桂枝加葛根汤含药血清对纤维环细胞CaM/CaMKⅡ信号通路的影响

目的观察桂枝加葛根汤含药血清对纤维环细胞CaM/CaMKⅡ通路影响。方法采用自制桂枝加葛根汤大鼠含药血清,对培养的椎间盘纤维环细胞进行不同浓度的药物干预,采用Western blot检测椎间盘纤维环中CaM、CaMKⅡ蛋白表达变化情况。结果中药高剂量组、中药中剂量组CaM、CaMKⅡ蛋白表达较空白对照组显著升高,变化有显著性差异(P<0.05)。结论中、高剂量组桂枝加葛根汤大鼠含药血清能增强纤维环细胞CaM和CaMKⅡ蛋白表达。桂枝加葛根汤通过上调CaM/CaMKⅡ通路影响纤维环细胞的修复。     

不同剂量五福饮对大鼠尾椎间盘退变髓核β—连环素、聚蛋白多糖及Ⅱ型胶原调控作用的实验研究

目的:探索不同剂量五福饮对大鼠尾椎间盘退变(IVDD)髓核β-连环素(β-catenin)、聚蛋白多糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原(Col2)的调控作用。方法:取SD大鼠64只,随机分为空白组、模型组、五福饮低剂量组及五福饮高剂量组。除空白组外,其余各组大鼠构建IVDD模型。模型构建成功后,五福饮低、高剂量组灌服不同剂量的五福饮药液,空白组和模型组大鼠灌服生理盐水。五福饮干预8周后,检测椎间盘髓核β-catenin阳性表达细胞数及mRNA表达水平,Aggrecan及Col2 mRNA水平。结果:模型制备4周后,与空白组比较,模型组、五福饮低、高剂量组大鼠50%缩足阈值(PWT)明显降低(P<0.05);尾椎间盘髓核β-catenin阳性表达细胞数明显升高(P<0.05)。五福饮干预8周后,与空白组比较,模型组大鼠尾椎5~6椎间盘Aggrecan与Col2 mRNA表达明显降低(P<0.05),β-catenin mRNA及阳性表达细胞数明显升高(P<0.05)。与模型组比较,五福饮低、高剂量组大鼠50%PWT、尾椎5~6椎间盘Aggrecan与Col2 mRNA表达均明显升高(P<0.05),β-catenin mRNA及阳性表达细胞数明显降低(P<0.05)。与五福饮低剂量组比较,五福饮高剂量组大鼠50%PWT、尾椎5~6椎间盘Aggrecan与Col2mRNA表达均明显升高(P<0.05),β-catenin mRNA及阳性表达细胞数明显下降(P<0.05)。结论:五福饮可延缓或部分逆转大鼠尾IVDD,且五福饮对大鼠尾IVDD治疗作用存在剂量依赖性。椎间盘髓核β-catenin可能是五福饮的作用靶点。     

分子生物学技术研究桂枝加葛根汤和独活寄生汤防治颈/腰椎病的机制

目的运用分子生物学技术研究桂枝加葛根汤和独活寄生汤防治颈/腰椎病的起效机制。方法用低、中、高剂量桂枝加葛根汤血清和独活寄生汤血清及空白血清分别干预大鼠颈/腰椎间盘细胞,再采用MTT比色法和Western blotting技术分别检测各组大鼠颈/腰椎间盘细胞生长情况和Ca M、Ca MK、CREB相关蛋白表达水平。结果干预后第1天,5组间颈/腰椎间盘细胞生长情况比色值比较差异无统计学意义(P均0.05);干预后的第2—7天,各中药血清组和胎牛血清组颈/腰椎间盘细胞生长情况比色值均明显高于空白血清组(P均0.05),且随作用时间呈递增趋势。各中药血清组和胎牛血清组颈/腰椎间盘细胞Ca M、Ca MK和CREB蛋白表达量均明显高于空白血清组(P均0.05);中、高剂量中药血清组和胎牛血清组各蛋白表达量比较差异均无统计学意义(P均0.05),但此3组各蛋白表达量均高于低剂量中药血清组(P均0.05),且高剂量中药血清组各蛋白表达量均明显高于中剂量中药血清组(P均0.05)。结论分子生物学技术研究提示桂枝加葛根汤和独活寄生汤可能通过促进颈/腰椎椎间盘细胞的生长及相关蛋白的表达水平达到防治颈/腰椎病的目的,而且其效应过程可能存在一条重要的信号通路即Ca M-Ca MK-CREB通路。     

下瘀血汤对肝癌细胞生物活性及Nanog信号通路表达的影响

目的:研究下瘀血汤对肝癌细胞的作用以及对Nanog信号通路的影响。方法:将HepG2细胞分为空白血清组、低剂量含药血清组、中剂量含药血清组;高剂量含药血清组,通过MTT、流式细胞仪、Transwell测肝癌细胞增殖、凋亡及侵袭情况,实时PCR、蛋白质印迹法测Nanog mRNA、Bcl-2、胱天蛋白酶-3水平。结果:空白血清组肝癌细胞的OD值及侵袭数量高于中剂量、高剂量含药血清组(P<0.05),肝癌细胞凋亡率低于低剂量、中剂量、高剂量含药血清组(P<0.05),高剂量含药血清组肝癌细胞OD值及侵袭数量最少、凋亡最高;空白血清组肝癌细胞中Nanog mRNA及Bcl-2蛋白表达高于低剂量、中剂量、高剂量含药血清组(P<0.05),胱天蛋白酶-3的蛋白表达水平低于低剂量、中剂量、高剂量含药血清组(P<0.05),与低剂量、中剂量剂量含药血清组比较,高剂量含药血清组肝癌细胞中Nanog mRNA及Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05),胱天蛋白酶-3蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:下瘀血汤通可抑制肝癌细胞的活性及其侵袭力、促进癌细胞的凋亡,其作用机制可能调控与Nanog信号通路,从而促进胱天蛋白酶-3的表达、抑制Bcl-2水平有关。     

化瘀祛痰颗粒剂含药血清对LPS诱导大鼠内皮细胞p65表达的影响

目的:通过研究化瘀祛痰颗粒剂含药血清对原代培养的大鼠内皮细胞p65mRNA和蛋白表达的影响,探讨其抗炎机制。方法:以血清药理学方法制备中药化瘀祛痰颗粒剂含药血清;原代培养的大鼠内皮细胞分为空白组、阳性对照组、化瘀祛痰颗粒剂含药血清低剂量组、中剂量组和高剂量组、采用RT—PCR方法观察各组p65mRNA表达情况;用WestenBlot方法检测p65蛋白表达情况。结果:与空白组比较,阳性对照组p65mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.001);与阳性对照组比较,化瘀祛痰颗粒剂含药血清各组p65mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.05);血清各组在影响p65蛋白含量方面存在剂量依赖性(P<0.05),但在影响p65mRNA表达方面无明显剂量依赖性(P>0.05)。结论:化瘀祛痰颗粒剂能够通过抑制核因子KB,减少炎症因子的基因表达起到抗炎作用进而发挥其抗动脉硬化作用。     

化瘀祛痰颗粒剂对血管内皮细胞表达MCP-1的影响研究

[目的]通过研究化瘀祛痰颗粒剂含药血清对原代培养的大鼠内皮细胞MCP-1 mRNA和蛋白表达的影响,探讨其抗炎机制。[方法]以血清药理学方法制备中药化瘀祛痰颗粒剂含药血清;原代培养的大鼠内皮细胞分为空白组、阳性对照组、化瘀祛痰颗粒剂含药血清低剂量组、中剂量组和高剂量组、采用RT-PCR方法观察各组MCP-1mRNA表达情况;用Westen Blot方法检测MCP-1蛋白表达情况。[结果]与空白组比较,阳性对照组MCP-1mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.001);与阳性对照组比较,化瘀祛痰颗粒剂含药血清各组MCP-1mRNA和蛋白表达较阳性对照组明显降低(P<0.05);血清各组在影响MCP-1蛋白含量方面存在剂量依赖性(P<0.05),但在影响MCP-1mRNA表达方面无明显剂量依赖性(P>0.05)。[结论]化瘀祛痰颗粒剂能够通过抑制MCP-1,减少单核细胞聚集起到抗炎作用进而发挥其抗动脉硬化作用。     

身痛逐瘀汤含药血清通过NF-κB通路抑制TNF-α诱导的大鼠髓核细胞退变的作用机制

目的 探讨身痛逐瘀汤含药血清是否可通过介导核因子-κB(NF-κB)通路抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的大鼠髓核细胞退变。方法 将成年雄性SD大鼠随机分为4组制备空白血清和身痛逐瘀汤高、中、低剂量含药血清。取从大鼠尾盘获得并传代到第3代的髓核细胞,分为5组培养：空白组加20%空白大鼠血清,模型组加20%空白大鼠血清和20 ng/mL TNF-α,身痛逐瘀汤高剂量组加20%身痛逐瘀汤高剂量含药血清和20 ng/mL TNF-α,身痛逐瘀汤中剂量组加20%身痛逐瘀汤中剂量含药血清和20 ng/mL TNF-α,身痛逐瘀汤低剂量组加20%身痛逐瘀汤低剂量含药血清和20 ng/mL TNF-α,均培养48 h。采用RT-PCR法检测髓核细胞中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原蛋白(CollagenⅡ)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2家族相关x蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA表达情况,采用Western blot法检测细胞中p-IKKα/β、IKKβ、p-IκBa、IκBa、p-p65、...     

三七含药血清对成纤维细胞功能及VEGF、TGF-β、Collagen Ⅰ表达的影响

目的:探讨三七含药血清对L929成纤维细胞增殖、迁移及血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子-β(TGF-β)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)表达的影响。方法:将28只SPF级SD大鼠随机分为对照组及三七低、中、高剂量组,制备血清。体外培养小鼠成纤维细胞系L929,对照组给予生理盐水血清,低、中、高剂量组给予相应的三七含药血清干预。CCK-8法检测成纤维细胞增殖,划痕实验检测成纤维细胞迁移,RT-qPCR及Western Blot分别检测VEGF、TGF-β、Collagen Ⅰ的mRNA及蛋白表达。结果:与对照组比较,低剂量组细胞干预24 h后OD值及干预48 h后迁移愈合百分比升高(P<0.05),VEGF、TGF-β蛋白及mRNA表达增加(P<0.05);中剂量组细胞干预24 h后OD值及干预48 h后迁移愈合百分比提高(P<0.05),VEGF、TGF-β、Collagen Ⅰ蛋白及mRNA表达增加(P<0.05);高剂量组细胞干预24 h后OD值及干预48 h后迁移愈合百分比降低(P<0.05),VEGF、TGF-β蛋白及mRNA表达下...     

胃热消炎合剂对人胃癌细胞SGC-7901增殖影响的机制研究

目的研究胃热消炎合剂对人胃癌细胞SGC-7901增殖的影响。方法取对数生长期的人胃癌细胞SGC-7901进行体外实验,其中空白血清组加入含10%正常血清培养,低剂量含药血清组加入含2.5%药物血清+7.5%正常血清培养,中剂量含药血清组加入含5%药物血清+5%正常血清培养,高剂量含药血清组加入含10%药物血清培养,胃热消炎合剂含药血清通过给大鼠灌胃的方式获得。分别采用CCK-8法、EdU染色法和免疫荧光法检测各组细胞增殖情况,采用RT-PCR法检测各组细胞增殖信号通路p53-p21的相关基因p21、p53、CyclinD1、CDX2、CDK7mRNA的表达情况,采用Western blot法检测各组细胞中p21、p53、CyclinD1、CDX2蛋白表达水平。结果各含药血清组SGC-7901细胞增殖受到明显抑制,且呈浓度依赖性。各含药血清组p21、p53 mRNA表达水平均明显高于空白血清组(P均<0.05),CyclinD1 mRNA表达水平均明显低于空白血清组(P均<0.05),且呈浓度依赖性;各组CDX2、CDK7mRNA表达水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。各含药血清组p21蛋白表达水平均明显高于空白血清组(P均<0.05),且呈浓度依赖性;低剂量含药血清组和中剂量含药血清组p53蛋白表达水平均明显高于空白血清组(P均<0.05),而高剂量含药血清组p53蛋白表达水平明显低于空白血清组(P<0.05);各组CyclinD1、CDX2蛋白表达水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论胃热消炎合剂可能通过作用于细胞周期来抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖,其可能具有预防和治疗早期胃癌的作用。     

四君子汤含药血清对RNA干扰后的大肠癌SW480细胞超微结构、端粒长度及hTERT表达的影响

目的:运用四君子汤含药血清干预经RNA干扰后的大肠癌SW480细胞,观察其超微结构、端粒相对长度、端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA及蛋白表达变化,探讨四君子汤含药血清防治溃疡性结肠炎癌变的可能机制。方法:培养人大肠癌SW480细胞,经RNA干扰后,予低、中、高不同剂量的四君子汤含药血清,空白胎牛血清,美沙拉嗪含药血清,分别干预48h,运用透射电镜观察细胞超微结构,荧光定量PCR(SYBR Green法)和Westernblotting技术检测端粒相对长度、hTERT mRNA及蛋白表达变化。结果:经不同剂量四君子汤含药血清和美沙拉嗪含药血清干预后,RNA干扰后的大肠癌SW480细胞出现了自噬现象。各给药组端粒长度均明显小于空白组(P0.05),其中四君子汤低剂量组端粒长度与美沙拉嗪组相当(P0.05),中、高剂量组端粒长度大于美沙拉嗪组(P0.05)。各给药组hTERT mRNA和蛋白表达明显低于空白组(P0.05),其中四君子汤中剂量组hTERT mRNA表达明显低于美沙拉嗪组(P0.05),低、高剂量组hTERT mRNA明显高于美沙拉嗪组(P0.05),低、中剂量组hTRET蛋白表达明显低于美沙拉嗪组(P0.05),高剂量组hTRET蛋白表达与美沙拉嗪组相当(P0.05)。结论:四君子汤含药血清可能通过诱导细胞自噬,减缓炎症反应,下调hTERT表达,降低端粒酶活性,缩短端粒长度,抑制癌细胞增殖,达到防治溃疡性结肠炎相关癌变的效用。     

桂枝加葛根汤对大鼠颈椎间盘纤维环细胞超微结构的影响

目的 观察桂枝加葛根汤对大鼠颈椎间盘纤维环细胞超微结构的影响。     

持续压力对兔内外层纤维环细胞线粒体功能和超微结构的影响

目的:研究持续压力对体外藻酸盐串珠培养的兔内外层纤维环细胞线粒体功能和超微结构的影响。方法:将体外藻酸盐串珠培养的兔纤维环细胞分为4组,分别进行持续压力干预:OA1组,外层纤维环细胞,不加压;OA2组,外层纤维环细胞,1MPa压力干预24h;IA1组,内层纤维环细胞,不加压;OA2组,内层纤维环细胞,1MPa压力干预24h。加压完成后,荧光酶标仪检测ATP产量、荧光显微镜观察和荧光分光光度计分析线粒体膜电位(ΔΨm)、透射电镜观察线粒体超微结构。结果:兔纤维环细胞经1MPa压力作用24h后,与各对照组相比,内外层纤维环细胞均可见ATP产量明显减少(P<0.05),线粒体膜电位ΔΨm明显下降(P<0.05),线粒体超微结构呈现损伤的病理改变。外层纤维环细胞的ATP产量和ΔΨm下降幅度较大,线粒体损伤更为明显。结论:过度压力负荷损害线粒体的能量代谢功能,并使线粒体形态结构发生明显病理改变,这可能是从能量代谢角度研究椎间盘退变的重要机制。     

益气化瘀方对过氧化氢诱导椎间盘纤维环细胞凋亡的保护作用

目的探讨益气化瘀方对H2O2诱导凋亡椎间盘纤维环细胞凋亡率的调控作用及作用机制。方法体外培养新西兰白兔纤维环细胞,RT-PCR技术检测纤维环细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原及Aggrecan mRNA表达。在给予100μMH2O2诱导凋亡前1h、同时、延迟2h给予益气化瘀方药物血清,或中药干预同时给予PI3K/PKB信号通路阻断剂渥曼青霉素（Wortmannin）,流式细胞仪检测不同时间点给药纤维环细胞凋亡率。结果与正常培养椎间盘纤维环细胞相比,100μM的H2O2诱导凋亡后,细胞凋亡率增高（P〈0.01）。诱导凋亡前1h、同时、延迟2h给予益气化瘀方均可以降低凋亡率,诱导凋亡前或同时给予益气化瘀方,抗凋亡效果优于延迟给药;加入渥曼青霉素阻断PI3K/PKB信号通路后,益气化瘀方抗凋亡作用减弱,与同时加药组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论益气化瘀方对H2O2诱导纤维化细胞凋亡有保护作用,其机理可能是通过激活PI3K信号转导通路,抑制纤维环细胞凋亡。     

独活寄生汤对腰椎间盘纤维环细胞P38信号转导通路的影响

目的:从P38细胞信号转导通路的角度探讨独活寄生汤治疗腰椎间盘源性腰痛的作用机制.方法:将20只3月龄雄性新西兰大白兔随机分为正常对照组、模型组、独活寄生汤组及P38阻断剂组,每组5只.除正常对照组外,其余3组均采用纤维环体表穿刺法建立兔腰椎间盘退变模型.造模8d后提取各组实验兔含药血清低温保存备用,于造模8周后分别用这些血清刺激培养的椎间盘纤维环细胞,并采用Western Blot法检测各组细胞的P38丝裂原活化蛋白激酶磷酸化水平.结果:各组纤维环细胞P38丝裂原活化蛋白激酶总量比较,差异无统计学意义(F=1.819,P=0.085).各组纤维环细胞磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶/138丝裂原活化蛋白激酶总量比较,差异有统计学意义(F=5.437,P=0.007),进一步两两比较:模型组大于独活寄生汤组、P38阻断剂组及正常对照组(P =0.009,P=0.005,P=0.003);独活寄生汤组大于P38阻断剂组及正常对照组(P=0.007,P=0.004);P38阻断剂组大于正常对照组(P=0.007).结论:独活寄生汤可通过降低纤维环细胞P38丝裂原活化蛋白激酶磷酸化水平,抑制炎性因子的产生,减缓由P38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路介导的软骨细胞凋亡进程,从而达到治疗腰椎间盘源性腰痛的目的.     

针灸治疗腰椎间盘突出症机制研究概况

腰椎间盘突出症(LDH)为临床常见病,其发病是在椎间盘退变的基础上,经不良机械负荷,导致纤维环破裂、髓核突出,继发的炎症刺激、免疫反应等因素又加重椎间盘突出的进展,临床表现为腰及下肢疼痛或感觉异常。针灸治疗LDH临床疗效肯定,然其机制尚不明确,笔者总结针灸治疗LDH的相关文献,发现目前其作用机制主要与延缓椎间盘退变、调节分子生物学反应、调整生物力学、减轻神经机械损伤、改善微循环有关,旨在为临床医生治疗LDH提供思路。     

腰椎间盘突出症病因机制的研究进展

目的腰椎间盘突出症(LDH)是因椎间盘变性,纤维环破裂,髓核突出并刺激或压迫神经根、马尾神经所表现的一种综合征,其中以腰及下肢痛为最主要的临床表现。近代研究表明,椎间盘突出的发病主要与椎间盘退行性病变、生物力学、自身免疫、细胞因子及一氧化氮等几个方面作用有关,下面就腰椎间盘突出发病机理做一综述。     

点拨腰大肌干预椎间盘损伤大鼠模型的实验研究

目的：通过前路针刺损伤椎间盘建立腰椎间盘损伤大鼠模型,观察该模型是否伴有腰大肌被动拉伸张力变化以及点拨腰大肌对模型的影响。方法：将Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、模型组与治疗组,通过前路手术损伤椎间盘造模。治疗组行点拨腰大肌干预,隔日1次,共10次。观察大鼠行为学、腰椎间盘形态学、IL-1β阳性表达以及腰大肌被动拉伸张力的变化。结果：模型组与假手术组相比,垂直方向活动度减少（P〈0.05）,椎间盘纤维环、髓核损伤明显,椎间盘IL-1β免疫组化阳性表达积分光密度增高（P〈0.01）,腰大肌弹性模量降低（P〈0.01）;治疗组与模型组比较,椎间盘纤维环及髓核病理变化有所好转,IL-1β免疫组化阳性表达积分光密度降低（P〈0.01）,腰大肌弹性模量有所提高。结论：前路椎间盘损伤大鼠模型的腰大肌弹性模量有所降低,点拨腰大肌可使其有所恢复,同时可有效改善大鼠椎间盘形态,降低炎性因子IL-1β的表达。     

一个新的实验性颈椎病动物模型

本实验通过切除兔颈椎棘上、棘间韧带和分离椎旁两侧肌肉建立了颈椎病模型。由于颈椎力学失衡，经８个月阶段的发展，诱发了兔的颈椎病。Ｘ线发现，模型动物椎间隙狭窄、椎体骨赘形成和曲度变直。病理证实，模型动物椎间盘突出、髓核消失；纤维环纤维化、粘液瘤变；软骨终板钙化、骨化、断裂。这与人类颈椎病病理变化一致。我们在显微镜下通过对骨赘形成的动态观察，首次证明骨赘是由周边软骨终板软骨细胞增殖，再经软骨内化骨而形成的     

益气化瘀补肾方及拆方影响椎间盘细胞外基质胶原和代谢酶mRNA表达的研究

目的探讨益气化瘀补肾方及拆方影响退变模型大鼠颈椎间盘细胞外基质中Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅹ型胶原和相关代谢酶MMPs／TIMPmRNA的表达。方法采用RT—PCR法检测胶原和MMPs／TIMPmRNA表达,凝胶成像系统扫描仪对各条带进行扫描,计算机自动计算出光密度。结果与假手术组比较,模型组Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅹ型胶原和MMP-13 mRNA表达明显升高（P〈0．01）;TIMP-1 mRNA表达无明显统计学差异（P〉0．05）。益气化瘀补肾方及其拆方可明显降低Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅹ型胶原和MMP-13 mRNA的过度表达（P〈0．01或P〈0．05）。结论退变椎间盘的Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅹ型胶原mRNA表达增高,MMP-13 mRNA的高表达和TIMP-1 mRNA的低表达,MMPs／TIMP的比例失调,反映了退变椎间盘ECM合成和降解的失调。益气化瘀补肾方及拆方可能通过影响颈椎间盘组织胶原及相关代谢酶mRNA表达而延缓椎间盘的退变。     

无创兔颈椎间盘退变动物模型的实验研究

目的:设计一种无创颈椎间盘退变动物模型的制备方法并验证其可行性,为防治颈椎病研究提供动物模型和实验依据。方法:20只日本大耳白兔随机分为模型组和对照组,每组10只。模型组采用特制的固定布套将兔颈部固定于屈曲60°位,4h/d;对照组兔戴上布套,允许其颈椎自由活动。在造模后3月,每组10只大耳白兔,麻醉及处死后行:①X线观察放射影像学变化;②光镜、电镜下观察组织形态学变化。比较组间的差异性。结果:模型组颈椎间盘间隙稍狭窄、椎体边缘有骨质增生,出现软骨细胞变性、坏死,髓核皱缩,纤维环胶原纤维变性、排列紊乱等组织形态学改变;对照组颈椎间盘组织形态无明显变化。结论:本造模法符合人椎间盘退变的客观规律,操作简便易行,造模效果确切(较长时间处于异常应力环境下能使兔颈椎间盘组织形态、基质生化成分发生明显退行性改变),且对所观察椎间盘无直接干扰,有利于对椎间盘退变的防治进行深入研究。