煎煮时间对附子毒性的影响研究

目的先煎(久煎)是附子等有毒中药减毒去毒的传统方法 ,但对其安全性缺少有效科学评价。本研究将通过比较不同煎煮时间对附子成分和体内毒性的影响,为其在临床上的安全应用提供科学依据。方法采用高效液相色谱法测定江油附子煎煮0、30、60min后水煎液中3种毒性成分含量变化,并以ICR小鼠进行急性毒性检测。结果附子0min水煎液中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱含量分别为97.28、176.28、648μg/g;30min水煎液中3种成分含量分别为2.23、1.87、8.52μg/g;60min水煎液中3种成分含量分别为0.00(检测不到),1.88、2.95μg/g。与空白对照组相比,附子0min和30min水煎液均有毒性,而60min毒性不显著,基本可以定义无毒。结论随着煎煮时间的延长,附子的毒性降低,尽管中乌头碱和次乌头碱仍有少量残留,但属于安全范围。本实验结果证明附子可以通过延长煎煮时间达到减毒的目的,以60 min以上为安全煎煮时间。     

干姜与附子配伍减毒的物质基础探讨

目的探讨干姜与附子共煎减小附子毒性的有效部位及其机理。方法取干姜的水提物及醋酸乙酯、氯仿和石油醚的提取物分别与附子共煎,取各种煎液进行小鼠口服给药的急性毒性实验及用HPLC法测定煎液中乌头碱,次乌头碱的含量。结果干姜与附子合煎有减小附子毒性的作用,但共煎液中的乌头碱含量增加,次乌头碱含量减小。干姜的氯仿提取物及石油醚提取物与附子共煎可明显减小附子的毒性,同时煎液中乌头碱含量明显减小。尤其是石油醚提取物同时使次乌头碱的煎出量也明显减小。干姜的醋酸乙酯提取物与附子共煎,可明显减小附子的毒性,但煎液中的乌头碱、次乌头碱含量均增加。干姜的水提物与附子共煎毒性略增大,乌头碱与次乌头碱的煎出量略有增加。结论干姜与附子共煎有减轻附子毒性作用。干姜中的氯仿、石油醚提取物可能通过减少乌头碱等有毒物质的煎出量而减小附子的毒性,干姜中的醋酸乙酯提取物可能具有同附子中的有毒生物碱发生某种结合而抑制其吸收的作用,也可能具有吸收后在体内发挥拮抗附子所含有毒生物碱毒性作用。     

附子复方治疗寒湿痹阻型痹证患者的安全性研究

目的研究附子复方治疗寒湿痹阻型痹证的安全性,为临床安全使用附子及其复方提供参考。方法按照中医证候积分不同,对56例受试者分别给予含不同剂量附子的中药复方水煎液口服,既定时间点采血并制备含药血浆样本,测取各样本药代动力学参数,并进行安全性分析。结果药动学仅检测出单酯型的苯甲酰乌头原碱（BAC）、苯甲酰新乌头原碱（BMA）、苯甲酰次乌头原碱（BHA）和双酯型的次乌头碱（HA）,4种生物碱血药浓度均低于附子中毒剂量,药动学参数拟合最佳房室模型为二室模型,有别于动物实验结果。临床观察无明显不良事件发生。结论本研究所用附子各剂量的临床用药安全;各生物碱在人体内代谢差异较大,其代谢过程可能与其它未知因素有关。     

泥附子商品等级划分合理性分析

目的分析泥附子商品等级划分的合理性。方法采用HPLC-MS/MS法同时测定不同等级附子中乌头碱、新乌头碱、印乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、乌头原碱、尼奥林、附子灵、宋果灵、塔拉乌头胺、去甲乌药碱、去甲猪毛菜碱14种生物碱的含有量,并采用聚类分析初步验证附子分级的科学性;采用冰醋酸扭体法,以小鼠扭体次数和扭体潜伏期为考察指标,研究不同等级附子水提液的镇痛效果;采用大鼠尾静脉推注测定最小致死量,研究不同等级附子70%醇提液的毒性差异。结果 14种生物碱在不同等级附子中含有量存在显著差异。随着附子质量的增大,双酯型生物碱的含有量呈降低趋势,强心成分呈升高趋势,单酯类生物碱变化不明显;各等级镇痛效果无显著性差异,但小鼠扭体潜伏期存在缩短趋势;质量大于40 g的附子毒性明显低于小于40 g附子。结论附子分级在毒性评价上具有显著意义,质量大的附子具有毒性小的特点,而在镇痛疗效上并无明显差异。大个头附子强心成分具有升高趋势,但体内活性还需进一步验证。     

附子毒性辨证研究

目的:建立中药"辨证毒理"假说.以附子为例,研究不同证候应用附子后产生的毒性差异.方法:丙基硫氧嘧啶100 mg·kg-1·d-1造成阳虚模型,甲状腺素片悬混液150 mg·kg-1·d-1复制阴虚模型,同时给附子水煎剂,附子高剂量组为8 g·kg-1·d-1,附子低剂量组为4 g·kg-1·d-1,空白组使用相同剂量的生理盐水.结果:28 d后大鼠股动脉放血处死,取大鼠血清,测各组大鼠血清中乌头碱含量.测试结果显示,各组大鼠血清中乌头碱含量有差异存在.结论:实验结果表明附子对阴虚、阳虚大鼠的毒性存在差异,从而说明中药辨证毒理假说的客观性.     

甘草与附子配伍对乌头碱、新乌头碱、次乌头碱大鼠药动学的影响

目的:建立HPLC-MS同时测定大鼠血浆中的乌头碱、新乌头碱、次乌头碱含量的方法,并用于研究大鼠口服3种含附子煎液后乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的药动学变化。方法:3组大鼠分别灌胃附子煎液(A液)、甘草附子单煎合并液(B液)、甘草附子合煎液(C液),附子剂量均为1.5 g/kg,HPLC-MS法测定乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的血药浓度,用DAS 2.0数理统计软件分别计算其药动学参数。结果:甘草与附子配伍后,三种乌头碱的Cmax、AUC均降低,MRT、t1/2均延长,Tmax无明显变化。甘草附子合煎液相比于甘草附子单煎合并液,Cmax、AUC更低,MRT、t1/2更长。结论:甘草能够显著影响附子中三种乌头碱的药动学。     

LC-MS/MS 比较研究附子配伍甘草对大鼠体内次乌头碱药动学影响

目的:建立大鼠血浆中次乌头碱的LC-MS/MS检测方法,用于研究附子配伍甘草后次乌头碱在大鼠体内药动学的变化。方法:大鼠分别灌服附子单煎液、附子甘草合煎液,其中次乌头碱含量分别为73.29μg.kg-1、34.85μg.kg-1,LC-MS/MS测定次乌头碱血药浓度,采用3P97药动学软件分别计算其药动学参数。结果:血浆中次乌头碱在1.98～198 ng.mL-1范围内呈现良好的线性关系。附子配伍甘草后次乌头碱在大鼠体内Tmax显著延长,CL显著减小,AUC/dosage显著增大(P<0.05)。结论:附子配伍甘草后次乌头碱在大鼠体内药动学行为发生显著改变。     

附子乙酸乙酯提取物对虚寒模型大鼠肝LA、LDH、PA、Gn含量及ATP酶活力的影响

目的 观察中药附子乙酸乙酯提取物与附子水煎液相比对虚寒模型大鼠能量代谢的影响.方法 将Wistar大鼠随机分为空白对照组(空白组,10只)及虚寒模型组(30只).采用生石膏、龙胆草、黄柏和知母水煎液灌胃大鼠15天复制虚寒模型,之后将虚寒模型组大鼠再随机分为附子乙酸乙酯提取物组(治疗组,10只)、附子水煎液组(对照组,10只)及模型组(10只),两个用药组分别用附子乙酸乙酯提取物和附子水煎液分别灌胃治疗5天,模型组继续予模型药灌胃,空白对照组继续予生理盐水灌胃.检测大鼠肝组织乳酸(LA)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙酮酸(PA)、糖原(Gn)含量以及Na+ -K+ -ATP酶、Ca2+ -Mg2+ -ATP酶的活力.结果 与空白组比较,模型组PA含量、Na+ -K+ -ATP酶、Ca2+ -Mg2+ -ATP酶活力降低;与模型组比较,两个给药组PA含量升高;与对照组比较,治疗组LDH含量、PA含量、Na+ -K+ -ATP酶活力升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 附子乙酸乙酯提取物比附子水煎液热性略大,似乎能产生更多的能量,但是最终结论及具体作用机制有待进一步研究.     

甘草与附子配伍减毒的有效成分及作用环节研究

目的:探明甘草酸和甘草次酸是否为甘草中降低附子毒性的有效成分及其作用环节。方法:将附子单煎及附子与甘草、附子与甘草酸、附子与甘草次酸分别合煎,用HPLC法分析各种煎液中乌头碱及次乌头碱的煎出量,同时用动物实验测定各煎液不同给药途径的急性毒性,比较各煎液的LD50。结果:口服给药,甘草、甘草次酸与附子合煎液的毒性明显减小,甘草酸与附子合煎毒性略有减小;腹腔注射给药,甘草酸与附子合煎液的毒性明显增加。合煎时甘草能降低乌头类生物碱的溶出,而甘草酸、甘草次酸均有增加溶出的作用,甘草酸的作用强于甘草次酸。结论:甘草与附子合煎口服可减小附子毒性,部分原因是其可减少附子中有毒生物碱的煎出。但甘草酸及甘草次酸并不能减少附子中有毒生物碱的煎出,而可能与有毒生物碱结合,延缓其在胃肠道吸收,发挥一定的减毒作用。     

大黄附子配伍对附子总生物碱在阳虚便秘大鼠体内的药动学影响

目的:研究大黄附子组分配伍对附子总生物碱在阳虚便秘大鼠体内的药动学行为的影响。方法:将阳虚便秘大鼠分为附子组和配伍组,附子组灌胃9.6 mg·kg~(-1)附子总生物碱,配伍组灌胃9.6 mg·kg~(-1)附子总生物碱、19.2 mg·kg~(-1)大黄总蒽醌,UHPLC-Q/TOF-MS法测定附子总生物碱的血药浓度,并计算药动学参数。结果:配伍后乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的C_(max)、AUC_(last)明显降低,T_(max)明显提前;苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和乌头原碱的C_(max)、AUC_(last)明显升高,T_(max)明显延后,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论:大黄总蒽醌、附子总生物碱组分配伍后改变了附子总生物碱在阳虚便秘大鼠体内的药动学行为。     

HPLC测“半蒌贝蔹芨攻乌”中乌头与其它诸药合煎前后次乌头碱的含量变化

 目的　建立“半蒌贝蔹芨攻乌”中乌头剧毒成分(次乌头碱 )的HPLC定量测定方法。对其中的乌头与其它诸药配伍前后水煎剂中次乌头碱的含量进行测定,探讨“半蒌贝蔹芨攻乌”的科学性。方法　HPLC条件:流动相:甲醇-水-氯仿-三乙胺(70∶30∶2∶0.2),流速1.0mL·min^-1,检测波长235nm,柱温40℃;选取生附片(属乌头类)单煎及分别与半夏、全瓜蒌、浙贝母、白蔹、白芨1∶1配伍合煎,100℃水浴加热45min制备水煎剂,乙醚萃取煎液中的待测成分,氮气流吹干萃取剂,残渣用甲醇溶解后进样测定次乌头碱含量。结果　除半夏外,其它诸药与乌头配伍均能使水煎剂中次乌头碱的含量增高,且与药材中的酸性成分(溶液pH值下降)有关。结论　本实验从诸药与生附片合煎液中有毒化学成分含量升高角度,肯定了“半蒌贝蔹芨攻乌”的科学性。     

清胰汤对重症急性胰腺炎营养状况的疗效观察

目的:观察中药清胰汤在重症急性胰腺炎患者的营养代谢中的治疗作用。方法:收集2006年7月～2010年7月收治的急性反应期SAP病人80例,分为清胰汤治疗组(治疗组)42人和常规治疗组(对照组)38人,观察、比较病人入院时、3d、7d、14d后的总蛋白、白蛋白、前白蛋白的血清水平变化。结果:治疗组和对照组的血清总蛋白、白蛋白、前白蛋白水平在住院第7d均上升,治疗组上升更快,两组比较在第7d、14d有显著性差异(P0.05)。结论:SAP患者早期能量消耗剧烈,患者表现为能量失衡状态。中西医结合治疗可以更好的维持早期SAP患者的营养状态。     

基于代谢组学的麻黄细辛附子汤治疗流感小鼠的作用机制研究

该研究运用代谢组学方法,研究麻黄细辛附子汤(MXF)干预的流感小鼠血清中内源性代谢物的变化,寻找潜在生物标志物及相关的代谢通路,探讨MXF的药效及作用机制。实验选用昆明(KM)小鼠36只,随机分为正常组、流感组、MXF组,使用流感病毒H1N1滴鼻感染,建立流感小鼠模型;MXF组使用药物干预,其他组给予等体积的生理盐水,每日1次,连续6 d,记录小鼠的体重、肛温等药理指标,末次给药24 h后收集血清样本,采用HPLC-TOF-MS检测。结果显示,与正常组相比,流感组小鼠体重、肛温均出现不同程度下降,肺指数和死亡率明显升高(P0.05),MXF组各药理指标出现良好的回调趋势;血清样本采集的原始数据,使用R语言,MPP,SIMCA-P等软件进行处理,发现3组小鼠血清中14种内源性物质发生显著性变化(P0.05),经MXF干预后代谢物水平均出现不同程度的回调;进一步利用Met PA数据平台分析发现,14种代谢物涉及的通路包括糖代谢、花生四烯酸代谢、甘油磷脂和鞘脂代谢等。通过对这些差异性代谢物生理功能的分析,并结合测定的宏观药理指标的分析,推测MXF可能从改善糖代谢,调节花生四烯酸代谢、甘油磷脂和鞘脂代谢等多途径,发挥其药效作用。     

基于析因设计探讨附子与人参、黄芪、干姜的交互关系

目的：考察中药附子、人参、黄芪、干姜干预阿霉素（ADR）心脏毒性损伤模型大鼠的效应机制,分析附子与人参、黄芪、干姜的交互关系。方法：将72 只大鼠随机分为9 组,每组8 只。除正常组外,各组大鼠按2.5 mg·kg-1 体重剂量腹腔注射阿霉素,每周1 次,连续4 周,累计10 mg·kg-1。附子、干姜组按1.75 g·kg-1,人参、黄芪组按0.875 g·kg-1,参附、芪附组按2.625 g·kg-1,姜附组按3.5 g·kg-1 体重剂量灌胃水煎液,每日1 次,连续4 周。测定超氧化物歧化酶（SOD）,肌钙蛋白（CTn）、细胞色素C（CytC）,心肌线粒体Bax、Bcl2、Caspase-3、Caspase-9 等指标,关联密切指标计算综合评分,对各项指标及综合指标进行药物组间单因素方差分析及药物间交互作用分析的析因设计方差分析。结果：模型组与正常组比较,各项指标差异均有统计学意义（P<0.05）。附子、人参、黄芪、干姜对各项指标均有不同程度影响,附子与人参、黄芪、干姜的交互作用（除Bax 外）均有统计学意义。结论：中药附子、人参、黄芪、干姜对ADR 模型大鼠心脏均具有一定的保护作用,附子与人参、黄芪、干姜配伍均能提升单一用药的效果。     

黑附子及配伍甘草、干姜对小鼠致死毒性随机平行对照研究

[目的]探讨附子及配伍对小鼠致死毒性影响。[方法]将50只小鼠编号并按随机数字表法分为四组:对照组、附子水组、附子炙甘草组、附子干姜组,10只/组。通过预实验确定小白鼠死亡临界剂量,将附子浓度分别配制成半致死剂量1倍、2倍和4倍3种浓度。根据小白鼠体重30±5g预测胃容量0.5±0.1mL,浓度分别为1.03mg/mL、2.05mg/mL、4.10g/mL;预实验结果4倍浓度下为69.68g/kg。8~9时间段内小鼠大量死亡,由此界定小鼠致死剂量。将药物熬到沸腾,持续40min,最后浓缩到10mL。常规灌胃干预,将小鼠腹位固定于玻璃板上,将附子及配伍甘草、干姜水煎剂灌胃小鼠,根据体重不同灌胃剂量0.5±0.1mL。[结果]附子与干姜或炙甘草配伍可缓解附子对小鼠的致死毒性,炙甘草作用较干姜明显,心率和体温下降明显变慢,漏搏、早搏、倒置减少。[结论]高浓度附子对小鼠具有较强的致死毒性,附子与干姜或炙甘草配伍对附子的致死作用具有较强解毒作用。     

基于UPLC-Q-TOF/MS技术结合序贯代谢法研究诃子汤炮制草乌机理＊

目的 研究诃子汤炮制草乌对草乌多成分体内动态变化过程的影响，从而探讨蒙医诃子汤炮制草乌机理。方法 采用超高效液相色谱-串联飞行时间/质谱（Ultra performance liquid chromatogr time of flight/mass spectrometry，UPLC-Q-TOF/MS）技术和封闭肠环法，收集生草乌、炮制草乌及诃子的肠壁吸收、肠道菌吸收代谢以及肝代谢样品，分别建立大鼠含药血浆指纹图谱，对各个样品所含成分进行对比分析研究。结果 在肠壁吸收研究中检测出生草乌、炮制草乌成分共32种，其中生草乌组、制草乌组共有成分16种、只在生草乌组检测出而未在制草乌组检测到成分8种、只在制草乌组检测出而未在生草乌组检测出成分8种，诃子成分17种。在肠道菌吸收代谢研究中检测出草乌31种成分，其中生草乌、制草乌组共有成分10种、只在生草乌组检测出而未在制草乌组检测到成分7种、只在制草乌组检测到而未在生草乌组检测出成分14种，诃子13种成分。在肝代谢研究中草乌检测出21种成分，其中生草乌组、制草乌组共有成分5种、只在生草乌组检测出而未在制草乌组检测到成分7种、只在制草乌组检测出而未在生草乌组检测出成分9种，诃子11种成分。对已鉴定出成分进行含量对比研究结果显示生草乌组与制草乌组相比较其成分在肠壁吸收中较多在肠道菌及肝中吸收代谢较少，而制草乌与诃子成分在肠道菌及肝代谢中较多，而在肠壁与肝代谢中较少。结论 经过诃子汤炮制草乌可使草乌成分吸收代谢位点发生了变化，使草乌成分在肠壁吸收中变少而肠道菌及肝代谢中变多。由此可知，经诃子汤炮制使草乌成分的吸收变缓慢且代谢变快，因而可有效起到草乌中毒性成分被人体缓慢吸收且快速代谢。由此推断，诃子汤炮制草乌通过以下途径达到减毒目的：一方面避免草乌毒性成分吸收过快而导致血药浓度快速升高导致中毒；另一方面加速代谢毒性成分，进而降低血药浓度而避免中毒。     

UPLC-Q-TOF-MS分析不同产地泥附子化学成分的差异

附子是我国毒性中药的代表品种,具有较高的药用价值,同时也具有一定的安全风险。随着城市化进程的推进及产业转移升级,逐渐形成了传统道地产区与新兴产区并存的局面。不同产区在地理分布、生态环境及生长周期等方面的差异性,可能导致附子种内化学成分的变异,进而影响品质和疗效。然而,有关不同产区附子的化学特征成分尚缺少深入研究。应用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)方法对比分析传统不同产地附子的化学成分差异。结果表明,采用无监督的主成分分析(PCA),汉中附子与道地的江油附子成分相似,明显不同于新兴产区的布拖与巍山附子;运用偏最小二乘判别分析(PLS-DA),筛选发现7个主要差异化合物,其中新乌头碱与附子灵在布拖附子与巍山附子中含量较高,而次乌头碱、尼奥林、卡米查林、宋果灵等在江油附子与汉中附子中含量较高;结合各成分的毒性强弱,发现次乌头碱与新乌头碱是区分江油附子与布拖附子、巍山附子的关键毒性成分,江油附子毒性低于布拖附子与巍山附子。江油附子较低的毒性有利于保障临床用药安全,可能是附子道地性形成的重要原因之一。上述研究结果为从次生代谢产物多样性角度揭示附子道地性的形成机制提供了新的参考数据。     

黄连与乌头对lewis肺癌细胞分化的作用比较

黄连与乌头分别是寒凉药与温热药的代表,该研究的目的是观察黄连与乌头对lewis肺癌细胞的分化作用,比较寒凉药与温热药对肿瘤进展的影响。该研究制备黄连与乌头大鼠含药血清,体外培养lewis肺癌细胞,观察黄连与乌头含药血清对肿瘤细胞分化、增殖、黏附、琥珀酸脱氢酶活性及细胞间连接通讯的影响。建立小鼠lewis肺癌皮下移植及转移肿瘤模型,采用每日2次、连续4周给小鼠灌胃给药黄连与乌头水煎液治疗,检测小鼠体温、血氧饱和度、红细胞ATP酶活性、血流变、瘤内缺氧状态、毛细血管通透性及细胞间连接通讯,综合评价黄连与乌头对肿瘤进展的影响。结果发现乌头含药血清诱导lewis肺癌细胞分化,抑制细胞增殖和黏附,促进细胞琥珀酸脱氢酶活性及细胞间连接通讯。黄连含药血清虽也抑制细胞增殖,但无诱导细胞分化作用,且促进细胞黏附,抑制细胞琥珀酸脱氢酶活性及细胞间连接通讯。乌头水煎液能维持荷瘤小鼠体温、血氧饱和度、红细胞ATP酶活性和血流变,改善瘤内缺氧状态、毛细血管通透性及细胞间连接通讯,阻止肿瘤生长和转移。黄连水煎液虽也有一定阻止肿瘤生长作用,但降低小鼠体温、血氧饱和度、红细胞ATP酶活性、血流变和细胞间连接通讯,增加瘤内缺氧状态和毛细血管通透性,促进肿瘤转移。这些结果提示温热药可诱导肿瘤肿瘤细胞分化,阻止瘤毒内陷,比寒凉药更有利于肿瘤治疗。     

附子水提物单次给药对小鼠心脏“量-时-毒”关系研究

目的: 通过心电图变化和血清生化指标的改变,研究附子水提物单次给药对正常小鼠心脏“量-毒”和“时-毒”关系的影响。 方法: 根据给药剂量和药后不同时间点对小鼠分组,单次灌胃给予一定剂量的附子水提物,观察给药前后小鼠ECG的变化,计算心、肝、肾的脏器指数,并检测血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、B-型脑钠肽(BNP)和肌钙蛋白(CTn-I)的水平。 结果: “时-毒”关系研究表明:给小鼠灌胃一定剂量附子水提物5 min后,小鼠心率开始升高,60 min达到峰值后逐渐降低;QRS间期、R波幅度、T波时间和幅度、QT间期从药后5 min开始降低,60 min达到最低值后逐渐升高;血中CK,LDH,BNP和CTn-I从药后5 min开始升高,60 min达到峰值;各时间点小鼠脏体比值无显著变化。“量-毒”关系研究表明:随着单次给药剂量的逐渐增大,小鼠的心率逐渐升高,心电图QRS间期、T波时间和幅度、QT间期逐渐减小,小鼠血清CK,LDH,BNP和CTn-I水平也逐渐升高,均呈现一定的剂量依赖性;各剂量组小鼠脏体比值无显著变化。 结论: 小鼠于不同剂量和不同时间点单次灌胃给予一定剂量的附子水提物可造成不同程度的心脏损伤,并呈现一定的“量-时-毒”关系,其毒性峰效应时间点出现在药后60 min。