甲基化特异性PCR检测胃癌p16基因甲基化及其临床意义

目的初步探讨甲基化特异性聚合酶链反应（MSPCR）在胃癌临床诊断中的应用价值。方法选取47例胃癌患者的癌组织及配对的癌旁组织，11例远离肿瘤的正常胃黏膜组织。标本经一般处理，PCR扩增后，产物经电泳EB染色，紫外灯下观察。结果47例胃癌组织标本中，22例（46．2％）在p16基因的启动子区域呈现异常甲基化；47例癌旁组织标本中，28例（58．6％）也检测出甲基化存在；11例正常胃黏膜组织标本中均未检测出p16基因甲基化存在。结论MSPCR技术对胃癌患者组织标本中的异常甲基化检测具有高度特异性，是一项具有潜力的胃癌早期诊断新技术。     

胃癌p16基因启动子CpG岛甲基化研究

目的：探讨p16基因启动子CpG岛甲基化在胃癌中的表达及意义．方法：采用特异性甲基化PCR（MSP）法检测p16基因启动子CpG岛甲基化水平．结果：对照组未检测到CpG岛甲基化,胃癌细胞株均检测到CpG岛甲基化,23例（74％）胃癌组织检测到CpG岛甲基化．此外,17例（74％）癌旁组织检测到CpG岛甲基化．胃癌组织p16基因CpG岛甲基化与分化程度及淋巴结转移之间无相关关系（P〉0．05）．结论：胃癌广泛存在p16基因启动子CpG岛甲基化,并且可能是胃癌发生的早期分子事件．     

胃癌及癌前病变中p16基因启动子异常甲基化研究

目的 探讨p16基因异常甲基化在胃癌发生中的作用.方法 应用甲基化特异性pCR技术检测胃腺癌及癌前病变组织中p16基因甲基化状态,并应用免疫组化染色检测p16蛋白的表达.结果 慢性萎缩性胃炎、重度异型增生及胃腺癌组织p16基因启动子甲基化阳性率分别为11.1%、40%和43.3%.胃腺癌组与浅表性胃炎组、萎缩性胃炎组及轻-中度异型增生组间p16基因甲基化阳性率差异有显著性(P＜0.05),而与重度异型增生组间差异无显著性(P＞0.05).p16蛋白阳性率在胃腺癌组、重度异型增生、轻-中度异型增生、萎缩性胃炎组和浅表性胃炎组分别为36.7%、40%、85.7%、83.3%和100%;在19例p16基因甲基化阳性病例中,18例p16蛋白缺失.结论 p16基因启动子异常甲基化可能是其在胃癌蛋白表达缺失的主要原因.p16基因启动子异常甲基化可能是胃癌发生的早期事件,在胃癌的发生起重要作用.     

胃癌组织中p16基因甲基化分析

目的：探讨抑癌基因p16在胃癌组织中是否存在甲基化异常及其与胃癌发生发展的关系。方法：对20例胃癌组织及相应正常胃粘膜组织应用于甲基敏感酶（HpaⅡ）和甲基非敏感酶（MspⅠ）酶切,结合PCR扩增技术,对p16基因外显子1、外显子2的二核苷酸胞嘧啶特定序列5‘-CCGG-3‘位点甲基化进行检测。结果：20例胃癌组织中,p16基因外显子1、2异常甲基化分别为5例（25％）和9例（45％）,正常组织未发现甲基化异常;14例高甲基化标本中,中分化胃癌4例,低分化7例,高分化1例,有2例存在外显子1、2同时甲基化异常,二者均为低分化胃癌,进展期胃癌（Ⅲa,Ⅳ期各1例）中1例呈现泳动易位;外显子2甲基化异常多发生于晚期肿瘤患者（P＜0．05）。结论：p16基因甲基化异常可能会造成基因功能丧失,从而失去了对细胞增殖的负性调控作用,导致胃癌发生与进展;外显子2高甲基化与临床进展有关,可能为晚期事件。     

p16基因启动子CpG区甲基化与人脑胶质瘤临床病理特征的关系

目的　研究 p16基因启动子CpG区甲基化的改变与脑胶质瘤发生及其临床病理特征的关系。 方法　采用甲基化特异PCR技术 (MSP法 )研究脑胶质瘤组织p16基因甲基化 ,并分析其与临床病理特征的关系。结果　 5 6例脑胶质瘤组织中有 10例 (17.9% )呈 p16CpG区甲基化阳性。胶质瘤的 p16CpG区甲基化与性别、年龄无关 ,而与肿瘤级别、浸润与否有关。有浸润的脑胶质瘤 p16CpG区甲基化明显高于暂无浸润者。p16CpG区甲基化也多发生于Ⅲ级、Ⅳ级 (即肿瘤恶性程度高 )的病例。结论　p16基因启动子区甲基化可作为脑胶质瘤的预后影响因子之一     

舌癌患者 p16基因启动子 CpG 岛甲基化及其与临床病理的关系

目的：研究舌癌与 p16基因启动子区域的 CpG 岛甲基化的潜在关系,并了解 p16基因甲基化与临床病理的关系。方法观察组舌癌标本及对照组正常舌组织标本所提取的 DNA,经亚硫酸氢钠处理改变甲基化碱基,设计相应引物（p16－M、p16－U）Q －MSP 扩增,检测样本中的甲基化比例。结果观察组甲基化阳性率为64．58％（31／48）,对照组阳性率仅2．08％（1／48）,差异有统计学意义（P ＜0．05）;舌癌个体中 pl6基因甲基化比例与病理分期、发生淋巴转移、组织学分化程度相关,与年龄、性别无关。结论p16基因启动子 CpG 岛甲基化现象与舌鳞癌的发生发展关系密切;癌症发展越晚期、肿瘤浸润更深、发生转移、更低分化者 p16基因启动子 CpG 岛甲基化的频率更高,但与患者年龄、性别等因素无关。     

p16基因与胃癌

１９９３年美国国立癌症研究中心的Ｓｅｒａｎｏ［１］利用酵母双杂合蛋白质相关筛选，发现并分离了特异性的细胞周期素依赖激酶（ｃｙｃｌｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅ，ＣＤＫ）的抑制蛋白（ＣＤＫ４Ｉ或ＣＤＫＮ２）－Ｐ１６蛋白。１９９４年４月，美国盐湖城和...     

胰岛素瘤中p16基因甲基化和表达下降与临床病理特征的关系

目的:探索胰岛素瘤中p16基因甲基化和表达下降与临床病理特征关系。方法:纳入2003年10月至2017年12月在北京协和医院手术切除胰岛素瘤的72例患者的资料,用免疫组织化学染色测定72例患者胰岛素瘤组织和49例对照胰腺组织中p16蛋白的表达。从组织中提取基因组DNA并且用亚硫酸氢盐修饰,用甲基化特异PCR的方法检测3...     

胃癌p16蛋白的表达及其与临床病理特征的关系

<正>p16基因为一种抑癌基因,来源于肺、乳腺、脑、骨、皮肤、膀胱、肾、卵巢等部位的癌细胞出现高频率的p16基因缺失或突变[1],提示其在肿瘤发生发展过程中有重要的作用。我们采用免疫组化技术,对本院与南通大学附属医院2006年4月～2007年5月103例胃癌标本的p16的表达进行研究,探讨其同胃癌的发生、发展及淋巴结转移的关系。     

癌组织中p16基因甲基化分析

目的探讨抑癌基因p16在胃癌组织中是否存在甲基化异常及其与胃癌发生发展的关系.方法对20例胃癌组织及相应正常胃粘膜组织应用甲基敏感酶(HpaII)和甲基非敏感酶(MspI)酶切,结合PCR扩增技术,对p16基因外显子1、外显子2的二核苷酸胞嘧啶特定序列5'-CCGG-3'位点甲基化进行检测.结果20例胃癌组织中,p16基因外显子1、2异常甲基化分别为5例(25%)和9例(45%),正常组织未发现甲基化异常;14例高甲基化标本中,中分化胃癌4例,低分化7例,高分化1例;有2例存在外显子1、2同时甲基化异常,二者均为低分化胃癌,进展期胃癌(Ⅲa、Ⅳ期各1例)中1例呈现泳动易位;外显子2甲基化异常多发生于晚期肿瘤患者(P<0.05).结论p16基因甲基化异常可能会造成基因功能丧失,从而失去对细胞增殖的负性调控作用,导致胃癌发生与进展;外显子2高甲基化与临床进展有关,可能为晚期事件.     

原发性肝细胞癌中p16、p15基因启动子区甲基化状态检测

目的研究原发性肝细胞癌中p16、p15基因启动子区甲基化状态及其与原发性肝细胞癌发生发展的关系。方法用特异性甲基化PCR（MSP）法检测30例原发性肝细胞癌肿瘤组织和5例正常肝脏组织中p16、p15基因启动子区甲基化状态，并进行统计分析。结果30例原发性肝细胞癌肿瘤组织中p16和p15基因启动子区分别有53．3％（16／30，P〈0．05）和46．7％（14／30，P〉0．05）甲基化，5例正常组织中未发现甲基化。两基因甲基化与原发性肝细胞癌临床病理及HBsAg之间无明显相关性（P〉0．05），两者在原发性肝细胞癌发生中有协同性（相关性和一致性）。结论p16、p15基因启动子区异常甲基化在原发性肝细胞癌中发生频率很高，可能对肝细胞癌发生发展起重要作用。     

p16甲基化与宫颈疾病的相关性研究

目的探讨p16基因甲基化与宫颈疾病的相关性。方法分别采用甲基化特异性PCR(MethylationspecificPCR,MSP)法和免疫组化法检测宫颈上皮内瘤样病变组织和宫颈癌组织中p16基因甲基化发生率和P16蛋白表达的缺失率。结果正常宫颈中未检测到p16基因甲基化,低度宫颈癌前病变p16基因甲基化率为3.33%。中度及高度宫颈癌前病变p16基因甲基化率分别为20.0%及26.7%。宫颈癌p16基因甲基化率为44.0%。中、高度病变及宫颈癌组与正常宫颈及低度病变甲基化率相比P<0.05,宫颈癌与中、高度病变组甲基化率相比P<0.05。结论 p16基因甲基化与宫颈疾病的发展具有相关性。     

肝细胞癌中p16基因及其甲基化的检测与意义

目的　研究P16、P16甲基化在肝细胞癌 (Hepatocellularcarcinoma ,HCC)与癌旁组织中的表达特点 ,探讨其与HCC生物学行为的关系。方法　分别以免疫组化及PCR技术检测 3 3例人肝细胞癌及其癌旁组织中p16基因表达及其甲基化的水平 ,并结合临床资料进行分析。结果　肝癌的p16基因表达率 (63 64 % )明显低于癌旁组织 (10 0 % ) (P <0 0 5 ) ;p16基因阳性表达率在无转移的肝癌中为 85 7% ,有转移组为 2 5 0 % ;高、中和低分化的肝癌分别为 5 2 4% ,2 8 6%和 19 1%。p16基因阳性表达在肝癌患者高分化与中和低分化比较有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,转移与非转移组比较有非常显著性差异 (P <0 0 1)。 3 3例HCC组织中 11例发生p16甲基化 ,均伴肿瘤转移 ,其中高、中和低分化肿瘤各占 2、4、5例 ;相应癌旁组织中未发现p16基因甲基化。结论　p16基因异常表达及其甲基化在肝细胞癌的发生、发展过程中起重要作用。     

p16基因CpG位点甲基化在维吾尔族宫颈鳞癌及HPV16感染中的意义

目的:探讨p16 基因启动子区CpG 位点甲基化及HPV16 感染与新疆维吾尔族宫颈鳞癌的关系及其意义。方法:采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱方法(MALDI-TOF MS) 对20 例维吾尔族宫颈鳞癌及20 例对照组维吾尔族宫颈组织中的p16 基因启动子CpG 位点甲基化进行定量检测;采用聚合酶链反应(PCR) 的方法检测两组HPV16 的感染状况。结果:宫颈鳞癌及对照组中p16 基因启动子区16 个CpG 位点中CpG1-2, CpG6 为甲基化差异位点, 宫颈鳞癌组中CpG1-2, CpG6 位点甲基化水平明显高于对照组;宫颈鳞癌组的HPV16 感染率明显高于对照组, 差异有统计学意义(P<0.05);所检测的维吾尔族宫颈鳞癌组织中p16 基因启动子区CpG 位点甲基化与HPV16 感染无明显相关。结论:p16 基因启动子区CpG1-2, CpG6 位点高甲基化及HPV16 感染均与维吾尔族宫颈鳞癌的发生有关系, 但为两个独立事件。     

食管鳞癌组织中p16基因缺失及甲基化检测

目的:探讨食管癌组织中p16基因表达缺失的机制.方法:采用PCR、DHPLC、MSP及免疫组化的方法,检测45例食管鳞癌组织及其相应的间变组织和正常食管上皮组织中p16基因的缺失、突变、甲基化状态及蛋白表达情况.结果:正常食管上皮组织中p16蛋白均为正常表达(45/45,100%),间变和癌组织中异常表达率分别为84.4%(38/45)和91.1%(41/45),3者间异常表达率差异有统计学意义(x2=20.03,P＜0.001).p16蛋白表达异常的41例癌组织中,纯合型甲基化发生率为80.48%(33/41),杂合缺失发生率58.53%(24/41),不缺失发生率41.46%(17/41),均高于p16蛋白表达正常的癌组织.结论:该地区食管癌组织中p16基因主要通过纯合型甲基化失活.     

妇科恶性肿瘤P16基因甲基化研究

目的探讨妇科恶性肿瘤中p16基因甲基化及临床意义。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)方法．检测不同病理类型和临床分期的206例妇科恶性肿瘤组织中p16基因启动子区域5‘CpG岛甲基化状态，其中包括84例卵巢上皮性癌，62例子宫内膜癌和60例宫颈癌。结果正常对照组织及癌旁p16基因无甲基化；在卵巢上皮性癌、子宫内膜癌和宫颈癌中，甲基化率分别为5．95％(5／84)、24．19％(15／62)和21．67％(13／60)。结论p16基因甲基化在妇科恶性肿瘤发生中起着重要作用。     

p16基因与鼻咽癌生物学行为的相关性研究

目的通过测定鼻咽癌组织中p16蛋白的表达情况,探讨p16基因与鼻咽癌临床生物学行为的关系。方法应用S-P免疫组化技术,检测90例鼻咽癌组织中p16蛋白的表达情况,以慢性鼻咽粘膜炎症标本80份作为对照,检测结果进行统计学检验分析。结果①鼻咽癌p16蛋白表达阴性率为75.56%,鼻咽炎症为16.25%,两者差异有高度显著性(P<0.01)。②高分化鳞癌的P16蛋白阴性表达率为34.78%,低分化鳞癌为88.68%,未分化癌为92.86%,提示p16基因的缺失可能与鼻咽癌的分化程度有关(χ2=20.88,P<0.01)。③颈淋巴结转移阳性(N+)者p16蛋白阴性表达率为92.06%,颈淋巴结转移阴性(N0)者为37.03%,p16蛋白表达与颈淋巴结转移情况呈负相关(r=-0.59,P<0.01)。结论抑癌基因p16失活或p16蛋白低表达可能与鼻咽癌的发生、癌细胞的分化程度及颈淋巴结转移有关,而与鼻咽癌原发灶大小无关。