氧化低密度脂蛋白循环免疫复合物诱导巨噬细胞胆固醇酯蓄积

目的:探讨氧化、天然低密度脂蛋白循环免疫复合物(Ox -LDL- IC)致动脉粥样硬化作用。　方法:采用人源的氧化、天然LDL与异源的抗载脂蛋白B(apoB)结合制备IC,观察不同浓度的Ox- LDL -IC对小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇酯蓄积和泡沫细胞形成的影响。　结果:氧化、天然LDL- IC均可引起巨噬细胞内胆固醇酯大量堆积,其效果强于Ox -LDL(P<0. 001),而且随剂量的增加而升高,并转化为泡沫细胞;而天然LDL、抗apoB处理的巨噬细胞内未见胆固醇酯的堆积。　结论:LDL- IC可导致巨噬细胞转化为泡沫细胞,参与动脉粥样硬化的形成。     

转铁蛋白对Cu2+,Fe2+介导的LDL氧化修饰的影响研究

目的 :观察转铁蛋白 (transferrin ,Tf)对Cu2 + 、Fe2 + 介导的体外人血浆低密度脂蛋白 (LDL)氧化修饰的影响。方法 :采用一次性密度梯度超离心法分离正常人血浆LDL并与CuSO4 及FeSO4 在 37℃温育不同时间 ,使LDL在体外氧化修饰。抗氧化组在温育前加入不同浓度的Tf。检测各组LDL中脂质过氧化产物丙二醛 (MDA) ,维生素E(VitE)含量及超氧化物歧化酶 (SOD)活性。结果 :①LDL与Cu2 + 或Fe2 + 温育后 ,MDA含量显著升高 (P <0 .0 0 1) ,并呈明显的时间效应。②在Cu2 + 或Fe2 + 修饰前加入不同浓度 (10 0、2 0 0、4 0 0 μg ml)的Tf能使LDL中MDA生成明显减少 ,VitE含量下降明显减缓 ,并显著提高SOD活性 ,呈现一定的浓度依赖性。当Tf浓度为 4 0 0 μg ml时 ,MDA生成抑制率分别为 71.6 5 % ,79.86 % ;SOD活性提高率分别为 14 1.5 5 % ,14 6 .6 9% ;VitE降低减缓率分别为 6 9.5 2 % ,85 .10 %。结论 :Tf对Cu2 + 或Fe2 + 介导的LDL氧化修饰具有明显的抑制作用 ,因而可能参与机体对AS的防治。其作用途径可能与阻断Cu2 + 或Fe2 + 诱导的自由基生成 ,保护内源性抗氧化物质SOD、VitE的活性有关     

氧化低密度脂蛋白与缺血性脑血管疾病

1 氧化低密度脂蛋白（OX—LDL） 1．1氧化低密度脂蛋白（OX—LDL）的形成及受体识别 LDL在体内发生氧化修饰的化学过程目前尚未完全阐明，但认为其可能是自由基攻击LDL上的多聚不饱和脂肪酸引发的链式反应过程。在体内自由基的产生可能是由于内皮细胞、血管平滑肌细胞、巨噬细胞、白细胞的细胞因子和／或细胞氧化酶或脂酶介导的，LDL中含有大量多价不饱和脂肪酸，     

姜黄素对巨噬细胞LDL受体表达的影响

目的:检测降脂中药姜黄醇提物总姜黄素对小鼠巨噬细胞LSL受体表达的影响.方法:用不同浓度的总姜黄素溶液无菌培养小鼠巨噬细胞,用酶联免疫吸附法测定巨噬细胞膜上LDL受体的表达数量.结果:不同浓度姜黄素对巨噬细胞LDL受体的表达数量与对照组比较有显著性差异.结论:0.02～0.05mmol/L的姜黄素溶液能极显著增加小鼠巨噬细胞LDL受体的表达.     

LDL氧化易感性与体内氧化LDL水平相关性分析

目的 :探讨体内氧化低密度脂蛋白 (Ox LDL)水平与LDL亚组分氧化易感性之间的关系。　方法 :采用序列超速离心分离 2 2例冠心病 (CHD)患者及 2 0例对照组血浆LDL ,体外Cu2 + 介导的LDL氧化分析其氧化易感性的变化 ;ELISA法检测体内Ox LDL水平。　结果 :CHD患者LDL氧化的延滞时间及总氧化值显著升高 ,氧化速率无变化 ;致密LDL氧化的延滞时间及总氧化值亦不同于轻的LDL。CHD患者Ox LDL水平显著升高 (5 39.1± 15 5 .6vs(318.0± 15 9.6 ) μg/L(P <0 .0 1)。Ox LDL水平同致密LDL氧化的延滞时间呈负相关 (r =- 0 .4 8,P <0 .0 5 ) ,同轻的LDL氧化的延滞时间不相关。Ox LDL水平同致密LDL的蛋白质浓度有相关趋势 (r=- 0 .4 2 ,P =0 .0 5 3)。　结论 :高浓度的小而密的B型LDL ,因易于氧化导致体内Ox LDL水平升高 ,促进了动脉粥样硬化 (As)的发生、发展     

抵抗素对动脉粥样硬化形成过程中巨噬细胞脂质吞噬功能的影响

目的研究不同浓度抵抗素对动脉粥样硬化形成过程中巨噬细胞脂质吞噬功能的影响。方法利用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测氧化型低密度脂蛋白(ox-DDL)对原代巨噬细胞抵抗素mRNA表达的影响。尼罗红染色观察抵抗素对THP-1分化的巨噬细胞脂质含量的影响。同时采用荧光定量PCR检测清道夫受体A型(SRA)、CD36 mRNA表达的变化;Western blot及流式细胞仪检测相关蛋白表达。结果ox-LDL明显促进巨噬细胞中抵抗素mRNA表达,4 h达到高峰,表达量约为非氧化LDL(nLDL)处理组的4倍(P< 0．001)。100 ng／mL抵抗素可使巨噬细胞内脂质荧光染色强度显著增加,表明促使脂质成分的吞噬。同时,抵抗素以时间和剂量依赖性在mRNA及蛋白水平促进清道夫Ⅱ型受体CD36和TLR4的表达,面对清道夫Ⅰ型受体SRA的表达无显著影响。结论ox-LDL诱导巨噬细胞表达抵抗素;后者通过上调清道夫受体CD36的表达,促进巨噬细胞吞噬脂质颗粒,从而增加其胞内脂质含量,在泡沫细胞形成中发挥作用。     

氧化修饰低密度脂蛋白诱导巨噬细胞凋亡

通过观察凋亡细胞的核形态及特征DNA梯形图谱（DNAladder）．研究了氧化修饰低密度脂蛋白（Ox－LDL）诱导的巨噬细胞凋亡。结果显示：Ox－LDL可引起明显的巨噬细胞凋亡，表现在Ox－LDL处理的细胞核发生固缩，染色体DNA断裂的凝胶电泳图谱呈典型的梯形，正常和乙酰化LDL（N－LDL和AC－LDL）未引起明显的巨噬细胞凋亡。Ox－LDL引起的巨噬细胞凋亡具有浓度和时间效应且与其修饰程度有关，修饰程度越高，引起凋亡越明显．     

云芝多糖对巨噬细胞氧化LDL的抑制作用与iNOS基因表达

目的和方法为揭示云艺多糖（PSK）的抗动脉粥样硬化机理,用RT-PCR和Westernblot等方法研究了PSK对巨噬细胞氧化低密度脂蛋白（LDL）的影响。结果PSK处理小鼠的巨噬细胞对LDL的氧化作用明显降低,NO分泌明显增加;PSK增强了IFN-Y对巨噬细胞LDL的抑制作用,减弱了一氧化氮合酶抑制剂N-Arg和DPI对细胞氧化LDL的增强作用;同时PSK能增强IFN-Y对细胞分泌NO的诱导作用,减弱N-Arg对细胞分泌NO的抑制作用;PSK能增强Raw264.7细胞iNOSmRNA和蛋白表达。结论PSK能抑制巨噬细胞对LDL的氧化,其作用机制可能与其能诱导iNOS基因表达有关。     

氧化低密度脂蛋白对巨噬细胞Toll样受体-4的表达效应

目的研究低密度脂蛋白(LDL)氧化对人单核细胞源巨噬细胞Toll样受体-4(TLR-4)表达的影响及其机制。方法用RPM I 1640培养基体外培养人THP-1单核细胞系,加入佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)培养48 h使其分化为巨噬细胞,加入氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)或LDL,用免疫细胞化学、蛋白质免疫印迹和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,观察脂蛋白氧化前、后对巨噬细胞表达TLR-4蛋白及TLR-4 mRNA的影响。结果Ox-LDL可提高TLR-4蛋白及TLR-4 mRNA的表达(P<0.01);而LDL对TLR-4蛋白及其mRNA的表达无影响(P<0.05)。结论LDL的氧化可能促进THP-1源巨噬细胞TLR-4转录水平的上调,导致蛋白质的合成增加;Ox-LDL可能是动脉粥样硬化中炎症的始发原因之一。     

氧化型低密度脂蛋白及其抗体与动脉粥样硬化

1概述低密度脂蛋白（1owdensity lipoprotein.LDL）为血中胆固醇的主要携带者,有证据表明LDL能在血浆内或动脉内膜下经自由基引发的脂质过氧化而转变为氧化修饰的LDL（OX-LDL而氧化型低密度脂蛋白OX-LDL和动脉粥样硬化（atherosclerosis,As）早期病变的发生与发展有密切关系。从80年代开始，越来越多的资料表明动脉粥样硬化与天然低密度脂蛋白通过Brown／GoldsteinLD受体的摄取关系不大，而与一些修饰的LDL通过一种或多种其它受体的摄取关系密切。有人观察到，缺乏LDL受体的病人或动物和有正常LDL受体的病人或动物一拌，仍可聚集胆固醇于泡沫细胞中，而一些可演变为泡沫细胞的单核／巨噬细胞和平滑肌细胞有体内高浓度LDL作用下并有能聚集胆固醇。当循环LDL发生某种形式的修饰时，可导致泡沫细胞的形成。尽管体外LDL的乙酰化可增加细胞摄取脂质．但目前尚无确切证据表明体内存在乙酰化LDL。然而，Ox-LDL的致AS程度不仅决定于其自身水平，还取决于其受体及受体后效应的变化。     

冠心病患者LDL及OXLDL对血小板活化作用

目的评价LDL及OXLDL与血小板的目的相互作用在冠心病发病机理的作用,方法对46例冠心病患者分离LDL,及3Z例冠心病患者体氧化LDL,并与血小板孵育．测定血小板聚集率。同时46例正常人作对照组。结果冠心病患者血浆LDL及OXLDL显著增加血小板聚集率（P＜0．01）,而OXLDL作用更显著（P＜0．01）。血小板聚集率的增加与OXLDL呈正相关（r＝0．59,P＜0．01）而与血浆LDL浓度无关。结论低密度脂蛋白通过氧化修饰直接作用血小板,增加血小板聚集功能,这种脂蛋白与血小板的相互作用,很可能是致动脉粥样硬化危险的重要因素。     

氧化低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的:探讨氧化型低密度脂蛋白(Oxidizedlowdensitylipoprotein,oxLDL)对人血管平滑肌细胞(Smoothmusclecell,SMC)凋亡的影响。方法:利用密度梯度超速离心分离纯化人血浆LDL,体外和CuS04共孵育氧化生成oxLDL。不同浓度的oxLDL对SMC作用不同的时间,观察其对SMC凋亡状况的影响。结果:oxLDL对SMC的作用具有时间浓度依赖性,较低浓度的oxLDL促SMC增生和泡沫细胞化,高浓度时则诱导SMC凋亡发生。结论:适当浓度的oxLDL促SMC增生及表型转换而高浓度时则对SMC促凋亡作用。     

ox-LDL对巨噬细胞表达miRNA-155和miRNA-146a／b的影响

目的：探讨氧化低密度脂蛋白（ox—LDL）刺激对巨噬细胞表达miRNA-155和miRNA-146a／b的影响。方法：培养人巨噬细胞,随机分为三组：空白对照组、ox-LDL（10μg／mL）组和OX—LDL（20μg／mL）组,刺激6h后,收集细胞,实时定量PCR方法检测miRNA-155和miRNA—146a／b的表达。结果：OX—LDL刺激可以增加巨噬细胞表达miRNA-155和miRNA-146a／b,且呈浓度依赖性。结论：miRNA-155和miRNA-146a／b可能参与ox-LDL致动脉粥样硬化过程。     

苦参碱、氧化苦参碱和槐定碱对巨噬细胞RAW264.7表达CD91、CD13和分泌TNF α的抑制作用

目的探讨苦参碱、氧化苦参碱和槐定碱对巨噬细胞RAW264.7表达CD91、CD13和分泌TNF-α的抑制作用。方法(1)用6孔板培养巨噬细胞RAW264.7,制作细胞爬片,然后与不同浓度(0、12.5、25、50、100、200mg/L)的苦参碱、氧化苦参碱和槐定碱共培养,细胞爬片免疫组化染色,检测CD91和CD13的表达情况,并采用MediaCybernetics公司的图像分析系统进行定量分析,测量积分光密度(IOD)值。(2)6孔培养板培养巨噬细胞RAW264.7,加入不同浓度的苦参碱、氧化苦参碱和槐定碱与巨噬细胞共培养1d后,收集培养孔中的培养液,采用ELISA方法检测培养液中TNF-α的含量。结果苦参碱、氧化苦参碱和槐定碱均能抑制巨噬细胞表达CD91和CD13,其抑制作用随浓度变化也有不同,苦参碱更明显。不同浓度的苦参碱、氧化苦参碱和槐定碱对巨噬细胞分泌TNF-α有抑制作用,苦参碱对巨噬细胞RAW264.7分泌TNF-α的抑制作用更明显。结论苦参碱、氧化苦参碱和槐定碱对巨噬细胞表达CD91、CD13和分泌TNF-α有明显的抑制作用。     

基因对高密度脂蛋白胆固醇的影响

血清中高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)浓度与冠心病(CHD)发病机率呈负相关.低浓度HDL-C将导致冠心病,而高浓度HDL-C可降低CHD发病机率.HDL具有保护作用在于它能把胆固醇从外周运到肝脏,在肝细胞膜上有识别HDL的受体.HDL具有抗炎性质,携带旁氧化酶,限制对LDL的氧化修饰.(氧化型LDL具有细胞毒性作用).在HDL-C浓度降低的同时,血浆中致动脉粥样硬化的蛋白如LDL浓度上升.     

云芝多糖对氧化修饰LDL抑制巨噬细胞一氧化氮产生的保护作用

通过测定巨噬细胞培养上清液中亚硝酸盐的含量和观察细胞内一氧化氮合酶（NOS）mRNA含量的变化，研究了云芝多糖（PSK）对氧化修饰LDL（Ox－LDL）抑制脂多糖（LPS）诱导的巨噬细胞NO产生的保护作用。结果显示，Ox－LDL可抑制LPS诱导的巨噬细胞NO产生，而正常（N－LDL）和乙酰化LDL（AC－LDL）则没有抑制作用。非特异性免疫调节剂PSK处理小鼠对Ox－LDL引起的巨噬细胞NO产生量下降具有保护作用。狭缝杂交结果显示，Ox－LDL可使LPS诱导的巨噬细胞NOSmRNA含量下降，PSK可保护巨噬细胞免受Ox－LDL引起的NOSmRNA含量下降。     

氧化低密度脂蛋白对人血管平滑肌细胞生长状况的影响

目的：探讨氧化低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein ox-LDL）对培养的人血管平滑肌细胞（smooth muscle cell,SMC）生长状况的影响。方法：利用密度梯度速离心分离纯化人血浆LDL，体外氧化生成ox-LDL,不同浓度的ox-LDL作用于培养的人SMC不同时间，从不同的角度观察其对SMCT生长状况的影响。结果：ox-LDL对SMC的作用具有时间浓度依赖性，低浓度的ox-LDL促SMC增生及表型转换，高浓度时则诱导SMC发生凋亡，甚至死亡。结论：ox-LDL可能在人动脉粥榇硬化的发生发展过程中起重要作用。     

FABP5促进RAW264.7细胞氧化LDL的初步研究

目的:探究RAW264.7细胞中脂肪酸结合蛋白5(FABP5),磷脂酶A2(PLA2),不饱和脂肪酸(UFAs)在低密度脂蛋白(LDL)氧化中的作用。方法:培养RAW264.7细胞,利用UFAs中的不同浓度的油酸(OA)、亚油酸(ALA)、花生四烯酸(AA)刺激后利用Western Blot检测细胞FABP5蛋白质水平;用LDL刺激RAW264.7细胞不同时间,分别用PLA2总活性分光光度法定量检测试剂盒测定细胞内PLA2活性变化,Real-time PCR及Western Blot测定FABP5基因的表达;LDL刺激细胞后分别测定脂质筏和非脂质筏FABP5蛋白质水平,探究FABP5的转位。结果:不同浓度的OA,ALA,AA长时间刺激RAW264.7细胞后,FABP5的蛋白表达量出现不同的变化;LDL短时间刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7后,细胞内PLA2活性升高;LDL刺激RAW264.7细胞较长时间后,FABP5的mRNA和蛋白质水平均较对照组上升;提取脂质筏后发现,LDL刺激15min的巨噬细胞的脂筏中FABP5水平较对照组的升高,而非脂筏部分则出现相反的结果。结论:推测LDL刺激会激活PLA2,而PLA2水解甘油磷脂产生UFAs,这些UFAs招募并结合FABP5,激发氧化应激通路,促进LDL的氧化。     

HDL对LDL和AcLDL渗入家兔主动脉壁的影响

本实验通过静脉注入大剂量人 HDL,人 LDL 到正常和高 Ch 血症家兔体内;大剂量人 HDL,人 AcLDL 到正常家兔体内;探讨 HDL 对 LDL 及 AcLDL 渗入家兔主动脉壁的影响。灌注大剂量~(131)I-LDL 后,各组实验兔较对照免血浆放射活性均增加,半衰期延长,高 Ch 血症尤为明显。对照兔主动脉壁标记脂蛋白渗入率:高 Ch 血症组>AcLDL 组>LDL 组。HDL 对~(131)I-LDL 及~(131)I-AcLDL 在家兔主动脉壁渗入率的影响:LDL 组减少18.660%,高 Ch 血症组减少48.280%,AcLDL 组减少63.320%。主动脉壁组织自显影显示:HDL 减少~(131)I-LDL 及~(131)I-AcLDL 渗入主动脉壁。标记脂蛋白在主动脉弓、胸腹段的渗入率,实验兔均低于对照兔。以上结果揭示主动脉内皮细胞表面有类似AcLDL 受体的存在,当 HDL 浓度异常高时可以阻止 LDL 及 AcLDL 渗入完整主动脉内皮层进入内膜。     

AGEs-RAGE相互作用促进巨噬细胞摄取胆固醇的研究

目的观察糖基化终末产物(advanced glycation end products, AGEs) 及其受体(receptor of advanced glycation end products, RAGE)对巨噬细胞胆固醇摄取功能的影响。方法 培养THP-1细胞株,用PMA诱导分化使其成为巨噬细胞,以100μg/ml的氧化LDL(oxidized LDL, oxLDL)孵育细胞使其转化为泡沫细胞。分别以浓度为300、600μg/ml的AGEs对细胞进行刺激,应用用浓度为10μg/ml的抗RAGE抗体对细胞进行预处理,采用油红O染色测定细胞内脂质含量,通过RT-PCR及Western印迹法来检测各组巨噬细胞RAGE表达以及与胆固醇摄取相关因子SRA2、CD36表达变化,将干预后的巨噬细胞与荧光标记的oxLDL共同孵育,动态观察巨噬细胞在不同干预条件下胆固醇摄取功能的变化。结果 高浓度AGEs诱导后,巨噬细胞内脂质含量增加,RAGE表达增加,SRA2、CD36表达增加,巨噬细胞胆固醇摄取能力增加。应用抗体阻断RAGE轴后,AGEs引起的改变均有明显恢复。结论 AGEs-RAGE相互作用可以促进巨噬细胞摄取胆固醇,增加细胞内脂质累积,从而易于形成泡沫细胞。