模拟缺血再灌注乳兔培养窦房结细胞损伤的保护作用（英文）

目的观察模拟缺血再灌注（IR）培养乳兔窦房结细胞（SANC）损伤及左旋精氨酸（L-Arg）的保护作用。方法对SANC模拟低糖缺氧培养,添加L-Arg和L-Arg加L-NAME（L-Arg抑制剂）与培养细胞共同孵育,吖啶橙（AO）标记细胞凋亡,检测细胞内过氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）、总一氧化氮合酶（NOS）、氧化亚氮（NO）水平。细胞分为正常对照组、I120R120组、I120R120加L-Arg组、I120R120加L-Arg加L-NAME组4组。结果凋亡细胞体积明显缩小,核呈黄绿色,断裂为多个碎块状,由膜包裹着凸起于细胞表面呈黄绿色凋亡小体。与I120R120组凋亡率[（5.21±1.59）%]比较,I120R120加L-Arg组凋亡率[（8.70±3.10）%]显著降低（P〈0.01）;I120R120加L-Arg组细胞SOD活性[（46 820±14 450）U/g]较I120R120组[（25 030±8 440）U/g]显著上升,而I120R120加L-Arg组MDA[（5.55±3.71）mmol/g]、NO[（3.65±1.02）U/g]和NOS[（3.73±0.24）μmol/L]较I120R120组MDA[（8.42±4.21）mmol/g]、NO[（4.62±1.20）U/g]和NOS[（4.96±0.52）μmol/L]显著下降（Pa〈0.05）;而I120R120加L-Arg加L-NAME组各指标较I120R120组无显著性差异（Pa〉0.05）。结论补充NO合成底物L-Arg能清除自由基,增加SOD活性,增强细胞抗氧化损伤能力,可能是阻断氧自由基所介导的细胞凋亡机制之一。     

氧化应激在新生大鼠常压高体积分数氧致脑损伤发生中的作用

目的探讨氧化应激在7日龄新生大鼠高体积分数氧（高氧）性脑损伤发生中的作用。方法体质量12～18g的7日龄SD大鼠42只，随机分为空气组和高氧组。高氧组与其乳母一起置于氧箱中，调节氧流量（3L／min），使箱内氧体积分数维持（800±50）mL／L，用数字式测氧仪进行监测。空气组置于同一室内空气中，氧体积分数为210mL／L，饲养条件与高氧组相同。高氧／空气开始暴露30min后，各取3只大鼠，麻醉后采血，行动脉血气分析。高氧／空气暴露12h后2组大鼠各处死8只，化学比色法检测其脑组织还原型谷胱甘肽（GSH）、氧化型谷胱甘肽（GSSG）、GSSG／GSH、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平。高氧／空气暴露12h后2组各处死10只大鼠，取其脑组织常规脱水、包埋、切片（经海马），脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法观察脑组织细胞凋亡指数。结果空气组平均动脉血氧分压[pa（O2）]为（87．0±2．71）mmHg（1mmHg=0．133kPa），高氧组为（219．0±10．7）mmHg，高氧组明显高于空气组[（87．0±2．71）mmHg]（P〈0．05）。高氧组暴露12h脑细胞凋亡指数[（39．20±7．59）％]较空气组[（4．50±1．87）％]显著增加（P〈0．01）。高氧暴露12h组GSH[（0．994±0．230）μmol／g]较空气组[（1．210±0．210）μmoL／g]明显下降（P〈0．05），高氧组暴露12h SOD[（124．60±4．14）×10^3 U／g]也较空气组[（145．0±6．62）×10^3 U／g]明显下降（P〈0．01）；高氧组GSSG[（0．0283±0．0043）μmol／g]、GSSG／GSH（0．0296±0．0045）、MDA[（5．21±0．41）μmol／g]均较空气组[（0．0212±0．0029）μmol／g，0．0181±0．0031，（4．85±0．25）μmol／g]显著升高（Pa〈0．05）。结论常压高氧可引起新生大鼠脑细胞的凋亡及氧化应激，氧化应激与高氧性脑损伤密切相关。     

促肝细胞生长素对大鼠肾缺血再灌注损伤细胞凋亡的干预

目的探讨促肝细胞生长素（pHGF）对肾缺血再灌注损伤（IRI）大鼠肾功能及‘肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法雄性Sprague—Dawley大鼠32只，随机分为假手术组（组I）、缺血再灌注组（组Ⅱ）、缺血再灌注前pHGF干预组（组Ⅲ）和缺血再灌注后pHGF干预组（组Ⅳ）。采用无损伤动脉夹钳夹大鼠双侧肾蒂45min，制作肾IRI模型。组I和组Ⅱ腹腔注射等量9g／L盐水（0．8mL），组Ⅲ和组Ⅳ分别在术前和术后腹腔注射pHGF 50mg／kg。于IRI 12 h股动脉采血，处死动物后迅速摘取其左侧肾脏。采用酶法检测血清肌酐（Scr），采用肾组织原位细胞凋亡标记法（TUNEL）检测肾小管上皮细胞凋亡。结果组Ⅱ血清Scr水平（120．850±22．237）μmol／L明显高于组I（22．775±6．508）μmol／L（P〈0．01），组Ⅲ（60．413±10．197）μmol／L和组Ⅳ（69．40±11．443）μmol／L表达水平均明显较组Ⅱ下降（Pa〈0．01）。组Ⅱ肾脏凋亡阳性细胞的表达（26．850±1．476）较组I（0．90±0．385）明显升高（P〈0．01），组Ⅲ（8．30±1．146）和组Ⅳ（9．0±0．869）均较组Ⅱ显著下调（Pa〈0．01）。组Ⅲ和组Ⅳ间各项值比较差异均无显著性差异（Pa〉0．05）。结论pHGF能显著降低肾缺血再灌注损伤大鼠血清Scr水平，显著抑制其肾小管上皮细胞凋亡，对缺血性急性肾衰竭既有保护又有治疗作用。     

不同条件机械通气氧吸入致新生兔肺损伤的实验研究

目的探讨不同吸气峰压（PIP）机械通气（MV）伴450mL/L氧吸入致新生兔肺损伤的病理改变。方法将60只日龄1～5d的新生兔随机分为高PIP组、中PIP组、低PIP组进行MV与未通气对照组,通气后1、3、6h3个时间点取其左肺,病理切片及电镜观察其肺组织结构的改变,行肺泡灌洗液（BALF）蛋白水平测定、细胞计数、沉渣涂片细胞分类,并结合其肺湿干比分析。结果1.光镜下中PIP组肺损伤较低PIP组及高PIP组轻,低PIP组肺叶内局部肺不张较明显,高PIP组肺出血、肺大泡形成较明显。2.随着通气的进行,BALF中细胞计数增高,低PIP组1、3、6h细胞计数分别为：（12.12±7.01）×10^12L^-1、（12.62±2.98）×10^12L^-1、（18.55±5.63）×10^12L^-1,中PIP组为（10.71±2.34）×10^12L^-1、（14.73±3.63）×10^12L^-1、（15.48±1.23）×10^12L^-1,高PIP组为（26.59±7.896）×10^12L^-1、（22.36±6.799）×10^12L^-1、（37.34±11.23）×10^12L^-1;分类中以巨噬细胞和淋巴细胞为主,分叶核升高不明显。BALF中细胞分类计数表明不同的通气模式或同一通气模式不同的时间点细胞反应不同。3.高PIP通气时,Ⅱ型上皮细胞（AT-Ⅱ）增生向AT-Ⅰ细胞转化加速。低压力通气时以AT-Ⅱ细胞肿胀、肺组织水肿为主,低PIP组通气6h就会出现胶原纤维增生。结论新生兔吸入450mL/L的氧时MV会引起肺泡、基底膜结构改变、胶原纤维增生;AT-Ⅱ细胞、淋巴细胞、巨噬细胞变化可能是新生兔机械通气肺损伤的病理基础。MV时肺膨胀有不均一性,低压力通气易致不张伤,高压力通气易致气压伤,适当的压力能减轻肺损伤。     

Caspase-8在TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡中的作用

目的：应用干扰素(IFNγ)诱导神经母细胞瘤（neuroblastoma, NB）细胞caspase 8的表达并观察其是否可以恢复NB细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）的敏感性。方法：应用RT PCR方法检测IFNγ作用前后NB细胞caspase-8 mRNA的表达;应用Alamar Blue法及流式细胞术检测IFNγ、TRAIL、IFNγ+TRAIL、IFNγ+caspase-8抑制剂zIETD-FMK+TRAIL对NB细胞生长及凋亡的影响;应用比色法测定NB细胞caspase-8相对活性。结果：对TRAIL敏感的CHP212细胞表达caspase-8,且经IFNγ处理后caspase-8 表达水平逐步增加;对TRAIL不敏感的SY5Y细胞不表达caspase-8,IFNγ作用后其caspase-8 mRNA表达明显增加。IFNγ与TRAIL联用对SY5Y细胞有明显诱导凋亡作用。CHP212细胞caspase-8相对活性随TRAIL作用时间的延长逐步升高;IFNγ与TRAIL联合作用的SY5Y细胞caspase-8相对活性明显高于未加药物处理的对照组、IFNγ组、TRAIL组及抑制剂组。结论：表达caspase-8的NB细胞对TRAIL的诱导凋亡作用敏感,TRAIL诱导NB细胞凋亡过程中伴随caspase-8活性的增加。［中国当代儿科杂志,2010,12(11)：902-907］     

出生后长期缺锌对大鼠生长发育及生长激素的影响

目的 研究出生后长期缺锌对大鼠生长发育的影响及其机制。方法 选取刚出生的SD大鼠3窝,每窝1只母鼠、10只仔鼠,3窝母鼠与仔鼠体重相近,仔鼠雌雄各半。随机分为3组,缺锌组（ZD）、配饲组（PF）、对照组（ZA）。实验期60 d。测定大鼠身长、股骨长度、直径、重量,血清生长激素（GH）含量。结果 ZD组身长[（16.15±0.67）cm]明显低于PF组[（20.94±0.98）cm]及ZA组[（23.08±0.11）cm]（P〈0.01）;ZD组股骨长度[（2.61±0.22）cm]明显低于PF组[（3.38±0.10）cm]及ZA组[（3.54±0.08）cm]（P〈0.01）;ZD组股骨直径[（0.30±0.03）cm]明显低于PF组[（0.37±0.33）cm]及ZA组[（0.42±0.01）cm]（P〈0.01）;ZD组股骨重量[（0.65±0.10）g]明显低于PF组[（1.07±0.07）g]及ZA组[（1.28±0.08）g]（P〈0.01）;ZD组血清生长激素水平[（0.47±0.04）ng/ml]明显低于PF组[（0.66±0.11）ng/ml]及ZA组[（0.75±0.07）ng/ml]（P〈0.01）。结论 出生后长期缺锌可导致动物体内生长激素水平下降,是导致生长迟缓的原因之一。     

胚胎干细胞诱导分化为造血干细胞重建造血功能的作用

目的探讨胚胎干细胞（ESC）定向分化来源的造血干细胞（HSC）体内重建造血功能的作用。方法将小鼠E14.1胚胎干细胞采用三步诱导法在体外分化发育为HSC,流式细胞仪检测HSC表面标志性抗原CD34^＋/Sca-1^＋的表达,体内畸胎瘤形成实验检测其致瘤性,造血克隆形成（CFU）实验观察其体外造血集落形成情况,免疫磁珠分选纯化HSC移植给经亚致死剂量γ射线照射的雌性小鼠观察其体内重建造血的功能。结果多种造血刺激因子联合应用能有效促进ESC发育为含丰富造血前体细胞的胚胎体（EB）,诱导14 d后,EB中CD34^＋/Sca-1^＋细胞数达峰值,为（13.72±2.07）%。收获此阶段的EB行第二步诱导分化16 d后,CD34^＋/Sca-1^＋细胞数可增至（24.62±2.50）%,CFU培养出现红系和粒系造血克隆;在骨髓基质细胞加胎肝基质细胞上清液培养体系中进行第三步诱导分化15 d后,CD34^＋/Sca-1^＋细胞达峰值,为（58.64±4.20）%,CFU培养能形成较多的红系、粒系/巨噬细胞系及混合细胞集落,W right-G iemsa染色显示为原始的造血细胞。此阶段的HSC经分选纯化后移植给经γ射线照射后的小鼠,移植组小鼠＋10 d造血功能开始恢复,观察40 d后除血小板恢复较慢外,白细胞、红细胞、血红蛋白等指标已接近正常,植入率为71.4%,存活率为43.0%,染色体检测证实已由受体鼠的XX转为供体鼠的XY。结论采用分阶段诱导的方法,可在体外定向诱导小鼠ESC分化发育为HSC,此来源的HSC较安全,无致瘤性,并具备体内重建造血功能的能力。     

黄芪甲甙治疗Balb/c小鼠慢性柯萨奇B3病毒性心肌炎的疗效

目的观察黄芪甲甙对实验性小鼠柯萨奇B3病毒（CVB3）性心肌炎的疗效。方法Balb／c小鼠80只随机分为模型组（30只）、干预组（30只）、对照组（20只）。模型组和干预组小鼠1次／月腹腔接种CVB3，共3个月；对照组腹腔注射等容积不含病毒的培养液。对照组和模型组小鼠每日以饮用水喂养，干预组小鼠以加有羧甲基纤维素钠助溶的黄芪甲甙饮用水（质量浓度为300mg／L）喂养，观察小鼠生存率。3个月后处死所有存活小鼠，HE染色进行心肌病理检查、苦味酸天狼星红胶原染色后以自动图像分析系统计算胶原容积积分（CVF），采用原位末端标记法检测其心肌细胞凋亡指数，半定量反转录聚合酶链反应进行心肌CVB3 RNA和心肌组织凋亡检测。结果模型组生存率为59．7％，干预组生存率为76．7％，二组比较有显著性差异（χ^2=4．26P〈0．05）；模型组与干预组病理积分分别为（3．86±0．47）、（1．72±0．56），二组比较有显著性差异（t=4．21 P〈0．01）；模型组与干预组CVF分别为（17．4±1．2）％、（8．6±0．9）％，二组比较有显著性差异（χ^2=5．38P〈0．05）；模型组与干预组心肌细胞凋亡指数分别为（19．6±5．2）％、（4．3±2．5）％，二组比较有显著性差异（χ^2=35．16 P〈0．01）。干预组心肌组织中CVB3 RNA水平与模型组比较有非常显著的统计学意义[（0．69±0．38）vs（1．24±0．57），t=4．26 P〈0．01]。结论黄芪甲甙可能成为一种有效的治疗Balb／c小鼠慢性CVB3心肌炎的药物。     

低体积分数氧预处理对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马区脑红蛋白变化的影响

目的观察低体积分数氧（低氧）预处理对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠脑红蛋白（NGB）变化的影响，探讨低氧预处理与NGB的关系。方法随机将出生7d Wistar大鼠110只分为3组：假手术组（n=10）、HIBD组（n=50）、低氧预处理后HIBD组（n=50），HIBD组和低氧预处理后HIBD组在模型建立后1、5、15、30和60min各个时间点再分为5个亚组。采用双侧颈总动脉结扎的方法建立HIBD模型，应用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学方法检测在低氧预处理干预下脑缺氧缺血后NGB mRNA及蛋白质在不同时间的表达量。结果RT-PCR半定量分析：HIBD组NGB mRNA在1、5min时相对表达量均显著高于假手术组（Pa〈0．05）；15、30和60min表达下降，与假手术组比较无统计学意义（Pa〉0．05）。与HIBD组比较，低氧预处理后HIBD组1、5min NGB mRNA相对表达量增加，15、30和60min下降，但差异均无统计学意义（Pa〉0.05）。免疫组织化学结果显示低氧预处理后HIBD组海马区域NGB在1、5、15、30和60min平均吸光度（195．0±11．26，202．41±12．20，182．60±15．72，178．22±14．37，164．86±28．99）与HIBD组（195．59±11．59，201．40±13．61，178．09±18．92，173．75±14．30，163．45±18．66）比较无统计学意义（Pa〉0．05）。结论低氧预处理对新生大鼠的脑保护作用可能与NGB的变化关系不大。     

Caspase-8和DR5在TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡中的作用

目的：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)能诱导多种肿瘤细胞凋亡而对正常细胞无诱导凋亡作用。大多数神经母细胞瘤细胞株对TRAIL的诱导凋亡作用耐受与其Caspase8表达缺失有关,也与细胞表面TRAIL受体的表达和分布有关。该文主要探讨Caspase8及TRAIL受体DR5的表达在TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞株SKNDZ凋亡中的作用及其发生机制。方法：应用RTPCR方法检测IFNγ作用前后SKNDZ细胞Caspase8的表达;应用WesternBlot方法检测化疗药作用前后SKNDZ细胞DR5的表达;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪(FCM)检测TRAIL、IFNγ+TRAIL、化疗药+TRAIL及化疗药+IFNγ+TRAIL对SKNDZ细胞生长及凋亡的影响。结果：SKNDZ细胞不表达Caspase8,IFNγ作用后的SKNDZ细胞Caspase8表达明显增加。对照组未检测到DR5蛋白表达,而阿霉素和依托泊苷处理后检测到DR5蛋白表达。表达Caspase8的SKNDZ细胞对TRAIL的诱导凋亡作用仍不敏感,而同时表达Caspase8和DR5的SKNDZ细胞对TRAIL的诱导凋亡作用敏感。阿霉素/依托泊苷+IFNγ+TRAIL组早期凋亡率为:(17.9±3.6)%、(14.8±3.3)%,与IFNγ+TRAIL组(3.9±1.2)%比较,差异有显著性(F=26.233,P<0.01)。结论：同时表达Caspase8和DR5的SKNDZ细胞恢复了对TRAIL的敏感性,Caspase8和DR5在TRAIL诱导SKNDZ细胞凋亡中起着十分关键的作用。     

褪黑素对新生儿脐带血单个核细胞活化增殖的影响

目的探讨褪黑素（melatonin,MLT）对新生儿脐带血单个核细胞（cord blood mononuclear cells,CBMC）活化增殖的影响。方法运用相差显微镜及。H-TdR掺入法观察MLT对CBMC形态学的影响及增殖的调节,并与MLT对成人血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）的影响进行比较。结果CBMC的。H-TdR掺入率随培养基中MLT浓度（50pg／ml～50ng／m1）的增加而增加,在5ng／ml效果最佳。在加入MLT（5ng／m1）的培养基中,经72h培养后,高倍光镜观察下见细胞较培养前明显密集,为较多体积增大的单个核细胞。CBMC培养基中分别加入不同刺激物MLT（5ng／m1）、Interleukin-2（IL-2,50ng／m1）、MLT＋phytohemagglutinin（PHA,5μg/ml）、MLT＋IL-2,其^3H-TdR掺入率（cpm）分别为114327±52863、16087±9006、118360±59207和17682±7391。与细胞悬液组（14133±8688）比较,MLT组和MLT＋PHA组CBMC的。H-TdR掺入率显著增加（t=5．9143,P〈0.001;t=5．5078,P〈0．001）,IL-2组、MLT＋IL-2组CBMC的。H-TdR掺入率无明显变化（t=0．4983,P〉0．05;t=0．9839,P〉0.05）;而MLT组或MLT＋PHA组CBMC的。H-TdR掺入率与培养基中仅加入PHA组（110397±48663）比较,差异无统计学意义（t=0．1730,P〉0．05;t=0．3286,P〉0．05）。各种刺激物加入培养基后,CBMC的^3 H-TdR掺入率均明显高于PBMC。结论MLT不但可诱导PBMC活化增殖,也可诱导CBMC的活化增殖,且其对CBMC的作用强于PBMC。     

基质金属蛋白酶组织抑制剂1对细胞因子诱导的胰岛β细胞凋亡的保护作用

目的探讨基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）对细胞因子IL-1β、TNF-α和干扰素1（IFN-γ）诱导的胰岛β细胞凋亡的保护作用及其可能机制。方法实验分TIMP-1干预组、细胞因子刺激组和对照组。细胞因子刺激组应用细胞因子（IL—1β 10ug／L，TNF—α 50ug／L，IFN-γ 50ug／L）诱导大鼠胰岛瘤细胞株RINmSF细胞凋亡；TIMP-1干预组在细胞因子刺激前予以TIMP—1（50ug／L）预处理1h；对照组采用无血清培养基同步培养。应用四甲基偶氮唑盐比色法和Caspase-3分光光度法检测各组细胞活力和Caspase-3活性，采用DNALadder进行凋亡鉴定。结果与对照组比较，细胞因子IL-1β、TNF—α和IFN-α联合刺激组细胞活力明显降低，并呈时间依赖性（Pa〈0．05，0．001）；TIMP-1干预组较细胞因子刺激组细胞活力上升约14％，Caspase-3活性下降约38％，二组比较差异有显著性意义（Pa〈0．001）。DNALadder检测，细胞因子刺激组可见特征性的梯状条带，TIMP—1干预组梯状条带不明显，出现与对照组相似的2条基因组大分子条带。结论IL-1β、TNF-α和IFN-γ联合刺激可诱导RINm5F细胞凋亡，TIMP-1对细胞因子诱导的RINm5F细胞的凋亡有一定的保护作用，此作用可能与其抑制Caspase-3活性有关。     

重组人胰岛素样生长因子1对高氧暴露下新生大鼠肺组织Clara细胞分泌蛋白表达的影响

目的探讨重组人胰岛素样生长因子1（rh-IGF-1）对高氧暴露下的新生大鼠肺损伤的影响。方法将生后2d的Wistar大鼠80只,随机分为4组。Ⅰ组：空气组;Ⅱ组：高氧组;m组：空气＋rh-IGF-1组;Ⅳ组：高氧＋rh-IGF-1组。Ⅱ组和Ⅳ组大鼠持续暴露于85％O2中,Ⅰ组和Ⅲ组大鼠呼吸空气。Ⅲ组和Ⅳ组从第3天起每日腹腔注射rh—IGF-1,1μ/Kg。于高氧暴露后7d取肺组织,用免疫组化方法检测肺内CC10表达变化,用TUNEL方法检测肺细胞凋亡。结果免疫组化结果阳性染色主要分布于终末及呼吸性细支气管上皮细胞。Ⅱ组终末和呼吸性细支气管上皮Clara细胞占上皮细胞的百分率（32．17±3．19）％和免疫阳性强度（29．45±5．56）,均明显少于Ⅰ组的测定值（68．32±2．04）％和（42．37±3．24）,差异均有统计学意义（P〈0．01）;Ⅱ组肺组织细胞凋亡指数（55．77±6．09）％明显高于Ⅰ组的测定值（16．41±4．01）％,差异有统计学意义（P〈0．01）;Ⅳ组的Clara细胞百分率（52．98±2．68）％和免疫阳性强度（41．22±6．36）较Ⅱ组明显增加,Ⅳ组的细胞凋亡指数（27．98±3．09）％明显低于Ⅱ组的测定值,差异均有统计学意义（P〈0．01）。而Ⅰ组与Ⅲ组之间差异无统计学意义（P〉0．01）。结论高氧诱导肺细胞凋亡、抑制肺内CC10分泌,而rh-IGF-1通过抑制肺细胞凋亡,能够有效抑制CC10分泌的减少,减轻气道炎症反应,抑制肺泡化阻滞,对高氧性肺损伤起保护作用。