耐药性颞叶癫痫脑组织中UL16结合蛋白2(ULBP2蛋白)的表达及临床意义

目的：研究耐药性颞叶癫痫患者脑组织中ULBP2的表达,探讨其在耐药性颞叶癫痫发病中的意义。方法：从重庆医科大学附属第一医院神经内科建立的耐药性癫痫患者脑组织库中随机抽取42例耐药性颞叶癫痫患者术后脑组织,用基因芯片检测ULBP2 cDNA的表达,用免疫荧光、免疫印记法（Western blot）检测ULBP2的蛋白表达产物,并与12例对照组进行比较。结果：耐药性颞叶癫痫患者颞叶脑组织中编码ULBP2的基因出现高表达；ULBP2蛋白在耐药性颞叶癫痫患者颞叶脑组织中的表达量与对照组相同部位比较明显增高。结论：耐药性颞叶癫痫患者颞叶脑组织中ULBP2基因及蛋白产物表达增高可能与耐药性颞叶癫痫发病中的免疫异常机制有重要关联,甚至可能是关键因素。它很可能为耐药性颞叶癫痫的免疫治疗提供新的靶点。     

颞叶癫痫患者颞叶皮层和海马组织内多药耐药相关蛋白1和胶质原纤维酸性蛋白共表达

目的 观察颞叶癫痫病人多耐药基因1（MDR1）、胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）和神经元特异性烯醇化酶（NSE）在颞叶和海马组织内的表达。方法 癫痫组样本来自12例颞叶癫痫病例的手术切除标本,对照组为4例非癫痫病的尸检脑组织。应用双重免疫荧光组织化学方法结合激光共聚焦显微镜技术显示MDR1、GFAP和NSE在颞叶和海马组织内的表达。结果 对照组颞叶皮质和海马齿状回内均可见到许多GFAP表达阳性的星形胶质细胞和NSE表达阳性的神经元,未见到表达MDR1的细胞。癫痫组颞叶皮质和海马齿状回内GFAP阳性星形胶质细胞高于对照组。颞叶皮层和海马组织内可见星形胶质细胞MDR1 和GFAP 共表达现象。结论 颞叶难治性癫痫可能与星形胶质细胞的多药耐药性有关。     

颞叶外侧癫痫患者脑组织NHE1及凋亡相关蛋白的表达

目的　检测颞叶外侧癫痫患者手术切除脑组织标本中钠氢交换体1（Na+/H+ exchanger-1,NHE1）的表达及凋亡相关蛋白的表达,初步探讨其致病机制。 方法　收集16例颞叶外侧癫痫患者手术切除脑组织标本作为癫痫组,10例颞叶肿瘤和脑出血患者手术切除脑组织标本作为对照组,HE染色观察脑组织病理学变化,免疫组化染色法以及免疫荧光法检测NHE1表达特点,Western blot等方法半定量分析NHE1蛋白表达特点,并检测凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax表达特点。 结果　HE染色可见癫痫组颞叶组织中神经元明显减少,吞噬现象明显增多,小胶质细胞过度活跃,而对照组标本无类似表现;免疫荧光及免疫组化染色提示NHE1定位于神经元上,癫痫组NHE1染色较对照组增强（P<0.05）;癫痫组NHE1蛋白半定量表达较对照组增高（P<0.05）;凋亡相关蛋白检测显示癫痫组Bcl-2蛋白表达较对照组降低（P<0.05）,Bax蛋白表达较对照组增高（P<0.05）。 结论　NHE1与颞叶外侧癫痫的形成和发展密切相关,其机制可能是NHE1增高参与调控神经元凋亡。     

灵芝孢子粉对癫痫大鼠脑IGF-1、NF-κB表达及神经细胞凋亡的影响

目的： 观察和探讨灵芝孢子粉对戊四氮（PTZ）致痫大鼠脑胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、核转录因子-κB（NF-κB）蛋白表达及神经细胞凋亡的影响。方法： 用亚惊厥剂量的PTZ复制大鼠慢性癫痫模型，用药组以灵芝孢子粉灌胃，记录癫痫发作的潜伏期及持续时间，采用免疫组织化学和TUNEL法分别检测脑IGF-1、NF-κB/P65的免疫反应性和神经细胞凋亡情况。结果： 大鼠海马和皮质区每高倍视野（×400）下平均凋亡细胞数模型组（18.80±2.13、16.87±2.00）明显多于对照组（0.97±0.52、0.58±0.25），IGF-1、 NF-κB/P65蛋白表达模型组明显高于对照组（均P<0.01）；在造模第17、21、25 d时用药组较模型组癫痫发作的潜伏期有所延长（分别为P<0.05，P<0.05，P<0.01），海马和皮质区凋亡细胞数用药组（12.30±2.46、10.48±1.33）明显少于模型组，NF-κB/P65蛋白表达用药组低于模型组，而IGF-1的免疫反应性用药组明显强于模型组。结论： IGF-1、NF-κB 及神经细胞凋亡均可能参与了PTZ致痫的发生发展过程,灵芝孢子粉能明显抑制NF-κB蛋白的表达，增强IGF-1的免疫反应性，可能是其对癫痫所致神经细胞凋亡有明显抑制，从而对神经细胞起保护作用的机制之一。     

难治性癫痫模型大鼠脑组织中srGAP2分子的表达

背景：众多研究结果显示srGAP2分子在突起生长和突触可塑性起到关键的作用,但具体机制不明。 目的：检测srGAP2在致痫大鼠模型中的表达,探讨srGAP2与难治性癫痫发病机制的相关性。 方法：选取雄性SD大鼠56只随机分为7组,其中随机选取6组建立癫痫模型,构成实验组,剩余1组作为对照组。分别选取癫痫发作后的6 h、1 d、1周、2周、1个月、2个月等6个时间点的颞叶脑组织作为研究对象,并与对照组进行比较。利用免疫组织化学、免疫荧光以及免疫印迹3种方法检测srGAP2在致痫动物模型以及对照组的脑组织中的表达及变化规律。 结果与结论：实验组中srGAP2除在皮质区表达增高外,还在海马区高表达,与对照组相比各时间点srGAP2在颞叶癫痫动物组中的表达含量逐渐升高,且在2周左右达高峰并维持,到2个月左右降至接近对照组水平。结果提示srGAP2可能通过促进苔藓纤维出芽,进而导致脑组织中异常神经网络的建立,并最终在难治性癫痫的发生发展中起到重要作用。     

ERRFI1在成年昆明小鼠脑组织中的表达定位研究

目的:探讨ErbB受体反馈抑制物1(ERRFI1)在成年昆明小鼠脑组织不同部位的mRNA和蛋白质表达情况。方法:选用成年健康雌性昆明小鼠,取脑组织的额叶、顶叶、枕叶、颞叶、丘脑、小脑和海马等部位,采取RT-PCR、real time RT-PCR检测ERRFI1 mRNA在各脑区的表达情况;采取Western Blot检测ERRFI1蛋白质在各脑区的表达情况;再采取免疫组织化学技术的方法对不同部位脑组织ERRFI1蛋白质进行表达与定位情况的研究。结果:ERRFI1 mRNA在小鼠脑组织的额叶、顶叶、枕叶、颞叶、丘脑、小脑和海马等部位均有表达,且表达没有显著差异;而ERRFI1蛋白质在小脑的表达显著高于额叶、顶叶、枕叶、颞叶、丘脑和海马(P 0. 05);免疫组化结果显示,ERRFI1在大脑皮质及脑干的部分神经元、海马少数锥体细胞及颗粒细胞、海马分子层及多形层的胶质细胞、小脑的部分神经元、浦肯野细胞、高尔基细胞等呈阳性表达,嗅球的小球周细胞、僧帽细胞、颗粒细胞等也呈阳性。结论:ERRFI1在成年昆明小鼠的脑组织中广泛表达。     

难治性癫痫患者脑组织中srGAP2的表达

目的:srGAP2(Slit-Robo GTPase-activating protein 2)作为Slit-Robo下游信号通路中一个重要的RhoGAP分子,在大脑轴突的形成及神经细胞的迁移中发挥作用。本课题通过检测病人大脑组织中srGAP2的表达,从分子水平探讨srGAP2与难治性癫痫发病机制的相关性。方法:从已建立的难治性癫痫脑库中随机选取35例患者的颞叶脑组织和同期15例相对正常的颞叶脑组织作为实验组与对照组。利用免疫组化,免疫荧光以及免疫印迹三种方法检测srGAP2在两组脑组织中的表达情况。结果:在正常人的颞叶脑组织中,srGAP2主要少量表达在神经元胞膜和胞浆中;而在难治性癫痫患者颞叶脑组织中srGAP2的表达量明显高于对照组(P0.05)。结论:srGAP2可能与难治性癫痫的发生发展密切相关。     

甜菜碱对戊四氮致痫大鼠海马GFAP、甘氨酸和甘氨酸受体表达的影响

 目的：研究甜菜碱对癫痫大鼠海马胶质细胞原纤维酸性蛋白（GFAP）、甘氨酸(Gly)及甘氨酸受体(GlyR)表达的影响。方法：将健康雄性Wistar大鼠随机分为：正常对照组（腹腔注射生理盐水,1.0 mL生理盐水灌胃);癫痫组（腹腔注射戊四氮,1.0 mL生理盐水灌胃）;甜菜碱高、中、低浓度组（腹腔注射戊四氮,甜菜碱灌胃）;丙戊酸钠组（腹腔注射戊四氮,丙戊酸钠灌胃）。实验结束后大鼠眼眶取血检测血清中同型半胱氨酸的含量;在低温条件下迅速取脑组织,分析Gly含量的变化,免疫荧光检测GFAP的水平,兔疫荧光和Western bloting检测海马区GlyR表达的变化。结果：各组大鼠大发作潜伏期无显著差异(P＞0.05),但是甜菜碱治疗组较癫痫组的首次大发作持续时间显著缩短(P<0.01)。癫痫组同型半胱氨酸的含量与正常组比较显著降低（P<0.01）,甜菜碱高、低浓度组同型半胱氨酸含量与癫痫组比较明显降低（P<0.05）。癫痫组甘氨酸的含量与正常对照组相比显著下降（P<0.01）。甜菜碱高、中、低浓度组甘氨酸的含量与癫痫组比较显著增高（P<0.01）。免疫荧光检测GFAP结果,癫痫组与正常组比较显著增高（P<0.01）,而甜菜碱高中低浓度与癫痫组相比显著降低（P<0.01）。免疫荧光与Western bloting检测GlyR结果,癫痫组GluR的表达与正常对照组相比显著降低（P<0.01）,甜菜碱高、中、浓度组较癫痫组显著升高（P<0.01）。结论：甜菜碱具有较好的抗癫痫作用。     

创伤后应激障碍模型大鼠内侧前额皮质磷酸化细胞外信号调节激酶1/2及EM>c-fos/EM>的变化

目的 探讨创伤后应激障碍（PTSD）模型大鼠内侧前额皮质（mPFC）磷酸化细胞外信号调节激酶1/2（pERK1/2）和c-fos的表达变化。 方法 将30只成年健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组（15只）和PTSD模型组（15只）,采用无连续单一应激（SPS）方法制备PTSD模型。用免疫组织化学和免疫印迹法检测mPFC pERK1/2的表达变化,RT-PCR检测c-fos mRNA表达变化。 结果 免疫组织化学分析显示,对照组和模型组pERK1/2阳性细胞数分别为10.4±2.07、48.8±10.08,阳性信号吸光度值分别为24.955±3.691、110.810±10.643,差异有统计学意义（P<0.01）;免疫印迹分析显示,对照组和模型组pERK/2相对表达量分别为0.510±0.052和1.109±0.106,差异有统计学意义（P<0.01）;RT-PCR分析结果显示,对照组和模型组c-fos mRNA相对表达分别为0.267±0.067和1.049±0.131,差异有统计学意义（P<0.01）。 结论 mPFC pERK1/2和c-fos表达增高,可能参与了PTSD模型大鼠的病理生理过程。     

灵芝孢子粉对癫痫大鼠脑组织IL-1β与c-Fos的影响

目的： 观察和探讨灵芝孢子粉对癫痫(EP)大鼠脑组织白细胞介素-1β（IL-1β）和c-Fos含量变化的影响。方法: 用放射免疫学方法检测IL-1β水平，用免疫组织化学方法检测c-Fos的表达。结果: 灵芝孢子粉组脑皮质和海马区c-Fos阳性细胞数明显少于癫痫模型组动物，脑组织中IL-1β明显低于癫痫模型组动物。结论: 灵芝孢子粉能够有效降低癫痫大鼠脑组织IL-1β水平，纠正免疫失调而起到抗癫痫作用；灵芝孢子粉能够抑制癫痫大鼠脑组织c-Fos的表达，阻断迟反应基因（LRG）以达到抗癫痫作用。     

颞叶癫痫大鼠海马差异表达基因和蛋白质的筛选研究

目的：寻找颞叶癫痫大鼠海马组织的差异表达基因和蛋白质，以期为进一步探讨颞叶癫痫的发病机制，寻找新的治疗靶点和研发新的治疗手段奠定基础。方法:运用cDNA微阵列、二维电泳和MALDI-TOF-MS技术，分析氯化锂-匹罗卡品（LiCl-PILO）致痫大鼠模型海马组织的基因表达谱和蛋白质表达谱，并对发现的差异表达基因和差异表达蛋白质进行分析和鉴定结果和。结论：发现LiCl-PILO致痫大鼠海马组织中192个基因差异表达，159条可在GenBank中登陆，其中表达上调的基因84条，表达下调的基因75条；筛选到78个差异表达蛋白质斑点，其中31个在癫痫组表达下调，47个在癫痫组表达上调。有5个蛋白质最终鉴定确认。本研究结果为运用蛋白质组学方法寻找癫痫治疗新靶点研究提供实验依据。     

免疫刺激对大鼠海马CA2、3区nNOS和c-Fos表达的影响

目的通过观察细菌脂多糖(LPS)对海马CA2、3区nNOS和c-Fos表达的影响,探讨海马CA2、3区的免疫调节作用及其与NO和c-Fos蛋白的相关性。方法实验组SD大鼠腹腔注射LPS,对照组注射生理盐水,2.5 h后,采用RT-PCR方法检测大鼠海马CA2、3区nNOS mRNA、原位杂交技术检测该区c-Fos mR-NA,免疫组化方法分别检测该区nNOS和c-Fos的表达变化。结果对照组和腹腔注射LPS组大鼠海马CA2、3区的nNOS,c-Fos及其mRNA的OD值如下:nNOS mRNA(0.283±0.09,0.476±0.03),nNOS(0.653±0.97,1.155±0.12),c-Fos mRNA(1.031±0.99,1.326±0.91),c-Fos(0.426±0.16,0.830±0.14);LPS使大鼠海马CA2、3区nNOS和c-Fos mRNA及表达产物含量均上调。结论海马CA2、3区在机体的免疫应激反应中起重要调节作用,NO和c-Fos蛋白可能是该调节过程中的重要信使分子。     

Neuronal expression of the drug efflux transporter P-glycoprotein in the rat hippocampus after limbic seizures

In the brain, the efflux transporter P-glycoprotein (Pgp) is predominantly located on the luminal membrane of endothelial cells lining brain microvessels and forming the blood-brain barrier. Many lipophilic drugs, including antiepileptic drugs, are potential substrates for Pgp. Overexpression of Pgp in endothelial cells of the blood-brain barrier has been determined in patients with drug resistant forms of epilepsy such as temporal lobe epilepsy and rodent models of temporal lobe epilepsy and suggested to lead to reduced penetration of antiepileptic drugs into the brain. Expression of Pgp after seizures has also been described in astrocytes, whereas it is not clear whether neurons can express Pgp. In the present study, Pgp expression was studied by immunohistochemistry in rats 24 h after a status epilepticus induced by either pilocarpine or kainate, widely used models of temporal lobe epilepsy. Unexpectedly, in addition to endothelial Pgp staining, intense Pgp staining was found in neurons in the CA3c/CA4 sectors and hilus of the hippocampus formation, but not in other brain regions examined. The neuronal Pgp staining was confirmed by two different Pgp antibodies. Double immunolabeling and confocal microscopy showed that Pgp was colocalized with the neuronal marker neuronal nuclear antigen, but not with the glial marker glial fibrillary acidic protein. No neuronal Pgp staining was seen in control rats. The expression of Pgp in neurons after limbic seizures was substantiated by determining Pgp encoding genes (mdr1a, mdr1b) in neurons by real time quantitative RT-PCR. Increased Pgp expression in hippocampal neurons is likely to affect the action of drugs with intraneuronal targets and, in view of recent evidence from other cell types, could be associated with prevention of apoptosis which is involved in neuronal damage developing after seizures such as produced by pilocarpine.     

青海高原藏族胃癌患者自然杀伤细胞活化性受体D及其配体MICA表达的研究

目的： 研究高原藏族胃癌患者外周血NK细胞表面活化性受体D(NKG2D)的表达及局部肿瘤组织和癌旁正常组织中相应配体MICA 的表达,探讨宿主NKG2D 在抗胃癌中的作用及其与肿瘤免疫逃逸的关系。方法: 对33例高原藏族胃癌患者及20 例健康人,采用流式细胞术检测外周血NKG2D 的表达状况,RT-PCR 和免疫组织化学技术检测在局部肿瘤组织和癌旁正常组织标本中MICA 的表达。结果: 高原藏族胃癌患者外周血NKG2D 的表达为(13.47 ±5.26)%，明显低于正常组（32.62±10.08)%，2组之间差异显著(P<0．05); 藏族胃癌组织MICA mRNA的表达水平显著高于癌旁正常组织（P<0.05）。胃癌组织MICA蛋白表达在癌旁正常组织中为(21.21%,7/33),胃癌组织阳性率为(78.79%，26/33),高分化组(60.00%,3/5),中分化组(72.73%,8/11),低分化组(88.24%,15/17),组间差异显著(P<0.05),而与肿瘤的大小、性别、年龄、淋巴结转移无关（P>0.05）。 Spearman相关分析显示，MICA表达水平与mRNA的表达水平显著正相关（r=0.903,P<0.01）。结论: 高原藏族胃癌的免疫逃逸可能与NKG2D 表达下调及其配体MICA 的表达升高有关，高原藏族胃癌患者外周血NK细胞活性降低,其NKG2D 表达的下降是NK细胞活性下降的原因之一。NKG2D配体MICA 的基因表达可能与高原胃癌患者的恶性转化有一定的相关性。     

Desmuslin基因的表达下调与原发性下肢静脉功能不全关系的实验研究

目的：在以前的mRNA差异显示研究中我们发现原发性静脉功能不全患者的病变静脉组织中存在desmuslin基因的差异表达。本研究的目的是从基因的转录和翻译水平对此进行验证。 方法： 将差异显示中获得的cDNA制备成探针，并根据desmuslin mRNA序列合成特异性PCR引物，分别采用Northern blotting和半定量RT-PCR技术检测病变静脉组织中desmuslin的表达水平。同时利用Yuji Mizuno惠赠的desmuslin特异性单克隆抗体，通过Western blotting和免疫组化技术检测病变静脉组织内DMN蛋白的含量。 结果： 在原发性下肢静脉功能不全患者的病变静脉组织中，desmuslin mRNA的表达量明显少于对照组（半定量RT-PCR：病例组0.19±0.05 vs对照组0.83±0.08，P＜0.01；Northern blotting：病例组0.06±0.02 vs对照组0.24±0.04，P＜0.01），Western blotting显示其蛋白质表达量也明显少于对照组（病例组0.25±0.06 vs对照组1.03±0.13，P＜0.01）。免疫组化表明：DMN蛋白大量分布于正常静脉管壁血管平滑肌细胞的胞浆中，平均阳性细胞百分率为83.7%±6.2％；而病例组中信号较少且弱，平均阳性细胞百分率为21.2%±8.3％，差异显著（P＜0.01）。 结论： 原发性下肢静脉功能不全患者的病变静脉组织中desmuslin基因在转录和翻译水平均存在明显的表达下调，这可能与病变静脉组织的形态学改变有一定的关系。     

U937细胞向巨噬细胞分化过程中清道夫受体BI(SR-BI)表达的变化

目的： 研究应用佛波酯使U937细胞向巨噬细胞分化过程中清道夫受体BI (SR-BI)蛋白及mRNA表达的变化。 方法： 用免疫细胞化学法、Western印迹法及RT-PCR法检测U937细胞诱导分化前和100 nmol/L PMA诱导分化24、48和72 h SR-BI蛋白及mRNA的表达。 结果： 诱导分化24、48及72 h，免疫细胞化学法检测的U937巨噬细胞SR-BI表达的平均积分吸光度值分别为15.94±3.56、27.86±4.39 及 9.08±2.37，前两者的平均积分吸光度值明显高于未分化细胞的SR-BI表达(7.76±1.74, P<0.05)；Western印迹法中诱导分化组SR-BI蛋白表达量分别是未分化组的2.08(P<0.05)、3.15(P<0.05)和1.24倍(P>0.05)。 RT-PCR结果显示，未分化组与各分化组SR-BI mRNA相对表达量分别是0.112±0.006、0.235±0.014、0.344±0.140和0.138±0.010。 结论： U937细胞向巨噬细胞分化过程中SR-BI蛋白及mRNA表达随着时间而先升高后降低，这种变化可能与泡沫细胞形成有关。     

Cortical Thickness Changes Associated with Photoparoxysmal Response

Photoparoxysmal response (PPR) is an EEG trait of spike and spike-wave discharges in response to photic stimulation that is closely linked to idiopathic generalized epilepsy (IGE). In our previous studies we showed that PPR is associated with functional alterations in the occipital and frontal cortices. The aim of the present study was to determine structural changes associated with PPR. For this purpose we analysed the cortical thickness as derived from T1 MRI images in PPR-positive-subjects (n = 12; 15.5 ± 8.6 years; 4 males), PPR-positive-IGE-patients (n = 12; 14.9 ± 2.7 years; 4 males) and compared these groups with a group of PPR-negative-healthy-controls (HC, n = 17; 15.3 ± 3.6 years; 6 males). Our results revealed an increase of cortical thickness in the occipital, frontal and parietal cortices bilaterally in PPR-positive-subjects in comparison to HC. Moreover PPR-positive-subjects presented a significant decrease of cortical thickness in the temporal cortex in the same group contrast. IGE patients exhibited lower cortical thickness in the temporal lobe bilaterally and in the right paracentral region in comparison to PPR-positive-subjects. Our study demonstrates structural changes in the occipital lobe, frontoparietal regions and temporal lobe, which also show functional changes associated with PPR. Patients with epilepsy present changes in the temporal lobe and supplementary motor area.