柱前衍生化HPLC测定中药材氨基酸的含量

目的:建立中药材有效成份氨基酸柱前衍生HPLC分析测定方法。方法:从常见中药材党参和山楂中提取氨基酸,邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生,反相高效液相色谱分离测定,以保留时间定性,面积外标法定量。结果:水解温度108℃,提取24 h,可有效提取药材中的氨基酸;梯度洗脱程序为(t,C%):(t:保留时间C:甲醇):(0,0);(9,30);(16,45);(25,60);(28,65);(32,80),二种药材中的十六种氨基酸得到较好分离和定性定量结果,其中天冬氨酸和胱氨酸的平均加样回收率分别为101.0%和94.4%。结论:采用HPLC柱前衍生分离分析党参和山楂中十六种氨基酸的方法灵敏、简便、快捷、高效,适于推广应用,可为解决中药材氨基酸分离测定难题提供参考。     

AccQ-Tag法测定复方氨基酸注射液(18AA-Ⅴ)中17种氨基酸的含量

目的建立测定复方氨基酸注射液(18AA-Ⅴ)中17种氨基酸含量的方法。方法采用AccQ-Tag法,以6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯(AQC)为衍生试剂,与复方氨基酸注射液(18AA-Ⅴ)中17种氨基酸柱前衍生,用Waters 2695 HPLC仪器,AccQ-TagTM柱,以醋酸钠(pH4.95)缓冲液为流动相A,乙腈为流动相B,水为流动相C进行梯度洗脱,检测波长为248 nm,柱温为37℃,进样量为5μL。结果17种氨基酸的线性回归方程r值为0.999 6~0.999 9(n=5),平均回收率为93.3%~104.4%(RSD值为0.88%~3.05%,n=6)。结论本法快速,简便,结果准确。     

HPLC柱前衍生法测定舒血宁注射液中四种氨酸的含量

[目的]建立舒血宁注射液中4种氨基酸(天门冬氨酸、苏氨酸、丙氨酸、甲硫氨酸)的高效液相色谱(HPLC)柱前衍生化法,为舒血宁注射液的质量控制提供方法。[方法]以异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生化试剂,采用C18色谱柱,乙腈-水(5∶1)-乙酸铵缓冲溶液(p H 6.5)为流动相,梯度洗脱,检测波长为254 nm,测定舒血宁注射液中天门冬氨酸、苏氨酸、丙氨酸、甲硫氨酸的含量。[结果]4种氨基酸的分离及线性关系良好,精密度,重复性,稳定性RSD均都小于5%,平均回收率在95.6%~98.9%之间且RSD小于5%。舒血宁注射液中4种氨基酸总含量为1 738.47μg/mL。其中甲硫氨酸含量最高,丙氨酸的含量最低。[结论]本方法简便、准确、可靠,适用于舒血宁注射液中氨基酸含量的测定。     

新型荧光试剂柱前衍生高效液相色谱定量分析小鼠脑脊液中氨基酸类神经递质

目的 采用新合成的荧光试剂柱前衍生氨基酸类神经递质,建立其测定方法,并测定小鼠脑脊液中氨基酸类神经递质的含量。方法 以1,3,5,7-四甲基-8-苯基-（4′-O-（N-琥珀酰亚胺乙酸酯））-二氟化硼-二吡咯甲烷（TMPAB-OSu）作为柱前荧光衍生试剂,在pH 8.8的硼酸-硼砂缓冲溶液中,30℃衍生反应5 min后获得稳定的荧光衍生产物,在反相色谱柱上,采用梯度洗脱进行5种氨基酸类神经递质标准品衍生物的分离检测,荧光激发波长为497 nm,检测波长为509 nm。结果 5种氨基酸类神经递质的线性范围为0.01~1.2 μmol/L,线性回归系数均大于0.998 1,检出限为1 nmol/L（S/N=3∶1）。小鼠脑脊液中天门冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、γ-氨基丁酸和丙氨酸的含量分别为0.06、0.20、0.26、0.03和0.07 μmol/L,标准加入回收率为96%~104%,RSD为0.7%~2.9%。结论 该方法的灵敏度高、重现性好,为小鼠脑脊液中氨基酸类神经递质的分析检测提供了一种新方法。     

DABS-Cl柱前衍生RP-HPLC法在氨基酸分析中的应用

目的 分离18种氨基酸，并对其分离的最适条件进行考察。方法 采用DABS-C1柱前衍生RP-HPLC法，在DAD检测器436nm处测定。结果 18种氨基酸在60min内得到良好的分离。结论 DABS-C1柱前衍生RP-HPLC分离氨基酸是一种比较方便、稳定和可靠的方法。     

柱前衍生高效液相色谱法测定瓜蒌皮中游离氨基酸含量

目的:建立柱前衍生高效液相色谱法(RP-HPLC)测定瓜蒌皮中游离氨基酸含量的方法。方法 :采用异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生试剂,高效液相色谱法色谱柱为(Atlantis dC18 Column(3μm,4.6 mm×150 mm,Waters),流动相A:甲醇-乙腈(1∶2),流动相B:0.15 mol/L乙酸钠,流速1.0mL/min,梯度洗脱,柱温35℃,吸收波长254 nm。结果:各种氨基酸均能达到基线分离。结论:柱前衍生高效液相色谱法作为瓜蒌皮药材中游离氨基酸的测定手段之一,准确可靠。     

柱前衍生高效液相色谱法测定蚕蛹提取物中氨基酸含量

目的 用柱前衍生法测定蚕蛹提取物中氨基酸含量,方法以磺酰氯二甲胺偶氮苯(DABS-CL)作衍生剂,采用柱前衍生高效液相色谱法(RP-HPLC),YMC-Pack ODS-A柱(250mm×4.6mm,5mm),流动相A为25mol/L KH2PO2,流动相B为乙腈:甲醇=70:30;流速1.5 ml/min梯度洗脱,检测波长436nm,柱温35℃,结果各种氨基酸均具有良好的线性关系(相关系数,=0.9989～0.9999)、精密度(RSD<1.50%)、稳定性(RSD<3.50%)、平均回收率(98.83%～107.83%),测定蚕蛹提取物中氨基酸含量,其含有人体必需氨基酸占总氨基酸含量的40%以上,结论该方法简便实用,分析结果准确可靠,适用于动植物中富有氨基酸含量的测定.     

HPLC柱前衍生法测定谷丙甘氨酸咀嚼片含量

目的建立谷丙甘氨酸中谷氨酸、丙氨酸及甘氨酸的高效液相分析方法,并用该方法测定咀嚼片中3种氨基酸的含量,为该制剂的质量标准制定提供依据.方法谷丙甘氨酸咀嚼片中3种氨基酸含量测定采用异硫氰酸基苯酯柱前衍生化高效液相色谱法.色谱条件:色谱柱为Inertsil ODS-3V(4.6mm×250mm,5μm);流动相A为0.1mol/L醋酸钠-醋酸缓冲液(pH6.5)/乙腈(93:7),流动相B为蒸馏水/乙腈(20:80)二元梯度洗脱分离;检测波长为254nm;流速为1ml/min;柱温为40℃.外标法计算3种氨基酸的含量.结果谷丙甘氨酸咀嚼片中谷氨酸、丙氨酸及甘氨酸分离度良好,在所考查的浓度范围内浓度对峰面积线性回归r》0.99,平均回收率为98.7%,日内及日间RSD＜1.3%,三批样品中3种氨基酸的含量均在95%～105%之间.结论用HPLC柱前衍生方法可测定谷丙甘氨酸制剂中谷氨酸、丙氨酸及甘氨酸含量.     

柱前衍生-反相高效液相色谱法测定血清及脑脊液中氨基酸的含量

目的 建立一种稳定、快速的柱前衍生-反相高效液相色谱测定血清和脑脊液中多种氨基酸的方法。方法 样品用ACCQ Fluor试剂进行衍生化后,在C18色谱柱上采用三梯度淋洗分离,荧光检测器检测。结果 本方法回收率在101.3%-97.9%之间,10次测定的RSD均小于5%。结论 1个样品在36min内可完成17种氨基酸的分离测定,各种氨基酸之间分离良好,方法快速、稳定、准确,可用于临床及科研样品的检测。     

RP-HPLC法测定大鼠脑组织及脑脊液中四种氨基酸类神经递质的含量

目的建立大鼠脑组织及脑脊液中四种氨基酸类神经递质含量的RP-HPLC测定方法。方法以2,4-二硝基氟苯(DNFB)为衍生化试剂柱前衍生,色谱条件为大连依利特色谱柱Hypersil BDS C18(4.6×200mm,5μm),乙腈和醋酸钠缓冲液为流动相,采用梯度洗脱,UV360nm检测。结果在25min内四种氨基酸分离完全,在1～100ng.mL-1范围内线性关系良好(r≥0.9993)。结论本方法准确,简便,灵敏度高,分析时间短,适用于一般实验室氨基酸的检测。     

不同炮制方法对水蛭中氨基酸及抗凝血酶活性的影响

目的 考察不同炮制方法对水蛭的氨基酸含量和抗凝血酶活性的影响.方法 采用柱前衍生化高效液相色谱法测定水蛭不同炮制品的游离氨基酸及水解氨基酸的含量;采用凝血酶滴定法测定其抗凝血酶活性.结果 蚂蟥的游离氨基酸含量为0.64%, 水解氨基酸含量为24.7%, 抗凝血酶活性为14.4 U;柳叶蚂蟥1 批的游离氨基酸含量为0.51%, 水解氨基酸含量为35.7%, 抗凝血酶活性为14.9 U;柳叶蚂蟥2 批及其炮制品的游离氨基酸含量为0.68%～0.78%,水解氨基酸含量为33.6%～39.9%,抗凝血酶活性为9.6～15 U.结论 柳叶蚂蟥的游离氨基酸含量及抗凝血酶活性与蚂蟥差别不大,但水解氨基酸含量高于蚂蟥;柳叶蚂蟥经过炮制后,游离氨基酸及水解氨基酸含量变化不大,而高温炮制（砂炒、蜜炙麦麸炒、滑石粉炒）降低了其抗凝血酶活性.     

HPLC法测定复方α酮酸片中四种氨基酸的含量

目的建立复方α酮酸片中4种氨基酸的含量测定方法。方法针对复方α酮酸片中赖氨酸醋酸盐、苏氨酸、组氨酸及酪氨酸四种氨基酸,采用反相高效液相法,以邻苯二甲醛（OPA）和2-巯基乙醇为衍生化试剂,测定四种氨基酸的含量。色谱柱为Lichrospher C1825 cm×4.6 mm;流动相：乙腈-醋酸盐缓冲液系统梯度洗脱;检测波长：335 nm。结果衍生化产物性质稳定;4种氨基酸在各自的浓度范围内线性关系良好（r〉0.999 0）;加样回收率为99.8%～101.1%,相对标准偏差均小于2.0%。结论该方法准确,简便,重现性好,专属性强,可用于该产品的质量控制。     

串联质谱检测氨基酸和酰基肉碱的室间质量评价

目的调查我国部分新生儿筛查实验室串联质谱检测氨基酸和酰基肉碱的水平和现状。方法向19家新生儿筛查实验室发放5个批号（201211、201212、201213、201214、201215）的血斑质控品,收集实验室回报的氨基酸和酰基肉碱检测值,对回报的结果按照方法分组进行统计分析,并评价其检测水平。结果 18家实验室回报了检测结果,回报率为94.7%。回报结果的18家实验室中有14家实验室采用衍生非配套的试剂检测氨基酸和酰基肉碱,有3家实验室采用衍生配套的试剂检测氨基酸和酰基肉碱,有1家实验室采用非衍生的方法检测氨基酸和酰基肉碱。按照方法学分组同时考虑是否使用配套试剂计算各组及格率,其中,瓜氨酸项目及格率为71.4%～100.0%,亮氨酸项目的及格率为71.4%～100.0%,甲硫氨酸项目的及格率为42.5%～100.0%,苯丙氨酸项目及格率为71.4%～100.0%,酪氨酸项目及格率为71.4%～100.0%,缬氨酸项目的及格率为66.7%～100.0%,游离肉碱项目的及格率为42.9%～100.0%,丙酰肉碱项目的及格率为28.6%～100.0%,异戊酰肉碱项目的及格率为33.3%～92.9%,辛酰肉碱项目的及格率为28.6%～100.0%,月桂酰肉碱项目的及格率为46.2%～100.0%,棕榈酰肉碱项目的及格率为64.3%～100.0%,十八碳酰肉碱项目的及格率为71.4%～100.0%。结论目前串联质谱检测氨基酸和酰基肉碱的质量水平差异较大,开展室间质评项目计划有利于提高我国遗传代谢病的检测领域整体水平。     

以氨基酸为连接子的吉西他滨-聚谷氨酸偶合物设计、合成及评价

目的 设计、合成抗肿瘤药物吉西他滨与聚谷氨酸的偶合物,通过调节连接子的结构以控制药物的释放,提高抗肿瘤药物的疗效。方法 首先合成吉西他滨3′-或5′-的氨基酸酯衍生物,然后在DCC作用下,氨基酸的氨基与聚谷氨酸分子中的羧基缩合,得到以氨基酸为连接子的吉西他滨-聚谷氨酸偶合物;用紫外法测定偶合物载药量;用HPLC法测定偶合物在水溶液或血浆中的稳定性。结果与结论 共合成目标化合物11个,载药量为25%～30%。稳定性试验结果表明,偶合物在水溶性或血浆中能够稳定地释放游离药物,氨基酸类型及连接位置可影响药物的释放速率,偶合物PG-Ala-3′-Gem的释放速率最快,4 h释放50%的药物,而PG-Val-3′-Gem和PG-Ala-5′-Gem在48 h分别释放30.3%和43.5%;偶合物在血浆中的释放速率略快于水溶液中的释放速率。     

异硫氰酸苯酯法测定清开灵注射液中氨基酸的含量

目的 建立准确测定清开灵注射液中氨基酸含量的方法.方法 采用异硫氰酸苯酯为衍生化试剂,清开灵注射液衍生化反应后,进行HPLC分析.色谱柱为Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相A为0.1 mol/L醋酸钠-乙腈(pH 6.5) (93∶7),流动相B为乙腈-水(4∶1),梯度洗脱,流速为1 mL/min;检测波长为254 nm.结果 该方法可以对清开灵注射液中20种氨基酸准确定量,其浓度在0.019 ～24.855 g/L范围内,线性关系良好(r=0.999 7～0.999 9).方法重复性的RSD(％)在0.766％ ～4.49％之间;20种氨基酸的加样回收率在92.2％ ～ 106.8％之间.结论 该方法准确、可靠、灵敏,可用于清开灵注射液中氨基酸的含量测定.     

柱前衍生HPLC测定阿胶中17种水解氨基酸含量

目的 建立柱前衍生高效液相色谱法(HPLC)同时测定阿胶中17种水解氨基酸含量的方法.方法 用6 mol/L盐酸溶液水解阿胶中的氨基酸,以异硫氰酸苯酯为柱前衍生试剂;用Hypersil BDS C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm),梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为254nm,柱温为30℃.结果 17种氨基酸在60 min内均可得到很好的分离,回收率为97.4％～1 00.1％,RSD为1.6％～3.4％.结论 建立的方法可靠,可用于阿胶中17种水解氨基酸的含量测定.     

3S-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸的结构修饰和抗血栓活性研究

3S 1 ,2 ,3,4 四氢 β 咔啉 3 羧酸 ( 1 )是来自我国南方蔬菜的具有抗血小板活性的吲哚生物碱 ,在水和有机溶剂中都很难溶解。考虑到引入氨基酸可以改善某些水溶性差的化合物的生物利用度 ,本研究对1进行氨基酸修饰。在H2 SO4存在下L 色氨酸与甲醛发生Pictet Spengler缩合 ,以 95 %收率生成 1。 1和Boc2 O反应以 76%收率生成 3S N Boc 1 ,2 ,3,4 四氢 β 咔啉 3 羧酸 ( 2 )。 2和L 氨基酸甲酯偶联 ,以90 %～ 98%收率生成 3S N Boc 1 ,2 ,3,4 四氢 β 咔啉 3 甲酰 L 氨基酸甲酯 ( 3a n)。皂化后 3a n以90 %～ 98%收率转化为 3S N Boc 1 ,2 ,3,4 四氢 β 咔啉 3 甲酰 L 氨基酸 ( 4a n)。脱Boc以 80 %～ 95 %收率生成 3S 1 ,2 ,3,4 四氢 β 咔啉 3 甲酰 L 氨基酸 ( 5a n)。体外和体内评价表明 ,引入L 氨基酸可以导致 1的抗血栓活性发生不同的变化。例如引入酸性和刚性环侧链氨基酸 ,1的抗血栓活性不增强 ,引入疏水侧链氨基酸 ,1的抗血栓活性适度增强 ,引入碱性和杂环侧链氨基酸 ,1的抗血栓活性明显增强。引入L 氨基酸导致 1的跨膜能力按与抗血栓活性相同的趋势变化。     

僵蚕提取物中氨基酸种类与含量测定

目的:研究僵蚕提取物中组成蛋白质的氨基酸残基种类与含量,为其质量控制和抗凝活性作用物质基础研究提供依据.方法:将样品用盐酸水解后采用RP-HPLC法测定15种氨基酸残基的种类与含量.结果:僵蚕提取物含有15种氨基酸残基,其总量为48.7%,其中谷氨酸、丙氨酸和缬氨酸残基较多,蛋氨酸和辅氨酸残基在水解过程中被破坏而未测出.结论:僵蚕提取物中的主要成分为蛋白质、多肽类成分,它们含有所测的15种氨基酸残基.该定量方法准确、可控,可用于僵蚕样品中氨基酸残基的分析.